吉他霉素中各组分的LC-MS研究

吉他霉素中各组分的LC-MS研究
（作者:___________单位: ___________邮编: ___________）
【摘要】目的建立吉他霉素的LC-MS分析方法，分析确定吉他霉素各组分。

方法采用分析柱，以电喷雾电离、正离子检测，以确定吉他霉素各组分。

结果分析确定吉他霉素实际样品中存在9个组分，即吉他霉素A1、A3、A4、A5、A6、A7、A8、A9和A13，并得出各组分的比例。

结论本文为吉他霉素的质量控制提供了一种新方法。

【关键词】吉他霉素；组分；液质联用(LC-ESI-MS)
ABSTRACT Objectives To establish an LC-MS method for the analysis of kitasamycin, and qualitatively and quantitatively analyze each component of kitasamycin. Methods By using analytical column, electrospray ionzation and positive ion monitoring components of kitasamycin were analyzed. Results The nine components of kitasamycin were baseline identified, i.e. kitasamycin A1, A3, A4, A5, A6, A7, A8, A9 and A13. The proportions of components were determined. Conclusion The LC-ESI-MS method are useful to quality control of kitasamycin.
KEY WORDS Kitasamycin; Component; LC-ESI-MS
吉他霉素(kitasamycin)是北里链霉菌(S.kitasa-toensis)产生的碱性十六元环大环内酯类抗生素，其抗菌作用与红霉素、螺旋霉素等相似。

目前国内外生产的吉他霉素的主要组分为吉他霉素(kitasamycin)A族(A1，A3～A9，A13)组分，其结构见图1。

由于国内外生产厂家所用的菌种不同，造成产品的组分比例有明显差异，影响产品的优劣和临床疗效。

因此，测定产品中组分的比例对控制产品质量、保证临床疗效非常重要，文献已报道HPLC［1］和HPCE［2］方法，因无法确定各组分，而不能准确有效的测定各组分的比例，本文建立了测定吉他霉素组分的LC-MS法，并与HPLC法进行了比较，为吉他霉素的组分测定提供了一种新方法。

1 材料与仪器
吉他霉素由华药华胜有限公司提供，吉他霉素对照品为中国药品生物制品检定所标定，甲醇、乙腈(天
图 1 吉他霉素各组分的化学结构津四友化学试剂公司)均为色谱纯试剂。

Waters公司Alliance型高效液相色谱系统，Waters公司ZMD 质谱检测器，Masslynx工作站。

2 实验方法
2.1 试验样品的制备
称取吉他霉素样品适量，用流动相配制成2mg/ml溶液，备用。

2.2 HPLC色谱条件
色谱柱：Agilent LC-18(4.6mm×250mm，5μm)；流速1.0ml/min；
流动相为100mmol/L乙酸铵溶液∶甲醇∶乙腈(40∶55∶5)；柱温60℃；检测波长231nm。

2.3 LC-MS条件
色谱柱：Agilent LC-18(4.6mm×250mm，5μm)；流速1.0ml/min，进入质谱的分流比为5∶1；流动相100mmol/L乙酸铵溶液∶甲醇∶乙腈(40∶55∶5)；柱温60℃；电喷雾电离源(ESI)，正离子检测,电离电压 3.0kV；电喷雾接口干燥气(N2)流速280L/h，离子源温度250℃；锥孔电压30V；脱溶剂气温度115℃。

二极管矩阵检测器(PDA)与质谱串联，两者之间的滞后时间约为0.2min。

3 实验结果3.1 吉他霉素中各组分的定性分析
为了确定吉他霉素中各组分，采用二极管矩阵(PDA)和正离子检测，结果显示吉他霉素中存在9种组分(图2)，各组分的最大吸收波长均为231nm，各组分的质谱均同时出现四个特征离子，即M+H、M+H+CH3OH、M+Na、M+Na +CH3OH，其中以M+H峰最强，根据其质谱特征(图3)，确定各组分依次为A9、A8、A7、A6、A5、A4、A1、A3、A13，出峰顺序与药典方法［3］一致(表1)。

3.2 吉他霉素中各组分的定量分析
按照药典方法，分别采用HPLC方法和LC-MS方法测定各组分的比例。

在LC-MS方法中，采用全波长和单一波长两种检测方式，检测结果见表2，结果显示LC-MS方法单一波长(λ=231nm)检测结果与HPLC法的结果基本一致，而LC-MS方法的全波长检测结果与上述两个方法有明显差异。

4 讨论
本品组分复杂，不同品牌色谱柱、不同批次产品等因素变动时，用HPLC方法确定峰位有差别，造成结表1 吉他霉素中各组分的测定结果表2 吉他霉素各组分比例测定结果果不准，偏差较大；LC-MS方法对各组分能同时进行定性和定量分析，结果准确可靠，因此优于HPLC 方法。

在LC-MS中多采用的二极管矩阵(PDA)检测，当进行定量分析时，从全波长的数据中提取单波长(λ=231nm)检测数据是必要的。

这是由于用特征吸收波长检测具有特异性，测得的各组分的比例更准确。

【参考文献】
［1］王永金，王立群. 闵翠娟柱晶白霉素的高效液相色谱分析［J］. 沈阳药学院学报，1990，7(2)：79
［2］洪利娅，郦玲.微乳毛细管电泳分离吉他霉素组分［J］. 药物分析杂志，2000，20(4)：251
［3］国家药典委员会. 中华人民共和国药典(二部)［S］. 北京：化学工业出版社，2005：177。