2020年(生物科技行业)微生物实验思考题参考答案及知识要点

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2020年(生物科技行业)微生物真题分章节

2020年(生物科技行业)微生物真题分章节

(生物科技行业)微生物真题分章节厦门大学微生物考研真题绪论微生物分类及常见代表微生物?(98、99)从微生物代谢特点来解释微生物“分布广,种类多,数量大”的原因?(99)第一章原核生物形态,构造和功能细菌和酵母菌的生态分布?(99)1.细胞壁构造5.磷壁酸(04)3..肽聚糖单体(06)外膜(08)举例说明肽桥的类型?(01)分别写出细菌放线菌霉菌酵母菌细胞壁的主要成分?(01)1.比较革兰氏阳性菌和阴性菌细胞壁成分及结构的异同点.(4分)(04)比较G+和G-菌细胞对机械抗性、溶菌酶、碱性染料敏感性的差异且解释其可能机制?(08)8.试述内毒素生产菌的细胞结构和组成,且简要说明内毒素的免疫特性及其主要检测方法。

(8分)(07)8.真细菌肽聚糖和古细菌假肽聚糖的组成和结构有何不同6分(06)1.革兰氏染色关键的步骤是哪壹步,为什么?6分(06)抗酸染色(08)LPS的毒性成分是()。

类脂A核心多糖O-侧链脂蛋白(08)2.缺壁细胞2.支原体(3分)(03)12、L型细菌(05)5.在细菌中,专性能量寄生的为:支原体衣原体立克次氏体MLO(06)2、何谓缺壁细菌?说明4种缺壁细菌形成原因及特点。

(5分)(07)3.特殊细胞构造和细胞内含物荚膜的化学成分、功能?(98)菌胶团(2001)1.龋齿的形成和某些产荚膜细菌有关吗?解释你的答案。

(02)内生孢子(98)2、芽孢子(05)1.芽孢囊(06)半孢晶体(08)1.试根据“渗透调节皮层膨胀学说”分析芽孢的抗热机制。

(5分)(03)菌毛形态和种类?(01)9、细菌的菌毛的主要功能是:A、运动B、传递遗传物质C、附着D、致病性(05)1.证明某壹细菌是否存在鞭毛有那些实验方法?(7分)(03)聚beta羟丁酸颗粒储存的营养要素是?用途及优点?(01)4.放线菌放线菌革兰氏染色结果?(99)工业发酵产抗生素放线菌主要借助哪种方式产生新的菌丝体有性孢子无性孢子菌丝体断裂有性结合(2000)试以链霉菌为例简述放线菌的生活史?(01)在显微镜下,链霉菌的气生菌丝和基内菌丝相比,颜色()、直径()。

2020年(生物科技行业)初级检验技师考试微生物检验考试试题及答案

2020年(生物科技行业)初级检验技师考试微生物检验考试试题及答案

(生物科技行业)初级检验技师考试微生物检验考试试题及答案初级检验技师考试微生物检验考试试题及答案(4)壹、名词解释1.感染2.侵袭力3.毒血症4.败血症5.带菌者6.内毒素7.外毒素8.菌血症9.脓毒血症10.类毒素11.菌群失调12.条件致病菌13.致病菌14.细菌毒力15.侵袭力16.医院内源性感染17.医院感染18.外源性感染/交叉感染19.医源性感染20.非特异性免疫二、填空题1.病原菌的致病性和其具有的毒力,侵入的及有密切关系。

2.细菌的毒力是由和决定的。

3.细菌的侵袭力是由、和构成。

4.内毒素是菌细胞壁中的成分。

5.内毒素是由脂质A,和组成。

6.内毒素的毒性部分是,菌体抗原(O抗原)是。

7.类毒素是由经甲醛处理制备而成,可刺激机体产生。

8.外毒素的化学成分是,可用甲醛处理制备。

9.根据外毒素的作用机理不同,可将外毒素分为,和肠毒素。

10.抗毒素可由或刺激机体产生。

11.构成非特异性免疫的屏障结构主要有皮肤和粘膜屏障,和。

12.吞噬细胞吞噬病原菌后的结果有吞噬和吞噬俩种。

13.内毒素的毒性作用有,,,。

14.目前所知毒性最强的生物毒素是。

15.以神经毒素致病的细菌有,等。

16.具有粘附作用的细菌结构有,。

17.具有抗吞噬作用的细菌结构有等。

18.病原菌侵入机体能否致病和,,等有密切关系。

19.细菌侵袭性酶有,,等。

20.定居于人和中的微生物群叫做正常菌群。

21.医院内感染的方式包括、和。

三、单项选择题1.和细菌致病性无关的结构是A.荚膜B.菌毛C.异染颗粒D.脂多糖E.磷壁酸2.细菌代谢产物中,和致病性无关的是A.毒素B.血浆凝固酶C.热原质D.细菌素E.透明质酸酶3.和细菌侵袭力无关的物质是A.荚膜B.菌毛C.血浆凝固酶D.芽胞E.透明质酸酶4.具有粘附作用的细菌结构是A.鞭毛B.普通菌毛C.荚膜D.性菌毛E.芽胞5.革兰阳性菌类似菌毛作用的成分是A.肽聚糖B.M蛋白C.膜磷壁酸D.壁磷壁酸E.SPA6.有助于细菌在体内扩散的物质是A.菌毛B.荚膜C.M蛋白D.血浆凝固酶E.透明质酸酶7.细菌内毒素的成分是A.H抗原B.肽聚糖C.O抗原D.荚膜多糖E.脂多糖8.内毒素的中心成分是A.特异性多糖B.脂多糖C.核心多糖D.脂质AE.脂蛋白9.内毒素不具有的毒性作用是A.食物中毒B.发热C.休克D.DICE.白细胞反应10.关于内毒素的叙述,下列错误的壹项是A.来源于革兰阴性菌B.能用甲醛脱毒制成类毒素C.其化学成分是脂多糖D.性质稳定,耐热E.只有当菌体死亡裂解后才释放出来11.关于外毒素的叙述,下列错误的是A.多由革兰阳性菌产生B.化学成分是蛋白质C.耐热,使用高压蒸汽灭菌法仍不能将其破坏D.经甲醛处理可制备成类毒素E.可刺激机体产生抗毒素12.外毒素的特点之壹是A.多由革兰阴性菌产生B.可制备成类毒素C.多为细菌裂解后释放D.化学组成是脂多糖E.耐热13.细菌毒素中,毒性最强的是A.破伤风痉挛毒素B.霍乱肠毒素C.白喉外毒素D.肉毒毒素E.金黄色葡萄球菌肠毒素14.以神经毒素致病的细菌是A.伤寒沙门菌B.霍乱弧菌C.肉毒梭菌D.乙型溶血性链球菌E.脑膜炎奈氏菌15.不能引起食物中毒的细菌是A.金黄色葡萄球菌B.破伤风杆菌C.肉毒梭菌D.产气荚膜杆菌E.肠炎沙门菌16.抗毒素A.为外毒素经甲醛处理后获得B.可中和游离外毒素的毒性作用C.可中和和易感细胞结合的外毒素的毒性作用D.可中和细菌内毒素的毒性作用E.B+C17.类毒素是A.抗毒素经甲醛处理后的物质B.内毒素经甲醛处理后脱毒而保持抗原性的物质C.外毒素经甲醛处理后脱毒而保持抗原性的物质D.细菌经甲醛处理后的物质E.外毒素经甲醛处理后脱毒且改变了抗原性的物质18.下述细菌中可引起菌血症的是A.破伤风梭菌B.伤寒沙门菌C.白喉棒状杆菌D.肉毒梭菌E.霍乱弧菌19.带菌者是指A.体内带有正常菌群者B.病原菌潜伏在体内,不向体外排菌者C.体内带有条件致病菌者D.感染后,临床症状消失,但体内病原菌未被彻底清除,又不断向体外排菌者E.感染后,临床症状明显,且可传染他人者20.对机体非特异性免疫叙述,错误的是A.在种系发育和进化过程中形成B.和生具有,人皆有之C.对某种细菌感染针对性强D.和机体的组织结构和生理功能密切相关E.对入侵的病原菌最先发挥作用21.不属于正常体液和组织中的抗菌物质是A.补体B.溶菌酶C.抗生素D.乙型溶素E.白细胞素22.关于抗感染免疫的叙述,下列错误的是A.完整的皮肤和粘膜屏障是抗感染的第壹道防线B.吞噬细胞和体液中的杀菌物质是抗感染的第二道防线。

食品微生物学实验思考题

食品微生物学实验思考题

实验一显微镜的使用和细菌简单染色六、思考题1.用油镜观察时应注意哪些问题?由于油浸镜的工作距离很短(0.19mm左右),故使用时必须特别小心。

在低倍镜找到要观察的部位以后,将镜筒升起,在标本上加一滴香柏油,转换油镜头,从侧面注视,用粗调螺旋将镜筒小心下降,使油镜头浸入油滴,直到几乎与标本接触为止(注意切勿压在标本上,以免压碎玻片,甚至损坏油镜头)。

从目镜观察,先用粗调螺旋徐徐升起(只准上升镜筒,不能向下调节),当视野中有模糊的标本物像时,改用细调螺旋调节,直到标本物像清晰为止,如转动粗调螺旋已使镜头离开油镜,应重新调节,直至调到看清物像为止。

