AD大鼠模型的制备及行为学和超微结构研究
固本化痰健脑方对拟AD痴呆大鼠模型作用及机理的实验研究
固本化痰健脑方对拟AD痴呆大鼠模型作用及机理的实验研究固本化痰健脑方对拟AD痴呆大鼠模型作用及机理的实验研究摘要：随着人口老龄化的不断加剧，阿尔茨海默病（AD）这一老年性神经系统变性疾病的发病率也不断上升。
固本化痰健脑方作为一种中草药复方制剂，被广泛应用于临床AD治疗中，但其具体机理仍不完全清楚。
本研究旨在通过拟AD痴呆大鼠模型的实验研究，探究固本化痰健脑方对AD的治疗作用及其机理。
实验方法：1. 实验动物：选取健康雄性SD大鼠80只，年龄为10个月，体重200-250g，随机分为正常对照组、AD模型组、固本化痰健脑方治疗组和多金属螯合剂治疗组。
2. 建立AD模型：通过给予大鼠D-半乳糖注射诱导AD模型的建立。
3. 实验组处理：AD模型组除给予D-半乳糖注射外不进行其他处理；固本化痰健脑方治疗组和多金属螯合剂治疗组分别给予相应药物处理。
4. 检测指标：运用Morris水迷宫和Step-down法评估大鼠学习记忆能力；采用免疫组化法检测大鼠脑组织中tau蛋白及β-淀粉样蛋白（Aβ）表达水平；应用RT-PCR和Western blotting检测大鼠脑组织中炎症因子表达水平。
结果：1. 学习记忆能力：固本化痰健脑方治疗组和多金属螯合剂治疗组大鼠在Morris水迷宫和Step-down法评估中表现出明显的改善。
2. tau蛋白和Aβ表达：固本化痰健脑方治疗组和多金属螯合剂治疗组大鼠脑组织中tau蛋白和Aβ表达水平明显低于AD模型组。
3. 炎症因子表达：固本化痰健脑方治疗组和多金属螯合剂治疗组大鼠脑组织中炎症因子表达水平显著下降。
结论：固本化痰健脑方能够改善大鼠学习记忆能力，并通过抑制tau蛋白和Aβ的异常表达，减轻AD模型大鼠脑组织中的炎症反应。
这表明固本化痰健脑方可能通过多通路调节AD发生发展过程中的神经炎症反应，从而发挥其治疗作用。
关键词：固本化痰健脑方，拟AD痴呆大鼠模型，学习记忆能力，tau蛋白，Aβ，炎症反本研究的结果表明，固本化痰健脑方和多金属螯合剂治疗能够显著改善拟AD痴呆大鼠模型的学习记忆能力。
ad转基因动物模型的建立与应用
一、概述近年来，转基因技术在生物学领域中得到了广泛的应用，其中转基因动物模型的建立和应用更是备受关注。
通过精准修改动物基因，科学家们可以模拟人类疾病，研究疾病发生的机制，筛选药物和治疗手段等。
本文将重点讨论转基因动物模型的建立与应用。
二、转基因动物模型的建立1. 转基因技术的原理介绍转基因技术是指通过基因工程技术将外源基因导入宿主细胞，使宿主细胞具有外源基因的特性。
在转基因动物模型的建立中，科学家们通常选择将与人类疾病相关的基因导入小鼠、斑马鱼等模式动物中，使其表现出与人类相似的疾病特征。
2. 转基因动物模型的建立过程a. 选择目标基因：科学家们首先需要确定研究的疾病类型，并选择与之相关的目标基因。
b. 基因编辑：通过CRISPR/Cas9等基因编辑技术，科学家们可以精准地编辑小鼠等模式动物的基因，将目标基因导入其基因组中。
c. 繁殖与筛选：经过基因编辑的模式动物需要进行繁殖，同时通过PCR、Western blot等技术对其后代进行筛选，确认目标基因已经成功导入。
3. 转基因动物模型的特点转基因动物模型具有模拟人类疾病的特点，可以为相关疾病的研究提供可靠的实验评台。
转基因动物模型还可以用于药物疗效的评估、基因治疗等领域。
三、转基因动物模型的应用1. 疾病研究转基因动物模型在疾病研究方面发挥着重要作用。
研究人员可以通过基因编辑技术将与帕金森病相关的α-突触核蛋白基因导入小鼠中，使其表现出类似于帕金森病的运动障碍等症状，从而研究帕金森病的发病机制。
2. 药物疗效评估转基因动物模型可以用于评估新药的疗效和安全性。
研究人员可以使用转基因小鼠模型，观察其对特定药物的反应情况，从而提高新药的研发效率和成功率。
3. 基因治疗转基因动物模型还可以用于基因治疗研究。
科学家们可以通过基因编辑技术将修复型基因导入转基因小鼠中，观察其治疗效果，为人类的基因治疗研究提供重要参考。
四、转基因动物模型的发展前景转基因动物模型的建立和应用为医学研究和临床治疗带来了新的可能性，然而目前还存在一些挑战和问题，如基因编辑技术的精准性、模型的可重复性等。
【精选】政府经济学单选和多选题
【精选】政府经济学单选和多选题政府经济学试题及答案一、单选题1：公共选择理论的理论基础和逻辑起点是（）。
1.人的道德缺陷2.政府失灵·3.市场失灵4.个人主义2：某个城市的供水系统由一家公司提供的主要原因在于（）。
1.经济实力雄厚·2.自然垄断3.政府保护4.其他主体缺乏供给意愿3：现代市场经济中德国模式的特征为（）。
1.对于自由市场的强调·2.强调社会公平的市场机制3.政府的强有力指导4.平均主义4：对选民行为进行研究时提出了“理性的无知”的经济学家是（）。
1.奥尔森2.布坎南3.尼斯坎南·4.唐斯5：专利制度所形成的垄断现象就其成因看属于（）。
1.经济垄断·2.行政垄断3.自然垄断4.科技垄断6：计划经济时期我国采取的收入分配政策是（）。
1.按劳分配·2.平均主义分配3.按需分配4.按阶级分配7：正的外部效应指的是（）。
1.社会净效益小于个人净效益，产品产量偏高2.社会净效益小于个人净效益，产品产量偏低·3.社会净效益大于个人净效益，产品产量偏低4.社会净效益大于个人净效益，产品产量偏高8：公共选择理论的分析所提出的最大结论在于（）。
1.市场失灵·2.政府失灵3.外部性4.官僚也是经济人9：下列西方发达国家中，尚未建立福利性社会保障体系的国家是（）。
1.英国2.瑞典·3.美国4.挪威10：由于劳动力市场对于劳动力技能的需求与劳动者自身的技能结构不相符造成的失业类型属于（）。
1.摩擦性失业2.周期性失业·3.结构性失业4.季节性失业1：垄断问题形成的基本原因是（）。
1.道德缺陷·2.进入障碍3.供给意愿不足4.资源短缺2：最早实行自由市场经济的西方国家是（）。
