链霉菌基因克隆载体及基因文库的构建

链霉菌基因克隆载体及基因文库的构建
唐莉;王以光
【期刊名称】《生物工程学报》
【年(卷),期】1989(005)004
【摘要】利用麦迪霉素产生菌中分离的质粒pSMY1(10.8kb),将pIJ30的硫链丝菌素抗性基因(tsr)克隆到pSMYJ上,获得了具有硫链丝菌素抗性选择标记质粒pSJ10。

通过DNA体外缺失,片段播入、λ-COS片段的插入及与大肠杆菌质粒的重组等基因技术,获得了一系列pSMY1衍生质粒,包括双标记质粒pSM3,大肠杆菌/链霉菌穿梭质粒pBMJ2和穿梭粘粒pNMJ1。

通过对这些质粒的分析,确定了质粒pSMY1的复制必需区为3.06kd的EcoRI-SphI片段。

质粒pSJ10、pSM3、pNMJ1具有可选择标记,多个单一确切的可克降位点,有一定范围的宿主并能在链霉菌中稳定存在等特点,故可作为链霉菌基因克隆的载体。

其中pNMJ1(11.15kb)是大肠杆菌/链霉菌穿梭粘粒,能有效地运载28—38kb的外源DNA片段,并能在体外包装λ-噬菌体外亮,转导大肠杆菌。

利用载体pNMJ1,通过λ-噬菌体蛋白体外包装,在大肠杆菌中建立了螺旋霉素产生菌的基因文库,其基因覆盖率可达90%。

重组DNA分子可通过转化转移到链霉菌中。

【总页数】9页(P270-278)
【作者】唐莉;王以光
【作者单位】不详;不详
【正文语种】中文
【中图分类】Q782
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