拟南芥种植及处理基本方法

[转载]拟南芥培养

[转载]拟南芥培养一、拟南芥播种种子装入dorf管内，20μl种子加1ml 75% 乙醇消毒1分钟；吸去乙醇，加入1ml 50%次氯酸钠：50%无菌水：0.05%吐温（or 5%漂白粉），震荡洗涤15-20分钟；稍离心使种子沉于下部，吸去次氯酸钠或漂白粉，加入无菌蒸馏水清洗（清洗3次，每次洗完后稍离心，吸净水分）；将种子用接种环均匀铺于MS培养基上，用封口膜封口，放入4℃冰箱内冷处理2-3天（春化）。

MS培养基的用量：直径为9cm的培养皿用25ml，直径为6cm 的培养皿用12.5ml。

加培养基时先将凝固的培养基用微波炉高温5分钟左右至全部解冻，然后慢慢冷却至不太烫手时倒板，如要加潮霉素等抗生素也是在此次加，加入后摇匀然后倒板。

倒板后至自然冷却即可铺种，如水分较多或板不够硬，亦可于倒板后将培养皿盖打开晾10分钟左右（此时超净台要关闭）。

种子的杀菌、清洗、铺板等过程在超净工作台上无菌操作，操作者进入超净工作台要用酒精棉球擦拭手、器具、超净台，防止感染细菌、真菌。

二、MS固体培养基制备1．培养基母液的配制和保存MS培养基含有近30种营养成分，为了避免每次配制培养基都要对这几十种成分进行称量，可将培养基中的各种成分，按原量的20倍或200倍分别称量，配成浓缩液，这种浓缩液叫做培养基母液。

这样每次使用时，取其总量的1/20(50 mL)或1/200(5 mL)，加水稀释，制成培养液。

现将制备培养基母液所需的各类物质的量列出，供配制时使用。

大量元素(母液Ⅰ，20×) mg／LNH4NO3 33 000KNO3 38 000CaCl2·2H2O 8 800MgSO4·7H2O 7 400KH2PO4 3 400微量元素(母液Ⅱ，200×) mg／LKI 166H3BO3 1 240MnSO4·4H2O 4 460ZnSO4·7H2O 1 720Na2MoO4·2H2O 50CuSO4·5H2O 5CoCl2·6H2O 5铁盐(母液Ⅲ，200×) mg／LFeSO4·7H2O 5 560Na2-EDTA·2H2O 7 460有机成分(母液Ⅳ，200×) mg／LⅣA肌醇 20 000ⅣB烟酸 100盐酸吡哆醇(维生素B6) 100盐酸硫胺素(维生素B1) 100甘氨酸 400上述几种母液都要单独配成1 L的贮备液。

拟南芥种植方法.doc

培养基上点种子：1.种子处理1.1 种子消毒处理在培养基中点样前，必须对种子进行消毒，防止感菌，具体方法为：先将种子倒在干净的纸上，挑去大的杂质，再将种子倒入EP管中，加入1mL70%酒精，振荡10min，将种子放在超净台中吹干。

1.2 点样将消毒处理后的种子，可以利用牙签点到培养基上，每次仅点一粒种子，根据培养皿的大小，确定一个里面能够点多少个种子，每个90mm培养皿上大约种30粒种子，防止植株长大后影响根与子叶的发育。

1.3 春化种子点样完毕后，将培养基密封，置于4℃冰箱里放置72h后，放回温室。

土培法：1.种种子前，要将营养土用自来水混匀后，121℃灭菌30min，待土冷却后，装入种植拟南芥的方盒中，再将方盒放入红色托盘中。

2.将要点的种子平铺在称量纸上，用牙签蘸取一粒种子点在营养土上,每点一个小盒时都用牙签做标记，以免遗种某个盒子。

（每个小盒子种5粒种子，每个大方盒子种9粒种子）3.将点了拟南芥种子的托盘置于22℃温室，并用一个干净的托盘盖在上面，大约两天后就可以打开上面的托盘，待植物长出4片叶子时，可以根据自己的实验需求对植物的幼苗进行取舍。

4.植株生长条件的控制幼苗移植后将花盆置于温室内，保证温室温度恒定在22℃，空气湿度70—80%，光照强度100—150μmol/m2/s，每天浇两次纯净水，上午9点左右一次，下午5点左右一次；一周浇一次营养液（1平匙溶于1L水中），营养液要灌在盆底。

浇水注意事项：1）水不可以浇的过多或过少，用手捏起一些土能挤出水来说明就有点太湿；2）水要浇均匀，托盘四个角的方向如果喷壶喷不到，可以用挤瓶均匀地喷一些水；3）用喷壶浇水时，喷壶的水柱不可以太大，以免把植物连根拔起；4）当植株出现花芽时，一定要保证水分的供应，促进果实的发育。

当植株结有豆荚时，可以适当的减少供水量，每两三天浇一次水便可，以利于种子的成熟。

开花后的植物不能再用喷壶浇水，要从盆底灌水，但不可以一次性灌太多水；5）在盆底灌水后，待植物吸收完水后，可以将盆底多余的水分倒出来；6）拟南芥受到胁迫判断标准：叶柄发紫，叶片发黄，开花期提前等；7）如果做生理实验，植物一旦受到胁迫，需要把植物丢弃，重新种植，以免实验数据不准确。

