常用细胞系所用培养液参考
各种培养液的配方
各种培养液的配方培养液是一种专门设计用于细胞培养的营养基质，它提供了细胞所需的营养物质和生长因子，以支持细胞的生长和增殖。
不同类型的细胞和细胞培养的特定目的可能需要不同的培养液配方。
以下是几种常见的细胞培养液配方：1. DMEM（Dulbecco's Modified Eagle Medium）：配方：- Glucose: 4.5g/L- L-Glutamine: 4mM- Sodium Bicarbonate: 3.7g/L- Sodium Pyruvate: 110mg/L- Phenol Red: 0.1%备注：DMEM是一种基础培养液，广泛用于多种哺乳动物细胞的培养，提供了细胞所需的基本营养物质，如糖、氨基酸和盐类。
2. RPMI 1640（Roswell Park Memorial Institute Medium）：配方：- Glucose: 2g/L- L-Glutamine: 2mM- Sodium Bicarbonate: 2g/L-HEPES:10mM- Phenol Red: 0.1%备注：RPMI 1640是一种适用于多种动物和人类细胞培养的基础培养液，具有类似DMEM的配方，但Glucose和L-Glutamine的浓度较低，适合一些特定的细胞类型。
3. MEM（Minimum Essential Medium）：配方：- Glucose: 1g/L- L-Glutamine: 2mM- Sodium Bicarbonate: 2.2g/L-HEPES:15mM- Phenol Red: 0.1%备注：MEM也是一种通用基础培养液，适用于多种细胞类型的培养，其配方与DMEM相似，但含有更低浓度的糖。
4. F-12（Ham's F-12 Nutrient Mixture）：配方：- Glucose: 3.15g/L- L-Glutamine: 2mM- Sodium Bicarbonate: 1.17g/L- Phenol Red: 0.03%备注：F-12是一种含有丰富营养物质的培养液，特别适用于培养多种优质的细胞系。
常见细胞系使用的培养基
常见细胞系使用的培养基细胞系培养基是在细胞体外培养时提供营养、调节生理功能和维持细胞生长所必需的基础培养液。
常见的细胞系培养基包括以下几种：1.基本培养基：(a) Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM)：DMEM是最常用的细胞培养基之一，可以满足大多数哺乳动物细胞的生长需求。
它包含丰富的氨基酸、维生素和硒等营养物质，pH 为7.4，细胞因子和血清可以根据需要添加。
(b)RPMI1640：RPMI1640是一种适用于淋巴细胞等肿瘤和免疫细胞的培养基。
它还包含可溶性蛋白、胎牛血清、植物血清和病毒适配因子等。
(c) Eagle's Minimum Essential Medium (EMEM)：EMEM是一种全面的培养基，适用于广泛的细胞系，并可添加血清、血清替代物或血清补充物来满足特定细胞系的需求。
(d) Iscove's Modified Dulbecco's Medium (IMDM)：IMDM是用于骨髓细胞和其他白细胞的培养基，也适用于一些其他特定的细胞系。
2.补充因子：(a)L-谷氨酸：可以通过促进蛋白质合成以及为细胞提供能量，促进细胞生长。
(b)胱氨酸：可以作为抗氧化剂，保护细胞免受氧化损伤。
3.血清和血清替代品：(a)胎牛血清(FBS)：FBS是最常用的培养基补充物之一，因为它含有多种生长因子、蛋白质和营养物质，可以促进细胞生长和增殖。
(b)马血清：适合一些特定的细胞系，可以替代FBS。
(c)血清替代品：血清替代品通常是人类血浆衍生物，不含动物血清，可以减少细胞系受到的外源性感染风险。
4.碳源和氮源：(a)葡萄糖：葡萄糖是最常用的碳源，可以提供细胞的能量需求。
(b)氨基酸：提供细胞各种生物合成的原料。
(c)谷氨酸/谷氨酰胺：作为氨基酸的前体，是合成蛋白质和核酸的重要物质。
5.生长因子和维生素：(a)血液集落刺激因子(CSFs)：CSFs可以促进造血系统细胞系的增殖和分化。
常用培养基配方范文
常用培养基配方范文培养基（Culture medium）是一种用于细菌、真菌、植物细胞、动物细胞和其他微生物的繁殖和生长的营养物质。
常用的培养基可分为发酵培养基、微生物培养基和细胞培养基。
下面列举了一些常用的培养基配方。
1. LB培养基（Luria-Bertani medium）成分：-牛肉提取物：10克-酵母提取物：5克-热可溶性淀粉：10克-氯化钠：10克-水：1升2. NB培养基（Nutrient broth）成分：-牛肉提取物或肉蔻精：8克-酵母提取物：4克-葡萄糖：4克-水：1升3. MacConkey培养基成分：-水解动物蛋白：17克-中和胆盐：1.5克-中性红：0.03克-水：1升4. TSB培养基（Tryptic soy broth）成分：-大豆胨：17克-酵母提取物：3克-水：1升5. BHIA培养基（Brain Heart Infusion Agar）成分：-脑心汤固体：37克-水：1升6.R2A培养基成分：-水解酵母提取物：0.5克-蛋白胨：0.5克-葡萄糖：0.5克-脱脂乳粉：0.5克-黄豆粉：0.5克-高氯酸钠：0.3克-多聚体1466：0.05克-水：1000毫升7.比尔斯氏培养基（BHI培养基）成分：-大豆胨：37克-脑心汤固体：2克-水：1升8. 培养基199（Medium 199）成分：-高锰酸钾：0.015克-硫酸：1.55克-磷酸一氢钠：0.184克-高氯酸钠：8.0克-溴酚蓝：0.4克-d-葡萄糖：5.55克-l-谷氨酸：40.525克-苏打粉：0.84克-水：1升9. DMEM培养基（Dulbecco's Modified Eagle's Medium）成分：-苔藓胶原酸：1克-乳糖：1克- 谷氨酸：584mg- 水：1000ml这只是一小部分常见的培养基配方，实际上有很多种不同的培养基，它们根据不同的生物特性和培养需求来设计。