3.什么是物镜的同焦现象?一般情况下,当五项在一种物镜中已清晰聚焦后,转动转换器将其它物镜工作时,物像基本保持在聚焦状态。

实验二革兰氏染色法六、思考题1.哪些环节会影响革兰氏染色结果的正确性?其中最关键的环节是什么?菌龄、图片厚度、染色均匀度、脱色时间、脱色均匀度等。

其中脱色时间是关键。

2.革兰氏染色时,为什么特别强调菌龄不能太老?为什么?菌龄太老,其中的部分细胞可能已经死亡或自溶,造成细胞壁的通透性增强,染色结果可能出现假阴性。

3.革兰氏染色时,初染前能加碘液吗?不能。

初染前加碘液的话就会先和染料结合成大分子,使得染料分子不能穿过细胞壁进入细胞质膜,达不到初染效果。

4.不经过复染,能否区别革兰氏阳性和革兰氏阴性细菌?可以。

因为脱色后G+是紫色的而G-是无色的,所以已经可以区分了。

但是如果不经复染的话,镜检时看不清G-的细胞形态。

5.制备细菌染色标本时,应该注意哪些环节?涂片、固定、脱色6.为什么要求制片完全干燥后才能用油镜观察?因为如果制片和油镜镜头之间有水层,透过载玻片的光线就会发生折射而不能完全进入镜头,从而降低视野的亮度;另外,由于水层的折射,会降低显微镜的分辨率,造成图像不清晰。

7.如果图片未经热固定会出现什么问题?加热温度过高、时间过长又会怎样?实验四放线菌、酵母菌、霉菌形态观察六、思考题1.酵母菌死活细胞观察中,美兰液有何作用?美兰的氧化态为蓝色,还原态为无色。

微生物实验思考题

微生物实验思考题

微生物实验思考题微生物学实验是生物学实验中较为复杂和繁琐的一类实验,它涉及到的实验类型和实验方法较多,而且每一种实验类型和实验方法都有其自身的特点和操作要求。

本文将从以下几个方面对微生物学实验中的一些常见问题进行思考和探讨。

一、实验前的准备工作在进行微生物学实验之前,我们需要做好充分的准备工作。

要了解实验的目的、要求和原理,确定所需的实验器材和试剂,并准备好相应的实验用品。

要对实验场所进行清洁和消毒处理,确保实验环境的无菌性。

要根据实验要求选择合适的菌种和培养基,并进行必要的预处理。

二、实验过程中的注意事项1、菌种保藏:在进行微生物学实验之前,需要对菌种进行保藏。

保藏方法应根据菌种的性质和实验要求进行选择。

常用的保藏方法有甘油管藏法、沙土管藏法、液体石蜡法等。

保藏过程中需要注意防止杂菌污染和防止菌种变异。

2、培养基的制备:制备培养基是微生物学实验中的一项基本操作技能。

在制备培养基时,需要注意根据菌种的营养需求和实验要求选择合适的配方和配制方法。

同时,要注意对培养基进行灭菌处理,确保无菌性。

3、接种与培养:在接种和培养过程中,需要注意无菌操作和防止杂菌污染。

接种时需要根据实验要求选择合适的接种方法和接种量,并注意对菌种进行纯化处理。

培养过程中需要注意控制温度、湿度、光照等环境因素,以保证微生物的正常生长和繁殖。

4、观察与记录:在观察和记录过程中,需要注意对微生物的生长情况、形态特征、生化反应等进行仔细观察和记录。

这些信息对于后续的数据分析和实验结果解释非常重要。

5、数据分析与总结:在完成实验后,需要对实验数据进行统计和分析,并将分析结果进行总结。

数据分析可以借助专业的统计软件进行,如SPSS、Excel等。

总结时需要注意对实验结果进行客观评价,并提出改进意见和建议。

三、实验后的整理与思考完成微生物学实验后,需要对实验场所进行清洁和消毒处理,并对实验器材和试剂进行整理和存放。

需要对实验数据进行整理和分析,并将分析结果进行总结和评价。

微生物实验思考题参考标准答案及知识要点

微生物实验思考题参考标准答案及知识要点

微生物实验思考题参考答案及知识要点一.酵母菌形态观察及死活细胞鉴别1.吕氏碱性美蓝染液浓度和作用时间的不同对酵母菌死细胞数量有何影响?是分析其原因。

美蓝是一种无毒性的染料,它的氧化型呈蓝色,还原型无色。

用美蓝对酵母的活细胞进行染色时,由于细胞的新陈代谢作用,细胞内具有较强的还原能力,能使美蓝由蓝色的氧化型变成为无色的还原型。

因此,具有还原能力的酵母活细胞是无色的,而死细胞或代谢作用微弱的衰老细胞则呈蓝色或淡蓝色,借此即可对酵母菌的死细胞和活细胞进行鉴别。

美蓝浓度高了,代谢不太活跃的活细胞也会被染色,从而使观察到的死细胞较多,活细胞较少;反之,则代谢微弱的细胞也能还原美蓝,不被染色,从而使观察到的死细胞较少,活细胞较多。

二.细菌的简单染色和革兰氏染色1.革兰氏染色中那一步是关键?为什么?你是如何操作的?革兰氏染色的关键步骤是:乙醇脱色(是脱色时间)。

如果脱色过度,革兰氏阳性菌也可被脱色而被误认为是革兰氏阴性菌;如脱色时间过短,革兰氏阴性菌也可被脱色而被误认为是革兰氏阳性菌。

脱色时间的长短还受涂片的厚薄,脱色是玻片晃动的快慢及乙醇用量的多少等因素的影响,难以严格规定(脱色是应当控制速度,脱色时间一般为20—30s)。

2. 固定的目的之一是杀死菌体,这与自然死亡的菌体有何不同?自然死亡的菌体本身已经部分自溶,结构已经改变。

固定杀死细菌时细菌结构是保持死亡时的状态的。

3. 不经复染这一步能否区分革兰氏阳性菌和阴性菌?能。

在酒精脱色后,不被酒精脱色而保留紫色者为革兰氏阳性菌(G+),被酒精脱色为革兰氏阴性菌。

最后一步用番红染液复染,是为了让结果更清楚。

4.涂片为什么要固定,固定适应注意什么问题?a 杀死细菌并使菌体黏附与玻片上;b增加其对染料的亲和力。

固定时应注意:手持玻片,菌膜朝上,在微火过3次(手指触摸玻片反面,不烫手为宜),固定时应尽可能维持细胞原有形态,防止细胞膨胀或收缩。

三. 霉菌、放线菌的形态观察1.镜检时,如何区分基内菌丝与气生菌丝?一般气生菌丝颜色较深,直生或分枝丝状,比基内菌丝粗;而基内菌丝色浅、发亮,可看到横隔膜,继而断裂成球状或杆状小体。

微生物实验报告思考题参考答案

微生物实验报告思考题参考答案

实验一、微生物的简单染色思考题1油镜与普通物镜在使用方法上有何不同?应特别注意些什么?答:油镜在使用时必须在载玻片与物镜之间滴加镜头油。

油镜使用过程中要注意两点:(1)、使用后镜头的清洁:镜面只能用擦镜纸擦,不能用手指或粗布,以保证光洁度,用完油镜必须进行“三擦”(观察完毕,上悬镜筒,先用擦镜纸擦去镜头上的油,然后再用擦镜纸沾取少量二甲苯(或者乙醇乙醚溶液)擦去残留的油,最后用擦镜纸擦去残留的二甲苯,后将镜体全部复原)。

(2)、.观察标本时,必须依次用低、中、高倍镜,最后用油镜。

当目视接目镜时,特别在使用油镜时,切不可使用粗调节器,以免压碎玻片或损伤镜面。

2、使用油镜时,为什么必须用镜头油?答:在使用普通显微镜时,当光线由反光镜通过玻片与镜头之间的空气时,由于空气与玻片的密度不同,使光线受到曲折,发生散射,降低了视野的照明度。

若中间的介质是一层油(其折射率与玻片的相近),则几乎不发生折射,增加了视野的进光量,从而使物象更加清晰。

3、镜检标本时,为什么先用低倍镜观察,而不是直接用高倍镜或油镜观察?答:低倍镜视野比较大,能看到的范围大,容易找到观察的目标,然后在用放大倍数高的高倍镜或油镜有目的的观察。

实验二、革兰氏染色(1)为什么必须用培养24 h以内的菌体进行革兰氏染色?答:24h以内的菌体处于活跃生长期,菌体细胞壁具有典型特征,而处于老龄的革兰氏阳性细菌壁结构开始发生变化,染色时会被染成红色而造成假阴性(2)要得到正确的革兰氏染色结果,必须注意哪些操作?哪一步是关键步骤?为什么?答:应注意如下几点:其一,选用活跃生长期菌种染色,老龄的革兰氏阳性细菌会被染成红色而造成假阴性;其二,涂片不宜过厚,以免脱色不完全造成假阳性;其三,脱色是革兰氏染色是否成功的关键,脱色不够造成假阳性,脱色过度造成假阴性(3)当你对未知菌进行革兰氏染色时,怎样保证操作正确,结果可靠?答:当要确证未知菌的革兰氏反应时,可用已知菌进行混合涂片,使二者染色条件保持一致,如果已知菌的结果与预期相符,则证明操作操作正确,结果可靠。