实验室拟南芥常用种植方法

4.2 种子的干燥和贮存
贮存过程中影响种子寿命的主要是温度和含水量。温度越高，含水量越多，则种子寿命越短。因此刚采集的种子必须要经过干燥才能保存。最安全的种子干燥的方法是将采集的种子置于干燥环境下，在室温条件下放置 2-3 周便可。
种子的贮存可根据贮存的目的不同，分为短期、中期、长期贮藏。一般短、中期贮藏是将种子贮存在 4℃，而长期贮藏是保持在-20℃温度下。当取用长期贮藏的种子前，先将贮存种子的容器预热到室温，或者将其置于 37℃水浴 10min，以尽量使冰害降至最低。为了及时了解贮存过程合适与否，一般对种子定期进行生活力测定，而种子发芽率是测定其生活力的最佳选择。
拟南芥实验室的常用种植方法刘金亮西北师范大学生命科学学院730070摘要拟南芥由于其生活周期短种植和生长不受季节限制并且为自花受粉植物而作为实验最常用的模式植物因此拟南芥如何能够在实验室较好较快地生长便成为实验成败的关键由于拟南芥存在多种生态性各实验室均有各自适合栽培种植的方法如在土壤石英砂琼脂等均可种植但土壤种植种子萌发率低生长过程中受其它方面影响大故本方法重点介绍利用琼脂无菌培养基培养幼苗和移植相结合的方法来快速种植拟南芥该过程主包括种子的处理琼脂无要菌培养基上种子的培养和幼苗的移植以及成熟后种子的保存
过厚或过薄。过薄，点种子后水分蒸发快，培养基有可能干涸；过厚，种子发芽后，有可能使叶子浸入平板中，影响幼苗后期发育并且过厚平板易开裂。
1.2 种子处理 1.2.1 种子消毒处理
在培养基中点样前，必须对对钟子进行消毒，防止感菌，具体方法为：利用 1%Naclo 浸泡 10min，离心后，倒掉 Naclo，然后用无菌蒸馏水洗涤 5-6 遍，时间间隔为 1min，注意的是 Naclo 浓度不易过高和种子处理时间不易过长，有可能伤害种子。

拟南芥植物组织培养

拟南芥植物组织培养 WTD standardization office【WTD 5AB- WTDK 08- WTD 2C】拟南芥组织培养一、种子消毒：方法一：将拟南芥种子置于1 .5 ml eppendorf 管(微量离心管)中，加入1 ml 蒸馏水，4C春化3 d，70 %（v／v ）乙醇1mi n、7 %（v／v ）次氯酸钠10 mi n 浸泡消毒，并用无菌水冲洗5 次。

方法二：在超净工作台内，用无菌蒸馏水浸泡1 min，然后用80％乙醇消毒90s，最后用无菌蒸馏水冲洗3～5次备用。

消毒完毕的种子可以用200ul的tips吸去洗涤液，然后在超净工作台上挥发掉残余水分、洗涤液。

方法三、取野生型拟南芥种子放人离心管内，75％乙醇清洗后，无菌蒸馏水清洗1—2次，转入无菌离心管；5％次氯酸钠溶液浸泡5—6 min，用无菌蒸馏水清洗3～4次，加入1 ml无菌水，用移液枪接种。

二、选用的培养基选用1/2MS培养基对种子进行培养。

（MS和1/2MS都可以，1/2MS就是大量元素减半，其他东西和ms培养基是一样的量。

糖可以加，会长得比较好，但是也很容易污染。

如果在平板上要生长时间比较长，需要做一些实验的，比如根的发育，最好不要加。

）也可以用MS+30 g／L蔗糖的固体培养基。

（我想两种培养基都接种上，比作对比确定好坏）。

MS培养基配料表：三：接种方法拟南芥种子消毒后，用移液枪吸取拟南芥种子和水的混合物，均匀地在MS 生长培养基的培养皿平板上滴落，并使之形成两条平行的直线。

（如不行，可适当添加琼脂）。

四、培养得无菌苗接种后置于光照培养箱(型号：GXZ．500C；培养光照条件为16小时光照，8小时黑暗，培养温度为22℃中竖直培养。

3天后即可取材用于器官离体再生实验。

萌发5天后，在超净工作台中，用镊子将苗移栽到装有1／2 MS培养基的50ml三角瓶中（每瓶4--6棵，视情况而定），于短日照条件下培养30天左右获得无菌苗。

拟南芥种植及处理基本方法

1 培养基MS培养基（Sigma公司）B5培养基（pH 5.5）改良的1/4 Hoagland 培养液（mM, pH6.0）：2 植物材料的常规种植拟南芥种子均匀地播撒于1/3 B5液体培养基浸润的蛭石上，塑料膜遮盖至种子萌发，揭开膜，让其自然生长，适当间苗，烤苗至蛭石表面干燥后加水。