不同的培养基可以提供细菌、真菌、细胞等微生物生长需要的各种营养物质。
常用培养基及基本特性
常用培养基及基本特性1、RPMI-1640MediumRPMI-1640广泛应用于哺乳动物、特殊造血细胞、正常或恶性增生的白细胞，杂交瘤细胞的培养，是目前应用十分广泛的培养基。
主要用于悬浮细胞培养。
其它像K-562、HL-60、Jurkat、Daudi、IM-9等成淋巴细胞、T细胞淋巴瘤细胞以及HCT-15上皮细胞等均可参考使用2、Minimum Essential Medium（MEM）也称最低必需培养基，它仅含有12种必需氨基酸、谷氨酰胺和8种维生素。
成分简单，可广泛适应各种已建成细胞系和不同地方的哺乳动物细胞类型的培养。
MEM-Alpha一般用于培养一些难培养细胞类型，而其它没有特殊之处的细胞株则几乎均可采用MEM来培养。
3、DMEM-高糖（标准型）是一种应用十分广泛的培养基，可用于许多哺乳动物细胞培养,更适合高密度悬浮细胞培养。
适用于附着性较差，但又不希望它脱离原来生长点的克隆培养，也可用于杂交瘤中骨髓瘤细胞和DNA转染的转化细胞的培养。
4、DMEM-低糖（标准型）是一种应用十分广泛的培养基，可用于许多哺乳动物细胞培养。
低糖适于依赖性贴壁细胞培养，特别适用于生长速度快、附着性较差的肿瘤细胞培养。
5、DMEM/F12DMEM/F12培养基适于克隆密度的培养。
F12培养基成分复杂，含有多种微量元素，和DMEM 以1：1结合，称为DMEM/F12培养基（DME/F12medium），作为开发无血清配方的基础，以利用F12含有较丰富的成分和DMEM含有较高浓度的营养成分为优点。
该培养基适用于血清含量较低条件下哺乳动物细胞培养。
为了增强该培养基的缓冲能力，改良之一是在DMEM/F12（1：1）中加入15mMHEPES缓冲液。
16、McCoy’s5A9McCoy’s5A Medium主要为肉瘤细胞的培养所设计，可支持多种（如骨髓、皮肤、肺和脾脏等）的原代移植物的生长，除适于一般的原代细胞培养外，主要用于作组织活检培养、一些淋巴细胞培养以及一些难培养细胞的生长支持。
cho细胞培养参数
cho细胞培养参数
CHO细胞（Chinese Hamster Ovary Cell）是一种常用的哺乳动物细胞系，常用于重组蛋白的生产。
细胞培养参数主要包括以下几个方面：
1. 培养基：常用的CHO细胞培养基有DMEM/F12、RPMI 1640等，其中含有必需的氨基酸、维生素、葡萄糖以及其他生长因子和辅助物质。
2. 温度：CHO细胞的最适生长温度一般为37°C。
3. CO2浓度：为了维持细胞培养环境的酸碱平衡，一般在细胞培养箱中提供5% CO2气氛。
4. pH值：细胞培养液的pH值通常在7.2-7.4之间。
5. 细胞密度：细胞密度的种植密度根据所需的细胞产量，一般可根据细胞生长曲线和培养容器的尺寸来确定。
6. 培养时间：CHO细胞的培养时间一般为2-7天，具体根据细胞类型和实验目的而定。
7. 摇床速度：细胞培养时的摇床速度一般为80-120rpm，旋转摇床的旋转半径也会影响细胞的生长。
8. 营养物质浓度：选择适当的营养物质浓度，如葡萄糖、氨基酸、维生素等，对细胞的生长和产量有重要影响。
9. 培养容器：常用的培养容器有细胞培养板、细胞培养瓶、细胞培养滚筒等，选择合适的培养容器也会影响细胞的生长和产量。
以上为一般常用的CHO细胞培养参数，实际情况可能根据实
验目的和细胞特性的不同而有所调整。
在进行细胞培养实验时，需根据实际情况进行优化调整。
细胞培养相关常用液体配制标准SOP操作规程样本
细胞培养相关常用液体配制标准SOP操作规程样本（一）胰酶的配制：（浓度为1‰，1L）1、认真清洗配制容器，自来水20遍，去离子水5遍，超纯水润洗3遍。
2、称取牛胰蛋白酶1.0g；EDTA 2 g；3、用超纯水溶解；4、磁力搅拌器搅拌至胰酶完全溶解，溶液变得澄清；5、超纯水定容至1L；6、不锈钢滤器加0.22um滤纸两张高温灭菌后，在超净工作台过滤；7、在血清瓶中加入少量滤好的胰酶，置于细胞培养箱中检测是否染菌，其余置于4℃待用；8、过滤后洗净滤器再次灭菌，避免残留的胰酶降解蛋白。
（二）DMEM配制：1、所需试剂及材料：试剂：DMEM干粉（GIBCO 10L）、超纯水（Milli-Q）、Na2CO3 （Sigma）材料：10L玻璃瓶、500ml盐水瓶（灭菌）、0.22um滤膜、滤器（事先放好两层滤膜并高压灭菌）、磁力搅拌器大号搅拌子蠕动泵胶塞2、操作步骤：(1)10L玻璃瓶洗涤，自来水20遍，去离子水5遍，超纯水润洗3遍。
(2)在10L玻璃瓶中加入超纯水9.5L，将DMEM干粉倒入，在磁力搅拌器上搅拌溶解。
(3)按照3.7g/L 加入Na2CO3 。
(4)调节pH值至7.2~7.4。
(5)过滤分装，并注明名称及配制日期。
此过程注意无菌操作！(6)最后用血清瓶取10ml左右置于细胞培养箱中检测是否染菌。
(7)清洗滤器，10L玻璃瓶，软管，将所有实验器具归位。
