油橄榄果渣多酚提取实验方案
微波辅助提取油橄榄果渣多酚
图 4 料液比对多酚含量的影响
图 4 结果表明，橄榄果渣多酚含量随料液比的增 大而升高，这是因为微波辐射待提取样品时，会使其 超微结构特 性 遭 到 破 坏，提 取 效 率 升 高［14］。 但 当 料 液比达到一定值后，继续提高料液比对提取效率影响 不大，反而有所下降。这是由于料液比较小时，果渣 吸收的微波能量相对多，细胞破碎的程度比较好，多 酚更易溶解扩散于溶剂中； 而溶剂体积增大时，橄榄 果渣吸收的能量相对减少，细胞破碎程度相对减小， 多酚溶解扩散阻力相对较大，而且增大溶剂的消耗量 使成本投入增加。本实验选择的料液比为 1∶ 20。
BS210S 型分析天平（ 北京赛多利斯天平有限公 司） ，HHS-2 型数显恒温水浴锅（ 江苏国华电器有限 公司） ，SY-1000 型超声波清洗器（ 上海宁商超声仪器 有限公司） ，101-3 型电热鼓风烘箱（ 上海市上海县第 二五金厂） ，Labtech UV-3 000 紫外可见分光光度计 （ 北京莱伯泰科仪器有限公司） ，APL17 型实验用微 波仪（ 上海新仪微波化学科技有限公司） ，HR1861 型 榨汁机（ 荷兰皇家飞利浦电子公司） 。 1. 3 实验方法 1. 3. 1 油橄榄果渣样品的制备
1 材料与方法
1. 1 实验材料 油橄榄加工果渣由陇南田园油橄榄科技开发有
限公司提供。 1. 2 试剂与仪器
蒸馏水，正己烷、无水乙醇、没食子酸、Na2 CO3 等 均为分析纯试剂； 复合纤维素酶（ 宁夏和氏璧生物技 术有限公司） 、Folin-Ciocalteu 试剂（ 上海荔达生物科 技有限公司） 。
橄榄叶中多酚的提取工艺
橄榄叶中多酚的提取工艺1.工艺流程橄榄叶→冷冻干燥→高速绞碎→橄榄叶渣→加乙醇→超声波辅助提取（0.5h）→离心（取上清液）→定容→测吸光值2. 材料与试剂油橄榄叶片；福林酚试剂(AR)、焦性没食子酸(AR)、碳酸钠(AR)；无水乙醇。
2.1 仪器与设备高速粉碎机；电子分析天平；数显恒温水浴锅；分光光度计；SHZ-D Ⅲ循环水式真空泵，冷冻干燥机，超声波提取机。
3.试验方法将油橄榄叶片在试验室冷冻干燥后，于微型高速粉碎机粉碎，放入干燥器皿中备用。
3.1 单因素试验称取2 g干燥的叶片粉末，置于250 mL 圆底烧瓶中，在不同条件下（乙醇浓度、提取料液比、提取时间、提取温度作为因素）进行提取，确定各因素较佳值。
每次提取液过滤，定容至25mL，测定提取液中多酚的含量并计算出提取率。
3.2 正交试验以乙醇浓度、提取料液比、提取温度、提取时间作为考察因素，采用正交试验对样品中的多酚进行提取，以多酚提取率作为指标，进行试验优化，确定出最佳提取工艺条件。
提取溶剂的选择：采取不同浓度的乙醇进行对比实验，分别计算其提取率；（30%、50%、70%、90%）（1）提取温度对得率的影响：选择40、50、60、70℃；（2）提取时间对得率的影响：选择 20、30、40、50min；（3）料液比对得率的影响：选择10、20、30、40（ml：g）；（4）超声波功率对得率的影响：选择200、400、600、800（W）。
3.3 多酚的测定3.3.1 标准曲线的绘制标准曲线的绘制：准确吸取没食子酸标准液0、0.05、0.10、0.20、0.40、0.80、1.20mL，移入25mL具塞试管中，分别用水稀释至10.0mL；各加入1.0mL福林试剂和2.0mL20%的Na2CO3水溶液，试管在沸水裕上加热1min，然后用水冷却并稀释至25mL。
室温放置30min，用1cm的比色杯，在745nm的波长处测定吸光度。
以吸收度为纵座标、浓度为横座标绘制标准曲线或求取线性回归方程。
油橄榄果渣中多酚的提取与纯化研究
ＳＨＵ Ｓｈｉ，Ｗ ＡＮ Ｙｏｎｇ－ｂｉｎ，ＨＵ Ｃｈｕａｎ－ｒｏｎｇ，Ｈ Ｅ Ｄｏｎｇ－ｐｉｎｇ
