地塞米松对骨髓淋巴细胞靶向性损伤机制与研究

地塞米松对骨髓淋巴细胞靶向性损伤机制与研究
吴柳盛*，王馥香，万 波
（安徽医科大学，安徽合肥 230000）
【摘要】目的 本研究通过细胞水平、分子水平、基因水平来阐述地塞米松对淋巴细胞的损伤及杀死效应机制。

方法：分别给三组大鼠注射等剂量的地塞米松、HMG-COA还原酶抑制剂,及对照组生理盐水，持续三周，分别取三组大鼠骨髓进行微粒制备，采用HPLC方法观察NADPA峰面积来检测HMG-COA还原酶的活性。

结果：发现地塞米松组小鼠骨髓淋巴细胞出现明显抑制损伤。

结论：地塞米松能够特异性诱导B淋巴细胞核DNA降解，能够强有力地抑制T淋巴细胞转录因子的表达调控，降低HMG-COA还原酶的活性，故地塞米松在临床上使用对于骨髓淋巴细胞具有靶向性损伤作用。

【关键词】地塞米松；NF-kB；淋巴细胞；凋亡；免疫学
【中图分类号】R733.3 【文献标识码】B 【文章编号】ISSN.2095-8242.2018.47.34.02
地塞米松在临床上被广泛被应用，在治疗严重感染以及器官免疫排斥反应上等具有很强大的临床价值，但是在临床上它的一些不良反应也在不断体现出来，特别是对于淋巴细胞系统靶向性破坏损伤效应，若是大剂量或是不规则使用，则将会对术后或是康复后机体的自身免疫系统造成损伤，易于引起免疫不足甚至免疫缺陷等严重问题。

故不恰当使用致自身机体代谢功能障碍疾病造成药物在体内积蓄造成的对免疫系统的严重损坏效应是值得注意和思考。

1 实验方法
1.1 实验原理
当淋巴细胞被诱导进行凋亡时，它有一系列的细胞结构和功能上的改变，包括出现染色质浓缩坏死、核糖核酸降解、核酸代谢障碍等。

在正常具有生物活性的细胞中，磷脂酰丝氨酸位于细胞膜的内侧，但在凋亡或坏死的细胞中，PS从内侧的细胞膜翻转到细胞膜的外侧，暴露到细胞所处的外环境中。

Annexin-Ⅴ是一种Ca2+依赖性磷脂结合蛋白，分子量为35-36KD且具有高亲和力，能与PS紧密结合在一起。

故用Annexin-Ⅴ进行荧光素（如PE或FITC）或生物素等标记，用标记好的Annexin-Ⅴ作为实验目标探针，然后再利用流式细胞仪或荧光显微镜可检测和观察细胞凋亡在结构和功能上的损伤变化。

HMG-CoA还原酶活性的测定也常常应用于淋巴细胞凋亡的检测。

测定HMG-CoA还原酶活性最常用的方法是分光度检测法，在HMG-COA还原酶的催化下，将带有4个电子的3-羟-3-甲戊二酰辅酶A还原生成甲戊二羟酸，并且同时产生还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸被氧化为氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸，通过其氧化后的吸光峰值变化（波长：340 nm），来定量分析3-羟-3-甲戊二酰辅酶A还原酶的活性变化情况。

3-羟-3-甲戊二酰辅酶A还原酶反应系统为：
HMG-CoA+2 NADPH+2 H＋→mevalonate+2 NADP－+2 CoA-SH
1.2 实验材料
标记缓冲液、PBS、移液器、吸头、微量离心管、可调速离心机、载玻片等。

实验动物：自身免疫性疾病小鼠：N Z B/N、NZB×NZW等品系。

1.3 实验步骤：
1.3.1 HMG-CoA还原酶的分光光度法分析
通过监测由于NADPH的氧化而使350nm的吸收峰下降率来测定核酸相关酶的活性。

下面所述的条件是适合用于1cm长光道和1ml的比色怀。

1.3.2 实验反应混合物含
（1）500 uL磷酸缓冲液（250 mm KCl，240 mm磷酸钾、6 mm EDTA和15 mm dithiothreitol，pH6.8～7.0）。

（2）100 uL 3mm NADPH。

（3）100 uL 2 mm（R，S）-HMG-CoA。

（4）100 uL已溶解的核酸酶。

（5）100 uL 水、抑制物、激活物、反应酶等。

2 实验结果
HMG-COA还原酶的活性检测结果：（HPLC方法观察NADPA峰面积），在试验条件下反应时间确定为20 min。

在20 min内，NADPH的峰面积逐渐下降；20 min后，下降速度开始减缓，反应体系中NADPH5的量无出现明显变化，曲线逐渐趋于平坦稳定。

见图1。

图1 NADPH浓度变化与发生反应时间的关系
3 实验结论
地塞米松可以通过NF-KB核转录因子的信号调控，经过细胞内的层级信号传导效应，作用于淋巴细胞的核受体上的地塞米松受体，进而触发已存在淋巴细胞的死亡程序，从而引起淋巴细胞的大规模死亡，通过对淋巴细胞DNA降解的诱导效应，影响体内葡萄糖和氨基酸以及核苷的跨膜转运，抑制淋巴细胞中相关核酸的合成，同时淋巴细胞内的ATP生成受阻（与在诱导淋巴细胞凋亡时对线粒体的间接损伤作用），造成能量供应不足，加快淋巴细胞的死亡，最重要的是地塞米松特异性靶向地抑制转录因子NF-KB的活性表达，发挥度淋巴细胞的免疫抑制作用。