1.美国2.法国3.瑞典·4.英国3：2008年下半年由美国次债危机演化而来的全球性经济危机同样对我国造成了不利影响，受此影响我国政府将财政政策调整为（）。
阿尔茨海默症动物模型
饮食诱导AD 模型
高脂饮食诱导模型
有报道指出动物给予高脂饲料饲养可降低大脑对葡萄糖的摄取，诱导动物模型 产生糖耐量降低及胰岛素抵抗，亦可损伤神经元胰岛素受体功能，引起tau 蛋白 过度磷酸化，从而导致 NFT。
方法：8周龄C57小鼠，通过给予硫胺素剥夺饮食结合腹腔注射硫胺素焦磷酸激 酶抑制剂—吡啶硫胺制作硫胺素缺乏模型，造模13d后取脑，模型组小鼠内侧丘 脑出现典型的对称性针尖样出血，小鼠皮质、海马及丘脑均出现Aβ沉积，tau蛋 白磷酸化。TD可引起Aβ沉积、tau蛋白磷酸化增加等 AD的特征性病理改变。
方法：将大鼠固定于脑立体定位仪上，在前卤后 1.5 mm，矢状 缝侧方 1.5 mm处钻孔，微量进样器注射 STZ 3 mg·kg-1，于手术 的第 1天和第 3 天分别二次向侧脑室注射。小剂量 STZ 侧脑室注 射可以制备痴呆模型。
此模型优点：模拟了散发性老年痴呆病的许多重要的特点。 缺点：造模过程中动物的死亡率较高。
国内外 AD 动物模型研 究进展
01
02
以衰老为基础 的AD模型
自然衰老的动 物模型
快速老化小鼠 模型
各种因素诱 发的AD模型
化学损伤 物理损伤 饮食诱导
03
转基因AD模型
APP 转基因模型 PS1 转基因模型 tau 相关模型 多重转基因模型
以衰老为基础的AD 模型
AD 是一个与年龄密切相关的疾病，衰老因素在AD 发病过程中起着重要作用。以衰 老为 AD 发病基础的动物模型成为实验研究中不可或缺的部分
艾灸对阿尔茨海默病模型大鼠行为学及海马超微结构的影响
艾灸对阿尔茨海默病模型大鼠行为学及海马超微结构的影响目的观察艾灸对阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease，AD）大鼠学习记忆能力及海马CA1区神经细胞超微结构的影响，探讨其治疗AD的作用机制。
方法40只SD大鼠随机分为正常组、模型组、艾灸组及假手术组。
模型组及艾灸组大鼠采用双侧海马立体定向注射聚集态β淀粉样蛋白（Aβ）25-35制作AD模型，假手术组大鼠双侧海马区注射等量生理盐水。
造模成功后，艾灸组大鼠于“肾俞”“足三里”与“百会”穴位上方2～3 cm处施予温和灸治疗。
正常组大鼠不做任何处理。
Morris水迷宫实验检测大鼠学习记忆能力，透射电镜观察大鼠海马CA1区神经细胞超微结构。
结果模型组大鼠5 d逃避潜伏期、后3 d逃避潜伏期均明显延长，跨越原平台位置次数均明显减少；大鼠海马CA1区神经元体积缩小，形态不规则，线粒体肿胀，基质清淡、有空泡，数目减少，可见线粒体嵴呈畸形样改变，内质网扩张，脂褐素沉积增多。
经艾灸治疗后，艾灸组大鼠5 d逃避潜伏期和后3 d逃避潜伏期均明显缩短，跨越原平台位置次数均明显增多；大鼠海马CA1区神经细胞水肿明显减轻，内质网扩张明显改善，线粒体肿胀明显减轻。
结论艾灸治疗可促进脑内神经细胞的修复，从而改善Aβ所致大鼠学习记忆障碍。
Abstract：Objective To observe the effects of moxibustion on learning and memory ability and nerve cell ultrastructure in CA1 region of hippocampus of rats with Alzheimer’s disease （AD）；To discuss its mechanism of action to AD. Methods A total of 40 male SD mice was randomly divided into normal group，model group，moxibustion group and sham-operation group. Stereotactic injection agglutinated Aβ25-35 into bilateral hippocampus of rats in model group and moxibustion group to prepare AD models. Rats in moxibustion group were treated by moxibustion at the points which were located above 2-3 cm away from “Shenshu”，“Zusanli” and “Baihui”. Rats in normal group received no treatment. The learning and memory ability was detected by Morris water maze test. Morphological changes of rat nerve cell ultra structure in hippocampal CA1 region were observed by transmission electron microscope. Results In model group，the average escape latency of five days and the last three days was significantly lengthened，and the times across the platform position significantly decreased. Transmission electron microscope indicated nerve cell structures were damaged and displayed unclearly；mitochondrion swelled，even mitochondrial crista was abnormal and