细胞生物学课程简介

《细胞生物学实验》实验课程教学大纲

一、课程基本信息

课程名称：细胞生物学实验

英文名称：Cell Biology Experiment

课程性质：学科及专业基础课

课程属性：独立设课

适用专业：生物科学本科

学时学分：课程共18学时；课程共1学分

开设学期：第五学期

先修课程：生物化学、细胞生物学

二、课程简介

细胞生物学实验课程是生命科学本科各专业的一门必修基础课程，在生命科学的本科教学中有着十分重要的地位。课程内容包括基础验证性，基本技能性实验，以及综合性、研究设计性实验四大类。基础验证性和基本技能性实验主要是配合理论课的教学，使学生加深理解和掌握有关理论知识，同时能够规范地掌握细胞生物学研究的基本操作与基本的实验技能。综合性、研究设计性实验，目的旨在培养和提高学生实验设计和应用各种实验技术的能力，培养和训练学生的创新意识和创新能力，培养严谨的科学态度和实事求是的作风，提高发现问题、分析问题和解决问题的能力，为今后独立从事科学研究打下坚实的基础。

三、实验课程目的与要求

1、学习本门课程的目的：配合理论课教学，巩固所学知识；掌握细胞生物学研究的相关技术，学习先进的研究方法；通过综合性、研究设计性实验，培养学生的实验设计能力，实验动手能力以及文献查阅、论文写作能力；培养学生的科学思维方法，提高发现问题、分析问题和解决问题的能力。

2、学习本门课程的要求：要求学生掌握基本的实验操作技能，掌握基本的实验设计思路；要求学生以个人或小组的形式根据自己所学知识、兴趣设计研

究课题进行实验，期末要提交完整的实验报告；要求学生通过研讨会、交流会的形式，将实验过程中遇到的各种问题进行探讨，让每个同学都有发表个人见解的机会，从而达到集思广益，提高自主学习的能力。

四、考核方式：

1、实验报告：实验报告应包括实验目的，实验原理，实验用品，实验步骤

(如果指导书上有实验步骤，可以简单梳理步骤或省略此步)，实验结果，结果讨论，有时还要求做思考题。

2、实验课的考核方式和成绩评定办法：实验课的考核方式以实验操作考查

为主。实验课成绩评定可分为三个部分：出勤率、实验态度占总成绩10%；操作能力及实验报告撰写情况占总成绩60%；实验设计（包括实验的思路、论文撰写、课堂讨论）占总成绩30%。

五、实验项目、学时分配情况

序号实验项目名称实验学时实验类型实验要求实验一细胞形态结构与细胞器的显微观察4学时验证性实验必做实验二细胞培养以及冷冻复苏技术5学时综合性实验必做实验三细胞膜的渗透性观察3学时验证性实验选做实验四细胞融合技术（PEG法）4学时综合性实验选做实验五细胞骨架的显示与观察4学时验证性实验选做实验六细胞生理活动的观察5学时综合性实验选做

5学时综合性实验选做实验七细胞组分分离技术及细胞组分

的化学反应

实验八精子细胞生物学特性分析5学时设计性实验选做实验九叶绿体分离及离体叶绿体

4学时验证性实验选做

的还原活性

合计实验个数：9 合计学时数：39学时

六、实验内容

实验一细胞形态结构与细胞器的显微观察

目的要求：

1、熟悉动植物细胞的基本形态结构，在普通光学显微镜下识别细胞器的形态结构，掌握生物绘图的方法。

2、制备不同细胞的临时制片，学会使用测微尺测量红细胞。

3、掌握细胞活体染色方法，了解显微镜下液泡和线粒体基本形态结构。

实验内容：

1、显微镜下观察不同细胞的形态结构与几种细胞器的形态和分布。

2、液泡系和线粒体的活体染色。

3、学习正确的生物绘图方法。

主要仪器设备药品：

配有目镜测微尺的显微镜，载玻片，盖玻片，吸水纸，手术器械，解剖盘，培养皿，一次性采血针，牙签，离心机，天平，10ml注射器，甲苯胺蓝，甲基蓝，Ringer氏液（两栖类、哺乳类），詹纳斯绿B染液，中性红染液。

计划时数：4学时

实验类型：验证性实验

实验性质：必做

每组人数：1人

实验二细胞培养以及冷冻复苏技术

目的要求：

1、学习动物细胞原代培养和传代培养的基本操作，熟练掌握无菌操作技术。

2、学会正确的细胞冷冻复苏技术，提高细胞的存活率。

3、学会细胞DMEM培养基的配制及无菌过滤。

实验内容：

1、配制DMEM培养基，熟悉培养基的主要成分，以及血清的灭菌方法。

2、原代培养细胞：乳兔脱颈椎处死后，无菌操作取出肝脏或肾脏。消化、接种培养到培养皿中。

3、Hela细胞的传代培养：胰酶消化细胞，培养基混悬细胞，离心后将部分细胞转移到新的培养皿中。

4、细胞冻存：了解细胞冻存的原理。配制细胞冻存液，将细胞逐步降温，最后将细胞置于液氮罐中。

5、从液氮罐中取出细胞水浴复苏，待细胞贴壁后计算细胞成活率。

主要仪器设备药品：

二氧化碳培养箱，倒置显微镜，超净工作台，冰箱，液氮罐，液氮瓶，离心机，超低温冰箱，高压灭菌锅，酒精灯，烧杯，恒温水浴箱，1.5ml离心管，培养皿，培养瓶，手术器械，1ml、200μl、10μl微量移液器，HeLa细胞株，滤器，滤膜，DMEM培养基，小牛血清，PBS缓冲液，胰蛋白酶，EDTA，乙醇。计划时数：5学时

实验类型：综合性实验

实验性质：必做

每组人数：2人

实验三细胞膜的渗透性观察

目的要求：

1、了解细胞膜对物质通透性的一般规律。

2、了解溶血现象及其发生机制。

实验内容：

1、杀鸡取血5ml（防止污染），放入盛有20ml Alsever’s溶液的瓶中，混匀后备用。

2、使用前，取用Alsever’s溶液保存的新鲜鸡血5ml，加入8ml的0.128 mol/L 的NaCl溶液，小心混匀，1000 r/min离心5min，如此3次洗涤，最后配成30%的鸡红细胞悬液。

3、取11支试管，按附表中所示测试溶液，分别取样各3ml，作出标记后，各管均加入红细胞悬液2滴，混匀后静置于温室中，观察各支试管中发生溶血的