油橄榄果渣多酚提取实验方案

油橄榄果渣多酚提取实验方案

一、油橄榄果渣预处理

（一）油橄榄果渣的脱油

1．有机溶剂浸提法（油橄榄果渣油的提取工艺及其脂肪酸组成研究）

1.1原料、仪器及试剂

原料：油橄榄鲜果渣，用前在-20℃冰箱封存。

仪器：BS210S 型电子分析天平，DHZ -C 型大容量恒温振荡器，N -1001 型旋转蒸发仪。

试剂：正己烷为分析纯试剂; 实验用水为去离子水。

1.2实验步骤

准确称取10 g 粉碎后的油橄榄果渣，置于250mL具塞三角瓶中，按1:9的料液比加入溶剂; 将三角瓶置于55℃（50℃）的恒温振荡器中振荡提取，转速200 r /min（150 r /min），时间为3h; 用过滤法分离溶剂混合物与残渣，用一定量

（5+5mL）溶剂洗涤残渣2 次，收集脱油油橄榄果渣，干燥至恒重（真空干燥：40℃，12h），计算脱油率。

2.酶法（酶法辅助提取工艺对橄榄油品质的影响）

2.1原料、仪器及试剂

原料：油橄榄鲜果渣，用前在-20℃冰箱封存。

仪器：BS210S 型电子分析天平，DHZ -C 型大容量恒温振荡器，N -1001 型旋转蒸发仪、磁力搅拌器（可加热）、高速离心机。

试剂：纤维素酶; 实验用水为去离子水。

2.2实验步骤

准确称取10 g 粉碎后的油橄榄果渣，置于250 ml具塞三角瓶中，加入

1.0%( W/W) 的纤维素酶水溶液10 ml，置于50℃的恒温振荡器中振荡提取，转速150 r /min，时间为45min，4 000 r /min 离心20 min，去上层油脂，收集下层脱油的果渣，干燥至恒重（真空干燥：40℃，12h），计算脱油率。

（二）油橄榄果渣的干燥

1.油橄榄果渣的冷冻干燥

1.1 原料、仪器及试剂

原料：用上述油橄榄脱油果渣，用前在-20℃冰箱封存。

仪器：BS210S 型电子分析天平，冷冻干燥机。

1.2 实验步骤

将原料果渣放入冷冻干燥机，冷冻干燥预冷冻时间为24h，在干燥时间分别为12、24、36、48h的条件下对样品进行冷冻干燥处理，对所得样品进行粉碎，选过80目筛的样品进行多酚提取操作，以多酚得率为指标确定最适宜干燥时间。

2.油橄榄果渣的真空干燥

2.1 原料、仪器及试剂

原料：油橄榄脱油果渣，用前在-20℃冰箱封存。

仪器：BS210S 型电子分析天平，真空干燥机。

2.2 实验步骤

2.2.1 干燥温度对油橄榄果渣得率的影响

将原料果渣放入真空干燥机，分别在温度为30、40、50、60℃条件下对样品进行真空干燥处理12h，然后对所得样品进行粉碎，选过80目筛的样品进行多酚提取操作，以多酚得率为指标确定最适宜真空干燥温度。

2.2.2 干燥时间对油橄榄果渣得率的影响

将原料果渣放入真空干燥机，在温度为40℃，干燥时间分别为6、12、18、24h条件下对样品进行真空干燥处理，然后对所得样品进行粉碎，选过80目筛的样品进行多酚提取操作，以多酚得率为指标确定最适宜真空干燥时间。

3.油橄榄果渣干燥工艺的确定

根据以上实验结果，选择最佳干燥方式和条件，作为油橄榄果渣干燥工艺。

（三）油橄榄果渣的粉碎

1.原料、仪器及试剂

原料：用上述干燥后油橄榄果渣，用前在-20℃冰箱封存。

仪器：BS210S 型电子分析天平，超微粉碎仪，分样筛（60、80、100、120目）。

2．实验步骤

将原料果渣放入超微粉碎仪中粉碎一定时间后取出，分别用60、80、100、120目的分样筛对样品进行筛分，制得不同粒度的果渣样品，对这些果渣样品进行多酚提取操作（乙醇60%，料液比1：30，55℃，2h），以多酚得率为指标确定最适宜的样品粒度。

二、油橄榄多酚的提取

（一）溶剂法提取油橄榄多酚

1.实验材料、仪器及试剂

材料：经上述预处理的油橄榄果渣，用前在-20℃冰箱封存。

仪器：UV—754紫外可见分光光度计(上海分析仪器总厂)，ZFQ—85A旋转蒸发器(上海医械专机厂)，电子天平，高速离心机，100ml容量瓶（磨口）及配套的冷凝管，橡胶管，温度计、水浴锅、移液管（5ml、10ml、25ml）、洗耳球、容量瓶（100ml）、酒精比重计。

试剂：乙醇（分析纯）、丙酮（分析纯）、蒸馏水。

2.乙醇浸提法提取油橄榄多酚

2.1 试验方法

2.1.1 单因素实验

(1)浸提温度比较试验

精确称取1.0 g干燥橄榄粉末4份，分别加入70％乙醇30 mL，分别在30、50、70、90℃（20、35、50、65℃）下浸提2 h，提取2次，离心，收集上清液，定容到100mL。

(2)乙醇浓度比较试验

精确称取1.0 g干燥橄榄粉末4份，分别加入30％、50％、70％、90％乙醇30 mL，50℃下浸提2 h，提取2次，离心，收集上清液，定容到100mL。

(3)料液比比较试验

精确称取1.0 g干燥橄榄粉末4份，分别加入50％乙醇10、20、30、40 mL，50℃下浸提2h，提取2次，离心，收集上清液，定容到100mL。

(4)浸提时间比较试验

精确称取1.0 g干燥橄榄粉末4份，加入50％乙醇30 mL，50℃下分别浸提1、2、3、4h，提取2次，离心，收集上清液，定容到100mL。

(5)提取次数比较试验

精确称取1.0 g干燥橄榄粉末4份，加入50％乙醇30 mL，50℃下浸提2 h，分别提取1次、2次、3次、4次，离心，收集上清液，定容到100mL。

以上各处理均重复3次。

2.1.2 优化实验

根据单因素试验与分析结果，选择有现实作业意义的因素水平构建正交试验表进行主因素优化试验，并进行统计分析，得出最佳实验组合。

3.丙酮提取油橄榄多酚

3.1 试验方法

3.1.1 单因素实验

(1)浸提温度比较试验

精确称取1.0g干燥橄榄粉末4份，分别加入70％丙酮30 mL，分别在20、3O、50、70℃（20、35、50、65℃）下浸提2 h，提取2次，离心，收集上清液，定容到100mL。

(2)丙酮浓度比较试验

精确称取1.0g干燥橄榄粉末4份，分别加入50％、60％、70％、80％丙酮30 mL，50℃下浸提2 h，提取2次，离心，收集上清液，定容到100mL。

(3)料液比比较试验

精确称取1.0g干燥橄榄粉末4份，分别加入50％丙酮10、20、30、40 mL，50℃下浸提2h，提取2次，离心，收集上清液，定容到100mL。

(4)浸提时间比较试验

精确称取1.0g干燥橄榄粉末4份，加入50％丙酮30 mL，50 ℃下分别浸提1、2、3、4h，提取2次，离心，收集上清液，定容到100mL。

(5)提取次数比较试验