2020年(生物科技行业)微生物工程期末复习习题及全部答案

2020年(生物科技行业)微生物工程期末复习习题及全部答案

(生物科技行业)微生物工程期末复习习题及全部答案绪论●1680年列文虎克制成显微镜───证明了微生物的存在。

●1857年,巴斯德(LouisPasteur)微生物之父证明了酒精是由活的酵母发酵引起的。

且提出了著名的发酵理论:壹切发酵过程都是微生物作用的结果。

1897年德国化学家毕希纳发现磨碎的酵母仍使糖发酵形成酒精───酶●1905年,柯赫建立微生物纯培养技术,为微生物学的发展奠定了基础。

科赫的固体培养基也是微生物学研究史上的壹大突破。

第壹章生产菌种的筛选1、工业化菌种的要求有哪些?①遗传性能要相对稳定,不易变异退化;②能够利用廉价的原料,简单的培养基,大量高效地合成产物;③抗病毒能力强,不易感染它种微生物或噬菌体;④产生菌及其产物的毒性必须考虑(在分类学上最好和致病菌无关,不产生任何有害的生物活性物质和毒素,包括抗生素、激素和毒素等,保证安全);⑤有关合成产物的途径尽可能地简单,或者说菌种改造的可操作性要强;⑥生产特性要符合工艺要求(如生长速度和反应速度较快,发酵周期短等)。

⑦培养和发酵条件温和(糖浓度、温度、pH、溶解氧、渗透压等)2.在工业生产中常用的微生物主要有细菌、酵母菌、霉菌和放线菌3、自然界分离微生物的壹般操作步骤?从环境中分离目的微生物时,为何壹定要进行富集培养?样品的采集-预处理—培养—培养—菌落的选择—出筛—复筛—性能的鉴定—菌种保藏富集培养的原因:自然界中目的微生物含量很少,非目的微生物种类繁多,进行富集培养,使目的微生物在最适的环境下迅速地生长繁殖,数量增加,由原来自然条件下的劣势种变成人工环境下的优势种,使筛选变得可能。

4.每克土壤的含菌量大体上有壹个十倍系列的递减规律:细菌(~108)>放线菌(~107)>霉菌(~106)>酵母菌(~105)>藻类(~104)>原生动物(~103)第二章微生物的代谢调节和控制1、酶活性调节的反馈抑制类型和抑制机制。

反馈抑制——主要表当下某代谢途径的末端产物过量时可反过来直接抑制该途径中第壹个酶的活性,促使整个反应过程减慢或停止,从而避免了末端产物的过多累积。

微生物学实验原理及思考题答案

微生物学实验原理及思考题答案

微生物学实验原理及思考题答案第一篇:微生物学实验原理及思考题答案油镜便于观察的原理是什么?用油镜观察时在油镜与载玻片之间加入了和玻璃折射率相近的香柏油,使进入透镜的光线增多,视野亮度增强,使物象明亮清晰。

1.细调节器每旋转一周使镜筒上升或下降0.1mm.一。

培养基的配制原理:微生物的生长发育都有一定的营养需要,培养基即人工培养物,为其生长发育提供所需营养的基质。

培养基配制好以后必须经过灭菌方能用于分离培养微生物实验。

一次培养基的配制和灭菌是微生物实验室中最基本的操作,通过本次实验学习微生物实验室中常用培养基的配制方法和灭菌方法。

1.称药品的钥匙不要混用称完药品应及时盖紧瓶盖,因为某些成分如蛋白胨极易吸水潮解调PH时要小心操作,避免回调。

配制培养基应注意哪些问题?要选定合适的培养基;培养基成分要称量准确;PH要适宜;灭菌要严格。

培养基配制完成后为什么要立即灭菌?已灭菌的培养基如何进行无菌检查?防止细菌污染培养基一旦细菌污染了培养基,由于培养基有丰富的营养物质,细菌会段时间内大量产生这样子就会跟培养物争夺营养物质,另一方面,细菌生长过程中会产生有毒物质致使培养物死亡。

放在37℃的恒温箱中一两天后,培养基上没有生长任何微生物的就可以使用(若有微生物则是以菌落出现的肉眼可以看见)二。

细菌的单染色技术原理:单染色法师利用单一染料对细菌进行染色的一种方法。

在中性,碱性或弱酸性溶液中,细菌细胞通常带负电荷,所以常用碱性染料进行染色。

碱性染料并不是碱,和其他染料一样是一种盐,电离时染料离子带正电,易于带负电荷的细菌结合而使细菌着色。

制备染色标本时的注意事项?选择合适菌龄的细菌;固定时避免火焰直接烘烤破坏细菌形态;染色时间要适宜;水洗时水不能直接冲在涂片处。

制片为什么要完全干燥后才能用油镜观察?油和水之间会分层,油就不能与标本接触还有光会发生折射等等原因,这样不利于油镜观察三。

细菌的革兰氏染色法原理:细菌先经碱性染料结晶紫染色,而经碘液媒染后用酒精脱色,在一定条件下有的细菌紫色不被脱去,为G+,有的可被脱去,为G-.1.革兰氏染色成败的关键是乙醇脱色。

微生物学实验理论及思考题

微生物学实验理论及思考题

实验一显微镜的使用及微生物大小测定的方法二、基本原理现代普通光学显微镜利用目镜和物镜两组透镜系统来放大成像,它们由机械装置和光学系统两大部分组成。

物镜的性能最为关键,它直接影响着显微镜的分辨率。

其中油镜的放大倍数最大,对微生物学最为重要。

微生物细胞的大小是微生物基本的形态特征,也是分类鉴定的依据之一。

微生物大小的测定,需要在显微镜下,借助于特殊的测量工具—测微尺,包括目镜测微尺和镜台测微尺。

其中镜台测微尺并不直接用来测量细胞大小,而是用于校正目镜测微尺每格的相对长度。

目镜测微尺每小格所代表的实际长度因显微镜的不同放大倍数而异,因此用目镜测微尺测量微生物大小时,必须先用镜台测微尺进行校正,以求出该显微镜在一定放大倍数下,目镜测微尺每小格所代表的相对长度,然后根据微生物细胞相当于目镜测微格数,即可计算出细胞的实际大小.两重合线间镜台测微尺格数×10目镜测微尺每格长度=两重合线间目镜测微尺格数思考题1、用油镜观察时应注意哪些问题?在载玻片和镜头之间加滴什么油?起什么作用?答(1)应先用摖镜纸将镜头摖干净,以防止实验的污染。

使用油镜时,应先用低倍镜再用高倍镜,然后再是油镜,用完之后也要用摖镜纸将油镜摖掉。

(2)滴加香柏油(3)作用是增加折射率,即增加了显微镜的分辨率,油的折射率和分辨率成反比,同时与波长成正比。

2、影响显微镜分辨率的因素有哪些?答:显微镜的分辨率指显微镜能辨别两点之间的最小距离的能力,最小分辨距离越小,分辨率越高,最小可分辨率距离=λ/2NA且NA=n.sin,所以,分辨率由物镜的NA值与照明光源的波长两个因素决定,当然还有介质的折射率。

3、为什么要换不同放大倍数的目镜或物镜时,必须用镜台测微尺重新对目镜测微尺进行校正?答:不同放大倍数,目镜测微尺每小隔所代表实际长度不一样,必须用镜台测微尺进行重新校正,这样目镜测微尺测量的长度才是目前状态的准备长度。

4、在不改变目镜和目镜测微尺,而改用不同放大倍数的物镜来测定同一微生物的大小时,其测定的结果是否相同?为什么?答:相同的,不同的放大倍数,目镜测微尺每小格所代表实际长度不一样,必须重新校正,才能得到目前状态的准确长度。

微生物实验思考题参考答案及知识要点

微生物实验思考题参考答案及知识要点

微生物实验思考题参考答案及知识要点一.酵母菌形态观察及死活细胞鉴别1.吕氏碱性美蓝染液浓度和作用时间的不同对酵母菌死细胞数量有何影响?是分析其原因。

美蓝是一种无毒性的染料,它的氧化型呈蓝色,还原型无色。

用美蓝对酵母的活细胞进行染色时,由于细胞的新陈代谢作用,细胞内具有较强的还原能力,能使美蓝由蓝色的氧化型变成为无色的还原型。

因此,具有还原能力的酵母活细胞是无色的,而死细胞或代谢作用微弱的衰老细胞则呈蓝色或淡蓝色,借此即可对酵母菌的死细胞和活细胞进行鉴别。

美蓝浓度高了,代谢不太活跃的活细胞也会被染色,从而使观察到的死细胞较多,活细胞较少;反之,则代谢微弱的细胞也能还原美蓝,不被染色,从而使观察到的死细胞较少,活细胞较多。

二. 细菌的简单染色和革兰氏染色1. 革兰氏染色中那一步是关键?为什么?你是如何操作的?革兰氏染色的关键步骤是:乙醇脱色(是脱色时间)。

如果脱色过度,革兰氏阳性菌也可被脱色而被误认为是革兰氏阴性菌;如脱色时间过短,革兰氏阴性菌也可被脱色而被误认为是革兰氏阳性菌。

脱色时间的长短还受涂片的厚薄,脱色是玻片晃动的快慢及乙醇用量的多少等因素的影响,难以严格规定(脱色是应当控制速度,脱色时间一般为20—30s)。

2. 固定的目的之一是杀死菌体,这与自然死亡的菌体有何不同?自然死亡的菌体本身已经部分自溶,结构已经改变。

固定杀死细菌时细菌结构是保持死亡时的状态的。

3. 不经复染这一步能否区分革兰氏阳性菌和阴性菌?能。

在酒精脱色后,不被酒精脱色而保留紫色者为革兰氏阳性菌(G+),被酒精脱色为革兰氏阴性菌。

最后一步用番红染液复染,是为了让结果更清楚。

4. 涂片为什么要固定,固定适应注意什么问题?a 杀死细菌并使菌体黏附与玻片上;b 增加其对染料的亲和力。

固定时应注意:手持玻片,菌膜朝上,在微火过3次(手指触摸玻片反面,不烫手为宜),固定时应尽可能维持细胞原有形态,防止细胞膨胀或收缩。

三. 霉菌、放线菌的形态观察1. 镜检时,如何区分基内菌丝与气生菌丝?一般气生菌丝颜色较深,直生或分枝丝状,比基内菌丝粗;而基内菌丝色浅、发亮,可看到横隔膜,继而断裂成球状或杆状小体。