deformed，endoplasmic reticulum of inter organelle expanded and the deposition of lipofuscin increased. After the treatment by moxibustion，the average escape latency of five days and the last three days was shortened obviously，and the times across the platform position significantly increased. In moxibustion group，the edema of nerve cells significantly decreased；dilation of endoplasmic reticulum and mitochondria swelling significantly improved；golgi bodies，mitochondria and ribosomes obviously increased in comparison with the model group. Conclusion Moxibustion can improve the learning and memory impairment caused by Aβ by promoting repairing of nerve cells in brain.Key words：Alzheimer’s disease；Aβ25-35；moxibustion；hippocampus；ultrastructure；rats阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease，AD）是一种以进行性高级认知功能障碍和记忆功能丧失为特征的中枢神经系统退行性疾病[1]。
阿尔茨海默病动物模型建立方法的论述_薛斌
基金项目:成都医学院“实验室开放基金课题”资助(S YSKF200748)。
作者简介:薛斌(1984-),男,成都医学院2005级临床本科班学生,研究方向:小鼠空间记忆障碍时效关系研究。
△通讯作者:荣成(1980-),男,助教,成都医学院基础医学实验技术中心科研秘书,研究方向:小鼠空间记忆障碍时效关系研究。
阿尔茨海默病动物模型建立方法的论述薛 斌1 荣 成 张 晓2 杨 拯2 江红丽2(1.成都医学院2005级临床本科甲班 2.成都医学院实验技术教研室)[摘 要]学习记忆能力障碍是老年性痴呆(Alzheimer ’s disease,AD)的主要临床症状和特征,而目前对阿尔茨海默病的发病机制有三种有影响力的学说。
因此理想的阿尔茨海默病AD 动物模型,对研究该病的发病机制及治疗具有重要意义,本文就目前几种有影响力的AD 的动物模型研究现状作一综述。
[关键词]阿尔茨海默病 穹窿海马伞 胆碱能神经元 T au 蛋白 β-淀粉样肽 阿尔茨海默病(Alzh eimer ’s disease ,AD )是一种临床常见的中枢神经系统变性疾病,目前其发病机制有三种影响力的学说,如淀粉样蛋白学说、乙酰胆碱能学说、线粒体损伤学说。
现关于AD 疾病的研究日益受到国内外学者的高度重视。
其建立一个可靠的A D 动物模型是研究AD 的重要环节。
有关AD 动物模型建立的方法较多,各有利弊,本文针对这几种学说的AD 动物模型的建立和新的动物模型的建立作一综述。
一、自然衰老认知障碍AD 动物模型AD 是一个与年龄相关的疾病,衰老因素在AD 发病过程中扮演着重要角色,衰老所特有的病理生理变化及其它病变的影响,是用年轻动物制作的动物模型所不能替代的。
通过行为筛选的方式,选择带有认知和记忆严重缺失的个体,它们的行为损害与老年人和A D 患者的认知损害相类似,同时还可出现某些相应的脑组织病理改变[1]。
故是研究AD 较好的动物模型。
但存在以下缺点:①老年动物神经系统的发病与A D 的发病机制过程不完全一致,因此神经化学方面的改变也是不同的。
AD大鼠模型脑血管淀粉样变性的病理学改变研究
*论著*AD大鼠模型脑血管淀粉样变性的病理学改变研究陈永衡\李建明21.长沙医学院临床学院，湖南长沙410219;2.长沙医学院研究中心，湖南长沙410219摘要目的研究建立阿尔茨海默氏病(AD)豚鼠模式的脑血管淀粉样变性的病理学改变特征。
方法于2016年3月在长沙医 学院选取50只成年豚鼠(以下简称大鼠)作为该次实验动物,随机均分为对照组与AD组，对照组20只,A D组30只;将AD 组30只大鼠建立阿尔茨海默氏病模型;采取水迷宫试验观察AD组大鼠高级认知功能的改变情况;采取刚果红染色法及HE 染色法观察淀粉样蛋白于阿尔茨海默氏病大鼠脑内的沉积情况及淀粉样变性的脑血管病理改变情况。
结果AD组12周时大 鼠找到安全平台的用时为(20.09±7.16)s，显著长于4周时（12.31±2.17)s的所用时间，差异有统计学意义,P<0.01;4、12周时 AD组大鼠找到安全平台的用时分别为（12.31±2.17)3及(20.09±7.16)3均显著长于对照组，差异有统计学意义，尸<0.01。
AD组 大鼠12周探索安全平台（1.87±0.62)次明显少于该组4周时(2.41±0.73)次，P<0.05;4、12周AD组大鼠探索平台的次数分别为 (2.41±0.73)次及(1.87±0.62)次均显著少于对照组,差异有统计学意义，P<0.01。
染色试验AD组海马区的颗粒细胞明显减少，细胞可见变性，胶质细胞明显异常增殖，海马内的小血管壁发生变性。
刚果红染色试验可见A|3纤维于小血管壁处逐渐沉积，管壁显示增厚，小血管发生狭窄、闭塞。
结论脑血管的淀粉样变性是A D的主要病理改变,在无干预的前提下淀粉样变性所致 病理改变随之时间延长而加重，AD模型的认知功能随之降低。
