医学生物学---生物学实验一 显微镜的使用
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部分，找到合适的目的物，仔细观察并记录所观察 到的结果。
3.高倍镜的操作
❖ 使用高倍镜前，必须先用低倍镜观察，发现目的物 后将它移至视野正中处。
❖ 旋动转换器换高倍镜。如果高倍镜触及载玻片立即 停止旋动，这说明原来低倍镜并没有调准，目的物 并没有真正找到，必须用低倍镜重新调节。如果高 倍镜下观察目的物有点模糊，调节细准焦螺旋，直 到视野清晰。调节细准焦螺旋时要注意旋转方向与 载物台上升或下降的关系，防止镜头与载玻片强力 接触，损坏镜头或载玻片。
观察结束后，调节光源到最小再关掉电源开关。 调节粗调螺旋，使载物台下降到最低，取下玻片， 擦干净镜体，罩上防尘罩，然后放回原处。
生物绘图
放大倍数：10×40
2.低倍镜的操作
❖ 置显微镜于固定的桌上，接通电源，打开光源。 ❖ 将标本片放在载物台上，用标本夹夹住，调节标本
移动螺旋，使观察的目的物处于物镜的正下方。 ❖ 调节粗调螺旋，使物镜（10×）与标本靠近，眼睛
在测向注视物镜，防止物镜和载玻片相碰。 ❖ 张开双眼向物镜里观察，如果见到目的物，但不十
分清楚，可用细准焦螺旋，至目的物清晰为止。 ❖ 通过玻片夹推进器慢慢移动玻片，认真观察标本各
实验一 普通光学显微镜的构造和使用
实验内容： 1.掌握普通光学显微镜的构造、使用方法。 2. 掌握生物绘图的正确方法 作业： 1.普通光学显微镜由几部分组成？说明每个 部分的具体部件有哪些？ 2.绘制1条正常人类染色体。
相关知识与实验原理 ❖ 显微镜的分类
现代显微镜可以分为两大类：一类是 光学显微镜，另一类是非光学显微镜 。 这两类显微镜又可根据不同的情况分成 若干类型 如表所示
（应特别注意不要因在下降镜头时用力过猛，或者调焦 时误将粗调节螺旋向反方向转动而损坏镜头及载玻片）
5.换片
观察完一个标本后，如果想要再观察另一标本时， 需先将高倍物镜（或油竟镜）转回到低倍物镜，取 出标本，按放片的方法换上新片，即可观察。千万 不可在高倍物镜（或油镜）下换片，以防损坏镜头。
6 显微镜使用后的整理
在显微镜的光学系统中，物镜的性能最为关键，它
直接影响着显微镜的分辨率。而在普通光学显微镜配置 的几种物镜中，油镜的放大倍数最大，对微生物学研究 最为重要。与其他物镜相比，油镜的使用比较特殊，需 在载玻片和镜头之间加滴镜油，这主要又有如下两方面 的原因：
Βιβλιοθήκη Baidu
油镜的放大倍数可达100× ，放大倍数这样大的镜头， 焦距很短，直径很小，但所需要的光照强度却最大（图 2-2）。
4.油镜的操作
❖ 如果用高倍镜目的物未能看清，可用油镜。先用低倍 镜和高倍镜检查标本片，将目的物移到视野正中。
❖ 在载玻片上滴一滴香柏油，将油镜移至正中，缓慢调 节粗调螺旋使油镜头浸没在油中，刚好贴近载玻片。 然后再用细准焦螺旋微微向上调（切忌不用粗准焦螺 旋）即可。
❖ 油镜观察完毕，用油镜纸将镜头上的油揩净，另用擦 镜纸蘸少许二甲苯揩拭镜头，再用擦镜纸揩干。
基本原理
现代普通光学显微镜利用目镜和物镜两组透镜系统来放
大成像，故又称为复式显微镜。它们由机械装置和光学系统
两大部分组成（图2-1）。
1.镜座；2.载物台；3.镜臂；
4.棱镜套；5.镜筒；
6.接目镜；7.转换器；8.接
物镜；9.聚光器；10.