（ＣｏＨｅｇｅ ｏｆ Ｆｏｏｄ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｗ ｕｈａｎ Ｐｏｌｙｔｅｃｈｎｉｃ Ｕｎ ｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｗ ｕｈａｎ ４３００２３，Ｈｕｂｅｉ，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｗ ｉｔｈ ｏｌｉｖｅ ｐｏｍ ａｃｅ ａｓ ｒａｗ ｍ ａｔｅｒｉａｌ，ｔｈｅ ｏｌｉｖｅ ｐｏｍ ａｃｅ ｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌｓ ｗａｓ ｅｘｔｒａｃｔｅｄ ａｎｄ
ｐｕｒｉｆ ｉｅｄ ｂｙ ｍ ｉｃｒｏｗａｖｅ－ａｓｓｉｓｔｅｄ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ．Ｓｉｎｇｌｅ ｆａｃｔｏｒ ｍ ｅｔｈｏｄ ａｎｄ ｏ￣ｈｏｇｏｎａｌ ａｒｒａｙ ｄｅｓｉｇｎ
量 与常 规溶 剂提 取 方法 相 比提高 了 １８％～３８％。 本 文利 用微 波 辅 助技 术 ，通过 单 因素试 验 研 究
溶 剂料 液 比 、微 波 时间 、微 波功率 等 因素 对 油橄榄 果 渣多 酚 提取率 的影 响 。在 单 因素试 验 基础上 ，采 用 正交 试 验设计 ，优化 多酚 提取 工艺 ，并 通 过大 孑Ｌ 树 脂 的选 择 ，对 多 酚粗提 液 进行 纯化 ，最 后通 过 高 效 液相 色谱 法鉴 定 油橄榄 多 酚物 质 。 １ 材 料 与方 法 １．１ 原料 与试 剂
中图分类号 ：ＴＳ２２９
文献标 识码 ：Ａ 文 章编号 ： １００８—９５７８（２０１８）０６—００９６—０５
油 橄 榄 含 丰 富 的 酚 类 化 合 物 ，在 新 鲜 油 橄 榄 果 、油 橄 榄 叶 、油 橄 榄 果 渣 中含 量 均 较 高 ］。 由 于 酚类 化 合 物 的分 子 结构 中含 有许 多 酚 性的 羟基 ， 所 以具 有 较 强 的抗 氧 化作 用 和 清 除 自由基 的 能力 ， 对 预 防 疾 病 有 积极 作 用 【２】，近 些 年 引 起 人 们 对 于 开 发 和 利 用 天 然 酚 类 化 合 物 的 广 泛 兴 趣 ，开 发 利 用 以酚 类 化合 物 为 主 的天 然 产 物 ，并 在食 品化 工 、 营养 保 健 等 多个 领 域 具有 广 泛 的应 用 ［３］。
油橄榄果渣多酚分离纯化及抗氧化活性
- 析[ ] cancer • 广西中医药 effect ， 2015,38(3):70 of Cordyceps -73. [22] 李万芳， 闫 滨 ， 王 璐 ， 等.北虫草醚提物成分与抗肿瘤活性 分析时珍国医国药， 2014,25(1):60 -62. [23]王 鸿 ， 陈 俊 ， 倪建良， 等.生物活性导向分离海洋真菌 A l m o i Sp.M N 801次级代谢产物[ ] . 浙江工业大学学报， 2014, 42(1) ： 41 -44. [24] 冯 娜 ， 吴 娜 ， 杨 焱 ， 等.鲍姆氏层孔菌子实体中化合物的 分离鉴定及其体外抑制肿瘤的研究[J] . 菌物学报， 215， 34 (1) :12 -130. [25] Breathnach A S ,Robins E J,Nazzaro - Porro M,et al. Hyperi/mentaty disorders一mechanisms of action ： Effect of azelaic acid on melanoma and other tumoral cells in culture [ J ]. Acta Derm Venereol,1989,143： 62-66. [26]Manosroi A ,Panyosak A ,Rojanasakul Y ,et al. Characteristics and anti proliferative activity of azelaic acid and i t s derivatives entrapped in bilayer vesicles in cancer cell lines[J]. Journal of Dru/ , 2007 , 15(5)334 -341.