关键词阿尔茨海默氏病;动物模型;淀粉样变性中图分类号 R749.16 文献标志码 A doilO.l1966/j.issn.2095-994X.2016.02.04.05Pathological Changes of Cerebral Vascular Amyloidosis in AD Rat ModelCHEN Yong—heng^LI Jian-ming21.Changsha Medical College Institute of Clinical,Changsha,Hunan Province,410219 China2.Changsha Medical College Research Center，Changsha，Hunan Province，410219 ChinaAbstract Objective Develop alzheimer^s disease(AD),guinea pig model of cerebrovascular pathological change characteristic of amyloidosis.Methods In March 2016 in changsha medical school select50 guinea pigs(hereinafter referred to as "rats")as the experimental animals,randomly divided into control group and the A D group and the control group of20, 30 AD group;The AD group and 30 alzheimer^s disease model in rats;Take the water maze test to observe the AD group rats high-level cognitive function;in the case of a change Take Congo red staining and HE staining observation of amyloid protein in alzheimer^s disease in rats of deposition and cerebrovascular pathological changes of amyloidosis.Results AD group 12 weeks to find a safe platform for the time of(20.09 土7.16) seconds，significantly longer than4 weeks of(12.31 ± 2.17) seconds of time，<0.01; 4，12 weeks when the AD group to finda safe platform with time Respectively, (12.31 ± 2.17) seconds and (20.09 ± 7.16) seconds were significantly longer than the control 收稿日期：2016-10-11;修回日期：2016-l l-05基金项目：湖南省科技计划项目（2015JC3059)。
AD大鼠模型的制备及行为学和超微结构研究
是研究的热点 。目前认为 AD 的病因主要有基因突
变[6] 、内分泌改变[7] 、慢性炎症[8] 和氧化应激 ,其中氧
化应激 被 认 为 是 AD 发 病 过 程 中 的 一 个 关 键 性 因
素[9] 。AD 的动物模型的制备原理就是模拟了以上几
种 AD 的病因和病理生理改变 。
尽管 AD 的病因多种多样 ,但 AD 的中后期都会出
二 、AD 大鼠模型的行为学检测 (Morris 水迷宫) Morris 水迷宫由直径 94cm ,高 55cm 圆形水池及高 38cm、面 积 6cm ×10cm 的 站 台 构 成 , 液 面 高 出 站 台 2cm ,水温维持在 (25 ±0. 5) ℃。 行为训练程序包括 : (1) 学习组 :大鼠共接受训练 36 次 ,每天 6 次 ,每次间隔 15min , 共 6 天 。(2) 记忆 组 :训练结束后一周开始检测性训练 ,共 3 天半 ,每天 6 次 ,从入水到找到站台时间作为潜伏期 (Latency) 。 三 、β2淀粉样蛋白的放射免疫测定 1. 测定前样本处理 :实验毕 ,将大鼠断头活杀开 颅 ,在冰台上分离出海马等脑区 ,生理盐水中煮沸 5 分 钟 ,匀浆 ,4000rpm 离心 15 分钟 ,取上清 ,220 ℃保存待 测。 2.β2淀粉样蛋白测定方法 :参照β2AP 放免测试盒 (解放军总医院放免所产品) 说明书进行 。离心去上清 后 γ, 计数器上计数 1min 。计算 (BΠBo) ×100 % ,从标 准曲线中找出抗原的含量 ,换算成每 mg 蛋白β2AP 的 含量 。 3. 样品蛋白含量测定 :以福林酚法对各样本总蛋 白含量进行测定 。 四 、AD 大鼠大脑皮层和海马神经元内超微结构的 变化 1. 电镜标本的取材和制作 :实验毕 ,大鼠经多聚甲
老年痴呆模型
老年痴呆模型(AD)制作因AD病因复杂，故相应的也缺乏严格意义的AD体内外模型，现在国内外大部分体内、外实验只能反映AD某一部分的改变，因而不应称为AD模型。
近年来许多学者正致力于寻找和研究AD动物模型，对AD模型报道也较多，虽然分类各有不同，但大致可分为以下几类（一）胆碱能损伤致痴呆模型1．穹窿-海马伞切断致痴呆大鼠模型该模型是建立在AD认知障碍的胆碱能假说基础上，较好地模拟了AD前脑胆碱能系统的损害，而且造成了神经损伤，可用于观察拟胆碱药物的药效学评价，还可观察药物对神经功能损伤的修复作用，是老年性痴呆临床前药效学研究的重要模型。
2．基底前脑注射鹅蒿蕈氨酸（ibotenic acid ,IBO）致痴呆模型大鼠该模型属兴奋性毒素致基底核损害模型。
通过该模型可反映导致学习记忆功能下降的病理基础-基底前脑胆碱能神经元缺失，因而也是广泛应用的模型。