虹彩光圈；11.光圈固定器；
12.聚光器升降螺旋；
13.反光镜；14.细调节器；
实验方法和步骤
（一）显微镜的使用
1.取镜和安放
置显微镜于平稳的实验台上，镜座距实验 台边沿约为3~4cm。镜检者姿势要端正。
（取、放显微镜时应一手握住镜臂，一手托住底座，使 显微镜保持直立、平稳。切忌用单手拎提；且不论使用单 筒显微镜或双筒显微镜均应双眼同时睁开观察，以减少眼 睛疲劳，也便于边观察边绘图或纪录。）
从承载标本的玻片透过来的光线，因介质密度不
同（从玻片进入空气，再进入镜头），有些光线会因 折射或全反射，不能进入镜头，致使在使用油镜时会 因射入的光线较少，物像 显现不清。所以为了不使 通过的光线有所损失，在 使用油镜时需在油镜和玻 片之间加入与玻璃的折射 率（n =1.55）相仿的镜油 （通常使用香柏油，其折 射率n =1.52）。
2、增加显微镜的分辨率 显微镜的分辨率或分辨力（resolution or resolving power）
是指显微镜能辨别两点之间的最小距离的能力。从物理学角 度看，光学显微镜的分辨率受光的干涉现象及所用物镜性能 的限制，可表示为：
分辨率D＝
2NA
式中：λ=光波波长，NA=物镜的数值孔径值。
光学显微镜的光源不可能超出可见光的波长范围（0.4～ 0.7 μm），而数值孔径则取决于物镜的镜口角和玻片与镜头 间介质的折射率，可表示为：NA=n·sinθ 。 式中θ为光线最大
入射角的半数。它取决于物镜的直径和焦距，一般来说在实 际应用中最大只能达到120°，而n为介质折射率。由于香柏 油的折射率（1.52）比空气及水的折射率（分别为1.0和1.33）
要高，因此以香柏油作为镜头与玻片之间介质的油镜所能达 到的数值孔径（NA一般在1.2～1.4）要高于低倍镜、高倍镜 等干镜（NA都低于1.0）。若以可见光的平均波长0.55μm来 计算，数值孔径通常在0.65左右的高倍镜只能分辨距离不小 于0.4μm的物体，而油镜的分辨率却可达到0.2 μm左右。
15.粗调节器；16.标本夹
普通光学显微镜的基本结构
❖ 普通光学显微镜的构造可分为两部分：一为 机械装置，二为光学系统 。
❖ 机械装置由镜座、镜筒、物镜转换器、载物 台、推动器、粗动螺旋和微动螺旋等部件组 成。
❖ 光学系统由目镜、物镜、聚光器、光源、滤 光片、虹彩光圈等组成
普 通 光 学 显 微 镜 基 本 构 造
3.高倍镜的操作
❖ 使用高倍镜前，必须先用低倍镜观察，发现目的物 后将它移至视野正中处。
❖ 旋动转换器换高倍镜。如果高倍镜触及载玻片立即 停止旋动，这说明原来低倍镜并没有调准，目的物 并没有真正找到，必须用低倍镜重新调节。如果高 倍镜下观察目的物有点模糊，调节细准焦螺旋，直 到视野清晰。调节细准焦螺旋时要注意旋转方向与 载物台上升或下降的关系，防止镜头与载玻片强力 接触，损坏镜头或载玻片。
观察结束后，调节光源到最小再关掉电源开关。 调节粗调螺旋，使载物台下降到最低，取下玻片， 擦干净镜体，罩上防尘罩，然后放回原处。
生物绘图
放大倍数：10×40
2.低倍镜的操作
❖ 置显微镜于固定的桌上，接通电源，打开光源。 ❖ 将标本片放在载物台上，用标本夹夹住，调节标本
移动螺旋，使观察的目的物处于物镜的正下方。 ❖ 调节粗调螺旋，使物镜（10×）与标本靠近，眼睛
在测向注视物镜，防止物镜和载玻片相碰。 ❖ 张开双眼向物镜里观察，如果见到目的物，但不十
分清楚，可用细准焦螺旋，至目的物清晰为止。 ❖ 通过玻片夹推进器慢慢移动玻片，认真观察标本各
实验一 普通光学显微镜的构造和使用
实验内容： 1.掌握普通光学显微镜的构造、使用方法。 2. 掌握生物绘图的正确方法 作业： 1.普通光学显微镜由几部分组成？说明每个 部分的具体部件有哪些？ 2.绘制1条正常人类染色体。
相关知识与实验原理 ❖ 显微镜的分类
现代显微镜可以分为两大类：一类是 光学显微镜，另一类是非光学显微镜 。 这两类显微镜又可根据不同的情况分成 若干类型 如表所示