1
材料与方法 试验材料 油橄榄果渣由凉山州中泽新技术开果渣立即装袋， 真空包装， - 2 0 丈条件下 保 藏 备 用 。 1.2 试剂与仪器 试剂： 蒸馏水； 正己烷、 无水乙醇、 碳酸钠、
橄榄油中多酚物质的分离与提取方法研究
橄榄油中多酚物质的分离与提取方法研究橄榄油是一种营养和美容的优质食用油，具有丰富的多酚物质。
多酚物质是一种强效的自由基清除剂，具有较强的抗氧化、抗炎、降血压、降血糖和降血脂等生物活性，对于保健和治疗慢性疾病具有很高的价值。
因此，多酚物质的分离与提取方法研究，对于发挥橄榄油营养和药理价值具有重要意义。
一、橄榄油中多酚物质的种类和含量橄榄油中的多酚物质主要分为黄酮类、苯酚类和羟基苯乙烯类等，包括儿茶素、鲁米酮、羟基酪醇、橄榄烯酚等。
其中，最常见的多酚物质为儿茶素，占橄榄油中多酚物质总量的70%以上。
橄榄油中多酚物质的含量与橄榄品种、种植地区、气候环境、收获时间等因素密切相关。
据统计，不同品种的橄榄油中多酚物质的含量有所差异，例如，希腊大力神品种的橄榄油中多酚物质的含量远远高于西班牙皇后品种和意大利莫尼卡品种。
二、橄榄油中多酚物质的分离与提取方法1.溶剂提取法溶剂提取法是橄榄油中多酚物质的高效分离和提取方法之一。
常用的溶剂有甲醇、乙醇、乙酸乙酯、氯仿、二甲苯等。
其中，甲醇提取法为最常用的方法之一，其分离效果好，抽提率高，但是甲醇在操作过程中易挥发，存在毒性及环境污染的风险。
2.超临界CO2提取法超临界CO2提取法是一种新兴的高效、安全、环保的橄榄油中多酚物质的提取工艺。
该方法利用超临界状态下的CO2作为溶剂，在高压下与原料直接接触，达到快速、均匀地抽提的目的，在操作过程中无毒害和不易挥发。
该方法被视为一种极具前景和发展价值的橄榄油多酚物质提取新技术。
3.超声波辅助提取法超声波辅助提取法（SFE）是一种利用超声波在橄榄油中产生大量空穴和震荡频率增加的方法，从而使溶剂更加容易渗入油中进行抽提的方法。
该方法具有分离效果高、速度快、操作简单、节能环保、提取率高等优点，是一种适用于批量生产的橄榄油多酚物质提取技术。
三、多酚物质的应用橄榄油中的多酚物质广泛应用于食品、药品、保健品等领域。
多酚物质具有强烈的抗氧化和抗炎作用，可以帮助维护身体健康，增强免疫力，降低慢性疾病风险。
油橄榄果渣中多酚的提取与纯化研究
油橄榄果渣中多酚的提取与纯化研究
舒适;万勇斌;胡传荣;何东平
【期刊名称】《粮食与油脂》
【年(卷),期】2018(031)006
【摘要】以油橄榄果渣为原料,利用微波辅助技术提取油橄榄果渣多酚并对其进行纯化研究.通过单因素和正交试验优化橄榄多酚提取工艺,最佳优化工艺参数为液料比20 mL/g、微波时间2 min、微波功率200 W、乙醇体积分数50%.在此条件下,油橄榄果渣多酚得率为0.97%.对比5种大孔树脂对油橄榄酚类粗提物的纯化效果可知,经AB-8型树脂纯化后油橄榄果渣多酚含量可提高至80%.
【总页数】5页(P96-100)
【作者】舒适;万勇斌;胡传荣;何东平
【作者单位】武汉轻工大学食品科学与工程学院, 湖北武汉 430023;武汉轻工大学食品科学与工程学院, 湖北武汉 430023;武汉轻工大学食品科学与工程学院, 湖北武汉 430023;武汉轻工大学食品科学与工程学院, 湖北武汉 430023
【正文语种】中文
【中图分类】TS229
【相关文献】
1.油橄榄果渣多酚分离纯化及抗氧化活性 [J], 谢碧秀;马建英;杨泽身;向亚楠;陈明霜
2.正交设计优化油橄榄果渣多酚提取工艺 [J], 谢碧秀;马建英;刘滕;刘捷;何强;朱华
荣;杨泽身
3.微波辅助提取不同品种油橄榄叶及果渣多酚物质 [J], 耿树香;宁德鲁;李勇杰;熊兴武;陈海云;张艳丽
4.油橄榄果渣中多酚提取及活性研究进展 [J], 王安华;龙国清;王东东;於洪建;贾景明
5.黑果腺肋花楸果渣多酚的提取工艺优化及纯化研究 [J], 郭鸿儒;王治同
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均匀设计法优化橄榄叶多酚提取工艺
图 1 没食子酸标准品经显色反应后的吸收光谱图
图 2 橄榄叶多酚提取物经显色反应后的吸收光谱图
图 4 温度对橄榄叶多酚提取得率的影响
21312 橄榄叶颗粒度对多酚提取得率的影响 分别准确称取没过 20 目 、过 20 ～40 目 、过