置于23 o C，16/8 h的光照培养间中生长。

3 拟南芥种子的表面灭菌处理1）拟南芥种子在4 C下春化3-5天。

2）在超净台上用70%酒精处理种子2-5分钟。

3）弃去酒精，用无菌水洗1-2次。

4）将种子用15% Bleach （KAO公司）处理15分钟，间歇振荡。

5）用无菌水洗4-6次，每次充分振荡混匀。

6）将种子悬浮在灭菌的0.1% Agar中。

7）均匀地将种子播撒在B5培养基平皿中。

4 植物材料的水培体系拟南芥种子经表面灭菌处理后均匀播撒于1/2 MS固体培养基上，10-15粒/皿，生长2周后，小心地将其转入水培体系中。

水培体系是由培养皿及起支撑作用的锡箔纸组成。

培养皿中盛适当的液体培养基（通常用上述改良的1/4 Hoagland培养液）；锡箔纸上留出相距适当的小洞后，盖于培养皿之上。

将拟南芥幼苗的根小心地经由锡箔纸上的小洞浸入培养液中。

塑料膜覆盖，2-3天后揭去。

整个体系置于光照培养间中生长，每3-6天更换一次培养液。

5 拟南芥T-DNA插入突变体的筛选方法到网站/tdnaprimers.html输入salk号设计引物LP、RPT-DNA LB：LBb1: GCGTGGACCGCTTGCTGCAACTLBa1: TGGTTCACGTAGTGGGCCATCG用于PCR扩增。

采用双引物法，分别用LP＋RP，BP＋RP扩增基因组DNA。

方法：1)将拟南芥突变体种子播种于MS培养基平皿中，生长2周后，将其转入蛭石中，待长至抽苔期准备DNA的提取。

2)DNA提取缓冲液的配制：3)剪取一片叶于1.5 ml Eppendorf管中，液氮充分研磨。

拟南芥种植方法

培养基上点种子：1.种子处理1.1 种子消毒处理在培养基中点样前，必须对种子进行消毒，防止感菌，具体方法为：先将种子倒在干净的纸上，挑去大的杂质，再将种子倒入EP管中，加入1mL70%酒精，振荡10min，将种子放在超净台中吹干。

1.2 点样将消毒处理后的种子，可以利用牙签点到培养基上，每次仅点一粒种子，根据培养皿的大小，确定一个里面能够点多少个种子，每个90mm培养皿上大约种30粒种子，防止植株长大后影响根与子叶的发育。

1.3 春化种子点样完毕后，将培养基密封，置于4℃冰箱里放置72h后，放回温室。

土培法：1.种种子前，要将营养土用自来水混匀后，121℃灭菌30min，待土冷却后，装入种植拟南芥的方盒中，再将方盒放入红色托盘中。

2.将要点的种子平铺在称量纸上，用牙签蘸取一粒种子点在营养土上,每点一个小盒时都用牙签做标记，以免遗种某个盒子。

（每个小盒子种5粒种子，每个大方盒子种9粒种子）3.将点了拟南芥种子的托盘置于22℃温室，并用一个干净的托盘盖在上面，大约两天后就可以打开上面的托盘，待植物长出4片叶子时，可以根据自己的实验需求对植物的幼苗进行取舍。

4.植株生长条件的控制幼苗移植后将花盆置于温室内，保证温室温度恒定在22℃，空气湿度70—80%，光照强度100—150μmol/m2/s，每天浇两次纯净水，上午9点左右一次，下午5点左右一次；一周浇一次营养液（1平匙溶于1L水中），营养液要灌在盆底。

浇水注意事项：1）水不可以浇的过多或过少，用手捏起一些土能挤出水来说明就有点太湿；2）水要浇均匀，托盘四个角的方向如果喷壶喷不到，可以用挤瓶均匀地喷一些水；3）用喷壶浇水时，喷壶的水柱不可以太大，以免把植物连根拔起；4）当植株出现花芽时，一定要保证水分的供应，促进果实的发育。

当植株结有豆荚时，可以适当的减少供水量，每两三天浇一次水便可，以利于种子的成熟。

开花后的植物不能再用喷壶浇水，要从盆底灌水，但不可以一次性灌太多水；5）在盆底灌水后，待植物吸收完水后，可以将盆底多余的水分倒出来；6）拟南芥受到胁迫判断标准：叶柄发紫，叶片发黄，开花期提前等；7）如果做生理实验，植物一旦受到胁迫，需要把植物丢弃，重新种植，以免实验数据不准确。

拟南芥种植

拟南芥种植方法
一．拟南芥生长条件
拟南芥生长的适宜温度白天为22-24℃左右，夜温最好比日温低2℃。

拟南芥在日照长于12小时下才会开花，一般拟南芥生长室的日照长度定于14-16h为佳，土壤湿度70%—80%，营养土：蛭石=1：1，3—4天浇一次营养液，从底盘浸入。