（应特别注意不要因在下降镜头时用力过猛，或者调焦 时误将粗调节螺旋向反方向转动而损坏镜头及载玻片）
5.换片
观察完一个标本后，如果想要再观察另一标本时， 需先将高倍物镜（或油竟镜）转回到低倍物镜，取 出标本，按放片的方法换上新片，即可观察。千万 不可在高倍物镜（或油镜）下换片，以防损坏镜头。
6 显微镜使用后的整理
在显微镜的光学系统中，物镜的性能最为关键，它
直接影响着显微镜的分辨率。而在普通光学显微镜配置 的几种物镜中，油镜的放大倍数最大，对微生物学研究 最为重要。与其他物镜相比，油镜的使用比较特殊，需 在载玻片和镜头之间加滴镜油，这主要又有如下两方面 的原因：
Βιβλιοθήκη Baidu
油镜的放大倍数可达100× ，放大倍数这样大的镜头， 焦距很短，直径很小，但所需要的光照强度却最大（图 2-2）。
4.油镜的操作
❖ 如果用高倍镜目的物未能看清，可用油镜。先用低倍 镜和高倍镜检查标本片，将目的物移到视野正中。
❖ 在载玻片上滴一滴香柏油，将油镜移至正中，缓慢调 节粗调螺旋使油镜头浸没在油中，刚好贴近载玻片。 然后再用细准焦螺旋微微向上调（切忌不用粗准焦螺 旋）即可。
❖ 油镜观察完毕，用油镜纸将镜头上的油揩净，另用擦 镜纸蘸少许二甲苯揩拭镜头，再用擦镜纸揩干。
基本原理
现代普通光学显微镜利用目镜和物镜两组透镜系统来放
大成像，故又称为复式显微镜。它们由机械装置和光学系统
两大部分组成（图2-1）。
1.镜座；2.载物台；3.镜臂；
4.棱镜套；5.镜筒；
6.接目镜；7.转换器；8.接
物镜；9.聚光器；10.
虹彩光圈；11.光圈固定器；
12.聚光器升降螺旋；
13.反光镜；14.细调节器；
实验方法和步骤
（一）显微镜的使用
1.取镜和安放
置显微镜于平稳的实验台上，镜座距实验 台边沿约为3~4cm。镜检者姿势要端正。
（取、放显微镜时应一手握住镜臂，一手托住底座，使 显微镜保持直立、平稳。切忌用单手拎提；且不论使用单 筒显微镜或双筒显微镜均应双眼同时睁开观察，以减少眼 睛疲劳，也便于边观察边绘图或纪录。）
从承载标本的玻片透过来的光线，因介质密度不
同（从玻片进入空气，再进入镜头），有些光线会因 折射或全反射，不能进入镜头，致使在使用油镜时会 因射入的光线较少，物像 显现不清。所以为了不使 通过的光线有所损失，在 使用油镜时需在油镜和玻 片之间加入与玻璃的折射 率（n =1.55）相仿的镜油 （通常使用香柏油，其折 射率n =1.52）。
2、增加显微镜的分辨率 显微镜的分辨率或分辨力（resolution or resolving power）
是指显微镜能辨别两点之间的最小距离的能力。从物理学角 度看，光学显微镜的分辨率受光的干涉现象及所用物镜性能 的限制，可表示为：
分辨率D＝
2NA
式中：λ=光波波长，NA=物镜的数值孔径值。
光学显微镜的光源不可能超出可见光的波长范围（0.4～ 0.7 μm），而数值孔径则取决于物镜的镜口角和玻片与镜头 间介质的折射率，可表示为：NA=n·sinθ 。 式中θ为光线最大
入射角的半数。它取决于物镜的直径和焦距，一般来说在实 际应用中最大只能达到120°，而n为介质折射率。由于香柏 油的折射率（1.52）比空气及水的折射率（分别为1.0和1.33）
要高，因此以香柏油作为镜头与玻片之间介质的油镜所能达 到的数值孔径（NA一般在1.2～1.4）要高于低倍镜、高倍镜 等干镜（NA都低于1.0）。若以可见光的平均波长0.55μm来 计算，数值孔径通常在0.65左右的高倍镜只能分辨距离不小 于0.4μm的物体，而油镜的分辨率却可达到0.2 μm左右。
15.粗调节器；16.标本夹
普通光学显微镜的基本结构
❖ 普通光学显微镜的构造可分为两部分：一为 机械装置，二为光学系统 。
❖ 机械装置由镜座、镜筒、物镜转换器、载物 台、推动器、粗动螺旋和微动螺旋等部件组 成。
❖ 光学系统由目镜、物镜、聚光器、光源、滤 光片、虹彩光圈等组成
普 通 光 学 显 微 镜 基 本 构 造