40～60目 、过 60～80目和过 80目筛的橄榄叶粉 各 1g加入五个带塞的 25mL 锥形瓶中 , 然后各加 入 20mL 80%的乙醇 , 在 20℃条件下水浴震荡浸 提 1h, 测定多酚提取得率 , 橄榄叶颗粒度对多酚 提取效果的影响见图 6。
中国食品添加剂 试验研究
Chi na Food Additives
食子酸计 ) , 经进一步计算即得多酚提取得率 。
提取得率 Y = CV ×100
M
式中 : Y: 提取得率 ( % ) ; C: 提取原液中 多酚 的 浓 度 ( mg /L ) ; V: 提 取 多 酚 液 总 体 积 (mL ) ; M : 橄榄叶质量 ( g) 。 1121114 标准曲线的绘制 精确称取 01070g的 干燥没食子酸标准品 , 用蒸馏水溶解 , 定容于 100mL的容量瓶中 , 配成浓度为 700mg /L 的没食 子酸 溶 液 。然 后 分 别 精 密 吸 取 0、 015、 110、 115、210、310和 410mL 没食子酸标准溶液定容 于 50mL 容量瓶内 , 配成浓度为 0 ～56mg /L 的系 列标准溶液 。再从各标准溶液中吸取 1mL 加入 25mL 容量 瓶内 , 加 10mL 蒸馏 水 , 摇 匀 , 再加 115mLFolin - C iocalteu 试 剂 , 充 分 摇 匀 30 s 后 , 8m in前加入 6mL 10% Na2 CO3溶液 , 混匀 , 加水 定容 , 再混匀 , 然后在 30℃下避光放置反应 2h, 以 0样为空白 , 在由 1121横坐标 , 绘制标准曲线 。 11212 提取因素对橄榄叶多酚提取量的影响试验
油橄榄果渣多酚提取实验方案
油橄榄果渣多酚提取实验方案一、油橄榄果渣预处理（一）油橄榄果渣的脱油1．有机溶剂浸提法（油橄榄果渣油的提取工艺及其脂肪酸组成研究）1.1原料、仪器及试剂原料：油橄榄鲜果渣，用前在-20℃冰箱封存。
仪器：BS210S 型电子分析天平，DHZ -C 型大容量恒温振荡器，N -1001 型旋转蒸发仪。
试剂：正己烷为分析纯试剂; 实验用水为去离子水。
1.2实验步骤准确称取10 g 粉碎后的油橄榄果渣，置于250mL具塞三角瓶中，按1:9的料液比加入溶剂; 将三角瓶置于55℃（50℃）的恒温振荡器中振荡提取，转速200 r /min（150 r /min），时间为3h; 用过滤法分离溶剂混合物与残渣，用一定量（5+5mL）溶剂洗涤残渣2 次，收集脱油油橄榄果渣，干燥至恒重（真空干燥：40℃，12h），计算脱油率。
2.酶法（酶法辅助提取工艺对橄榄油品质的影响）2.1原料、仪器及试剂原料：油橄榄鲜果渣，用前在-20℃冰箱封存。
仪器：BS210S 型电子分析天平，DHZ -C 型大容量恒温振荡器，N -1001 型旋转蒸发仪、磁力搅拌器（可加热）、高速离心机。
试剂：纤维素酶; 实验用水为去离子水。
2.2实验步骤准确称取10 g 粉碎后的油橄榄果渣，置于250 ml具塞三角瓶中，加入1.0%( W/W) 的纤维素酶水溶液10 ml，置于50℃的恒温振荡器中振荡提取，转速150 r /min，时间为45min，4 000 r /min 离心20 min，去上层油脂，收集下层脱油的果渣，干燥至恒重（真空干燥：40℃，12h），计算脱油率。
（二）油橄榄果渣的干燥1.油橄榄果渣的冷冻干燥1.1 原料、仪器及试剂原料：用上述油橄榄脱油果渣，用前在-20℃冰箱封存。
仪器：BS210S 型电子分析天平，冷冻干燥机。
1.2 实验步骤将原料果渣放入冷冻干燥机，冷冻干燥预冷冻时间为24h，在干燥时间分别为12、24、36、48h的条件下对样品进行冷冻干燥处理，对所得样品进行粉碎，选过80目筛的样品进行多酚提取操作，以多酚得率为指标确定最适宜干燥时间。
油橄榄鲜果中多酚提取工艺优化及不同成熟度含量变化分析