微生物学实验思考题

微生物学实验思考题

微生物学实验思考题实验1 培养基的配置1、简述配置培养基的基本步骤及注意事项。

步骤:配料-溶解-调PH-加入琼脂-融化-分装-封口(棉花纱布或封口膜)-灭菌注意事项①加热溶化过程中,要不断的搅拌,防止琼脂糊底。

最后,补足所失水分。

② pH值要按照各种不同培养基的要求调整。

③分装时注意不要使培养基沾染在管口或者瓶口上,以免沾污棉塞引起杂菌污染。

④培养基的灭菌时间和温度需要按照各种培养基的规定进行,培养基灭菌后,须放在37℃温箱培养24-48h,以检查灭菌是否彻底。

2、为什么微生物实验室所用的三角瓶口或试管口要塞上棉塞才能使用?为了防止外界微生物进入三角瓶或试管,保持三角瓶或试管内部无菌状态或微生物的纯培养状态。

同时又允许空气进入,给内部菌种提供适宜生存环境。

3、培养基配好后,为什么必须立即灭菌?如何检查灭菌后的培养基是无菌的?如果不进行灭菌培养料内的微生物就会发酵生长,从而破坏培养基内的营养成分,并且由于这些微生物的生长过程中分分泌一种或多种毒素从而抑制目的菌的生长。

检查无菌的方法:将灭菌的培养基放入37℃温室中培养24~48小时,若无杂菌生长,即可证明为无菌的。

4、配置培养基为什么要调节pH?因为不同微生物所需环境的PH不同,同时在微生物的生长过程中由于营养物质的分解、代谢产物的积累,培养基的PH也会发生改变,故培养基在配置时以及在微生物培养过程中都需要调节PH。

5、什么是选择培养基?它在微生物工作中有何重要性?选择性培养基是指根据某种微生物的特殊要求或其对某化学、物理因素的抗性而设计的培养基。

利用这种培养基可以将所需要的微生物从混杂的微生物中分离出来。

实验2 高压蒸汽灭菌1、如何检查培养基灭菌是否彻底?将取出的灭菌培养基放入37℃温箱培养24h,若无杂菌生长即已彻底。

2、高压蒸汽灭菌开始之前为什么要将锅内冷空气排尽?灭菌完毕后,为什么要待压力降到0是才能打开排气阀?灭菌主要因素是温度而非压力,排出冷空气后关上排气阀,维持所需压力。

微生物实验报告范文思考题答案

微生物实验报告范文思考题答案

微生物实验报告范文思考题答案
思考题
1、脱色环节,脱色不足会把革兰氏阳性菌染成阴性菌,脱色过度会
把阴性菌染成阳性菌;复染环节,染液不能干涸。

最关键的环节是乙醇脱
色环节。

2、菌龄太老会造成着色不均染色效果不好~阴性阳性不明显分不太清楚,不便于显微镜下观察是阳性菌还是阴性菌~
3、不可以。

因为革兰氏碘液的作用是增加结晶紫染料和细胞之间的
亲和性或附
着力,即以某种方式帮助染料固定在细胞上,使不易脱落。

改变顺序
可能会对效果有影响,所以最好按步骤做;脱色后复染前,理论上革兰氏
阳性菌呈紫色,阴性菌无色。

4、可以,因为脱色后G+是紫色的而G-是无色的,这时,已经可以区
分了,但是如果不经复染的话,镜检时看不清G-的细胞形态,而且如果
没有和G+一起混染的话,基本看不清什么,但是如果只做区分的话,可
以不经过复染。

5、注意菌龄,12-18小时的培养物;注意乙醇的脱色时间,20-30秒,时间过长或过短都会和结果不符。

6、因为用油镜观察时,镜头离玻片会很近.如果未完全干燥,载玻片上
的液体会污染油镜镜头.镜头非常精密,被污染后不利于下次观察。

另外,一般作细菌装片不用盖盖玻片,所以待干燥后才能观察.如果盖
上盖玻片后就不用考虑需要干燥的问题.
7、未经热固定,在剩下的步骤中,菌体会被液体冲走,镜检时出现在视野中的细菌极少,甚至没有;加热温度过高或时间过长会导致菌体变形或形态破坏。

2020年(生物科技行业)微生物学考试试题及答案

2020年(生物科技行业)微生物学考试试题及答案

(生物科技行业)微生物学考试试题及答案《微生物学》课程期末考试试题解答及评分标准99b壹.判断改错题(判断下列每小题的正错,认为正确的在题后括号内打“√”;错误的打“×”,且予以改正,每小题1.5分,共15分)01.真菌典型营养体呈现丝状或管状,叫做菌丝(√)02.专性寄生菌且不局限利用有生命力的有机物作碳源。

(×)改正:专性寄生菌只利用有生命力的有机物作碳源03.根据微生物生长温度范围和最适温度,通常把微生物分成高温性、中温性、低温性三大类。

(√)04.放线菌、细菌生长适宜的pH范围:最宜以中性偏酸;(×)改正:放线菌,细菌生长适宜中性或中性偏碱。

05.厌气性微生物只能在较高的氧化仍原电位(≥0.1伏)生长,常在0.3-0.4V生长。

(×)改正:厌气性微生物只能在较低的氧化仍原电位(≤0.1伏)才能生长,常在0.1V生长;06.波长200-300nm紫外光都有杀菌效能,壹般以250-280nm杀菌力最强。

(√)07.碱性染料有显著的抑菌作用。

(√)08.设计培养能分解纤维素菌的培养基,能够采用合成培养基。

(×)改正:能分解纤维素菌的培养基,培养基中需加有机营养物:纤维素。

09.液体培养基稀释培养测数法,取定量稀释菌液,经培养找出临界级数,能够间接测定样品活菌数。

(√)10.共生固氮微生物,二种微生物必须紧密地生长在壹起才能固定氨态氮,由固氮的共生菌进行分子态氮的仍原作用。

(√)壹.多项选择题(在每小题的备选答案中选出二至五个答案,且将正确的答案填在题干的括号内,正确的答案未选全或有选错的,该小题无分,每小题2分,共20分)11.放线菌是能进行光合作用的原核微生物,其细胞形态(A;B;C;)A.有细胞壁;B.由分支菌丝组成;C.无核仁;D.菌体无鞭毛;E.菌体中有芽孢。

12.支原体[Mycoplasma],介乎于细菌和立克次体之间的原核微生物,其特点是:(A;B;)A.有细胞壁;B.能人工培养;C.有核仁;D.有鞭毛;E.非细胞型微生物。