（三）1640、MEM培养基的配制同上，Na2CO3的用量见包装说明（四）细胞间100×双抗（青霉素、链霉素）的配制青霉素及链霉素配制的终浓度为1万单位/毫升。
配制的步骤以400ml为例：1.认真清洗配制容器，自来水20遍，去离子水5遍，超纯水润洗3遍。
2.准备5瓶青霉素（80万单位/瓶）、4瓶链霉素（100万单位/瓶）。
3.加入1-2ml细胞间专用PBS进入青霉素、链霉素的瓶子内，浸泡后吹吸数次至全部溶解，溶解后的液体吸入配制容器内。
常用细胞培养基配方及缓冲液
常用细胞培养基配方及缓冲液细胞培养基是为了在体外维持细胞生长和增殖所设计的一种营养液。
细胞培养基的配方要求提供细胞所需的基本营养物质，如氨基酸、糖类、维生素和激素，并提供适当的pH和离子平衡。
同时，缓冲液也是细胞培养过程中不可或缺的一部分，用于稳定细胞培养基的pH，维持细胞正常的生长环境。
下面列举几种常用的细胞培养基配方及缓冲液：1. DMEM (Dulbecco's Modified Eagle Medium)-细胞培养基配方：-DMEM培养基粉末-对应体积的无菌水-10%火马骅胎血清(FBS)-1%青霉素/链霉素(P/S)-缓冲液：无2. RPMI 1640 Medium (Roswell Park Memorial Institute Medium) -细胞培养基配方：-RPMI1640培养基粉末-对应体积的无菌水-10%火马骅胎血清(FBS)-1%青霉素/链霉素(P/S)-缓冲液：HEPES(4-(2-羟乙基)-1-哌嗪乙烷磺酸)溶液，浓度为25mM，用于稳定pH。
3. MEM (Minimum Essential Medium)-细胞培养基配方：-MEM培养基粉末-对应体积的无菌水-10%火马骅胎血清(FBS)-1%青霉素/链霉素(P/S)- 缓冲液：盐酸/NaOH缓冲体系，通常用NaHCO3/N-2-羟乙基piperazine-N'-2-乙磺酸(HEPES)缓冲。
4. Hank's Balanced Salt Solution (HBSS)-细胞培养基配方：-HBSS培养基粉末-对应体积的无菌水-缓冲液：无5. L-15 Medium (Leibovitz's L-15 Medium)-细胞培养基配方：-L-15培养基粉末-对应体积的无菌水-10%火马骅胎血清(FBS)-缓冲液：HEPES溶液，浓度为25mM。
6. DMEM/F12 Medium (Dulbecco's Modified Eagle Medium and Ham's F-12 Medium)-细胞培养基配方：-DMEM/F12培养基粉末-对应体积的无菌水-10%火马骅胎血清(FBS)-1%青霉素/链霉素(P/S)-缓冲液：HEPES溶液，浓度为25mM。
微生物实验室常见20种培养基配方大全
微生物实验室常见20种培养基配方大全1.肉汤培养基成分：牛肉膏或牛肉汤500克，葡萄糖10克，胰蛋白胨10克，NaCl5克，蒸馏水1000毫升。
用途：适用于各种需有机氮源的细菌的培养。
2.十倍腌盐水成分：NaCl300克，蒸馏水1000毫升。
用途：适用于耐盐真菌和嗜盐细菌的培养。
3.果胶培养基成分：果胶5克，葡萄糖5克，NaNO32克，K2HPO40.2克，MgSO4·7H2O0.1克，CaCO30.02克，FeSO4·7H2O0.01克，蒸馏水1000毫升。
用途：适用于果胶酶产生菌的培养。
4.大肠杆菌选择性培养基成分：土豆提取物4克，蛋白胨2克，乳糖10克，NaCl10克，胆盐0.75克，碱性蓝2克，琼脂15克，蒸馏水1000毫升。
用途：适用于分离大肠杆菌的选择性培养。
5.卡波培养基成分：石蜡300克，肉浸膏100克，大豆酪蛋白胨20克，NaCl5克，琼脂15克，蒸馏水1000毫升。
用途：适用于致病真菌的培养。
6. Nutrient Broth培养基成分：肉膏1克，酵母提取物2克，葡萄糖2克，NaCl5克，琼脂15克，蒸馏水1000毫升。
用途：适用于细菌和真菌的常规培养。
7. Luria-Bertani（LB）培养基成分：酵母提取物5克，酪蛋白胨10克，NaCl10克，琼脂15克，蒸馏水1000毫升。
用途：适用于E. coli等细菌的培养。
8. Sabouraud葡萄糖琼脂培养基成分：葡萄糖40克，醇20克，琼脂15克，蒸馏水1000毫升。
用途：适用于真菌的培养。
9. MacConkey琼脂培养基成分：鱼精膏20克，胆盐胆红素15克，玛琪琼脂25克，NaCl5克，蒸馏水1000毫升。
用途：适用于肠道杆菌的培养、分离。
10.马加提琼脂培养基成分：马加提琼脂50克，蒸馏水1000毫升。
用途：适用于细菌、酵母和霉菌的常规培养。
11.酵母醇葡萄糖琼脂培养基成分：葡萄糖20克，醇30克，琼脂20克，蒸馏水1000毫升。
4.2细胞培养常用液体
缺点：来源受限。
成分复杂，影响对某些实验产物的提取和实验 结果的分析。易发生支原体污染
合成培养基
合成培养基是根据细胞生存所需物质的种类和数量，用 人工方法模拟合成的。目前已设计出许多种培养基， 如TC199、MEM、RPMI-1640、 DMEM等。
合成培养基主要成分是氨基酸、维生素、碳水化合物、 无机盐和其它一些辅助物质。
优点：标准化生产，组分和含量相对固定。 成本低
缺点： 缺少某些成分，不能完全满足体外细胞生长需要。 Note：人工合成培养基只能维持细胞生存，要想使细胞
生长和繁殖，还需补充一定量的天然培养基（如血 清）。
培养基的基本要求
• 营养成分:氨基酸、单糖、维生素、无机离 子与微量元素