油橄榄鲜果中多酚提取工艺优化及不同成熟度含量变化分析刘露;邓俊琳;王寒冬;丁春邦;李天【摘要】利用响应面法优化油橄榄鲜果多酚的提取工艺,并测定8个油橄榄品种5个成熟度的多酚含量.在单因素试验结果的基础上,以料液比、超声温度和超声时间为自变量,以油橄榄鲜果中多酚的提取量为响应值,利用Box-Benhnken中心组合设计三因素三水平试验,运用响应面法优化提取条件,确定最佳提取工艺为料液比1∶22(g/mL)、超声时间30 min、超声温度47℃.经验证,多酚的平均提取量为6.8145 mg/g,与理论值的相对误差为1.35％.说明模型拟合度好,提取工艺稳定可行,具有实用价值.油橄榄鲜果多酚含量因品种不同而有差异,在总体变化趋势上,多酚含量在第一成熟度最高,之后随着成熟度增加逐渐下降,在第三成熟度达到最低,之后略有增加,最终趋于相对稳定.【期刊名称】《天然产物研究与开发》【年(卷),期】2015(027)008【总页数】6页(P1453-1458)【关键词】油橄榄;多酚;响应面法;超声辅助提取;成熟度【作者】刘露;邓俊琳;王寒冬;丁春邦;李天【作者单位】四川农业大学生命科学学院,雅安625014;四川农业大学生命科学学院,雅安625014;四川农业大学生命科学学院,雅安625014;四川农业大学生命科学学院,雅安625014;四川农业大学农学院,成都611130【正文语种】中文【中图分类】TS201油橄榄(Olea europaea L.)是木犀科木犀榄属常绿乔木，为世界著名油料作物，原产地中海沿岸国家［1］。
中国从1956 年开始引种油橄榄，到2013 年栽植面积达到3 万余公顷，主要分布于甘肃、四川以及云南西北部金沙江流域等地区［2］。
油橄榄是一种油果兼用的独特树种，用鲜果榨取的橄榄油，是最为理想的健康食用油之一;用鲜果制成的果用油橄榄更是世界流行的高质量食品，营养成分保存完整，具有促消化、预防心血管疾病和抗肿瘤等多种功能［3］。
MMFSCNJ橄榄油油橄榄果渣油检验杂质测定法
MM_FS_CNJ_0318橄榄油油橄榄果渣油杂质测定法MM_FS_CNJ_0318橄榄油、油橄榄果渣油检验杂质测定法1.适用范围本标准适用于商品橄榄油、油橄榄果渣油中杂质含量的检验。
2.原理概要油脂中的杂质系指其中不溶于石油醚的残留物。
用石油醚可将油和杂质分离，并用失量法将杂质定量。
3.主要试剂和仪器3.1.主要试剂石油醚（60～90℃沸程）。
3.2.仪器过滤坩埚：直径40mm，规格2号；烧杯：50mL；抽滤瓶；抽气泵或玻璃水泵；干燥器；玻璃棒：150mm；注射器：5mL；分析天平：感量0.001g；电烘箱：可控制温度100～120℃。
4.过程简述4.1.先将洁净的烧杯、过滤坩埚烘至恒量，分别记下质量（g，准确到0.001g），放在干燥器内待用。
4.2.称取10g（准确至0.001g）混合均匀的油试样置于烧杯内，加入20mL石油醚，用玻璃棒搅拌使油样充分溶解。
静止片刻，将溶液沿着玻璃棒缓缓倾泻到过滤坩埚中过滤并同时抽滤。
用石油醚少量多次，充分洗净烧杯及玻璃棒，全部倒至过滤坩埚中。
4.3.用注射器吸取石油醚洗涤过滤坩埚内壁及不溶物，直至洗净油迹为止，并全部滤出石油醚溶液。
4.4.将过滤坩埚连同杂质放入105±2℃电烘箱内烘40min，取出放入干燥器内冷却至室温后称量（g，准确到0.001g），此后每烘20min冷却、称量一次，直至恒量（前后两次质量差不超过0.003g）。
5.结果计算X＝m2－m1×100 m式中：X ——杂质含量，％（m／m）；m2——恒量后过滤坩埚和杂质质量，g；m1——恒量后过滤坩埚质量，g；m ——试样质量，g。
平行试样结果允许差不超过0.03％，求其平均数，即为测定结果，测定结果取小数点后二位。
6.来源：ZB B66 005.5－90。
橄榄多酚的提取研究
橄榄多酚的提取研究
何志勇;夏文水
【期刊名称】《林产化学与工业》
【年(卷),期】2007(27)1
【摘要】利用溶剂浸提法、超声波辅助提取法和微波辅助提取法对橄榄中的多酚物质进行提取研究,并比较了3种方法的提取效果.结果表明:以1g橄榄果肉粉为原料,60%～70%丙酮水溶液是提取橄榄多酚的最适溶剂,最佳提取时间1h,温度20～30℃,固液比1∶20(g∶mL);超声波提取的最适功率为80W,最佳提取时间25min;微波提取的最适功率为280W,提取时间5s.3种提取方法的多酚提取得率分别为17.1%、19.3%和20.3%,与溶剂浸提法相比,超声波法和微波法提取时间短、效率高,提取效果明显优于前者,并且三者提取物的UV和HPLC检测图谱完全一致.【总页数】4页(P77-80)
【作者】何志勇;夏文水