二．种子处理
1.取适量种子置于标记好的1.5ml离心管中，加入1 ml 70％乙醇轻微振1 min；
2.去乙醇，加入1 ml体积分数为10％的NaClO (次氯酸钠), 消毒5~10 min；
3.吸去NaClO, 用无菌水冲洗种子5次后, 加入600μl无菌水；
4.取适量拟南芥种子至10 ml 离心管中，加入0.05%的琼脂悬浮，置于4℃冰箱低温春化处理2-3 天。

三．土壤培养
将已春化处理的拟南芥种子，用消过毒的牙签或者移液枪将种子，点播在土壤中，一盆2—3颗即可，将花盆放入有水的底盘中,框中的水就会通过花盆底部的孔渗上来，待花盆中的基质湿透后即可点播。

用保鲜膜覆盖1-2天后揭膜，如果苗很弱，则在此基础上还需多覆盖1天。

当到4叶期时，要适当移苗，每盆一株。

小心轻轻用镊子拨开周围土壤，连根取出小苗（注意不要伤害根部）。

苗期不使用营养液，移栽后3-4天使用一次营养液，期间视情况浇水，但不要在底盘中始终保持水层。

在开始收籽期,不再需要过多的水分，可保持底盘干燥，此时每隔7-10天加一次水即可。

在种荚变黄，变干时可以收籽。

将种子抖落在纸上，用金属滤网过一下以除去杂质，将种子装入写了标记的小纸袋中，放于干燥的环境中让种子进一步干燥后，封存于1.5ml试管中，切记越干越好，长期保存的种子必需要干燥保存到4℃。

拟南芥培育方法

拟南芥培育方法—通用指南一、原理拟南芥作为高等植物的模式生物被全世界的植物生物学实验室广泛研究。

然而，照顾好这种小植物可能不是那么容易。

这里介绍一个马里兰大学帕克学院的HevenSze实验室的通用指南。

Sze实验室及其他实验室的成员为建立这个在实验室培育拟南芥的通用指南做出了许多努力。

二、步骤1. 准备种植用土我们使用Miracle-Gro混合土（2立方英尺一袋）与Miracle-Gro珍珠岩（8夸脱一袋）来培养拟南芥，在一个可以放下2袋混合土的大容器中和土，1袋混合土（2立方英尺）混入半袋珍珠岩（4夸脱）。

注意：Sze实验室在装土之前经常将土灭菌！（方法如下）（1）将干土放入灭菌容器中，直至与顶部相差一英寸，将土拍实。

（2）用铝箔纸将容器封住，在每一个容器上放一张灭菌用胶带，缠好。

确保容器外没有土，放入灭菌锅。

（3）用常规/秒速/快速模式灭菌30~50 min，灭菌模式及时间取决于灭菌的容器数量。

（4）当温度降至室温，将土放入花盆，轻轻压实。

记住将灭菌土保存好，避免种子或菌类污染。

灭过菌的土至少可以使用两星期，如无需要请不要多次灭菌。

（5）将花盆用去离子水浸没（不要超过土表面）用humidomes覆盖，使其吸水3-6小时或过夜。

吸水后应该还保存约1英寸高的水，如果没有请添水。

（6）此时的土可以用于种植拟南芥。

2. 种子消毒方法A（1）取适量种子（野生型、突变体或互补株系）置于一个EP管中，加1 ml 消毒溶液。

消毒溶液：20%Chlorox消毒液0.05%Tween-20用新灭过菌的无菌水配制。

（2）用振荡器以最大速度震荡20-30秒。

（3）放置7-10 min，偶尔震荡一下。

（4）8 000 rpm 离心5秒。

（5）仔细将水倒出。

（6）加1 ml 无菌水，震荡重旋种子。

（7）8 000 rpm 离心5秒，倒去上清。

（8）重复步骤6-7，重复四次。

（9）将灭菌的种子移到底部铺有无菌滤纸的小Fisher盘（100×15 mm）中。

拟南芥种植及处理基本方法

1 培养基MS培养基（Sigma公司）B5培养基（pH 5.5）改良的1/4 Hoagland 培养液（mM, pH6.0）：2 植物材料的常规种植拟南芥种子均匀地播撒于1/3 B5液体培养基浸润的蛭石上，塑料膜遮盖至种子萌发，揭开膜，让其自然生长，适当间苗，烤苗至蛭石表面干燥后加水。

置于23 o C，16/8 h的光照培养间中生长。

3 拟南芥种子的表面灭菌处理1）拟南芥种子在4 C下春化3-5天。

2）在超净台上用70%酒精处理种子2-5分钟。

3）弃去酒精，用无菌水洗1-2次。

4）将种子用15% Bleach （KAO公司）处理15分钟，间歇振荡。

5）用无菌水洗4-6次，每次充分振荡混匀。

6）将种子悬浮在灭菌的0.1% Agar中。

7）均匀地将种子播撒在B5培养基平皿中。

4 植物材料的水培体系拟南芥种子经表面灭菌处理后均匀播撒于1/2 MS固体培养基上，10-15粒/皿，生长2周后，小心地将其转入水培体系中。

水培体系是由培养皿及起支撑作用的锡箔纸组成。

培养皿中盛适当的液体培养基（通常用上述改良的1/4 Hoagland培养液）；锡箔纸上留出相距适当的小洞后，盖于培养皿之上。

将拟南芥幼苗的根小心地经由锡箔纸上的小洞浸入培养液中。

塑料膜覆盖，2-3天后揭去。

整个体系置于光照培养间中生长，每3-6天更换一次培养液。

5 拟南芥T-DNA插入突变体的筛选方法到网站/tdnaprimers.html输入salk号设计引物LP、RPT-DNA LB：LBb1: GCGTGGACCGCTTGCTGCAACTLBa1: TGGTTCACGTAGTGGGCCATCG用于PCR扩增。