• 促生长因子及激素：胰岛素 、泌乳素 • 渗透压 • pH • 无毒、无污染
宜的PH; • 酚红作指示剂：PH7.4呈红色； PH7.0呈橘红色；
PH6.5呈柠檬黄；PH低于6.5呈黄色；PH高于7.8呈紫红 色； • 大多情况下细胞培养液PH值可凭肉眼判断或PH试纸， 只有在染色如荧光染色时，需要用PH计来测定。
无毒、无污染
• 体外生长的细胞对微生物及一些有害有毒物质无任何 抵抗力，因此培养基应达到无化学物质污染、无微生 物污染（如细菌、真菌、支原体、病毒等）、无其他 对细胞产生损伤作用的生物活性物质污染（如抗体、 补体等）。
Na2HPO4H2O NaH2PO42H2O KH2PO4 NaHCO3 葡萄糖
PBS 8.00 0.20 1.56 0.20 -
Hank’s D-Hank’s
8.00 8.00
0.40 0.40
0.14 -
-
-
细胞培养中常用到哪些培养基
细胞培养中常用到哪些培养基1、RPMI-1640 MediumRPMI-1640广泛应用于哺乳动物、特别造血细胞、正常或恶性增生的白细胞，杂交瘤细胞的培育，是目前应用非常广泛的培育基。
主要用于悬浮细胞培育。
其它像K-562、HL-60、Jurkat、Daudi、IM-9等成淋巴细胞、T细胞淋巴瘤细胞以及HCT-15上皮细胞等均可参考使用。
2、Minimum Essential Medium（MEM）也称低必需培育基，它仅含有12种必需氨基酸、谷氨酰胺和8种维生素。
成分简洁，可广泛适应各种已建成细胞系和不同地方的哺乳动物细胞类型的培育。
MEM-Alpha一般用于培育一些难培育细胞类型，而其它没有特别之处的细胞株则几乎均可采纳MEM来培育。
3、DMEM-高糖（标准型）是一种应用非常广泛的培育基，可用于很多哺乳动物细胞培育,更适合高密度悬浮细胞培育。
适用于附着性较差，但又不盼望它脱离原来生长点的克隆培育，也可用于杂交瘤中骨髓瘤细胞和DNA转染的转化细胞的培育。
4、DMEM-低糖（标准型）是一种应用非常广泛的培育基，可用于很多哺乳动物细胞培育。
低糖适于依靠性贴壁细胞培育，特殊适用于生长速度快、附着性较差的肿瘤细胞培育。
5、DMEM/F12DMEM/F12培育基适于克隆密度的培育。
F12培育基成分简单，含有多种微量元素，和DMEM以1：1结合，称为DMEM/F12培育基（DME/F12medium），作为开发无血清配方的基础，以利用F12含有较丰富的成分和DMEM含有较高浓度的养分成分为优点。
该培育基适用于血清含量较低条件下哺乳动物细胞培育。
为了增加该培育基的缓冲力量，改良之一是在DMEM/F12（1：1）中加入15mMHEPES缓冲液。
6、McCoy’sMcCoy’s Medium 主要为肉瘤细胞的培育所设计，可支持多种（如骨髓、皮肤、肺和脾脏等）的原代移植物的生长，除适于一般的原代细胞培育外，主要用于作组织活检培育、一些淋巴细胞培育以及一些难培育细胞的生长支持。
实验总结细胞培养方法
一、培养细胞常用配置培养基的配置：基础培养基500ml+胎牛血清50ml+双抗5ml冻存液的配置：10 % DMSO + 90%胎牛血清依次比例酌量配置。
超净工作台常规配置移液器1套（2.5μl、20μl、200μl、1ml），酒精灯1盏，液器1台，斜架1台，酒精喷壶1个，酒精棉球缸1个，污缸1个，常规耗材：培养瓶（50㎝2），定量移液管（5ml、10ml），枪头（1ml、200μl、10μl），培养皿，6/24/48/96孔板，医用脱脂棉球，冻存管所需试剂：培养基，胎牛血清，双抗，DMSO，胰酶，75%酒精……实验前准备：所需的各项高压后的耗材及污物缸放于超净工作台内，用酒精喷壶喷洒实验台面，并关闭工作台打开紫外灯照射30min后开始实验操作。
培养基及胰酶恢复常温后使用，可37℃水浴5-10min二、细胞复苏步骤：1. 紫外消毒30min后关闭紫外灯，开启超净台正常工作状态，用酒精消毒操作者的双手。
2. 培养液（DMEM），恒温水浴箱37℃预热20min，备用。
超净台内准备一支15ml离心管备用。
3.将所需的培养基确保瓶身干净后酒精消毒放于工作台面内，点燃酒精灯，再将瓶口对准在酒精灯上消毒2-3次，旋开瓶盖后需再次分别消毒瓶口和瓶盖。
4. 从液氮保存罐中取出冻存管，立即放入37℃水浴中，快速摇晃，直至冻存液融化至黄豆粒大小后迅速取出。
5. 将细胞悬液移入15ml离心管，缓慢加入4ml培养液，离心（1000r/min，5min）。
6. 取出2个培养皿并做好标记（复苏日期等），提前加入5-10ml培养液；离心结束后用1ml培养液悬液混悬沉淀细胞后分别加入培养皿内。
7. 将培养基瓶口和瓶盖消毒2-3次后拧紧，熄灭酒精灯，整理实验台面，取出实验试剂及污缸等，关闭超净工作台。
8. 将培养瓶放入培养箱内培养注意事项：1. 取细胞的过程中注意带好防冻手套。
此项尤为重要，细胞冻存管可能漏入液氮，解冻时冻存管中的气温急剧上升，可导致爆炸。
常用不同培养板的孔底面积及推荐加液量
常用不同培养板的孔底面积及推荐加液量不同孔板所加培养液的液面都不宜太深，一般在2~3mm范围，结合不同孔的底面积就可算出各培养孔的适宜加液量（参考下表）。
若加液量过多会影响气体（氧气）交换，而且在搬动过程中易溢出造成污染。
具体所加细胞密度依实验的目的不同灵活掌握。