【作者单位】江南大学,食品学院,江苏,无锡,214036;江南大学,食品学院,江苏,无锡,214036
【正文语种】中文
【中图分类】TQ91
【相关文献】
1.油橄榄果渣中多酚的提取与纯化研究 [J], 舒适;万勇斌;胡传荣;何东平
2.超声波乙醇浸提法提取橄榄叶总多酚工艺的研究 [J], 孔祥佳;刘廉荣
3.二次正交旋转优化橄榄多酚提取及其抗氧化性研究 [J], 宋照风;周子凡;朱峰;赵海全;
4.橄榄多酚的化学组成、药理作用及提取技术研究进展 [J], 程子良;祁惠芳;黄鹏飞;霍焕燃;孔维宝;马君义;王俊龙
5.油橄榄果渣中多酚提取及活性研究进展 [J], 王安华;龙国清;王东东;於洪建;贾景明
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MMFSCNJ橄榄油油橄榄果渣油检验酸度测定法
MM_FS_CNJ_0319橄榄油油橄榄果渣油酸度中和法
MM_FS_CNJ_0319
橄榄油、油橄榄果渣油检验酸度测定法
1.适用范围
本方法适用于商品橄榄油、油橄榄果渣油酸度的检验。
2.原理概要
用已知标准浓度的氢氧化钾中和一定量的油中的游离脂肪酸，并以油酸的百分含量表示橄榄油、油橄榄果渣油的酸度值。
3.主要试剂和仪器
.主要试剂
／L氢氧化钾标准溶液；
中性乙醚-乙醇（2∶1）混合溶剂：临用前加入3滴1％酚酞指示剂，用／L 氢氧化钾滴定至中性；
指示剂：1％酚酞乙醇溶液。
.仪器
滴定管：碱式，最小刻度为；
锥形瓶：250mL；
容量瓶、称量瓶；
移液管：大肚50mL；
天平：感量。
4.过程简述
称取3～5g（准确至）混匀油试样置于锥形瓶中，加入50mL中性乙醚-乙醇混合溶剂，摇动使试样溶解，再加3滴酚酞指示剂，用氢氧化钾滴定至出现微红色并30s不消退，记下消耗的氢氧化钾标准溶液毫升数。
5.结果计算
.油脂酸度
A＝V×c×282
10m
式中：A ——酸度，％（m／m）；
V ——滴定消耗的氢氧化钾标准溶液体积，mL；
C ——氢氧化钾标准溶液的摩尔浓度，mol／L；
m ——试样质量，g；
282 ——油酸分子的摩尔质量，g／mol。
平行试验结果允许差不超过％，求其平均数，即为测定结果，测定结果取小数点后一位。
6.来源：
ZB B66 －90。
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油橄榄果渣多酚提取实验方案一、油橄榄果渣预处理（一）油橄榄果渣的脱油1．有机溶剂浸提法（油橄榄果渣油的提取工艺及其脂肪酸组成研究）1.1原料、仪器及试剂原料：油橄榄鲜果渣，用前在-20℃冰箱封存。
仪器：BS210S 型电子分析天平，DHZ -C 型大容量恒温振荡器，N -1001 型旋转蒸发仪。
试剂：正己烷为分析纯试剂; 实验用水为去离子水。
1.2实验步骤准确称取10 g 粉碎后的油橄榄果渣，置于250mL具塞三角瓶中，按1:9的料液比加入溶剂; 将三角瓶置于55℃（50℃）的恒温振荡器中振荡提取，转速200 r /min（150 r /min），时间为3h; 用过滤法分离溶剂混合物与残渣，用一定量（5+5mL）溶剂洗涤残渣2 次，收集脱油油橄榄果渣，干燥至恒重（真空干燥：40℃，12h），计算脱油率。
2.酶法（酶法辅助提取工艺对橄榄油品质的影响）2.1原料、仪器及试剂原料：油橄榄鲜果渣，用前在-20℃冰箱封存。
仪器：BS210S 型电子分析天平，DHZ -C 型大容量恒温振荡器，N -1001 型旋转蒸发仪、磁力搅拌器（可加热）、高速离心机。
试剂：纤维素酶; 实验用水为去离子水。
2.2实验步骤准确称取10 g 粉碎后的油橄榄果渣，置于250 ml具塞三角瓶中，加入1.0%( W/W) 的纤维素酶水溶液10 ml，置于50℃的恒温振荡器中振荡提取，转速150 r /min，时间为45min，4 000 r /min 离心20 min，去上层油脂，收集下层脱油的果渣，干燥至恒重（真空干燥：40℃，12h），计算脱油率。
（二）油橄榄果渣的干燥1.油橄榄果渣的冷冻干燥1.1 原料、仪器及试剂原料：用上述油橄榄脱油果渣，用前在-20℃冰箱封存。
仪器：BS210S 型电子分析天平，冷冻干燥机。