采用双引物法，分别用LP＋RP，BP＋RP扩增基因组DNA。

方法：1)将拟南芥突变体种子播种于MS培养基平皿中，生长2周后，将其转入蛭石中，待长至抽苔期准备DNA的提取。

2)DNA提取缓冲液的配制：3)剪取一片叶于1.5 ml Eppendorf管中，液氮充分研磨。

拟南芥种植方法

拟南芥种植方法Document serial number【KKGB-LBS98YT-BS8CB-BSUT-BST108】培养基上点种子：1.种子处理1.1 种子消毒处理在培养基中点样前，必须对种子进行消毒，防止感菌，具体方法为：先将种子倒在干净的纸上，挑去大的杂质，再将种子倒入EP管中，加入1mL70%酒精，振荡10min，将种子放在超净台中吹干。

1.2 点样将消毒处理后的种子，可以利用牙签点到培养基上，每次仅点一粒种子，根据培养皿的大小，确定一个里面能够点多少个种子，每个90mm培养皿上大约种30粒种子，防止植株长大后影响根与子叶的发育。

1.3 春化种子点样完毕后，将培养基密封，置于4℃冰箱里放置72h后，放回温室。

土培法：1.种种子前，要将营养土用自来水混匀后，121℃灭菌30min，待土冷却后，装入种植拟南芥的方盒中，再将方盒放入红色托盘中。

2.将要点的种子平铺在称量纸上，用牙签蘸取一粒种子点在营养土上,每点一个小盒时都用牙签做标记，以免遗种某个盒子。

（每个小盒子种5粒种子，每个大方盒子种9粒种子）3.将点了拟南芥种子的托盘置于22℃温室，并用一个干净的托盘盖在上面，大约两天后就可以打开上面的托盘，待植物长出4片叶子时，可以根据自己的实验需求对植物的幼苗进行取舍。

4.植株生长条件的控制幼苗移植后将花盆置于温室内，保证温室温度恒定在22℃，空气湿度70—80%，光照强度100—150μmol/m2/s，每天浇两次纯净水，上午9点左右一次，下午5点左右一次；一周浇一次营养液（1平匙溶于1L水中），营养液要灌在盆底。

浇水注意事项：1）水不可以浇的过多或过少，用手捏起一些土能挤出水来说明就有点太湿；2）水要浇均匀，托盘四个角的方向如果喷壶喷不到，可以用挤瓶均匀地喷一些水；3）用喷壶浇水时，喷壶的水柱不可以太大，以免把植物连根拔起；4）当植株出现花芽时，一定要保证水分的供应，促进果实的发育。

当植株结有豆荚时，可以适当的减少供水量，每两三天浇一次水便可，以利于种子的成熟。

拟南芥培养

一．拟南芥生长过程拟南芥生长的适宜温度白天为22℃-24℃,夜温最好比日温低2℃,适宜的湿度为60-70%,生长期适宜的光强为150μmol·s-1·m-2.拟南芥在日照长于12小时下才会开花,一般拟南芥生长室的日照长度定于14-16h为佳。

1．准备发苗培养基:1/2 MS,Sucrose:10g/L,pH5.7,agar:0.7-0.8%.灭菌后,在超净台上分装入培养皿.2．种子消毒有两种方法：一种是湿法NaClO水溶液消毒:种子放在1.5ml试管中, 加入1ml10%NaClo,混匀,消毒5min,用无菌水洗5次以上(用移液枪吸)，湿法消毒后的种子要马上播；另一种是干法8%NaClO 酒精溶液，此时需用95%的酒精来配制8%NaClO 酒精溶液。

在8%NaClO 酒精溶液中消毒6-8min。

然后用无水酒精洗种子5次以上，吸干无水酒精后，在超净工作台上吹干透后再密闭保存。

3．播种：对湿法NaClO水溶液消毒种子用移液枪将种子吸到培养皿上,可多加些水,将种子铺均匀(不要太密,太密根缠在一起不好移苗),用移液枪吸干水,在超净台上让培养皿干了；对干法消毒的种子，用无菌牙签将种子点播到培养基上。