常用的培养器皿培养器皿底面积（cm2）加培养液量（mL）可获细胞量96孔培养板0.320.110524孔培养板2 1.05×10512孔培养板 4.5 2.01066孔培养板9.6 2.5 2.5×1064孔培养板28 5.07×1063.5cm培养皿8 3.0 2.0×1066cm培养皿21 5.0 5.2×1069cm培养皿4910.012.2×10610cm培养皿5510.013.7×10625cm塑料培养瓶25 5.05×10675cm塑料培养瓶7515~302×10725cm玻璃培养瓶19 4.03×106100cm玻璃培养瓶37.510.06×106250cm玻璃培养瓶7815.02×1072500cm旋转培养瓶700100~250 2.5×108注：各种单层生长的细胞在培养皿中长满的细胞数，主要取决于器皿底表面积和细胞体积的大小。
上表以Hela细胞为例给出的可获细胞量仅作参考。
各种孔板细胞接种量细胞培养瓶（板）生长面积容量与细胞数（大约）96孔板4~5X10 4 35mm培养皿 1X10 648 孔板 1.3X10 5 60mm培养皿 2.6X10 624孔板 2.5X10 5 100mm培养皿 7X10 612孔板 5X 10 5 150mm培养皿 1.8X10 76孔板 1.2X10 6细胞瓶面积容量工作体积细胞数目12.5cm2 25ml 2ml 5X10 525cm2 50ml 5ml 1X10 635cm2 75ml 10ml 2X10 675 cm2 250ml 15ml 4X 10 6150cm2 700ml 40ml 1.1X107。
细胞培养常用培养基讲解学习
细胞培养常用培养基细胞培养常用培养基高博，苏州大学医学部药学院药理学系1、R PMI-1640 MediumRPMI-1640广泛应用于哺乳动物、特殊造血细胞、正常或恶性增生的白细胞，杂交瘤细胞的培养，是目前应用十分广泛的培养基。
主要用于悬浮细胞培养。
其它像K-562、HL-60、Jurkat、Daudi、IM-9等成淋巴细胞、T细胞淋巴瘤细胞以及HCT-15上皮细胞等均可参考使用。
2、M inimum Essential Medium （MEM）也称最低必需培养基，它仅含有12种必需氨基酸、谷氨酰胺和8种维生素。
成分简单，可广泛适应各种已建成细胞系和不同地方的哺乳动物细胞类型的培养。
MEM-Alpha —般用于培养一些难培养细胞类型，而其它没有特殊之处的细胞株则几乎均可采用MEM来培养。
3、D MEM-高糖（标准型）是一种应用十分广泛的培养基，可用于许多哺乳动物细胞培养，更适合高密度悬浮细胞培养。
适用于附着性较差，但又不希望它脱离原来生长点的克隆培养，也可用于杂交瘤中骨髓瘤细胞和DNA转染的转化细胞的培养。
4、D MEM-低糖（标准型）是一种应用十分广泛的培养基，可用于许多哺乳动物细胞培养。
低糖适于依赖性贴壁细胞培养，特别适用于生长速度快、附着性较差的肿瘤细胞培养。
5、D MEM/F12DMEM/F12培养基适于克隆密度的培养。
F12培养基成分复杂，含有多种微量元素，和DMEM 以1：1结合，称为DMEM/F12培养基(DME/F12 medium)，作为开发无血清配方的基础，以利用F12含有较丰富的成分和DMEM含有较高浓度的营养成分为优点。
该培养基适用于血清含量较低条件下哺乳动物细胞培养。
为了增强该培养基的缓冲能力，改良之一是在DMEM/F12 (1：1)中加入15 mM HEPES缓冲液。
6、M cCoy s 5AMcCoy s 5A Medium主要为肉瘤细胞的培养所设计，可支持多种(如骨髓、皮肤、肺和脾脏等)的原代移植物的生长，除适于一般的原代细胞培养外，主要用于作组织活检培养、一些淋巴细胞培养以及一些难培养细胞的生长支持。
常用25种培养基详细配方
常用25种培养基详细配方以下是常用的25种培养基的详细配方：1. LB培养基（Luria-Bertani medium）-天然培养基：10g蛋白胨，5g酵母粉，10gNaCl，添加适量蒸馏水，pH值调至7.0。
- 固体培养基：添加15g agar。
2. TSA培养基（Tryptic Soy Agar）-17g蛋白胨，3g酵母提取物，5gNaCl，添加适量蒸馏水，pH值调至7.3-7.5- 固体培养基：添加15g agar。
3. NB培养基（Nutrient Broth）-8g蛋白胨，2g胰蛋白胨，5gNaCl，添加适量蒸馏水，pH值调至7.4 - 固体培养基：不添加agar。
4. R2A培养基（Reasoner's 2A medium）- 0.5g peptone，0.5g casein hydrolysate，0.5g yeast extract，0.5g glucose，0.5g soluble starch，0.3g dipotassium phosphate，0.05g magnesium sulfate，0.3g sodium pyruvate，10μg m anganese sulfate，添加适量蒸馏水，pH值调至7.2-7.4- 固体培养基：添加15g agar。
5. BHIS培养基（Brain Heart Infusion with 20% Sucrose）- 37.5g BHIS培养基，10g sucrose，添加适量蒸馏水，pH值调至7.5- 固体培养基：添加15g agar。
6. PDA培养基（Potato Dextrose Agar）-200g马铃薯，20g葡萄糖，添加适量蒸馏水，pH值调至5.6- 固体培养基：添加20g agar。
7. MRS培养基（de Man Rogosa Sharpe medium）- 10g peptone，10g beef extract，4g yeast extract，20g glucose，5g sodium acetate，2g dipotassium phosphate，0.02g magnesium sulfate，添加适量蒸馏水，pH值调至6.2-6.6- 固体培养基：添加20g agar。