1.2 实验步骤将原料果渣放入冷冻干燥机，冷冻干燥预冷冻时间为24h，在干燥时间分别为12、24、36、48h的条件下对样品进行冷冻干燥处理，对所得样品进行粉碎，选过80目筛的样品进行多酚提取操作，以多酚得率为指标确定最适宜干燥时间。
2.油橄榄果渣的真空干燥2.1 原料、仪器及试剂原料：油橄榄脱油果渣，用前在-20℃冰箱封存。
仪器：BS210S 型电子分析天平，真空干燥机。
2.2 实验步骤2.2.1 干燥温度对油橄榄果渣得率的影响将原料果渣放入真空干燥机，分别在温度为30、40、50、60℃条件下对样品进行真空干燥处理12h，然后对所得样品进行粉碎，选过80目筛的样品进行多酚提取操作，以多酚得率为指标确定最适宜真空干燥温度。
2.2.2 干燥时间对油橄榄果渣得率的影响将原料果渣放入真空干燥机，在温度为40℃，干燥时间分别为6、12、18、24h条件下对样品进行真空干燥处理，然后对所得样品进行粉碎，选过80目筛的样品进行多酚提取操作，以多酚得率为指标确定最适宜真空干燥时间。
3.油橄榄果渣干燥工艺的确定根据以上实验结果，选择最佳干燥方式和条件，作为油橄榄果渣干燥工艺。
（三）油橄榄果渣的粉碎1.原料、仪器及试剂原料：用上述干燥后油橄榄果渣，用前在-20℃冰箱封存。
仪器：BS210S 型电子分析天平，超微粉碎仪，分样筛（60、80、100、120目）。
2．实验步骤将原料果渣放入超微粉碎仪中粉碎一定时间后取出，分别用60、80、100、120目的分样筛对样品进行筛分，制得不同粒度的果渣样品，对这些果渣样品进行多酚提取操作（乙醇60%，料液比1：30，55℃，2h），以多酚得率为指标确定最适宜的样品粒度。
二、油橄榄多酚的提取（一）溶剂法提取油橄榄多酚1.实验材料、仪器及试剂材料：经上述预处理的油橄榄果渣，用前在-20℃冰箱封存。
仪器：UV—754紫外可见分光光度计(上海分析仪器总厂)，ZFQ—85A旋转蒸发器(上海医械专机厂)，电子天平，高速离心机，100ml容量瓶（磨口）及配套的冷凝管，橡胶管，温度计、水浴锅、移液管（5ml、10ml、25ml）、洗耳球、容量瓶（100ml）、酒精比重计。
试剂：乙醇（分析纯）、丙酮（分析纯）、蒸馏水。
2.乙醇浸提法提取油橄榄多酚2.1 试验方法2.1.1 单因素实验(1)浸提温度比较试验精确称取1.0 g干燥橄榄粉末4份，分别加入70％乙醇30 mL，分别在30、50、70、90℃（20、35、50、65℃）下浸提2 h，提取2次，离心，收集上清液，定容到100mL。
(2)乙醇浓度比较试验精确称取1.0 g干燥橄榄粉末4份，分别加入30％、50％、70％、90％乙醇30 mL，50℃下浸提2 h，提取2次，离心，收集上清液，定容到100mL。
(3)料液比比较试验精确称取1.0 g干燥橄榄粉末4份，分别加入50％乙醇10、20、30、40 mL，50℃下浸提2h，提取2次，离心，收集上清液，定容到100mL。
(4)浸提时间比较试验精确称取1.0 g干燥橄榄粉末4份，加入50％乙醇30 mL，50℃下分别浸提1、2、3、4h，提取2次，离心，收集上清液，定容到100mL。
(5)提取次数比较试验精确称取1.0 g干燥橄榄粉末4份，加入50％乙醇30 mL，50℃下浸提2 h，分别提取1次、2次、3次、4次，离心，收集上清液，定容到100mL。
以上各处理均重复3次。
2.1.2 优化实验根据单因素试验与分析结果，选择有现实作业意义的因素水平构建正交试验表进行主因素优化试验，并进行统计分析，得出最佳实验组合。
3.丙酮提取油橄榄多酚3.1 试验方法3.1.1 单因素实验(1)浸提温度比较试验精确称取1.0g干燥橄榄粉末4份，分别加入70％丙酮30 mL，分别在20、3O、50、70℃（20、35、50、65℃）下浸提2 h，提取2次，离心，收集上清液，定容到100mL。
(2)丙酮浓度比较试验精确称取1.0g干燥橄榄粉末4份，分别加入50％、60％、70％、80％丙酮30 mL，50℃下浸提2 h，提取2次，离心，收集上清液，定容到100mL。
(3)料液比比较试验精确称取1.0g干燥橄榄粉末4份，分别加入50％丙酮10、20、30、40 mL，50℃下浸提2h，提取2次，离心，收集上清液，定容到100mL。
(4)浸提时间比较试验精确称取1.0g干燥橄榄粉末4份，加入50％丙酮30 mL，50 ℃下分别浸提1、2、3、4h，提取2次，离心，收集上清液，定容到100mL。