因此，在临床上关于地塞米松的量化使用以及规范化使用的指导上具有深远的意义，同时也促进对自身免疫不足或免疫缺陷疾病诱发因素的研究。

通讯作者：吴柳盛（下转46页）
[J].实用中医药杂志,2016,32(5):447-448.
[2] 张焱.中西医结合治疗肝硬化腹水疗效观察[J].大家健康旬
刊,2016,10(8):588-589.
[3] 王永娟.肝硬化腹水中西医结合治疗的疗效观察[J].中国医药指
南,2016,14(9):2778-2779.[4] 谢永忠.中西医结合治疗肝炎后肝硬化腹水临床疗效观察[J].当
代医学,2016,22(29):114-115.
[5] 汤颖琦.中西医结合治疗及护理肝硬化腹水患者的效果观察[J].
医疗装备,2016,29(21):88-89.
本文编辑：刘欣悦
参考文献
[1] 杨宝峰,苏定冯.药理学[M].第八版.北京:人民卫生出版社,2015.
[2] 金惠铭,王建枝,殷莲华.病理生理学[M].第八版.北京:人民卫生
出版社,2013.[3] 吴波,马捷,孙桂勤,周晓军.淋巴细胞凋亡的超微结构观察
[J].北京:电子显微学报.2012.
本文编辑：刘欣悦
（上接34页）
目前，所采用的常规根管治疗术一般需要在完成根管预备后进行诊断封药，通常需要进行两次根管治疗或多次根管治疗，虽然该种治疗措施可取得一定的治疗效果，但该种治疗措施也给患者造成了较多的问题，并且增大了治疗后的感染率。

而随着相关的医疗技术的进步，采用一次性根管治疗急性牙髓炎的情况越来越常见。

就一次性根管治疗而言，该治疗措施主要指一次性完成根管填充、消毒以及预备工作，并及时有效的完成根管填充，从而以最快的速度完成隔绝处理，最大程度的避免了再次感染的情况发生，该治疗措施的优势主要可体现为缩短了治疗时间、就诊次数，并且有效避免了因消毒而产生的化学性根尖周炎等症状。

综上所述，在急性牙髓炎的治疗过程中采用一次性根管治疗的效果较好，减轻患者痛苦，提升了患者的预后效果，值得临床进行推广
参考文献
[1] 王全禹,毕婉婷.一次法与多次法根管治疗急性牙髓炎的效果对
比观察[J].中国实用医药,2018,13(05):70-71.
[2] 李冰,姜志.一次性与常规根管治疗术治疗急性牙髓炎的效
果比较[J].中国医药指南,2018,16(01):67.
[3] 高竹英.一次性与多次根管治疗急性牙髓炎的临床效果比较[J].
临床医学研究与实践,2017,2(29):89-90.
[4] 毛守慧.一次性与常规根管治疗术治疗急性牙髓炎的效果比较
[J].医药论坛杂志,2017,38(08):55-56.
[5] 武常亮,黄俊红,刘淑娟.一次性与常规根管治疗术治疗急性牙髓
炎的效果比较[J].世界最新医学信息文摘,2017,17(63):34+39.
本文编辑：刘欣悦
（上接37页）
[2] 张毅,李晓,姜华.老年肺栓塞患者危险因素及临床特征分
析[J].云南医药,2015,36(05):527-529.
[3] 苏晴,柳士勋,胡锴,等.老年肺栓塞患者的危险因素及临床
特征研究[J].中国老年保健医学,2015,13(04):49-50+53.
[4] 白红霞.浅析肺栓塞患者存在的危险因素及临床特征[J].当代医
药论丛,2015,13(01):212-213.
[5] 汪铮,陈孝谦,李秀.肺栓塞患者危险因素及临床特征分析
[J].临床肺科杂志,2013,18(02):255-257.
本文编辑：刘欣悦
（上接40页）
我们实验中的治疗组的治疗疗程就是基于该指南的建议。

在欧美国家，雾化治疗的应用非常普遍，经长期临床应用和研究，未见明显不良反应[5]。

但在我国，雾化治疗依然面临知晓率低、使用率低、治疗时间不够等问题。

许多家长在患儿喘息缓解或减轻后自行停药，造成喘息反复发作。

故建议儿科医师加强对患儿家属的宣教，嘱其遵医嘱、规范用药、定期复诊、个体化治疗等。

参考文献
[1] Pedersen S E,Hurd S S,Jr L R,et al.Global strategy for the
diagnosis and management of asthma in chiliren 5 years and younger[J].Experimental Hematology,2011,46(1):1.[2] 刘传合,洪建国,尚云晓,等.中国16城市儿童哮喘患病率20年对
比研究[J].中国实用儿科杂志,2015,30(8):596-600.
[3] 中华医学会儿科学会组呼吸学组.《中华儿科杂志》编辑
委员会.儿童支气管哮喘诊断与防治指南[J].中华儿科杂志,2008,46(10):745-753.
[4] 胡亚美,江载芳,申昆玲,等.诸福棠实用儿科学(第8版)[M].北京:
人民卫生出版社,2015.
[5] Sheharyar R.Durrani,Ravi K.Viswanathan,William W.Busse.
What effect does asthma treatment have on airway remodeling?
Current perspectives[J].The Journal of Allergy and Clinical Immunology,2011,128(3).
本文编辑：刘欣悦
（上接41页）。