常用细胞系物种名称、类型、来源、核型及培养液
常用细胞系物种、名称、类型、来源、核型及培养液以下译自美国ATCC公司和个人经验，谨供参考。
物种名称类型来源核型培养液犬上皮样肾;矮脚长耳猎犬非整倍体78 MDCK MEM+NEAA 10%FBS(Coeker Spaniel)仓鼠成纤维细胞肾非整倍体44-45 BHK-21 MEM+NEAA 10%FBS上皮样卵巢非整倍体20 CHO-K1 Ham’s F12+10%FBS 人上皮样表皮细胞肿瘤非整倍体76，XX A431 DMEM+10%FBS上皮滋养层绒毛癌非整倍体84-86 F12K改良Ham’s+15%FBS BeWo上皮样结肠腺癌非整倍体96-101 Caco-3 MEM+NEAA 20%FBS淋巴样Burkitt’ｓ淋巴瘤非整倍体45-47,XY Daudi RPMI 1640+20%FBS 淋巴样Burkitt’ｓ淋巴瘤非整倍体46-47,XY EB-3 RPMI 1640+10%FBS上皮样宫颈癌非整倍体81-83,XY Hela MEM+NEAA 10%FBS上皮样肝细胞癌非整倍体55,XY Hep G2 MEM+NEAA 10%FBS淋巴样皮肤T-细胞淋巴癌 HUT 78 n.d. RPMI 1640+10%FBS成纤维细胞肺二倍体46,XY IMR-90 MEM+NEAA 10%FBS淋巴样 T-细胞白血病 Jurkat n.d. RPMI 1640+10%FBS淋巴样成淋巴细胞白血病非整倍体95,XY MOLT-4 RPMI 1640+10%FBS淋巴样Burkitt’ｓ淋巴瘤非整倍体46-47,XY Raji RPMI 1640+10% ~20%FBS 上皮样骨肉瘤非整倍体54-56,XY Saos-2 Mccoy’s 5a+15%FBS淋巴样至单核细胞型组织细胞淋巴瘤非整倍体58,XY U937 RPMI1640+10%FBS成纤维细胞胚胎肺，3月妊娠二倍体46,XY WI-38 MEM+10%FBS绒猴淋巴样 EBV感染血液白细胞 B95-8 n.d. RPMI 1640+10%FBS猴成纤维细胞 SV-40转染非洲绿猴肾 COS-7 n.d. DMEM+10%FBS成纤维细胞非洲绿猴肾非整倍体58-60 CV-1 MEM+10%FBS成纤维细胞非洲绿猴肾非整倍体57-59 199培养基+5%FBS Vero小鼠A9(APRTˉ，HPRTˉ) 结缔组织 L细胞衍生细胞系非整倍体49-52硫鸟嘌DMEM+10%FBS+6-呤(30μg/ml)2,6-二氨基嘌呤(30μg/ml)成纤维细胞及肌肉细胞肌肉成肌细胞 CC n.d. DMEN+10%FBS 212成纤维细胞胚胎非整倍体 CH/10T1/2/Clone 8 80MEM+10%FBS 3胚胎型多能胚胎干细胞二倍体 DMEM+100μmol/L二巯基 ES-D3丙醇+15%FBS胚胎型至内胚层型睾丸畸胎瘤 F9 n.d. DMEM+15%FBS结缔组织 NCTC衍生细胞系非整倍体56-64 IPP培养基+0.5%细菌培养 L-M 用蛋白胨 L-M(TKˉ) 结缔组织 L-M BrdU耐药细胞系非整倍体42-46DMEM+10%FBS+30μg/mlBrdU淋巴样浆细胞瘤非整倍体43-85 MOPC-31C Leibovitz L-15+20%FBS小 P19 视黄酸诱导神经元和腺体; 胚胎瘤整倍体40,XY ΑMEM+2.5%FBS+7.5%DMSO诱导心肌骨骼肌牛血清小鼠(cont'd)淋巴样淋巴样肿瘤非整倍体42-43 P388D DMEM+10%FBS成纤维细胞 SIM鼠胚胎 STO n.d. DMEM+10%FBS成纤维细胞衍生型成纤维细胞鼠胚胎二倍体40 3T3-Swiss albino DMEM+10%FBS成纤维细胞型非整倍体高度可变 3T3-L1 3T3-Swiss albino DMEM+10%FBS 至脂肪细胞样衍生细胞系性大鼠成纤维细胞胰腺癌AR42J n.d. Ham’s F12K+20%FBS成纤维细胞肝BRL 3A n.d. Coon’s F12+5%FBS上皮样垂体瘤非整倍体63-69 Ham’s F10+15%马血清 GH3+10%FBS上皮样肝癌 H4-II-E-C3 n.d. F12+10%FBS胰岛素0.1 IEC-6 n.d.上皮样正常小肠 DMEM+5%FBS+μ/mlNGF诱导神经元肾上腺嗜铬细胞 PC12 n.d. RPMI1640+10%FBSRat 2(TKˉ) 成纤维细胞Rat 1(TKˉ)衍生细胞 n.d. OEME+5%FBS+系 30μg/mlBrdU缩写词注释:MEM:极限必需培养液(Eagle)FBS:胎牛血清NEAA:非必需氨基酸DMEM:Dulbecco’s MEM改良培养液PRMI:Roswell Memorial研究所BrdU:5-溴脱氧尿苷TK:胸苷激酸APRT:腺苷磷酸核酸糖转移酶HPRT:次黄嘌呤磷酸核酸转移美DMSO:二甲基亚矾n.d.:表示无资料描述。
细胞培养常用试剂
器材与试剂干粉型培养基、胰蛋白酶，青霉素、链霉素. 纯净水系统、电子天平、PH计、磁力搅拌器等具体步骤1. 水：细胞培养用水必须非常纯净，不含有离子和其他的杂质。
