RMND5 B基因的克隆及其腺病毒载体的构建

RMND5 B基因的克隆及其腺病毒载体的构建
张仕超;范雄伟;王跃群;陈宇;尹丽阳;刘文邦;崔俊毅;蔡英桂;朱旋;陈辉;吴秀山
【期刊名称】《激光生物学报》
【年(卷),期】2016(025)004
【摘要】已有研究表明 RMND5B 可能与心肌肥大相关，但具体机制不明，RMND5B 的重组腺病毒载体的构建和鉴定为研究 RMND5B 功能提供了基础工具。

首先，设计小鼠 RMND5B 基因的特异性引物，以 cDNA 为模板， PCR 扩增RMND5B ORF 区，并在两端各加入Hind Ⅲ及SalⅠ的酶切位点。

将此片段插入到 pMD18-T 载体，再亚克隆至线性化的穿梭质粒 pAdTrack-CMV 中。

PmeⅠ
酶切线性化之后，电转化到含 pAdEasy-1的 BJ5183感受态细菌中。

在 BJ5183
细菌中发生同源重组获得了重组质粒 pAd-RMND5B 质粒。

PacⅠ酶切线性化之
后转染293A细胞，经过包装获得腺病毒 AdRMND5B。

将此腺病毒感染新生大
鼠原代心肌细胞，并在一段时间后观察绿色荧光并通过 RT-PCR 检测 RMND5B
的表达情况。

结果表明，成功构建了 RMND5B 的重组腺病毒载体并实现了 Ad-RMND5B 在新生大鼠原代心肌细胞中表达，为进一步研究 RMND5B 基因在心肌肥大中的作用奠定了良好的实验基础。

%Studies have proved that RMND5B might be associated with myocardial hypertrophy but specific mechanism was not clear yet.The construction of RMND5B recombinant adenovirus vector provided the basis tools for RMND5B function research.First of
all,specific primers for the mouse RMND5B gene were designed and employed to amplify RMND5B ORF area using cDNAs as the template.At the same time joined Hind Ⅲ and SalⅠenzyme loci at each end.This
fragment was inserted into the pMD18-T carrier and subcloned to linearized pAdTrack-CMV shuttle plasmid.It was electroporated into the competence of BJ5183 bacteria with pAdEasy-1 after linearized by
PmeⅠenzyme.Homologous recombination occurred during BJ5183 bacteria and finally obtained the recombinant pAd-RMND5B plasmid.It was used to infect 293A cells after linearized by PacⅠenzyme and adenovirus AdRMND5B was obtained after packaging.The ad-enovirus infected primary myocardial cells of neonatal rat,and after a period of time the green fluorescence was ob-served.Then the expression of RMND5B was detected by RT-PCR and agarose gel electrophoresis.Above results proved that we successfully built the mice RMND5B recombinant adenovirus vector and implemented the AdRMND5B expressed in primary myocardial cells of neonatal rat laid a solid experimental foundation for
the further studies on the function of RMND5B gene of myocardial hypertrophy.
【总页数】6页(P350-355)
【作者】张仕超;范雄伟;王跃群;陈宇;尹丽阳;刘文邦;崔俊毅;蔡英桂;朱旋;陈辉;吴秀山
【作者单位】湖南师范大学蛋白质化学及鱼类发育生物学教育部重点实验室，心脏发育研究中心，湖南长沙 410081;湖南师范大学蛋白质化学及鱼类发育生物学教
育部重点实验室，心脏发育研究中心，湖南长沙 410081;湖南师范大学蛋白质化
学及鱼类发育生物学教育部重点实验室，心脏发育研究中心，湖南长沙 410081;
湖南师范大学蛋白质化学及鱼类发育生物学教育部重点实验室，心脏发育研究中心，
湖南长沙410081;湖南师范大学蛋白质化学及鱼类发育生物学教育部重点实验室，心脏发育研究中心，湖南长沙 410081;湖南师范大学蛋白质化学及鱼类发育生物
学教育部重点实验室，心脏发育研究中心，湖南长沙 410081;湖南师范大学蛋白
质化学及鱼类发育生物学教育部重点实验室，心脏发育研究中心，湖南长沙410081;湖南师范大学蛋白质化学及鱼类发育生物学教育部重点实验室，心脏发育研究中心，湖南长沙 410081;湖南师范大学蛋白质化学及鱼类发育生物学教育部
重点实验室，心脏发育研究中心，湖南长沙 410081;湖南师范大学蛋白质化学及
鱼类发育生物学教育部重点实验室，心脏发育研究中心，湖南长沙 410081;湖南
师范大学蛋白质化学及鱼类发育生物学教育部重点实验室，心脏发育研究中心，湖南长沙 410081
【正文语种】中文
【中图分类】Q782
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