该类模型的缺陷是不能反映AD发生的病因，不能产生AD的病理学特征，因此不如IBO应用广泛。
3．东莨菪碱致胆碱能损伤拟痴呆小鼠东莨菪碱为M胆碱能受体阻断剂，可阻断乙酰胆碱对M受体的激动作用，造成了学习记忆功能障碍。
但是该模型不直接引起胆碱能神经缺失，而且缺乏研究AD病理生理所必需的特征，如AD是一种进行性不可逆变性，而该模型为化学性模型，恢复快是其局限性，可用于早期药物的筛选。
（二）老化致痴呆模型1．自然衰老动物较常用的是自然衰老大鼠，24月龄以上，另外也有采用老年狗或猴者，该模型是较为接近AD实际病理改变的动物模型，在此基础上观察老年性痴呆治疗药物能较好地反映药物的作用机理和效果。
2．快速老化小鼠（SAM）快速老化小鼠分为快速老化亚系（senescence accelerated mouse/prone,SAM-P）及抗快速老化亚系（senescence accelerated mouse/resistance,SAM-R），它是由日本京都大学首次培育成功，经20多代交配近繁，获得了遗传性与病理表型一致，符合近交系标准的新系列。
AD阿尔兹海默症模型的制作及详细步骤
AD阿尔兹海默症模型的制作及详细步骤
动物:大鼠，SPF级，健康，雄性
造模方法:
1,经腹腔注射麻醉大鼠;剃除头顶部毛发后固定于脑立体定位以上，手术区皮肤消毒，切开皮肤，暴露颅骨。
2,参照大鼠脑立体定位图谱(国内多选用包新民的大鼠脑立体定向图谱)，在前后囟2mm、中线外1mm处，用牙科钻凿开颅骨，切开硬脑壳膜,用双刃刀置于上述部位的脑表面，降刀4.5mm,外移1mm,再降刀1mm，外移1.5mm,后上下抽动刀20次，以完全切断穹隆海马伞。
可行单侧，也可行双侧穹隆海马伞切除。
术后连续应用头孢唑啉钠( 50mg/kg体重，ip)或庆大霉素(每只2万U/d, im) 抗炎5d。
3,迷宫测试显示，该模型动物的学习能力明显下降，与抗胆碱药物引|起的学习行为障碍相似。
D-半乳糖法制备AD动物模型的分类总结与初步评价
D-半乳糖法制备AD动物模型的分类总结与初步评判随着人类寿命的延长和老龄化社会的来临，老年痴呆症（Alzheimer's Disease，AD）成为全球性健康难题。
AD是一种进行性、不行逆性的神经系统退行性疾病，其主要特征是智力和记忆功能的进行性丢失，最终导致个体平时活动能力和社会功能的完全丢失。
目前，AD的发病机制尚不极其清晰，但许多探究表明淀粉样蛋白β（Amyloid β，Aβ）的异常代谢和神经纤维缠结是AD的主要病理生理学特征。
为了探究AD的发病机制以及开展相关的药物筛选和治疗探究，科学家们屡屡使用动物模型。
近年来，以D-半乳糖法制备AD动物模型备受探究者的关注。
D-半乳糖是一种具有亲脑特性的糖类物质，通过饮食方式赐予小鼠高剂量D-半乳糖可以模拟AD过程中异常Aβ代谢的一些特征。
依据D-半乳糖赐予的时间长短和赐予的剂量不同，可以将D-半乳糖法制备的AD动物模型分为多个亚型。
以下是一些常见的亚型分类及其初步评判：1. 长期低剂量赐予亚型：该亚型的试验条件是赐予小鼠长期低剂量的D-半乳糖，以模拟AD发病过程中Aβ蓄积的特点。
探究显示，这种亚型的AD动物模型能够模拟出Aβ和tau蛋白的异常聚集，以及突触功能障碍等病理生理学特征。
此外，这种模型还可以观察到记忆毁伤和进修能力下降等AD 的临床表现。
2. 短期高剂量赐予亚型：这种亚型的试验条件是赐予小鼠短期高剂量的D-半乳糖，以模拟AD早期病理过程中Aβ的大量产生。
初步评判结果显示，这种亚型的AD动物模型能够复制出Aβ的高水平积累，并且在行为学测试中表现出明显的记忆和进修障碍。
此外，该模型还呈现出炎症反应的增加和神经元毁伤的特征。
3. 短期低剂量赐予亚型：这种亚型的试验条件是赐予小鼠短期低剂量的D-半乳糖，以模拟AD中期疾病过程中Aβ的代谢紊乱特点。
初步评判结果显示，这种亚型的AD动物模型能够模拟出Aβ的产生和蓄积，以及突触功能受损等病理生理学特征。
实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠模型的建立及病理特征
Ｒａ ｓ ａ ｔ ｔ ｏ ｏ ｉａ ｔ ｎｄ ＩｓＰａ ｈ ｌ ｇｃ ｌＣｈａ ａ ｔ ｒｓｉｓ ｒ ｃ ｅ ｉｔｃ
ＹＩ Ｌｉ １ｎ ，ＬＩ Ｌ —ｉ ，Ｗ ＡＮＧ ｉ ＬＩＬ ｎ ＇ Ｎ ｎ．ｉ Ｎ ｉｌ Ｌｅ。 ｉ
，
（ ．Ｄｐ ｒ ｅｔｏ ｈ ｒ ａｏ ｇ ，Ｘ ａｗ ｏ ｉ ｌ ａｉ ｌＭｅｉ ｌＵ ｉ ｒ ｔ；２ ｅ ａ ｏａ ｒ ｏ ｅｒｄｇｎｒｔｅＤｓａｅ， １ ｅａｔ ｎ ｆ Ｐ ａｍ ｃｌ ｙ ｕｎ ｕ Ｈ ｓ ｔ ，Ｃｐｔ ｄ ａ ｎ ｅ ｉ ｍ ｏ ｐａ ａ ｃ ｖ ｓｙ ．Ｋ ｙＬ ｂｒｔ ｙｆｒＮ ｕｏｅｅｅａｉ ｉ ｓ ｏ ｖ ｅ ｓ Ｍｉｉｒ ｏ ｄ ｃｔｎ ３ ｅａ ｍ ｎ ｏ ｒ ｃｉ ｉ ， ｃｏｌ ｒｄ ｉ ａ Ｃ ｉｅ ｄｃ ｅ Ｃ ｐｔｌ ｄｃｌ ｎ ｅ ｉ ） ｎ ｔ Ｅ ｕａｉ ； ．Ｄｐ ｒ ｔ Ｐｅ ｒ ｔ ｎ Ｓｈｏ Ｔａ ｉｏ ｌ ｈｎｓ Ｍｅｉｎ ， ａ ｉ ｉ ｉ ｒｔ ｓｙｆ ｏ ｔ ｅ ｆ ｓ ｐｏ ｆ ｏ ｔｎ ｅ ｉ ａ Ｍｅ ａ Ｕ ｖ ｓｙ
层松散 。结论 采用该模 型作 为急性 ＭＳ的研究模 型较 为理想 。
【 关键词 】 多发性 硬化 ； 实验性 自身免疫性脑脊髓炎 ； 脱髓鞘 ； ｅｉ大 鼠 Ｌｗｓ 【 中图分 类号】 Ｒ３２３ ． ９
Ｅｓ ａ ｌｓ ｍ ｅ ｔ ｏ ｎ Ｅｘ ｅ ｉ ｅ ａ ｔ ｂ ｉｈ ｎ ｆ ａ ｐ ｒ ｍ ｎｔ ｌＡｕｔ ｉ ｍ ｕ ｃ ｐｈ ｌ ｍ ｙ ｌｔｓ Ｍ ｏ ｌｏ ｗｉ ｏｍ ｎｅ Ｅｎ ｅ ａ ｏ ｅｉｉ ｄｅ ｆＬｅ ｓ
ｐ ｔ ｏｏ ｉ ａ ｈ ｒ ｃｅ ｉｔ ｓｆｒｓｕ ｙ ｎ ｌ ｐｅ ｓ ｌｒ ｓｓ ａｈ ｌ ｇｃ ｌ ａ ａ ｔｒｓ ｃ ｏ ｔ ｄ ｉ ｇ ｍｕ ｔ ｌ ｃｅ ｏ ｉ．Ｍ ｅｈ ｄ Ａｎ Ｅ ｄ ｌ ｓｅ ｔｂ ｉｈ ｄ ｂ ｃ ｉ ｉ ｔｏ ｓ ＡＥ ｍｏ ｅ ｓａ ｌ ｅ ｙ ｉ ｗａ ｓ ｍｍｕ ｉ ｎ ｅ ｉ ｒ ｔ ｗｉ ｏ ｈ ｎ ｚ ｇ Ｌ ｗ ｓ ａｓ ｔ ｂ ｔ ｉ ｈ