用Parafilm密封盖子后,请用牙签或镊子在上下两处各打4个小孔以通气。

最好是在每皿<30株这样的密度下,让其生长两周后再移苗. 4.移苗及后续管理:如果培养基质用花泥，将花泥装入花盆,将花盆放入有水的塑料周转框中,框中的水就会通过花盆底部的孔渗上来,待花盆中的基质湿透后即可移苗.小心轻轻用镊子从培养皿中连根取出小苗,把苗种入花泥中.移苗结束后,用保鲜膜覆盖1-2天后揭膜，如果苗很弱，则在此基础上还需多覆盖1天.在花泥中种植时，苗期不需要添加营养液，开始抽苔时请及时添加营养液，一般需要添加2次，每次加入1升拟南芥营养液，2次添加最好间隔一段生长时期（7-10天），由于花泥有较好的吸附缓释能力，对间隔时间长短没有严格要求。

拟南芥种植及处理基本方法

.'1培养基MS培养基（ Sigma公司）B5培养基（ pH 5.5）Content mg/L Content mg/L Content mg/LKNO2500. 2.0Nicotinic1 3ZnSO4 7H2O.150H3BO3 3.0Thiamine HCl10CaCl 2H O22.250KI0.75Pyrindoxine1 MgSO4 7H2O.150.NaH2PO4 H2O Na2MoO4 2H2O.27.8.FeSO4 7H2O CoCl 2 6H2O.10Na2EDTAMnSO4 H2O.0.025CuSO 5H O42改良的 1/4 Hoagland 培养液（ mM, pH6.0 ）：Content mM ContentKNO 31.25ZnSO40.25m-Inositol1000.025Glycine20037.3Kinetin0.1IAA0.1-1mM0.002Ca(NO3)21.500.050H3BO3MgSO40.75KCl0.050KH 2PO40.5(NH 4)6Mo0.0757O24FeSO40.0720.0015CuSO4Na2EDTA 0.0720.1Na2SiO32植物材料的常规种植拟南芥种子均匀地播撒于1/3 B5液体培养基浸润的蛭石上，塑料膜遮盖至种子萌o 发，揭开膜，让其自然生长，适当间苗，烤苗至蛭石表面干燥后加水。

置于 23 C，16/8 h的光照培养间中生长。

3拟南芥种子的表面灭菌处理1）拟南芥种子在 4 C 下春化 3-5 天。

2）在超净台上用 70%酒精处理种子 2-5 分钟。

3）弃去酒精，用无菌水洗1-2 次。

4）将种子用 15% Bleach （KAO 公司）处理15分钟，间歇振荡。

5）用无菌水洗 4-6 次，每次充分振荡混匀。

6）将种子悬浮在灭菌的0.1% Agar 中。

7）均匀地将种子播撒在B5 培养基平皿中。

4植物材料的水培体系拟南芥种子经表面灭菌处理后均匀播撒于1/2 MS固体培养基上，10-15粒 /皿，生长 2周后，小心地将其转入水培体系中。

拟南芥种植方法

培养基上点种子：1.种子处理1.1种子消毒处理在培养基中点样前，必须对种子进行消毒，防止感菌，具体方法为：先将种子倒在干净的纸上，挑去大的杂质，再将种子倒入EP管中，加入1mL70%酒精，振荡10min，将种子放在超净台中吹干。

1.2点样将消毒处理后的种子，可以利用牙签点到培养基上，每次仅点一粒种子，根据培养皿的大小，确定一个里面能够点多少个种子，每个90mm培养皿上大约种30粒种子，防止植株长大后影响根与子叶的发育。

1.3春化种子点样完毕后，将培养基密封，置于4℃冰箱里放置72h后，放回温室。

土培法：1.种种子前，要将营养土用自来水混匀后，121℃灭菌30min，待土冷却后，装入种植拟南芥的方盒中，再将方盒放入红色托盘中。

2.将要点的种子平铺在称量纸上，用牙签蘸取一粒种子点在营养土上,每点一个小盒时都用牙签做标记，以免遗种某个盒子。

（每个小盒子种5粒种子，每个大方盒子种9粒种子）3.将点了拟南芥种子的托盘置于22℃温室，并用一个干净的托盘盖在上面，大约两天后就可以打开上面的托盘，待植物长出4片叶子时，可以根据自己的实验需求对植物的幼苗进行取舍。

4.植株生长条件的控制幼苗移植后将花盆置于温室内，保证温室温度恒定在22℃，空气湿度70—80%，光照强度100—150μmol/m2/s，每天浇两次纯净水，上午9点左右一次，下午5点左右一次；一周浇一次营养液（1平匙溶于1L水中），营养液要灌在盆底。

浇水注意事项：1）水不可以浇的过多或过少，用手捏起一些土能挤出水来说明就有点太湿；2）水要浇均匀，托盘四个角的方向如果喷壶喷不到，可以用挤瓶均匀地喷一些水；3）用喷壶浇水时，喷壶的水柱不可以太大，以免把植物连根拔起；4）当植株出现花芽时，一定要保证水分的供应，促进果实的发育。

当植株结有豆荚时，可以适当的减少供水量，每两三天浇一次水便可，以利于种子的成熟。

开花后的植物不能再用喷壶浇水，要从盆底灌水，但不可以一次性灌太多水；5）在盆底灌水后，待植物吸收完水后，可以将盆底多余的水分倒出来；6）拟南芥受到胁迫判断标准：叶柄发紫，叶片发黄，开花期提前等；7）如果做生理实验，植物一旦受到胁迫，需要把植物丢弃，重新种植，以免实验数据不准确。