需要用新鲜的双蒸水、三蒸水或纯净水.2. PBS (也可用于其它BSS，如：Hanks，D-Hanks液的配制)：主要用于免疫组化染色时组织或细胞的漂洗溶解定容：将药品（NaCl 8.0g，KCl 0.2g，Na2HPO4·H2O 1.56g，KH2PO4 0. 2g ）倒入盛有双蒸水的烧杯中，玻璃棒搅动，充分溶解，然后把溶液倒入容量瓶中准确定容至1000ml，摇匀即成新配制的PBS溶液。
用HCl或NaOH调PH到7.4。
移入溶液瓶内待消毒：将PBS倒入溶液瓶（大的吊针瓶）内，盖上胶帽，并插上针头放入高压锅内8磅消毒20分钟。
注意高压消毒后要用灭菌蒸馏水补充蒸发掉的水份。
3. 胰蛋白酶溶液：胰蛋白酶的作用是使细胞间的蛋白质水解从而使细胞离散。
不同的组织或者细胞对胰酶的作用反应不一样。
胰酶分散细胞的活性还与其浓度、温度和作用时间有关，在pH为8.0、温度为37℃时，胰酶溶液的作用能力最强。
使用胰酶时，应把握好浓度、温度和时间，以免消化过度造成细胞损伤。
因Ca2+、Mg2+和血清、蛋白质克降低胰酶的活性，所以配制胰酶溶液时应选用不含Ca2+、Mg2+的BSS，如：D-Hanks液。
终止消化时，可用含有血清培养液或者胰酶抑制剂终止胰酶对细胞的作用。
称取胰蛋白酶：按胰蛋白酶液浓度为0.25％，用电子天平准确称取粉剂溶入小烧杯中的双蒸水（若用双蒸水需要调PH到7.2左右）或PBS（D-hanks）液中。
搅拌混匀，置于4℃内过夜。
用注射滤器抽滤消毒：配好的胰酶溶液要在超净台内用注射滤器（0.22微米微孔滤膜）抽滤除菌。
然后分装成小瓶于-20℃保存以备使用。
4. 0.05％胰蛋白酶－0.02%EDTA溶液称取胰蛋白酶粉末（1：250）0.05g，EDTA 0.02g，加入PBSA 100ml，0.22um微孔滤膜过滤除菌，分装，于－20℃保存。
细胞培养-细胞培养用液及培养基
培养基（液）-无血清培养基
·为什么要使用无血清培养基？
➢血清成分复杂，干扰实验结果 ➢血清含有毒性物质、抑制性物质、影响
某些细胞功能
培养基（液）-无血清培养基
·无血清培养基-缺点
➢通用性较差 ➢细胞增殖缓慢、成本较高 ➢可能失去血清的一些保护性作用
培养基（液）-无血清培养基
·无血清培养基-配置方法
工作浓度： 0.02%
培养用液
·消化液-EDTA
注意事项 ① 需用不含离子的平衡盐缓冲液溶解 ② 与胰酶联合使用可提高消化效率 ③ EDTA不能被血清中和，消化后应彻底
清洗
培养基（液）
维持体外细胞生存和生长的基本 溶液，是组织细胞培养最重要的条件 分类 ·天然培养基 ·合成培养基
培养基（液）-天然培养基
维持渗透压、调节PH、供给细胞生存所需 能量及无机离子成分。 ➢用途
合成培养基（液）的基础液及用于洗涤组 织、细胞等
培养用液
·平衡盐溶液
培养用液
·消化液-用途
➢分散组织、细胞 ➢使细胞脱离附着底物
培养用液
·消化液-成分
➢胰蛋白酶 ➢二乙烯四乙酸二钠（EDTA） ➢胶原酶溶液
培养用液
·消化液-胰蛋白酶
细胞培养用液及培养基（液）
主要内容
· 培养用液 · 培养基（液）
主要内容
· 培养用液 · 培养基（液）
培养用液
细胞培养时，除需要培养基，还 需要大量的液体，包括
·水 ·盐溶液 ·消化液 ·缓冲液 ·维生素液等
培养用液
·水
➢细胞培养所必须的成分（吸收与代谢） ➢维持细胞形态、调节渗透压及PH ➢细胞培养对水质的要求极高
取自动物体液或从动物的组织中 分离提取 优点 ·营养成分丰富，培养效果良好 缺点
常用的几种细胞培养配套试剂的配置
常用的几种细胞培养配套试剂的配置几种常用细胞培育基产品⒈ BME(basal medium eagle)基础伊格培育基⒉ MEM⒊ DMEM⒋ IMDM⒌ RPMI-1640⒍ M199⒎ Mccoys 5A⒏ F10\ F12 \DMEM混合F12几种常用细胞培育配套试剂的配置(缓冲液、平衡盐溶液等)1、无钙、镁、离子溶液(1000ml)氯化钠(NaCl)8g磷酸二氢钠、(NaH2PO4H20)0.05g、碳酸氢钠(NaHCO3)1g、柠檬酸三钠(Na3C6H5O7,H20)1g、葡萄糖1g、加去离子水或双蒸水至1000mL2、PBS(Phosphate-Buffered saline)磷酸盐缓冲液甲液:0.2mol/L磷酸氢二钠溶液、磷酸氢二钠(无水)28.4g、氯化钠8.77g加去离子水或双蒸水至1000mL乙液:0.2mol/L磷酸二氢钠溶液、磷酸二氢钠(无水)2.4g、氯化钠8.77g加去离子水或双蒸水至1000mL甲、乙液于4℃保存，使用时按表3-2所示比例，配制成所需pH 浓度，高压灭菌后室温保存。
3、Hanks液(HBSSHanks Balanced salt solution)⑴ 母液甲(20x)配法①NaCl(A.R)160g、KCl(A.R)8g、MgSO4.7H2O(A.R)2g、MgCl.6H2O(A.R)2g依次溶于800mL双蒸水中，前一物质溶后再加后一种。
②CaCl2(A.R)2.8g溶于100mL双蒸水中，溶时不断搅拌(此液应单配，单溶)。
待上述两溶液中的"溶质"全溶后，将它们混合，再用双蒸水补至1000mL，向其中加2mL作为防腐剂，置4℃保存。
⑵ 母液乙(20×)配法①Na2HPO4.12H2O(A.R)3.04g、KH2PO4(A.R)1.20g、葡萄糖(A.R)20.0g溶于800ml双蒸水中。
②0.4%酚红液0.4g酚红放在玻璃研钵后加0.01N、NaOH11.28mL，直到全部溶解，移入100mL容量瓶中，加水至100mL，过滤，pH为7.4，4℃保存。
常用细胞培养基配方及缓冲液
1640细胞造就基【1 】
以上数据仅为参考,以产品解释书为准.
