羟丙基β环糊精毛细管电泳法测定1,2

羟丙基β环糊精毛细管电泳法测定1,2
赵燕，杨兴斌，姜茹，孙晓莉，柳文敏，张生勇
【关键词】羟丙基
Enantiomeric excess analysis of 1,2diphenyl1,2ethanediol by capillary electrophoresis using HPβCD as chiral selectors
【Abstract】 AIM: To develop a new method to determine enantiomeric excesses .%) of 1,2diphenyl1,2ethanediol by capillary electrophoresis (CE). METHODS: The effects of the concentration of buffer and hydropropylβcyclodextrin ( HPβCD), pH, running voltage and capillary temperature on the enantioseparation of 1,2diphenyl1,2ethanediol were investigated by CE. Enantiomeric excesses of 4 samples synthesized by asymmetric dihydroxylation were investigated and the results determined by CE method were then evaluated by comparison with those by HPLC. RESULTS: Under the optimized conditions of 200 mmol/L boric acid buffer of pH containing 15 mmol/L HPβCD, at capillary temperature 20℃ and separation voltage 15 kV, 1,2diphenyl1,2ethanediol was completely separated with resolution as high as . Synchronously, the .% of
the 4 batches of samples determined by CE was consistent with that by HPLC. CONCLUSION: This method is simple, precise and can be applied to the chiral separation of 1,2diphenyl1,2ethanediol enantiomers and determination of .%.
【Keywords】 electrophoresis, capillary； 1,2diphenyl1, 2ethanediol； enantiomer； chiral separation； stereoisomerism
【摘要】目的：成立毛细管电泳法(CE)测定（E）1,2二苯乙烯不对称二羟化反映产物1,2二苯基乙二醇对映体过量（.%）值的新方式．方式：以HPβCD为手性选择剂，采纳毛细管区带电泳法研究背景电解质浓度、pH值、环糊精浓度、分离电压、温度等参数对1,2二苯基乙二醇对映体分离的阻碍，同时对该合成样品进行光学纯度检查，并与HPLC测定结果作比较．结果：在200 mmol/L硼酸缓冲液(pH=，15 mmol/L HPβCD，15 kV分离电压、柱温20℃的大体优化条件下，1,2二苯基乙二醇对映体取得基线分离，Rs达到．同时，该合成样品分析结果说明，4批样品的.%测定值与HPLC法结果相一致．结论：该CE方式简单、准确，可用于该1,2二苯基乙二醇的手性拆分和.%值的测定．
【关键词】电泳,毛细管；1,2二苯基乙二醇；对映体；手性分离；立体异构体
0引言
旋光性的1,2二苯基乙二醇（1,2diphenyl1,2ethanediol）既可用于手性药物合成的底物，也可作为手性催化剂用于多种反映［1-2］．在金鸡钠生物碱衍生物配体存在下，（E）1,2二苯乙烯不对称二羟化（asymmetric dihydroxylation, AD）反映是制备该手性物质最重要的方式之一［1-2］．而进一步进展该手性物质的高效拆分技术和方式关于此AD反映的反映选择性评估和产物光学纯度的鉴定具有十分重要的意义．咱们利用毛细管电泳（capillary electrophoresis，CE）手性拆分具有简单、高效、低消耗和符合绿色化学要求的特性［3-4］，选择价廉易患的羟丙基β环糊精（HPβCD）为手性选择剂，通过研究背景缓冲液浓度、pH值、环糊精浓度、操作电压及温度等因素对1,2二苯基乙二醇手性分离的阻碍，成立此对映体的最正确分离条件，并别离对以奎宁和奎尼定衍生物为锇手性配体催化合成的4批不对称二羟化产物对映体过量（enantiomeric excesses, .%）值进行了测定，以期进展一种简单方便拆分该手性物质对映体和测定.%值的CE新方式.