拟南芥栽培方法

拟南芥栽培方法
1．装土：泥炭（tref型号705#）和蛭石的配比为2：1，混匀装在盆里压实，用1倍的MS 大量浸盆，基质一定要完全湿润。

2．泡种子：取适量拟南芥种子装在2 ml的离心管中，加入1 ml 水放在4度冰箱3 d，打破种子休眠。

3．播种：播种前，土面喷水至湿润。

将种子到在滤纸上，用牙签或竹签挑起种子放在土面上，建议一个花盆中播5颗。

播种完毕盖上透明盖子，放在培养箱中，一般2d就可以发芽。

4．待长至20 d左右，即可揭盖，再浇一次MS大量。

生长期间应每隔2-3 d观察一次生长状况，补充水分。

5．主要虫害是蚜虫和一种小飞蝇（幼虫在土壤中以拟南芥的根为食），一般用吡呀酮，灭蝇胺防治。

拟南芥种植到培养基中的方法

拟南芥种植到培养基中的
方法
It was last revised on January 2, 2021
拟南芥种植到培养基中的方法
材料：1/2MS培养基、植物组织培养专用琼脂、1ml吸头（灭菌）、0.1%琼脂糖、水（灭菌）、75%酒精
种植过程在超净工作台内进行，具体方法为：
1、种植前先将实验过程中用到的物品放到超净工作台，紫外线灭菌15分钟左右，提供一个相对无菌的环境。

注：种子不能放在紫外灯下照射，以免引起损伤和变异。

2、用75%酒精棉球将暴露于实验台内的手及其他部分擦拭一遍，起消毒作用，种植过程中最好不要在上风向放东西，手也最好不要在上风向经过。

3、在放有种子的离心管中加入75%的酒精，消毒5分钟左右，时间不宜过长以免影响种子的活性。

酒精的量大约为离心管体积的2/3，上下颠倒离心管使种子与酒精充分接触。

种子不宜过多（超过50ul），否则消毒效果不好。

4、消毒完后，将离心管中的酒精吸出，用灭菌的ddH2O漂洗3-5遍，注意有一些种子会漂浮在水中。

在洗的过程中用移液器慢慢吹打，注意更换吸头，避免交叉污染。

5、种子漂洗完后将适量0.1%琼脂糖加入离心管中。

之所以用琼脂糖而不是水是因为琼脂糖有粘性，种子会悬浮在其中，而在水中种子一般都沉在底部不便于种植。

将种子均匀滴到1/2MS培养基中，每个平皿大约种植30粒左右，在培养皿的盖和底部最好都要写上种植的拟南芥的名称以及日期，最后用胶条将培养皿封口。

6、将培养皿放到4℃冰箱中（主要是让种子均匀发芽），2-3天后便可拿到培养间中。

拟南芥盆栽方案

拟南芥盆栽方案拟南芥（学名：Arabidopsis thaliana）是一种小型的一年生植物，因其生命周期短、易于培养和遗传实验的可行性，被广泛应用于植物科学研究中。