微生物思考题及参考标准答案

微生物思考题及参考标准答案

微生物思考题及参考答案.用油镜观察时应注意哪些问题?在载玻片和镜头之间加滴什么油?起什么作用?答:应该先用擦镜纸将镜头擦干净,以防上次实验地污染.操作时,先低倍再高倍.用完要擦掉油.加香柏油,作用是增加折光率,也就是增加了显微镜地分辨率.油地折光率和分辨率成反比(有公式),同时与波长成正比..什么是物镜地同焦现象?它在显微镜观察中有什么意义?答:在一般情况下,当物像在一种物镜中已清晰聚焦后,转动物镜转换器将其他物镜转到工作位置进行观察时,物像将保持基本准焦地状态,这种现象称为物镜地同焦.利用这种同焦现象,可以保证在使用高倍镜或油镜等放大倍数高、工作距离短地物镜时仅用细调节器即可对物像清晰聚焦,从而避免由于使用粗调节器时可能地误操作而损坏镜头或载玻片..影响显微镜分辨率地因素有哪些?答:物镜地值(物镜地数值孔径)与照明光源地波长..美蓝染色液作用时间地不同,对酵母菌死细胞数量有何影响,试分析原因答:会造成更多地死细胞,在显微镜下观察,活地是透明无色,衰老地是淡蓝色,死亡地是蓝色,如果美蓝染色液作用时间过长,会造成细胞脱水死亡并渗透染液,影响实验结果..镜检时如何区分放线菌基内菌丝,气生菌丝以及孢子丝一般气生菌丝颜色较深,直生或分枝丝状,比基内菌丝粗;而基内菌丝色浅、发亮,可看到横隔膜,继而断裂成球状或杆状小体..在进行细菌涂片时应注意哪些环节、载玻片应该冷却后再涂片. 、如果是涂布液体,可以用毛细管或接种环滴一小滴,然后轻轻抹开,一圈足够. 、如果是涂布菌落或菌苔,应该在载玻片上先滴一滴水,再将菌落或菌苔涂布上去,接种环地尖蘸一点点即可. 、为了节省时间,可以将干燥和热固定合并成一步.但是应该避免高温,因为温度一高,细菌会变形. 、染色时间视染色液种类而定.如结晶紫只需几十秒,亚甲基蓝则需一到两分钟. 、冲洗时,水流不能太大,而且尽量避免水流直接冲在涂片上. 、冲洗后干燥,可以用酒精灯加热以节省时间,同样地,应该避免高温,因为温度一高,细菌会变形..进行细菌制片时为什么要进行加热固定?在加热固定时应注意什么?固定地目地有三个:)杀死微生物,固定细胞结构. )保证菌体能更牢地粘附在载玻片上,防止标本被水冲洗掉. )改变染料对细胞地通透性,因为死地原生质比活地原生质易于染色.固定时应注意:手持玻片,菌膜朝上,在微火过次(手指触摸玻片反面,不烫手为宜),固定时应尽可能维持细胞原有形态,防止细胞膨胀或收缩..为什么要求制片完全干燥后才能用油镜观察.因为用油镜观察时,镜头离玻片会很近.如果未完全干燥,载玻片上地液体会污染油镜镜头.镜头非常精密,被污染后不利于下次观察、若未完全干燥,水滴会影响油与玻璃之间折光率,造成视野不够清晰..哪些环节会影响革兰色染色结果地正确性?其中最关键地环节是什么?答:涂片环节、加热固定环节、脱色环节;其中最关键地环节是脱色环节..进行革兰氏染色时,为什么特别强调菌龄不能太老,用老龄细菌染色会出现什么问题?答:菌龄太老,细胞壁通透性改变.着色不均,染色效果不好.阴性阳性不明显分不太清楚,问题是:不便于显微镜下观察是阳性菌还是阴性菌..革兰氏染色中那一步是关键?为什么?你是如何操作地?革兰氏染色地关键步骤是:乙醇脱色(是脱色时间).如果脱色过度,革兰氏阳性菌也可被脱色而被误认为是革兰氏阴性菌;如脱色时间过短,革兰氏阴性菌也可被脱色而被误认为是革兰氏阳性菌.脱色时间地长短还受涂片地厚薄,脱色是玻片晃动地快慢及乙醇用量地多少等因素地影响,难以严格规定(脱色是应当控制速度,脱色时间一般为—)..革兰氏染色中,哪个步骤可以省略?在什么情况下采用媒染目地是在所有地细胞壁内形成了不溶于水地结晶紫与碘地复合物. 脱色后使革兰氏阴性菌变为无色. 复染使革兰氏阴性菌染成红色. 所以鉴别细菌地革兰氏阴阳性只须媒染,复染地目地是为了看清革兰氏阴性菌..你主要根据哪些形态特征来区分四种不同地霉菌曲霉:具有分隔;气生菌丝地一部分形成长而粗糙地分生孢子梗,顶端膨大成球状顶囊,表面辐射出一层或两层小梗,小梗上着生成串地球形分生孢子.分生孢子梗生于足细胞上,并通过足细胞与营养菌丝相连.根霉:菌丝无隔、多核、分枝状,有匍匐菌丝和假根.在假根地上方直立地生长出一至数根孢囊梗,其顶端膨大成球形孢子囊.囊地基部有囊托,中间有球形或半球形囊轴.毛霉:菌丝无隔、多核、分枝状,无假根或匍匐菌丝.菌丝体上直接生出单生、总状分枝或假轴状分枝地孢囊梗.各分枝顶端着生球形孢子囊,无囊托.青霉:菌丝有横隔,分生孢子梗亦有横隔,光滑或粗糙.基部无足细胞,顶端不形成膨大地顶囊,其分生孢子梗经过多次分枝,产生几轮对称或不对称地小梗,形如扫帚,称为帚状体.孢子颜色:黑曲霉是黑色,青霉是青色,根霉是白菌丝黑孢子,毛霉则是淡黄色.以上为实验室观察)菌丝特征:青菌与曲霉菌丝与膈;毛霉与根霉则无;)菌丝地特化结构:曲霉有足细胞,其它霉菌无;根霉有假根与匍匐枝,其它霉菌无;)孢子头特征:青霉地孢子头为扫帚状;根霉与毛霉地孢子头为囊状;曲霉为菊花状孢子头..为什么更换不同放大倍数地目镜或物镜时,必须用镜台测微尺重新对目镜测微尺进行校正?目镜测微尺中每小格代表地实际长度是不固定地,它是随所使用目镜和物镜地放大率地不同而改变地,故在测量前必须先用镜台测微尺重新对目镜测微尺进行校正,以得出在显微镜地特定放大倍率下,目镜测微尺每小格所代表地相对长度..在不改变目镜和目镜测微尺,而改用不同放大倍数地物镜来测定同一细菌地大小时,其测定结果是否相同?为什么?答:相同;目镜测微尺是一块圆形玻片,其中央刻有精确等分地刻度,有把毫米刻成为等分或把毫米长度刻成等分.测量时,将其放在接目镜中地隔板上来测量经显微镜放大后地细胞物象.由于在不改变目镜和目镜测微尺,而改用不同放大倍数地物镜来测定同一细菌地大小时,物象地放大倍数与每小格目镜测微尺所代表地长度在变化比例上是同步地,故而测定结果相同..哪些因素会造成血细胞计数板地计数误差,应如何避免?操作时没有先盖盖玻片再滴加悬液,导致体积不准确.避免:先盖盖玻片再滴加悬液.细胞密度太高.避免:稀释溶液.溶液不均匀.避免:滴加溶液前混匀悬液.、仪器误差:所用器材均应清洁干净,并且计数板计数区不应该有擦痕.、计数室内可能有气泡.因为酵母细胞并没有染色,看起来是透明地,有气泡很容易被计入,使数值偏高;并且,气泡会影响菌悬液地随机分布.改进:若产生气泡,则用吸水纸吸出.、菌体在计数板上分布不均,当用选取格计数时,会造成很大误差.改进:应使菌液自然流入并混匀,进行观察时尽可能多数几个格子.、配制稀释液时吸取地浓度过高或过低,导致稀释液浓度和原液不成正确比例,计算时产生误差.应将原液摇晃均匀后取中部地液体进行稀释.、由于数菌体数目时视觉疲劳而导致地视觉误差.应多人观察,取记录平均数.、计数时可能将格四周地菌都计算在内了,使数值偏高. 改进:谨遵一个规则,计上不计下,计左不计右,不可以重复计数.、可能出现有出芽地酵母菌,将出芽地酵母菌按两个计数了,使数值偏高. 改进:计数时,只有当芽体于母细胞一样大地时候,才能计为两个..培养基配好后,为什么必须立即灭菌?如何检查灭菌后地培养基是否无菌?为什么要倒置培养?答:由于配制培养基地各类营养物质和容器等含有各种微生物,因此,已配制好地培养基必须立即灭菌,如果来不及灭菌,应暂存冰箱内,以防止其中地微生物生长系列而消耗养分和改变培养基地酸碱度所带来地不利影响.将灭菌地培养基放入℃温箱中培养~,无菌生长即可证明灭菌后地培养基无菌.倒置培养地主要目地:)由于重力地作用使培养基表面及次层能富集微生物生长所需地营养物质,利于微生物生长;)防止空气中微生物地污染培养基及培养物:倒置时平板内地空气是不流动地,杂菌不会沉降到培养基表面,如果不倒置,很快平板周边会长起杂菌.)倒置培养使琼脂里水分不易蒸发出去,而充分地保持琼脂地弹性与细菌容易繁殖和生存地环境.如果不倒置,大概天左右培养基就会出现龟裂等水分散失地情况.而一些落菌等试验,需验证培养基无菌,就要先倒置培养小时才可作为模板做落菌,水分散失是很重要地..在配制培养基地操作过程中应注意些什么问题?为什么?答:一般而言,培养基地配置要注意如下几点原则:)营养成分地配比:碳源和氮源地比例()要适当;)适宜地酸碱度(值):配制培养基时地调节;)渗透压:营养物质要有适合地浓度;)培养基不能反复高温灭菌.) 称不溶性固形物时,应单独称,若量少地可以与无机盐一起称,但一定要混匀再分装;)一般情况下培养基用自来水配制.操作细节上则要注意:)称药品用地牛角匙不要混用,称完药品应及时盖紧瓶盖)调值不要调过头,以免回调而影响培养基内各离子地浓度)分装时注意不要污染棉塞、试管口,以免染菌.)及时灭菌,以免培养基及容器里地微生物生长繁殖消耗养分、改变酸碱度.、当然是注意浓度配比不要搞错、很多培养基地加料顺序有讲究,否则会有沉淀产生、有些培养基会有不溶物质,分装前应摇匀、不要忘了调节值(一般细菌都需要,酵母可能自然就行,不过不一定)、加热溶解时尽量不要煮沸,会损失营养物质.高压蒸气灭菌开始之前,为什么要将锅内冷空气排尽?灭菌完毕后,为什么待压力降低“”时才能打开排气阀,开盖取物.答:)在使用高压蒸汽灭菌时,灭菌锅内冷空气地排除是否完全极为重要,因为空气地膨胀压大于水蒸汽地膨胀压,所以,当水蒸气中含有空气时,在同一压力下,含空气蒸汽地温度低于饱和蒸汽地温度.)压力未降至“”便开盖取物地可能后果:压力锅内压力骤然降低,引起容器中地溶液喷出容器口导致污染或导致人员地烫伤..干热灭菌操作过程中应注意哪些问题为什么、物品不要摆放太挤,以免妨碍空气流通、灭菌物品不要接触干燥箱内壁地铁板,以防包装纸烤焦起火、灭菌时人不能离开、灭菌结束后不能忘记关掉电源、待温度降到度以下再打开,否则冷热空气交替,玻璃器皿容易炸裂或发生烫伤事故.为什么干热灭菌比湿热灭菌所需温度高时间长?在湿热条件下,有水蒸汽地作用:高温水蒸汽导热比干空气要快;高温水蒸汽冷凝变水时有放热过程;高温水蒸汽能穿透细菌地细胞膜,直接进入细胞内破坏细胞;高温水蒸汽能水解一部分细胞结构,加速导热.(湿热中细菌菌体吸收水分,蛋白质较易凝固,因蛋白质含水量增加,所需凝固温度降低;湿热地穿透力比干热大;湿热地蒸汽有潜热存在,每克水在℃时,由气态变为液态时可放出.(千焦)地热量.这种潜热,能迅速提高被灭菌物体地温度,从而增加灭菌效力.).设计实验方案,比较干热灭菌和湿热灭菌地效果. 以下试验方案有关操作均遵循无菌操作条件和等量原则.(一)实验材料试管镊子酒精灯嗜热脂肪芽孢杆菌菌片纸片(与菌片同大小同材料)溴甲酚紫蛋白冻水培养基(已灭菌)等实验材料(材料有余).(二)对照组取支洁净试管,分为三组(每支一组),将组中放入菌片,组中放入纸片,组中什么也不加;不经灭菌,直接加入溴甲酚紫蛋白冻水培养基(等量).(三)恒为培养将上述所有试管按分组在℃恒温条件下培养小时..如何确定平板上某单个菌落是否为纯培养请写出实验地主要步骤纯培养地确定除观察其菌落特征外,还要结合显微镜检测个体形态特征后才能确定,有些微生物地纯培养要经过一系列分离与纯化过程和多种特征鉴定才能得到..配制牛肉膏蛋白胨培养基,有哪些操作步骤?那几步易出错,如何防止?称取药品—加热溶化—分装—加棉塞—包扎—灭菌—搁置斜面易出错地步骤有:称取药品称取时钥匙专用,瓶盖不要错盖,易吸水地药品要快速称取;加热溶化加入药品后要用玻璃棒不停搅拌,以免糊底(在琼脂熔化过程中,应控制火力,以免培养基因沸腾而溢出容器,同时,需不断搅拌,以防琼脂糊底烧焦.);分装分装时培养基不能粘在三角瓶(或试管)口,以免接种时染菌;搁置斜面斜面长度约试管长度一半为宜..平板菌落计数法地原理是什么? 它适用于那些微生物地计数?平板菌落计数法是将等测样品经适当稀释后,其中地微生物充分分散为单个细胞,取一定量地稀释液接种到平板上,经过培养,由每个单细胞生长繁殖而形成地肉眼可见地菌落,即一个单菌落应代表原样品中地一个单细胞.统计菌落数,根据其稀释倍数和取样接种量即可换算出样品中地含菌数.(但是,由于待测样品往往不易完全分散成单个细胞,所以,长成地一个单菌落也可能来自样品中地或更多个细胞.因此平板菌落计数地结果往往偏低.现在常使用菌落形成单位).平板计数法是根据微生物在固体培养基上所形成地一个菌落是由一个微生物繁殖而形成地现象进行地,也就是一个菌落可代表一种微生物(并不绝对).通常用来测定样品中所含细菌、孢子、酵母菌等单细胞微生物地数量.、微量移液器地最小量程太大,在加样时,容易加多,使盖玻片鼓起,血球计数板所技术地体积变大,最终结果偏大. 改进:用量程地小地微量移液器并少加一些..如果一项科学研究内容需从自然界中筛选到能产生高温蛋白酶地菌株,你将如何完成?写出实验方案(产蛋白酶菌株在酪素平板上能形成降解酪素透明圈).以下试验方案有关操作均遵循无菌操作条件一材料准备土壤【有机质(特别是蛋白质)含量丰富地土壤】灭菌生理盐水()灭菌移液管添加酪素地—(牛肉膏蛋白胨完全培养基)经灭菌—斜面(经灭菌)其他材料:接种环酒精灯等二操作方法在盛有灭菌生理盐水地烧杯中添加土壤,配成悬浮液;稍静止后,用灭菌移液管移取部分上清液,将其制成^—^倍地稀释液;用灭菌移液管吸取各稀释液用稀释倒平板法(或涂布平板法)将其接入添加酪素地—平板上;在—℃下培养—天;挑取形成降解酪素透明圈地菌落(透明圈直径与菌落直径之比较大者),转接入—斜面上培养;(若无特定菌落形成,则需另取土样从开始重复试验)将—斜面上地菌落再用平板纯培养,依次重复—次后即可得到纯培养(镜检);纯培养细菌中蛋白酶地提取及活性鉴定【摇瓶培养(若提取蛋白酶及其活性正常,则纯培养成功,否则,重取土样重复以上实验)】..为什么熔化后地培养基要冷却至℃左右才能倒平板?低于这个温度琼脂会凝固,温度过高,如果是做倾倒琼脂做菌落计数,会杀死一部分细菌,如果只是只是制备琼脂平板,那么温度太高就进行倾倒会导致琼脂凝固后偏软,水汽过多..要使平板菌落计数准确,需要掌握哪几个关键?为什么?无菌操作稀释良好,不会太浓或太稀. 菌落生长时间控制好,不会长地太大不便区分,也不至于太小影响计数..当你地平板上长出地菌落不是均匀分散地而是集中在一起时,你认为问题出在哪里?.太浓 .没涂匀.用倾注法和涂布法计数,其平板上长出地菌落有何不同?为什么要培养较长时间()后观察结果?倾注法是在培养皿中接种好样品之后,倾注琼脂并培养;而涂布法则是在琼脂表面接种并使用型棒涂布.因此,倾注法地菌落将出现在琼脂地各个部位,包括底层和中层,但涂布法培养后形成地菌落只出现在琼脂表面..你如何解释淀粉酶是胞外酶而非胞内酶?答:①淀粉是大分子物质,进入细胞十分困难,甚至需要高耗能地胞吞作用.因而通过胞外酶地作用,将淀粉水解为葡萄糖后运入细胞,较方便高效.②试验中出现透明圈,说明培养基内淀粉被水解,可推测是细菌产生地胞外地淀粉酶起地作用..不利用碘液,你能否证明淀粉水解地存在?答:由于淀粉水解生成葡萄糖,即多羟基醛,因此可利用醛地性质进行检验,如银镜试验,斐林试验等.呈阳性者,说明产生了葡萄糖,淀粉被水解;阴性者说明淀粉未被水解..假如某些微生物可以有氧代谢葡萄糖,发酵试验应该出现什么结果?答微生物有氧代谢葡萄糖产气不产酸,因此发酵结果是小管中生气泡但是溶液不变黄..解释在细菌培养中吲哚检测地化学原理,为什么在这个试验中用吲哚地存在作为色氨酸酶活性地指示剂,而不用丙酮酸?答:化学原理:有些细菌产生色氨酸酶,分解蛋白胨中地色氨酸,产生吲哚和丙酮酸.吲哚与对二甲基氨基甲醛结合,形成红色地玫瑰吲哚.但并非所有地微生物都具有分解色氨酸产生吲哚地能力,因此吲哚试验可以作为一个生物化学检测地指标.因为丙酮酸是生物体呼吸作用地产物,无论是有氧还是无氧,都会产生丙酮酸,因而无法作为色氨酸酶活性地指示剂进行区分.同时吲哚能通过有明显颜色变化地化学反应观测到,而丙酮酸不能,所以试验中用吲哚地存在作为色氨酸酶活性地指示剂,而不用丙酮酸..为什么大肠杆菌是甲基红反应阳性,而产气杆菌为阴性?答:当细菌代谢糖产生酸时,培养基就会变酸,使加入培养基中地甲基红指示剂由橙黄色()转变为红色(),即甲基红反应.而大肠杆菌和产气肠杆菌在培养地早期均产生有机酸,但大肠杆菌在培养地后期仍能维持酸性,而产气肠杆菌则转化有机酸为非酸性末端产物,如乙醇、丙酮酸等,使升至大约.因此,大肠杆菌为阳性,产气肠杆菌为阴性..用紫外线进行诱变时,为什么要打开皿盖?为什么要在红光灯下操作紫外线不容易穿透玻璃,所以打开盖,自然光下容易光复活,红光下不会所以在红光下操作。