大鼠MCAO模型制作学习(第二版)
大鼠MCAO模型的制作制作原理:大脑中动脉栓塞模型并不是把线栓插进大脑中动脉,而是经颈内动脉入颅并插入大脑前动脉,从而阻塞来自栓塞侧的大脑前动脉的血供,以及堵塞接受后交通动脉血供的的颈内动脉颅内段.大脑前动脉通过前交通动脉和对侧大脑前动脉相连通,颈内动脉通过后交通动脉和基底动脉相连接,从图中可以看出,大脑中动脉的血供被线栓阻断.大鼠体重的选择:国内一般选用250-280g的雄性大鼠,SD和WISTAR应该都可以.麻醉剂的选择:国内常用水合氯醛,戊巴比妥钠,氯胺酮,或者用气体麻醉机麻醉,我觉得用氯胺酮比较经济方便,适合国内使用.用水合氯醛和戊巴比妥钠术后大鼠死亡较多,气体麻醉太代价太高,一个是气体麻醉机一般实验室没有,第二个是气体麻醉剂很贵.氯胺酮的优点:大鼠苏醒较快,术后状态较好,能较早进食,有效降低术后死亡率.氯胺酮的用法: 100g体重用氯胺酮8~10mg. 我们采用的方法是2支氯胺酮(2X2ml)加一支异丙嗪(2ml)加4ml生理盐水配成10ml,(本来想用甲苯噻嗪的,但买不到),使用时每100g体重用0.5ml,并且术用用点阿托品,减少呼吸道分泌物产生(1支稀释成10ml,每只大鼠注射0.1~0.2ml).线栓的选择:目前常用医用尼龙线,或者用渔线代替,大家所用的直径,粗细都不太相同,处理头端的方法或者用明火或者蚊烟熏或者在砂纸上磨,使头端变钝,外表面或者涂清漆或者涂石蜡. 这种线栓制作比较简便,但缺点就是头端或者比较尖,或者火烧后头端直径不一,有时候不能入颅,容易造成脑出血,以前差点被这种线栓搞死,术后头三天大鼠大量死亡,很伤心.死亡的大鼠解剖后很多都是脑出血.国外有用医用尼龙线外涂硅胶的, 但方法我认为缺点多多,国内可能由于材料的限制,用的人不多.关于线栓的直径:国内一般用0.2-0.3mm的尼龙线,外面如果涂层石蜡或者清漆直径差不多在0.3mm关于线栓的硬度,我觉得直径在0.2以下的普通渔线较软,而0.2以上的就比较硬了,但0.2以下可能不能完全堵住血管.我们经过实践摸索,采用了国外所用的尼龙线硅胶线,但发明了自已的制作工艺,有一定的设备要求和比较高的技术要求,这种线栓比较柔软光滑,头端为硅胶所包裹,钝圆形,栓塞效果比较理想.附图一: 硅胶栓模式图上面的线栓很粗，有时很难入颅或者插到所需要的深度，且制用过程很费硅胶,再者就是头端处理仍然不够好，下面的线栓制作比较麻烦，但很好使用，效果也比上面的线栓好。
AD动物模型的制作方法
Alzheimer’s AD Animal Models:AD动物模型的制作方法一、Okadaic acid慢性损害AD模型Okadaic acid（OA）是一种丝氨酸／苏氨酸蛋白磷酸化酶（1A和2A）的特异性抑制剂，OA的长期脑室投递可引起动物的记忆严重缺失，同时导致脑内Aβ淀粉样沉积斑块形成以及NFT样磷酸化Tau蛋白出现。
投递装置用ALZA公司的ALZET微渗透泵（Model 2004），使用前充填OA溶液。
1. 实验动物：用SD或Wistar大鼠，体重250～300克。
2. 材料和试剂：脑立体定位仪，微量注射器，颅钻。
OA选用Sigma公司产品，产品编号是0-1506，以pH7.4的磷酸缓冲的人工脑脊液配制，置4℃冰箱备用。
3. 操作程序：动物麻醉后固定于脑立体定位仪。
参照脑立体定位图谱的侧脑室座标，颅骨钻孔，装置微渗透泵的投递针，使针管头端置于侧脑室，用牙科水泥将其柄部固定在颅骨上，泵体埋在动物项部皮下，输送管经头皮下传送。
平均投递速度0.25±0.02μl／小时，通常一次埋泵可维持4周，如需要长时间的投递，更换一次新充填的微渗透泵即可。
2～3周后进行行为试验，动物将出现工作记忆和参考记忆的损害。
术后6周免疫组化分析可见经OA处理的大鼠脑的纹状体、海马和皮质等部位出现高磷酸化Tau蛋白免疫阳性神经元、App免疫阳性星形胶质细胞和Aβ淀粉样蛋白免疫阳性斑块。
二、穹窿海马伞损害模型1．实验动物：用雄性大白鼠（SD或Wistar鼠种），3～5个月龄，体重250～300克。
2. 材料和试剂：脑立体定位仪，特制刀片，注射器，开颅钻。
3. 操作程序：动物经腹腔注射1%戊巴比妥钠麻醉后，固定于脑立体定位仪上，颅顶区被皮常规消毒手术区皮肤，无菌下操作，沿颅顶中线作长2cm切口，用湿棉球分离骨膜。
于前囟后2.0mm，中线旁1mm处，用牙科钻或自制颅钻打开颅骨，仔细切开硬脑膜，暴露大脑皮质，用特制的宽2mm双刃刀片（剃须刀片制作）按照脑立体定位仪图谱（Paxinos G and Watson C），于前囟后2mm，中线左侧1mm处置刀于脑表面，然后操作定位仪降刀4.1mm，并向外向内各移动1mm和0.5mm。
复合型AD大鼠模型的建立及其神经细胞凋亡的线粒体通路研究的开题报告
复合型AD大鼠模型的建立及其神经细胞凋亡的线粒体通路研究的开题报告一、选题背景阿尔茨海默病（AD）是常见的神经退行性疾病之一，主要表现为认知障碍、行为异常、功能障碍等症状。
AD的主要病变特征为β淀粉样蛋白（Aβ）的沉积和神经元于胶质细胞中的确认。
近年来的研究表明，线粒体功能障碍是诱发AD细胞凋亡的重要原因之一。
因此，探究AD中线粒体通路的调控机制对于治疗和预防该疾病具有重要意义。
二、研究目的本课题旨在建立复合型AD大鼠模型，探究神经细胞凋亡的线粒体通路，为深入研究AD的发病机制提供新的实验基础。
三、研究内容及方法（1）模型建立。
采用中枢神经系统特异性转录因子的启动子驱动突变的Aβ42基因，构建AD大鼠模型。
同时，利用多发性因素诱导AD发生的理论，采用复合型因素对大鼠进行干扰。
（2）组织学检查。
通过HE染色、免疫组化等方法观察AD大鼠脑组织的病理变化，如神经元凋亡、Aβ沉积等。
（3）线粒体通路研究。
观察AD大鼠线粒体的形态学变化和线粒体通路相关蛋白的表达，如线粒体膜通道蛋白、氧化还原酶等。
（4）数据统计分析。
采用SPSS软件对实验数据进行统计分析。