1材料和方式
材料P/ACETM MDQ型毛细管电泳仪系统（Beckman，USA），配有
二极管阵列检测器和Beckman System Gold软件；空心石英毛细管柱（ cm×75 μm .，有效长度 cm，Beckman公司）；320S pH计（Mettler Toledo公司）. HPβCD (Beckman公司)；其他试剂均为分析纯．实验用水为去离子蒸馏水．4批1,2二苯基乙二醇样品由本实验室通过（E）1,2二苯乙烯的不对称二羟化反映制备取得，其对映体的化学结构见图1．
图11,2二苯基乙二醇的分子结构
方式毛细管柱温度20℃，工作电压15 kV， psi气压进样5 s，二极管阵列检测．背景电解质溶液为硼酸水溶液，适量的HPβCD加入背景电解质作为手性选择剂，样品浓度为 g/L．样品溶液缓和冲液皆4℃贮存，在利用前用μm微孔滤膜滤过，超声脱气处置．每次运行前依次用 mol/L NaOH溶液、MILLIQ去离子水、电泳缓冲液冲洗柱子2 min． 2结果
分离条件的优化实验中改变电泳缓冲液中HPβCD的含量别离为5，10，15，25，50，75，100 mmol/L，测定对映体的分离度RS(图2)．不同缓冲溶液pH值（，，，，）对分离也有阻碍(图3)．增加硼酸浓度，对映体的出峰时刻有所延长，能有效增加分离度，但当硼酸浓度过大时，阻碍重现性，实验选择200 mmol/L硼酸浓度为优化的浓度．
图2HPβCD浓度对1,2二苯基乙二醇对映体分离度的阻碍
图3缓冲液pH对分离的阻碍
样品分离结果与对映体过量值的测定1#和2#样品通过锇奎宁衍生物手性配合物诱导催化合成，3#和4#样品通过锇奎尼定衍生物手性配合物诱导催化合成，是两类具有不同旋光性的样品．在200 mmol/L 硼酸缓冲液(pH=，15 mmol/L HPβCD，15 kV，20℃的大体优化条件下，别离对这4批不同旋光性或光学纯度的样品(1#,2#,3#,4#)进行了分离(图4)，并测定了其.%值，然后与HPLC分析结果作比较(表1)．
图41,2二苯基乙二醇消旋体对照品与4批样品的电泳图
3讨论
在手性分离进程中，手性选择剂的浓度高低与手性识别强弱有关，对对映体的手性分离有必然的阻碍．由图2可知，随着HPβCD 浓度的增加，分离度先急剧提高，而后缓慢下降，其中15 mmol/L时分离度最好．这与Wren等［6］以为在手性分离中总存在一个最正确的手性选择剂浓度的研究结果相一致．且HPβCD对1,2二苯基乙二醇有专门好的分离能力，浓度在15~75 mmol/L之间都可使该对映体有良好的分离度.
表11,2二苯基乙二醇.%的CE测定结果(略)
缓冲溶液pH值对分离度和迁移时刻都有专门大的阻碍．由图3可知随着pH值的增加，分离度先慢慢增加，在pH为以后那么开始降低，在pH为时分离度可达到最大．其中，在pH 至的范围内，都可使该对映体有良好的分离．但在pH 以后迁移时刻超过10 min，而在pH 时分析时刻不到10 min，也可达到的理想分离度．综合考虑迁移时刻与分离度，本实验对样品的测定选择pH 为分离酸度．依照色谱大体理论［7］，当分离度大于时，两化合物的分离程度可达%，其未分离部份小于1%，能够以为两个化合物达到基线分离．本实验在200 mmol/L 硼酸缓冲液(pH=，15 mmol/L HPβCD，15 kV，20℃的优化条件下，1,2二苯基乙二醇对映体的分离度RS为，明显大于，达到基线分离．可见，1,2二苯基乙二醇对映体分离良好，可用来测定该对映体的.%值．本实验采纳HPβCD CE方式，对4批不同光学活性或纯度的1,2二苯基乙二醇合成样品(1#，2#，3#，4#)进行了分离分析，并别离与HPLC 所测.%值比较，结果说明，本CE方式测定的对映体过量（.%）值与传统的HPLC法测定结果相一致．目前用于AD反映产物分析的方式以HPLC法为主，其它还有核磁共振法、比旋光度法等［1-2］．核磁共振法需要昂贵的手性位移试剂；比旋光度分析法误差较大；HPLC法那么不仅需要昂贵的手性柱，还需要利用大量的有机溶剂，手性柱通用性差，大量有机溶剂的利用也不符合绿色化学的要求［8］．而本CE方式
测定的1,2二苯基乙二醇对映体.%与传统的HPLC法测定结果相一致，但比HPLC法简单、经济，更符合绿色化学的要求．可见，该CE方式具有简单、准确，可用于1,2二苯基乙二醇对映体的手性拆分和.%值的测定．
【参考文献】
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