微生物实验报告思考题参考答案

微生物实验报告思考题参考答案

实验一、微生物的简单染色思考题1油镜与普通物镜在使用方法上有何不同?应特别注意些什么?答:油镜在使用时必须在载玻片与物镜之间滴加镜头油。

油镜使用过程中要注意两点:(1)、使用后镜头的清洁:镜面只能用擦镜纸擦,不能用手指或粗布,以保证光洁度,用完油镜必须进行“三擦”(观察完毕,上悬镜筒,先用擦镜纸擦去镜头上的油,然后再用擦镜纸沾取少量二甲苯(或者乙醇乙醚溶液)擦去残留的油,最后用擦镜纸擦去残留的二甲苯,后将镜体全部复原)。

(2)、.观察标本时,必须依次用低、中、高倍镜,最后用油镜。

当目视接目镜时,特别在使用油镜时,切不可使用粗调节器,以免压碎玻片或损伤镜面。

2、使用油镜时,为什么必须用镜头油?答:在使用普通显微镜时,当光线由反光镜通过玻片与镜头之间的空气时,由于空气与玻片的密度不同,使光线受到曲折,发生散射,降低了视野的照明度。

若中间的介质是一层油(其折射率与玻片的相近),则几乎不发生折射,增加了视野的进光量,从而使物象更加清晰。

3、镜检标本时,为什么先用低倍镜观察,而不是直接用高倍镜或油镜观察?答:低倍镜视野比较大,能看到的范围大,容易找到观察的目标,然后在用放大倍数高的高倍镜或油镜有目的的观察。

实验二、革兰氏染色(1)为什么必须用培养24 h以内的菌体进行革兰氏染色?答:24h以内的菌体处于活跃生长期,菌体细胞壁具有典型特征,而处于老龄的革兰氏阳性细菌壁结构开始发生变化,染色时会被染成红色而造成假阴性(2)要得到正确的革兰氏染色结果,必须注意哪些操作?哪一步是关键步骤?为什么?答:应注意如下几点:其一,选用活跃生长期菌种染色,老龄的革兰氏阳性细菌会被染成红色而造成假阴性;其二,涂片不宜过厚,以免脱色不完全造成假阳性;其三,脱色是革兰氏染色是否成功的关键,脱色不够造成假阳性,脱色过度造成假阴性(3)当你对未知菌进行革兰氏染色时,怎样保证操作正确,结果可靠?答:当要确证未知菌的革兰氏反应时,可用已知菌进行混合涂片,使二者染色条件保持一致,如果已知菌的结果与预期相符,则证明操作操作正确,结果可靠。