四、预期结果预计通过建立复合型AD大鼠模型，可以模拟出AD疾病的发生过程。
通过组织学检查，可以观察到神经元凋亡和Aβ沉积。
通过对AD大鼠线粒体通路的研究，可以了解到线粒体功能障碍对细胞凋亡的影响。
通过本实验，预计可以初步分析AD疾病的病理变化和线粒体通路的相关机制。
五、意义及应用价值本课题对于探究AD发病机制和寻找治疗AD的新靶点具有重要的意义。
同时，该研究结果也可以为其他神经退行性疾病的研究提供参考。
相关研究成果将有助于临床医生更好地诊断和治疗AD，提高其预防和治疗效果。
AD转基因模型研究进展
AD转基因模型研究进展
彭彩霞;刘蓉;王建枝
【期刊名称】《神经损伤与功能重建》
【年(卷),期】2007(2)4
【摘要】阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)是最常见的神经系统退行性疾病之一.以进行性认知功能损害、基底前脑胆碱能神经元退变、神经原纤维缠结和β-淀粉样多肽沉积为主要特点.AD转基因鼠的诞生为AD发病机制及治疗的研究带来了新的曙光.现综述几种主要AD转基因鼠,包括转APP、转PS、转ApoE、转tau、双转及三转基因鼠等的病理变化特点及其在AD相关研究中的应用.
【总页数】6页(P197-202)
【作者】彭彩霞;刘蓉;王建枝
【作者单位】华中科技大学同济医学院病理生理学系,武汉,430030;华中科技大学同济医学院病理生理学系,武汉,430030;华中科技大学同济医学院病理生理学系,武汉,430030
【正文语种】中文
【中图分类】R741;R592
【相关文献】
1.丙型肝炎病毒细胞模型及转基因动物模型研究进展 [J], 梁雪松;周永兴
2.APP/PS1双转基因AD模型小鼠海马区磁共振波谱和超微结构分析 [J], 邢敏; 毛敬洁; 陈文列; 李钻芳
3.Cdk5/p25在APPswe/PS1dE9双转基因AD模型小鼠海马内表达与认知功能障碍的关系 [J], 许方方;蒋淼
4.APP/PS1转基因AD模型小鼠海马自噬及相关信号通路研究 [J], 侯雪飞;龚仕涛;李锦超;李欣
5.PS1/APP双转基因AD模型小鼠与Aβ_(1-40)海马注射AD模型大鼠的组织病理学比较 [J], 李达兵;唐军;范晓棠;宋敏;徐海伟;周光纪;白云
因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
中国行为医学科学 2003 年第 12 卷第 2 期
基础研究·论著
·123 ·
AD 大鼠模型的制备及行为学和超微结构研究
徐海伟1 , 黎海蒂1 , 范晓棠2 , 曹娟1 , 龚发云1 (1. 第三军医大学生理学教研室 ,2. 第三军医大学神经生物学教研室 ,重庆 400038)
摘要 :目的 观察大鼠皮下长期间断性注射叠氮钠后的学习记忆 、中枢神经系统β2淀粉样蛋白 (Aβ) 含量和神经元超微结构的 改变 。方法 采用 Morris 水迷宫 、放射免疫和透射电镜的方法 。结果 注射氮钠后 4 周 ,大鼠 Morris 水迷宫试验逃逸潜伏期明显延 长 ,海马和额叶大脑皮层内 Aβ含量显著升高 ,神经元内出现脂褐素沉积 、髓鞘样变等退行性变 ,线粒体肿胀 、嵴断裂 、数目减少 ,突 触小泡数目减少 。结论 长期皮下注射叠氮钠可以制备 AD 氧化应激大鼠模型 , 并导致中枢 Aβ的升高 ,神经元内出现退行性变和 线粒体的损伤 。
材料和方法 一 、AD 大鼠模型的制备 Wistar 大鼠 48 只 (本校实验动物中心提供) ,雌雄
基金项目 :国家自然科学基金资助项目 (30100087) ;全军“十五”青年基金 资助项目 (01Q099)
不拘 ,体重 190g 至 215g ,按 3mg. kg- 1Π2h 皮下间断注射 NaN3 ,注射 8 次Π天 ,连续注射 4 周[5] ,以同等剂量的生 理盐水代替 NaN3 作为对照组 。
现氧化应激 (oxidative stress) 。氧化应激是 AD 的重要
的病因 ,并随着 AD 病程的进行而逐渐加重[10] 。而 AD
的神经损伤又可加重氧化应激[11] 。Bennett 等[5 ,12] 等注
与生理盐水对照组相比 , 3 P < 0. 05 , 3 3 P < 0. 01
三 、AD 大鼠皮层和海马神经元超微结构改变
1. 海马神经元
注射 NaN3 后 4 周 , 大鼠海马 CA1 区神经元中可
见脂褐素沉积 (图 2 A) ,出现髓鞘样改变 (图 2 A) 。神
经元内线粒体出现肿胀 ,线粒体嵴断裂 、数目减少 (图
阿尔茨海默氏病 (Alzheimer Disease , AD) 患者脑内 存在多种生化及组织学方面的异常变化 ,建立理想的 动物模型对探明 AD 的病因 、病程及治疗极为重要 。 目前采用的 AD 模型可分为神经元直接损伤模型[1] 和 胆碱能系统损伤模型[2] ,这两类模型模拟 AD 中后期 神经细胞变性坏死的病理改变 ,无法模拟 AD 缓慢发 病过程 ,且胆碱能损伤模型 CNS 未见特征性病理改 变 。将 AD 的致病基因导入生殖细胞可制备 AD 的转 基因动物模型 ,但由于 AD 的发生往往是多个基因的 共同作用[3 ,4] ,转染单个基因效果并不理想 ,况且转基 因动物技术要求高 ,难度很大 。AD 病人血小板中线粒 体细胞色素氧化酶活性出现显著降低 , Bennett 等[5] 根 据这一病理改变 ,采用长期皮下注射线粒体细胞色素 氧化酶的特异性阻断剂叠氮钠 ( Sodium Azide ,NaN3 ) , 大鼠出现明显的记忆障碍 ,海马脑片 LTP 也受到明显 抑制 ,初步证实该模型可以作为 AD 模型 ,但该模型中 AD 的典型病理产物β2淀粉样蛋白 (β2amyloid ,Aβ) 及神 经元的超微结构有何改变 ,未见报道 。本文采用放射 免疫和透射电镜对该模型的可靠性加以分析 ,希望有 助于理解 AD 氧化损伤的病理基础 。