(5)提取次数比较试验精确称取1.0g 干燥橄榄粉末4份，加入50％丙酮30 mL，50℃下浸提2 h，分别提取1次、2次、3次、4次，离心，收集上清液，定容到100m L。
以上各处理均重复3次。
3.1.2 优化实验根据单因素试验与分析结果，选择有现实作业意义的因素水平构建正交试验表进行主因素优化试验，并进行统计分析，得出最佳实验组合。
4.最终提取方案确定根据以上实验结果，选择最佳提取溶剂和提取工艺，作为超声波和微波处理法提取油橄榄果渣多酚的辅助提取方法。
（二）超声波法提取油橄榄多酚1．实验材料、仪器与试剂材料：经上述预处理的油橄榄果渣，用前在-20℃冰箱封存。
仪器：UV—754紫外可见分光光度计(上海分析仪器总厂)，JY88—Ⅱ超声波细胞粉碎机(上海新芝生物技术研究所)。
试剂：蒸馏水、乙醇或丙酮（分析纯）2. 单因素试验2.1 超声波功率对油橄榄果渣多酚提取效果的影响称取1.0g经上述果渣预处理后的油橄榄果渣粉，按上述溶剂提取法中最佳溶剂和提取方法加入最佳溶剂，分别在功率为60、70、80、90W，提取时间25min的条件下进行油橄榄果渣的提取，根据多酚得率选出最佳的超声波提取功率。
2.2 超声波时间对油橄榄果渣多酚提取效果的影响称取1.0g经上述果渣预处理后的油橄榄果渣粉，按上述溶剂提取法中最佳溶剂和提取方法加入最佳溶剂，在功率为80W，提取时间分别为15、25、35、45min 的条件下进行油橄榄果渣的提取，根据多酚得率选出最佳的超声波提取时间。
（三）微波处理法提取橄榄多酚1．实验材料、仪器与试剂材料：经上述预处理的油橄榄果渣，用前在-20℃冰箱封存。
仪器：UV—754紫外可见分光光度计(上海分析仪器总厂)，Galanz中型机械微波炉(顺德格兰仕电器有限公司)。
试剂：蒸馏水、乙醇或丙酮（分析纯）2. 单因素试验2.1 微波功率对油橄榄果渣多酚提取效果的影响称取1.0g经上述果渣预处理后的油橄榄果渣粉，按上述溶剂提取法中最佳溶剂和提取方法加入最佳溶剂，分别在功率为260、270、280、290W（改为200、400、600、800W），提取时间5s的条件下进行油橄榄果渣的提取，根据多酚得率选出最佳的微波提取功率。
2.2 微波时间对油橄榄果渣多酚提取效果的影响（橄榄中黄酮微波提取工艺研究）称取1.0g经上述果渣预处理后的油橄榄果渣粉，按上述溶剂提取法中最佳溶剂和提取方法加入最佳溶剂，在功率为280W，提取时间分别为4、5、6、7s（改为1、5、10、15min）的条件下进行油橄榄果渣的提取，根据多酚得率选出最佳的微波提取时间。
（四）油橄榄果渣多酚提取最优工艺的确定根据以上实验结果，以油橄榄果渣多酚得率为指标，确定油橄榄多酚提取的最佳方法以及工艺条件。
三、油橄榄多酚的分离纯化（油橄榄叶中多酚和黄酮的含量分析）（一）大孔树脂法1．树脂的筛选通过测定以下型号树脂LX-1、XAD-7、XAD-16、AB-8、HPD-200、LS-100的吸附和解析能力确定树脂。
2．树脂的动态试验（橡实壳多酚分离纯化、抗氧化剂抑菌的研究（中南林业科技大学郑菲硕士论文））2.1 吸附动态试验（1）pH值对吸附的影响（3、4、5、6、7、8）（2）上样量对吸附的影响（1、2、3、4、5BV/h）（3）动态吸附曲线的绘制2.2 解析动态试验（1）乙醇浓度对洗脱效果的影响（30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%）（2）洗脱剂的体积对洗脱效果的影响（1、2、3、4、5BV/h）（3）动态解吸曲线的绘制取干燥好的油橄榄果渣30g，采用最佳提取工艺进行提取，将提取液在30℃下旋转蒸发除去溶剂，回收溶剂，浓缩后样品加水稀释至100 mL，用石油醚等体积萃取3次，石油醚层浓缩，回收石油醚，水层上大孔树脂柱( 2．0 am×50 cm)进行柱层析。
柱层析方法如下：取处理好的250 mL D101大孔树脂，装入层析柱内。
样品溶液慢慢滴人层析柱，漏出液的速度为4 mL/min。
用2～3倍柱体积的水淋洗树脂至流出液呈无色，以洗去其中的多糖等水溶性杂质，再用70％的乙醇溶液600 mL缓缓通过树脂柱，控制其流速，收集洗脱液。
30℃下旋转蒸发除去乙醇，水相冷冻干燥，得油橄榄叶提取物精制产品，于-20℃下保存备用，测定多酚的含量。