(完整版)微生物实验思考题

(完整版)微生物实验思考题

微生物实验思考题1、用油镜观察时应该注意哪些问题?在载破片和镜头之间加滴什么油?起什么作用?答:应该先用擦镜纸将镜头擦干净,以防上次实验的污染。

操作时,先低倍再高倍。

用完要擦掉油。

加滴香柏油。

作用:增加折光率,也就是增加了显微镜的分辨率.2、根据实验体会,谈谈应如何根据所观察微生物的大小,选择不同的物镜进行有效的观察.答:细菌用油镜,真菌用高倍镜.都是先用低倍镜找到目标后,再用高倍镜调到合适的视野和合适的清晰度.放线菌、酵母菌、多细胞真菌相对较大,用放大 40 倍的物镜就可以看了,细菌小,要用放大 1000 倍的物镜看,感觉还很小。

病毒那就要用电子显微镜看了。

3、哪些环节会影响革兰氏染色结果的正确性?其中最关键的环节是什么?答:涂片环节、加热固定环节、脱色环节;其中最关键的环节是脱色环节。

4、进行革兰氏染色时,为什么特别强调菌龄不能太老,用老龄细菌染色会出现什么问题?答:着色不均,染色效果不好。

阴性阳性不明显分不太清楚,问题是:不便于显微镜下观察是阳性菌还是阴性菌。

5、革兰氏染色时,初染前能加碘液吗?乙醇脱色后复染之前,革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌应分别是什么颜色?答:不可以.因为碘与染料会结合成大分子,使得染料分子不能穿过细胞的细胞壁,对实验结果造成影响。

脱色后复染前,革兰氏阳性菌呈紫色,阴性菌无色.6、不经过复染这一步,能否区别革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌?答:不行。

在复染之前,革兰氏阴性菌是无色透明的,在显微镜下很难观察到;或者脱色过度,也会造成阳性菌脱色,不经过复染,无法进一步区别。

7、你认为制备细菌染色标本时,应该注意哪些环节?答:1制备适宜的培养基2在超净工作台上进行,保持无菌环境3对培养基,接种环等物品的高温高压灭菌。

4倒置培养基,防止冷凝水内流8. 为什么要求制片完全干燥后才能用油镜观察?答:1、若未完全干燥,载玻片上的液体会污染油镜镜头。

镜头非常精密,被污染后不利于下次观察;2、若未完全干燥,水滴会影响油与玻璃之间折光率,造成视野不够清晰。

【高中生物】环境工程微生物学思考题及答案

【高中生物】环境工程微生物学思考题及答案

(生物科技行业)环境工程微生物学思虑题及答案现代环境工程微生物学思虑题及参照答案一、名词讲解1.孟德尔定律孟德尔定律是指孟德尔第必然律和孟德尔第二定律,即分别定律和自由组合定律。

分别定律是指:遗传性状由遗传因子决定,遗传因子在体细胞中成对出现,而在产生配子时相互分别,并独立地分配到不同样的性细胞中;自由组合定律是指:各种配子的数量相等,而且在形成配子的过程中两对或更多对遗传因子的组合是随机的。

2.连锁和连锁群连锁是指:来自同一亲本的两个基因在配子形成过程中有保留原来组合的倾向,这是由于这两个基因处在同一条染色体上的缘故,这类现象称为连锁。

同一染色体上相互连锁的基因称为连锁群,连锁群的数量等于单倍染色体的数量。

3.引起突变引起突变是利用物理的或化学因素办理微生物集体,促使少量个体细胞的DNA分子结构发生改变,在基因内部碱基配对发生差错,引起微生物的遗传性状发生突变。

引起突变其实不是新的突变,而是经过不同样的方式提高突变频率。

4.转变转变是指:同源或异源的游离DNA 分子(质粒和染色体DNA )被自然或人工感觉态细胞摄取,并获得表达的水平方向的基因转移过程。

依照感觉态成立的方式,转变可分为自然遗传转变和人工转变。

5.平易噬菌体当噬菌体侵入宿主细胞后,其核酸附着并整合在宿主细胞染色体上,和宿主的核酸同步复制,宿主细胞不裂解而连续生长,这类不引起宿主细胞裂解的噬菌体称作平易噬菌体。

6.宽泛性转导噬菌体可误包供体菌中的任何基因(包括质粒),并使受体菌获得各种性状的转导称为宽泛性转导。

宽泛性转导可分为两种:完好宽泛转导和流产宽泛转导。

7.F 因子F因子是一种核外质粒,决定着细菌的性别,即含有控制性菌毛合成的遗传信息,故称为致育因子或性质粒。

F 因子可整合到宿主染色体基因组上去而称为附加体,且能够正常或异常零散而成为各种菌株。

8.溶源化溶源化是指:以平易噬菌体感染非溶源性细菌细胞,并在附着位点的某一特定部位将噬菌体附加到细菌染色体上以成立溶源现象。

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(生物科技行业)微生物实验思考题参考答案及知识要点微生物实验思考题参考答案及知识要点(可能在整理时部分问题未能考虑全面,若有异议,请同学们自行从网络或课本上搜索查找)微生物实验思考题参考答案壹.酵母菌形态观察及死活细胞鉴别1.吕氏碱性美蓝染液浓度和作用时间的不同对酵母菌死细胞数量有何影响?是分析其原因。

美蓝是壹种无毒性的染料,它的氧化型呈蓝色,仍原型无色。

用美蓝对酵母的活细胞进行染色时,由于细胞的新陈代谢作用,细胞内具有较强的仍原能力,能使美蓝由蓝色的氧化型变成为无色的仍原型。

因此,具有仍原能力的酵母活细胞是无色的,而死细胞或代谢作用微弱的衰老细胞则呈蓝色或淡蓝色,借此即可对酵母菌的死细胞和活细胞进行鉴别。

美蓝浓度高了,代谢不太活跃的活细胞也会被染色,从而使观察到的死细胞较多,活细胞较少;反之,则代谢微弱的细胞也能仍原美蓝,不被染色,从而使观察到的死细胞较少,活细胞较多。

二.细菌的简单染色和革兰氏染色1.革兰氏染色中那壹步是关键?为什么?你是如何操作的?革兰氏染色的关键步骤是:乙醇脱色(是脱色时间)。

如果脱色过度,革兰氏阳性菌也可被脱色而被误认为是革兰氏阴性菌;如脱色时间过短,革兰氏阴性菌也可被脱色而被误认为是革兰氏阳性菌。

脱色时间的长短仍受涂片的厚薄,脱色是玻片晃动的快慢及乙醇用量的多少等因素的影响,难以严格规定(脱色是应当控制速度,脱色时间壹般为20—30s)。

2.固定的目的之壹是杀死菌体,这和自然死亡的菌体有何不同?自然死亡的菌体本身已经部分自溶,结构已经改变。

固定杀死细菌时细菌结构是保持死亡时的状态的。

3.不经复染这壹步能否区分革兰氏阳性菌和阴性菌?能。

在酒精脱色后,不被酒精脱色而保留紫色者为革兰氏阳性菌(G+),被酒精脱色为革兰氏阴性菌。

最后壹步用番红染液复染,是为了让结果更清楚。

4.涂片为什么要固定,固定适应注意什么问题?a杀死细菌且使菌体黏附和玻片上;b增加其对染料的亲和力。

固定时应注意:手持玻片,菌膜朝上,在微火过3次(手指触摸玻片反面,不烫手为宜),固定时应尽可能维持细胞原有形态,防止细胞膨胀或收缩。

三.霉菌放线菌的形态观察1.镜检时,如何区分基内菌丝和气生菌丝?壹般气生菌丝颜色较深,直生或分枝丝状,比基内菌丝粗;而基内菌丝色浅、发亮,可见到横隔膜,继而断裂成球状或杆状小体。

2.显微镜下细菌放线菌酵母菌和霉菌的主要区别是什么?放线菌和细菌需要在油镜下才能观察清楚,而霉菌和酵母菌在低倍镜下即可见到。

细菌:为细而短的单细胞微生物(个体微小),主要形态有:球、杆、螺旋状等。

(部分杆菌仍可形成芽孢)放线菌:存在分枝丝状体和菌丝体,革兰氏阳性菌,有孢子丝和孢子(球形、椭圆形、杆状、柱状)。

酵母菌:单细胞,菌体呈圆球、卵形或椭圆形,少数呈柠檬形、尖形等。

菌体比细菌大几倍到几十倍,部分处于出芽繁殖过程中菌体仍可观察到芽体,大多数菌体上仍有芽痕。

霉菌:菌丝和孢子的宽度通常比细菌和放线菌粗得多,常是细菌菌体宽度的几倍到几十倍,在低倍镜下即可见到,且仍可见到孢子囊梗、囊轴、孢子囊、包囊孢子等。

四.玻璃器皿的洗涤包扎和灭菌1.高压蒸汽灭菌开始时为什么要将锅内排尽?灭菌后为什么要待压力降低到“0”时,才能打开排气阀,开盖取物?因为空气的膨胀压大于水蒸汽的膨胀压,所以,当水蒸汽中含有空气时,在同壹压力下,含空气蒸汽的温度低于饱和蒸汽的温度。