18. 50 ±5. 88 21. 45 ±6. 76 59. 42 ±12. 11 3 3 89. 54 ±13. 20 3 3 93. 66 ±15. 38 3 3 119. 67 ±20. 79 3 3
38. 32 ±8. 34 42. 65 ±4. 76 48. 82 ±8. 91 64. 87 ±5. 81 3 68. 73 ±8. 25 3 78. 67 ±16. 65 3 3
图 1 注射叠氮钠后大鼠 Morris 水迷宫测试潜伏期变化 表 1 注射叠氮钠后大鼠中枢神经系统内β- 淀粉样蛋白含量的变化 (单位 :pgΠmg protein)
皮层
海马
空白对照组
生理盐水对照组 注射 NaN3 后 1 周组 注射 NaN3 后 2 周组 注射 NaN3 后 3 周组 注射 NaN3 后 4 周组
2B) 。
2. 额叶大脑皮层
注射 NaN3 后 4 周 , 大鼠额叶大脑皮层神经元中
出现髓鞘样改变 , 同一视野中可见多处髓鞘样改变
(图 2 C ) ,神经元内线粒体肿胀 ,线粒体嵴断裂 ,突触
内清亮突触小泡数目减少 (图 2 D ) 。图 2 见封二 。
讨 论
AD 是痴呆最常见的原因 ,其病因和发病机理一直
一 、AD 大鼠的空间记忆功能改变 皮下间断注射 NaN3 后 1～4 周 ,大鼠 Morris 水迷 宫测试潜伏期由生理盐对照组的 10 秒以下升高到 40 秒至 2 分钟之间 (图 1) ,以注射叠氮钠 4 周组大鼠的潜 伏期升高最为明显 ,升高 974. 75 %( P < 0. 01) 。 二 、AD 大鼠 CNS 内 Aβ的变化 生理盐水对照组各脑区 Aβ含量较正常对照组没 有明显差异 。注射 NaN3 1 周组大鼠额叶大脑皮层中 Aβ升高 ,较对照组升高 177. 02 % ( P < 0. 01) ,注射
nervous system , retrograde degeneration and mitochondria damage in the neurons. Key words : Alzheimer disease ;Oxidative stress ;Learning and memory ;β2amyloid peptide ; Rat 中图分类号 :R742. 5 文献标识码 :A 文章编号 :100528559 (2003) 022123202
是研究的热点 。目前认为 AD 的病因主要有基因突
变[6] 、内分泌改变[7] 、慢性炎症[8] 和氧化应激 ,其中氧
化应激 被 认 为 是 AD 发 病 过 程 中 的 一 个 关 键 性 因
素[9] 。AD 的动物模型的制备原理就是模拟了以上几
种 AD 的病因和病理生理改变 。
尽管 AD 的病因多种多样 ,但 AD 的中后期都会出
五 、统计学处理
统计采用医用统计软件 SPSS(Ver 8. 0) 中的 t2pair test 和相关性分析程序 。
结 果
NaN3 2 周和 3 周组额叶皮层中 Aβ也明显升高 ( P < 0. 01) , 注射 NaN3 4 周组额叶皮层 Aβ升高达峰值 ,较 对照组升高 546. 86 %( P < 0. 01) 。海马中 Aβ的含量 在注射 NaN3 后也明显升高 ,并在注射 NaN3 后 4 周组 升高达峰值 ,较对照组升高 105. 30 % ( P < 0. 01) , 此 时小脑皮层中的 Aβ也升高了 29. 33 % ( P < 0. 05) 见 表 1。
Department of Neurobiology , Third Military Medical University , Chongqing 400038 Abstract : Objective To observe the learning and memory , level ofβ2amyloid protein and ultra2structure changes in the central nervous system
of the rats which were chronically injected sodium azide . Methods After the establishment of AD model , the memory of the rats was surveyed by Morris water maze test , the level of Aβwas assayed with radioimmunoassay and the ultrastructure of neuron was observed with transmission electron microscope. Results Increase of escape latency in Morris water maze test and elevation ofβ2amyloid protein level in the frontal cortex and hippocam2 pus of rats were obvious after injection of sodium azide. And the ultra2structure of neuron including retrograde degeneration such as lipofuscin deposit and myelin sheath2like changes , mitochondria swelling and cristae fragmentation , synaptic corpuscle decreased. Conclusion An Alzheimer disease rat model was established by chronically subcutaneously injection of sodium azide , which resulted in increasing ofβ2amyloid protein level in the central