MEM细胞造就基
以上数据仅为参考,以产品解释书为准.
DMEM/F12细胞造就基
以上数据仅为参考,以产品解释书为准.
IMDM细胞造就基
以上数据仅为参考,以产品解释书为准.
BME 细胞造就基
以上数据仅为参考,以产品解释书为准.
199 细胞造就基
以上数据仅为参考,以产品解释书为准.
Hanks'均衡盐
以上数据仅为参考,以产品解释书为准.
Earle's均衡盐
以上数据仅为参考,以产品解释书为准.
以上数据仅为参考,以产品解释书为准。
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常用细胞系所用培养液参考，其它详细参见ATCC细胞库()
细胞系名称细胞类型物种来源组织培养液与血清
293成纤维细胞 人 胚胎肾 MEM, 10% 马血清
3T6成纤维细胞 小鼠 胚胎 DMEM, 10% FBS
A549上皮样 人 肺癌 F-12K, 10% FBS
A9成纤维细胞 小鼠 结缔组织 DMEM, 10% FBS
AtT-20上皮样 小鼠 垂体肿瘤 F-10, 15%马血清+ 2.5% FBS BALB/3T3成纤维细胞 小鼠 胚胎 DMEM, 10% FBS
BHK-21成纤维细胞 仓鼠 肾 DMEM, 10% FBS or MEM, 10% FBS
and NEAA
BHL-100上皮样 人 乳腺 McCoy'5A, 10% FBS
BT成纤维细胞 牛 鼻甲细胞 MEM, 10% FBS and NEAA
Caco-2上皮样 人 结肠腺瘤 MEM, 20% FBS and NEAA
Chang上皮样 人 肝 BME, 10% 牛血清
CHO-K1上皮样 仓鼠 卵巢 F-12, 10% FBS
Clone 9上皮样 大鼠 肝 F-12K, 10% FBS
Clone M-3上皮样 小鼠 黑色素瘤 F-10, 15%马血清+ 2.5% FBS
COS-1成纤维细胞 猴 肾 DMEM, 10% FBS
COS-3成纤维细胞 猴 肾 DMEM, 10% FBS
COS-7成纤维细胞 猴 肾 DMEM, 10% FBS
CRFK上皮样 猫 肾 MEM, 10% FBS and NEAA
CV-1成纤维细胞 猴 肾 MEM, 10% FBS
D-17上皮样 犬 骨肉瘤 MEM, 10% FBS and NEAA
Daudi淋巴样 人 淋巴瘤患者外周血 RPMI-1640, 10% FBS
GH1上皮样 大鼠 垂体瘤 F-10, 15%马血清+2.5% FBS
GH3上皮样 大鼠 垂体瘤 F-10, 15%马血清+ 2.5% FBS
H9淋巴样 人 T-细胞淋巴瘤 RPMI-1640, 20% FBS
HaK上皮样 人 肾 BME, 10% 牛血清
HCT-15上皮样 人 结肠腺癌 RPMI-1640, 10% FBS
HeLa上皮样 人 宫颈癌 MEM, 10% FBS and NEAA (in
suspension, S-MEM)
HEp-2上皮样 人 喉癌 MEM, 10% FBS
HL-60淋巴样 人 早幼粒细胞白血病 RPMI-1640, 20% FBS
HT-1080上皮样 人 纤维肉瘤 MEM, 10% HI FBS and NEAA
HT-29上皮样 人 结肠腺癌 McCoy's 5A, 10% FBS
HUVEC上皮样 人 脐带 F-12K, 10% FBS 肝素100 ug ml
I-10上皮样 小鼠 睾丸肿瘤 F-10, 15%马血清+2.5% FBS
IM-9淋巴样 人 骨髓瘤患者骨髓 RPMI-1640, 10% FBS
JEG-2上皮样 人 绒毛膜癌 MEM, 10% FBS
Jensen成纤维细胞 大鼠 肉瘤 McCoy's 5A, 5% FBS
Jurkat淋巴样 人 淋巴瘤 RPMI-1640, 10% FBS
K-562淋巴样 人 髓系白血病 RPMI-1640, 10% FBS
KB上皮样 人 口腔癌 MEM, 10% FBS and NEAA
KG-1髓样细胞 人 红白血病患者骨髓 IMDM, 20% FBS
L2上皮样 大鼠 肺 F-12K, 10%FBS
L6大鼠 骨骼肌成肌细胞 DMEM, 10% FBS
LLC-WRC
上皮样 大鼠 癌 Medium 199, 5%马血清
256
McCoy成纤维细胞 小鼠 未知 MEM, 10% FBS
MCF7上皮样 人 乳腺癌 MEM, 10% FBS NEAA, 10ug/ml 胰
岛素
WEHI-3b巨噬细胞样 小鼠 粒单细胞白血病 DMEM, 10% FBS
WI-38上皮样 人 胚胎肺 BME, 10% FBS
WISH上皮样 人 羊膜 BME, 10% FBS
WS1人 胚胎皮肤 MEM, 10% FBS and NEAA
XC上皮样 大鼠 肉瘤 MEM, 10% FBS and NEAA
Y-1上皮样 小鼠 肾上腺肿瘤 F-10, 15%马血清+ 2.5% FBS
生
物
秀
1。