在本文中，我们将提供一个拟南芥盆栽方案，以帮助那些对这一植物进行自家种植的人。

1. 材料准备- 拟南芥种子：可在植物学实验室、种子公司或在线购买。

- 盆：选择适宜大小的盆，保证拟南芥根系能够充分扩展。

- 泥土：使用适宜的培养土，可在花草市场或园艺店购买。

- 平底盘或托盘：用于放置盆，以避免水滴在室内滴落。

2. 盆栽步骤2.1 准备盆土选择质地疏松、排水良好的培养土。

可以将培养土轻轻湿润，但避免过于湿润，以免引发根部腐烂。

2.2 播种将拟南芥种子均匀撒在培养土表面上，并轻轻压实，不要完全覆盖种子。

拟南芥种子较小，所以要小心操作，以确保均匀分散。

2.3 浇水使用喷壶或水壶从顶部轻轻喷洒水，保持培养土湿润。

避免使用喷头过大或水流过大的工具，以免种子被冲走。

2.4 光照与温度控制拟南芥适宜在温度适宜、充足的光照下生长。

将盆栽置于明亮的窗户旁或人工照明设备下。

室温保持在20-25摄氏度之间。

2.5 生长环境调节拟南芥对于光照的要求较高，因此要经常转动盆栽，以保证植株各个方向都能得到充足的光照。

如果环境光线不足，可以补充使用植物专用灯。

2.6 浇水与施肥保持培养土湿润，但避免过度浇水，以免引发根系病害。

约每周浇水一次，根据环境湿度和季节的变化做适当调整。

在生长过程中可以适时施加适量的植物营养液，以促进拟南芥的生长和发育。

3. 生长管理3.1 害虫防治定期检查拟南芥植株，如发现害虫如蚜虫、螨虫等，可以使用适量的杀虫剂进行处理，但要遵循产品说明。

3.2 避免拥挤随着拟南芥生长，植株之间可能会产生拥挤。

在植株茁壮成长后，适当间隔并摘除较弱的植株，以保证光照和营养的充足供给。

3.3 测量和记录生长数据观察拟南芥的生长情况，使用尺子或其它测量工具记录植株的高度、叶片数量等数据，以便后续分析比较。

拟南芥移栽注意事项

拟南芥移栽注意事项拟南芥（学名：Arabidopsis thaliana）是一种常见的植物模式生物，广泛应用于植物学研究中。

在进行拟南芥的移栽过程中，需要注意以下几点：一、选择适宜的移栽时间拟南芥的生长发育过程中，不同阶段对外界环境的适应能力不同。

一般来说，拟南芥的移栽最好选择在早晨或傍晚时分进行，避免高温时段对植株造成伤害。

同时，应尽量选择天气晴朗、气温适宜的日子进行移栽工作，避免大风或雨天对新移栽的拟南芥造成不良影响。

二、准备适宜的移栽土壤拟南芥对土壤的要求不高，但最好选择肥沃、疏松、透气性好的土壤进行移栽。

在移栽前，可以将土壤进行适当的改良，添加一些有机肥料或腐熟的堆肥，提供充足的养分和水分供植株生长发育。

三、正确处理植株在移栽前，需要将拟南芥植株从原来的生长环境中取出，尽量保留完整的根系。

对于较大的植株，可以使用铲子或者手动挖掘的方式将其整株取出；对于较小的苗期植株，可以使用小铲子或者手动拨土的方式进行取出。

在取出植株后，应尽量避免植株根系的损伤，以免影响其后续生长发育。

四、合理处理移栽坑在移栽坑的准备过程中，需要根据拟南芥的根系形态和大小合理设计坑的大小。

一般来说，移栽坑的直径要比拟南芥根系的直径略大一些，深度约为根系长度的1.5倍。

在移栽坑底部可以铺一层腐叶土或者细河沙，以提高土壤的肥力和排水性能。

五、正确移栽植株在移栽过程中，需要将拟南芥植株放入移栽坑中，使其根系均匀分布在坑底，然后用适量的土壤填埋，将植株固定。

填埋土壤时，应适当拍实，以保证植株与土壤之间的接触紧密，并排除空气。

移栽完成后，可以适量浇水，帮助植株恢复生长。

六、及时进行喷灌管理移栽完成后，拟南芥植株处于适应新环境的阶段，需要进行适当的喷灌管理。

在移栽后的几天内，可以每天进行喷水，保持土壤湿润，有助于植株根系的生长。

随着植株适应新环境的能力增强，可以逐渐减少喷水次数，过渡到正常的浇水管理。

总结起来，拟南芥的移栽需要选择适宜的时间和天气条件，准备适宜的移栽土壤，正确处理植株，合理处理移栽坑，正确移栽植株，并及时进行喷灌管理。

拟南芥培养

拟南芥培养一．拟南芥生长过程拟南芥生长的适宜温度白天为22℃-24℃,夜温最好比日温低2℃,适宜的湿度为60-70%,生长期适宜的光强为150μmol·s-1·m-2.拟南芥在日照长于12小时下才会开花,一般拟南芥生长室的日照长度定于14-16h为佳。

1．准备发苗培养基:1/2 MS,Sucrose:10g/L,pH5.7,agar:0.7-0.8%.灭菌后,在超净台上分装入培养皿.2．种子消毒有两种方法：一种是湿法NaClO水溶液消毒:种子放在1.5ml试管中, 加入1ml10%NaClo,混匀,消毒5min,用无菌水洗5次以上(用移液枪吸)，湿法消毒后的种子要马上播；另一种是干法8%NaClO 酒精溶液，此时需用95%的酒精来配制8%NaClO 酒精溶液。

在8%NaClO 酒精溶液中消毒6-8min。

然后用无水酒精洗种子5次以上，吸干无水酒精后，在超净工作台上吹干透后再密闭保存。

3．播种：对湿法NaClO水溶液消毒种子用移液枪将种子吸到培养皿上,可多加些水,将种子铺均匀(不要太密,太密根缠在一起不好移苗),用移液枪吸干水,在超净台上让培养皿干了；对干法消毒的种子，用无菌牙签将种子点播到培养基上。

用Parafilm密封盖子后,请用牙签或镊子在上下两处各打4个小孔以通气。

最好是在每皿<30株这样的密度下,让其生长两周后再移苗. 4.移苗及后续管理:如果培养基质用花泥，将花泥装入花盆,将花盆放入有水的塑料周转框中,框中的水就会通过花盆底部的孔渗上来,待花盆中的基质湿透后即可移苗.小心轻轻用镊子从培养皿中连根取出小苗,把苗种入花泥中.移苗结束后,用保鲜膜覆盖1-2天后揭膜，如果苗很弱，则在此基础上还需多覆盖1天.在花泥中种植时，苗期不需要添加营养液，开始抽苔时请及时添加营养液，一般需要添加2次，每次加入1升拟南芥营养液，2次添加最好间隔一段生长时期（7-10天），由于花泥有较好的吸附缓释能力，对间隔时间长短没有严格要求。