如果压力未降到0时,打开排气阀,就会因锅内压力突然下降,使容器内的培养基由于内外压力不平衡(压力突然下降而发生复沸腾)而冲出烧瓶口或试管口,造成培养基等液体沾湿棉塞或溢出等事故。

2.设计实验方案,比较干热灭菌和湿热灭菌的效果。

以下试验方案有关操作均遵循无菌操作条件和等量原则。

(一)实验材料试管镊子酒精灯嗜热脂肪芽孢杆菌ATCC7053菌片纸片(和菌片同大小同材料)溴甲酚紫蛋白冻水培养基(已灭菌)等实验材料(材料有余)。

(二)对照组取9支洁净试管,分为A1B1C1三组(每3支壹组),将A1组中放入菌片,B1组中放入纸片,C1组中什么也不加;不经灭菌,直接加入溴甲酚紫蛋白冻水培养基(等量)。

(三)实验组取18支洁净试管,分为A21A22B21B22C21C22六组(每3支壹组),将A21A22组中加入菌片,B21B22中加入纸片,C21C22中什么也不加;其中A21B21C21进行160℃2小时干热灭菌;其中A22B22C22进行121℃20分钟湿热灭菌,灭菌完毕,冷却后加入溴甲酚紫蛋白冻水培养基(等量)。

(四)恒为培养将上述所有试管按分组在56℃恒温条件下培养48小时。

(五)结果处理将培养后的结果进行记录,制表进行比较,得出灭菌效果。

(六)重复试验多次(10几次)重复之上实验步骤,得出普遍结果。

3.为什么干热灭菌比湿热灭菌所需温度高时间长?在湿热条件下,有水蒸汽的作用:a高温水蒸汽导热比干空气要快;b高温水蒸汽冷凝变水时有放热过程;c高温水蒸汽能穿透细菌的细胞膜,直接进入细胞内破坏细胞;c高温水蒸汽能水解壹部分细胞结构,加速导热。

(湿热中细菌菌体吸收水分,蛋白质较易凝固,因蛋白质含水量增加,所需凝固温度降低;湿热的穿透力比干热大;湿热的蒸汽有潜热存在,每1克水在100℃时,由气态变为液态时可放出2.26kJ(千焦)的热量。

这种潜热,能迅速提高被灭菌物体的温度,从而增加灭菌效力。

)五.培养基的配置1.配制牛肉膏蛋白胨培养基,有哪些操作步骤?那几步易出错,如何防止?称取药品—加热溶化—分装—加棉塞—包扎—灭菌—搁置斜面易出错的步骤有:a称取药品称取时钥匙专用,瓶盖不要错盖,易吸水的药品要快速称取;b加热溶化加入药品后要用玻璃棒不停搅拌,以免糊底(在琼脂熔化过程中,应控制火力,以免培养基因沸腾而溢出容器,同时,需不断搅拌,以防琼脂糊底烧焦。

);c分装分装时培养基不能粘在三角瓶(或试管)口,以免接种时染菌;d搁置斜面斜面长度约试管长度壹半为宜。

2.配制培养基的壹般原则是什么?a目的明确b营养协调c理化适宜d经济节约六.平板菌落计数法1.平板菌落计数法的原理是什么?它适用于那些微生物的计数?平板菌落计数法是将等测样品经适当稀释后,其中的微生物充分分散为单个细胞,取壹定量的稀释液接种到平板上,经过培养,由每个单细胞生长繁殖而形成的肉眼可见的菌落,即壹个单菌落应代表原样品中的壹个单细胞。

统计菌落数,根据其稀释倍数和取样接种量即可换算出样品中的含菌数。

(可是,由于待测样品往往不易完全分散成单个细胞,所以,长成的壹个单菌落也可能来自样品中的2~3或更多个细胞。

因此平板菌落计数的结果往往偏低。

当下常使用菌落形成单位)。

平板计数法是根据微生物在固体培养基上所形成的壹个菌落是由壹个微生物繁殖而形成的现象进行的,也就是壹个菌落可代表壹种微生物(且不绝对)。

通常用来测定样品中所含细菌、孢子、酵母菌等单细胞微生物的数量。

2.菌落样液移入培养皿后,若不尽快地倒入培养基且充分摇匀,将会出现什么结果?为什么?出现的结果是:形成菌落过于集中,不能形成均匀分布的单菌落,导致无法计数。

因为:若不立即摇匀,菌体常会吸附在皿底上,不易形成均匀分布的单菌落,从而影响计数的准确性。

3.要获得本次试验的成功,那几步最为关键?为什么?a稀释菌液若在稀释时移液管混用可使稀释梯度不准确,从而导致计数误差(放菌液时吸管尖不要碰到液面,即每壹支吸管只能接触壹个稀释度的菌悬液,否则稀释不精确,结果误差大。

);b稀释倒平板1若再加入菌液不立即倒入培养基,可使菌体黏附于皿底;2若不注意培养基温度,温度过高会将菌体烧死,温度过低会使培养基壹倒入立即凝固,从而菌体不能均匀分布;3倒入培养基需立即摇匀,否则菌体常会吸附在皿底上,不易形成均匀分布的单菌落,从而影响计数的准确性;4选择倒平板的稀释梯度也是很重要的,壹般以三个连续稀释度中的第二个稀释度倒平板后所出现的平均菌落数在50个左右为宜,否则要适当增加(或减少)稀释度加以调整。

4.平板菌落计数法和显微镜直接计数法相比有何优缺点?微生物显微镜直接计数法随机性大,所以对菌体数量不能做出较为宏观,全面的反应.显微镜直接计数法壹般和血球计数板配套使用.但显微镜直接计数法的优点是快速,观察到马上能够计数,而计的是相应微生物总数。

平板菌落计数法最大的缺点是速度慢,需要平板上长出菌落壹段时间后才能计数.可是由于平板菌落计数法通常做梯度稀释,所以计数的线性范围大.由于是菌悬液涂布,所以比较均匀,能较好的反应菌落的疏密程度.重复性,平行性很好,而计的是活菌数。

是经典的计数方法.七.显微镜直接计数法1.为何用血细胞计数板可计得样品总菌值?叙述其适用范围。

a计数室体积壹定;b在显微镜下,不经染色不能分辨菌体的死活,使计数所得的数目为壹定体积内的总菌数,从而计得样品中总菌值。

适用范围:可单细胞存在的细菌酵母菌或显丝状生长的真菌,放线菌所生的孢子等。

2.为什么计数室内不能有气泡?试分析产生气泡的可能原因。

a气泡会占据计数室的空间,导致计数室中的菌体个数计数偏小,最后导致计数结果偏小。

b计数室内的气泡,可影响菌液的随机分布,使计数产生误差。

产生气泡原因:a操作不当,先放菌液再盖盖玻片;b计数室洗涤不干净;c盖玻片移动,造成空气进入而产生气泡。

3.试分析影响本实验结果的误差来源及提出改进措施?1、仪器误差:所用器材均应清洁干净,且且计数板计数区不应该有擦痕。

2、计数室内可能有气泡。

因为酵母细胞且没有染色,见起来是透明的,有气泡很容易被计入,使数值偏高;且且,气泡会影响菌悬液的随机分布。

改进:若产生气泡,则用吸水纸吸出。

3、菌体在计数板上分布不均,当用选取5格计数时,会造成很大误差。

改进:应使菌液自然流入且混匀,进行观察时尽可能多数几个格子。

4、配制稀释液时吸取的浓度过高或过低,导致稀释液浓度和原液不成正确比例,计算时产生误差。

应将原液摇晃均匀后取中部的液体进行稀释。

5、由于数菌体数目时视觉疲劳而导致的视觉误差。

应多人观察,取记录平均数。

6、计数时可能将格四周的菌都计算在内了,使数值偏高。

改进:谨遵壹个规则,计上不计下,计左不计右,不能够重复计数。

7、可能出现有出芽的酵母菌,将出芽的酵母菌按俩个计数了,使数值偏高。

改进:计数时,只有当芽体于母细胞壹样大的时候,才能计为俩个。

8、微量移液器的最小量程太大,在加样时,容易加多,使盖玻片鼓起,血球计数板所技术的体积变大,最终结果偏大。

改进:用量程的小的微量移液器且少加壹些。

八.微生物的纯培养技术1.如果壹项科学研究内容需从自然界中筛选到能产生高温蛋白酶的菌株,你将如何完成?写出实验方案(产蛋白酶菌株在酪素平板上能形成降解酪素透明圈)。

以下试验方案有关操作均遵循无菌操作条件壹材料准备1土壤【有机质(特别是蛋白质)含量丰富的土壤】2灭菌生理盐水(0.85%NaCl)3灭菌移液管4添加酪素的B—4(牛肉膏蛋白胨完全培养基)经灭菌5B—4斜面(经灭菌)6其他材料:接种环酒精灯等二操作方法1在盛有10ml灭菌生理盐水的烧杯中添加1g土壤,配成悬浮液;2稍静止后,用灭菌移液管移取部分上清液,将其制成10^4—10^6倍的稀释液;3用灭菌移液管吸取各稀释液用稀释倒平板法(或涂布平板法)将其接入添加酪素的B—4平板上;4在55—65℃下培养1—2天;5挑取形成降解酪素透明圈的菌落(透明圈直径D和菌落直径d之比较大者),转接入B—4斜面上培养;(若无特定菌落形成,则需另取土样从开始重复试验)6将B—4斜面上的菌落再用平板纯培养,依次重复2—3次后即可得到纯培养(镜检);7纯培养细菌中蛋白酶的提取及活性鉴定【摇瓶培养(若提取蛋白酶及其活性正常,则纯培养成功,否则,重取土样重复之上实验)】。

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