染液配制方法

染色配方计算和染液的配制—染色配方计算

测色与配色
染色配方计算
染色配方计算
某染色处方如下：
活性染料艳红x－3B
1%（owf）
NaCl（促染剂）
30ｇ·Ｌ-1
Na2CO3（固色剂）
15ｇ·Ｌ-1
浴比：1：20
织物 100 g
还记得这个处方吗？现在让我们计算各组分的用量吧。
染色配方计算
1、染料用量：活性染料艳红x－3B 1%（owf）
----owf（对织物重）（on weight of fabric）
公式： owf ＝（染料用量/织物重）×100% 1% = x / 100g x =1 g
举一反三：owf＝1% 如：织物重1g，织物重1kg，
染料用量 1？0mg ；染料用量 1？0g 。
染液浓度表示方法
2、助剂用量质量浓度（克/升浓度 g ·L-1 ）---与染液体积有关
首先计算染液体积浴比：织物的质量(ｇ)与染液的体积（mL）之比 1 : 20 = 100 ：y y = 2000mL = 2L
再计算助剂用量
计算公式： ρB =
NaCl ： 30 = z /2 z = 60ｇ Na2CO3 ： 15= z /2 z = 30ｇ
测色与配色
染料母液的配制
染液浓度表示方法
某染色处方如下：
活性染料艳红x－3B
1%（owf）
NaCl（促染剂）
30ｇ·Ｌ-1
Na2CO3（固色剂）
15ｇ·Ｌ-1
浴比：1：20
织物 100 g
你能理解其中的含义吗？

染液浓度表示方法
1、染料用量的表示方法 ----owf（对织物重）（on weight of fabric）定义：指染料用量相对于织物质量的百分数相当于质量分数公式：owf ＝（染料用量/织物重）×100%

常用染色液配方

实验室常用染色液配方1、吕氏(Loeffler)美蓝染色液A液：美蓝(Methylene blue) 0.3 克95%酒精毫升B液：氢氧化钾(KOH) 0.01 克蒸馏水100 毫升分别配制A液和B液，然后混合即成。

2、齐氏(Ziehl)石炭酸复红染色液A液：碱性复红(Basic fuchsin) 0.3 克95%酒精10.O 毫升B液：石炭酸(苯酚) 5.0 克蒸馏水95 毫升将碱性复红溶于95%酒精中，配成A液。

将石炭酸溶于蒸馏水中，配成B液。

将两者混合即成。

3、结晶紫染色液(Huclker改订)A液：结晶紫(Crystai violet) 2.5 克95%酒精25.0 毫升B液：草酸铵(NH4)2C2O4H2O 1.0 克蒸馏水100 毫升将结晶紫研细后，加入95%酒精，使之溶解，配成A液。

将草酸铵溶于蒸馏水，配成B液。

两液混合即成。

4、路戈氏(LugoI)碘液(革氏鉴别染色用)碘1.0克碘化钾2.0克蒸馏水300毫升先将碘化钾溶于少量蒸馏水中，再将碘溶于碘化钾溶液中，溶时可稍加热，最后加足蒸馏水量。

5、番红染色液(革氏鉴别染色用)番红O(Safranin O) 2.0克蒸馏水100毫升6、孔雀绿染色液(芽孢染色用)孔雀绿(Malachite green) 5.0克蒸馏水100毫升先将孔雀绿研细，加少许95%酒精溶解，再加蒸馏水。

7、Dorner黑素液(英膜染色用)黑素(Nigrosin) 10.0克蒸馏水100毫升福尔马林(40%甲醛) 0.5毫升将黑素在蒸馏水中煮沸5分钟，加入福尔马林作为防腐剂，用玻璃棉过滤。

8、刚果红染色液刚果红(Congo red) 2.0克蒸馏水100毫升9、稀释结晶紫染液(放线菌染色用)结晶紫染色液(同3) 5.0毫升蒸馏水95.010、乳酸石碳酸棉蓝染色液（真菌制片，短期保存）石炭酸10.0克甘油20.0毫升乳酸(比重l.21) 10.0毫升棉蓝0.02克蒸馏水10.0毫升将碳酸加在蒸溜水中加热溶化，加入乳酸和甘油，最后加入棉蓝，溶解即成。

常用染色液的配制

常用染色液的配制１．染料饱和酒精溶液的配制配制染色液常先将染料配成可长期保存的饱和酒精溶液，用时再予以稀释配制。

配制饱和酒精溶液，应先用少量95％酒精先在研钵中徐徐研磨，使染料充分溶解，再按其溶解度加于95％酒精之中，贮存于棕色瓶中即可。

附表1 几种常用染料在95%酒精中的溶解度(26℃)染料名称美蓝结晶紫龙胆紫碱性复红沙黄溶100mL95％酒精中的重量(g) 1.4813.8710.003.203.412．常用染色液的配制（１）碱性美蓝(亦称骆氏美蓝)染色液：取美蓝饱和酒精溶液30ml，加入0.01％氢氧化钾水溶液l00mL，混合即成。

此染色液在密闭条件下可保存多年。

若将其在瓶中贮至半满，松塞棉塞，每日拔塞摇振数分钟，并不时加水补充失去的水分，约1年后可获得多色性，成为多色美蓝染色液。

（２）草酸铵结晶紫(亦称赫克结晶紫)染色液：取结晶紫饱和酒精溶液2mL，加蒸馏水18mL稀释10倍，再加入1％草酸铵水溶液80mL，混合过滤即成。

（３）革兰氏碘溶液：将碘化钾2g置乳钵中，加蒸馏水约5mL。

再加入碘片1g，予以研磨，并徐徐加水，至完全溶解后，注入瓶中，被加蒸馏水至全量为300mL即成。

此液可保存半年以上，当产生沉淀或褪色后即不能再用。

（４）沙黄水溶液：沙黄也称番红花红。

将沙黄饱和酒精溶液以蒸馏水稀释10倍即成。

此液保存期以不超过4个月为宜。

（５）石炭酸复红染色液：取3%复红酒精溶液10mL，加入5％石炭酸水溶液90mL混和过滤即成。

（６）稀释石炭酸复红染色液：将石炭酸复红染色液以蒸馏水稀释10倍即成。

（７）3％盐酸酒精(亦称含酸酒精)：加浓盐酸3mL于95%酒精97mL中即成。

（８）瑞士染色色液：取瑞氏染料0.1g置乳钵中，徐徐加入甲醇，研磨以促其溶解。

将溶液倾入有色中性玻瓶中，并数次以甲醇洗涤乳钵，亦倾入瓶内，最后使全量为60mL即可。

将此瓶置暗处过夜，次日滤过即成。

此染色液须置于暗处，其保存期约为数月。

实验室常用染色液配方

实验室常用染色液配方1、吕氏(Loeffler)美蓝染色液A液：美蓝(Methylene blue) 0.3 克95%酒精毫升B液：氢氧化钾(KOH) 0.01 克蒸馏水100 毫升分别配制A液和B液，然后混合即成。

2、齐氏(Ziehl)石炭酸复红染色液A液：碱性复红(Basic fuchsin) 0.3 克95%酒精10.O 毫升B液：石炭酸(苯酚) 5.0 克蒸馏水95 毫升将碱性复红溶于95%酒精中，配成A液。

将石炭酸溶于蒸馏水中，配成B液。

将两者混合即成。

3、结晶紫染色液(Huclker改订)A液：结晶紫(Crystai violet) 2.5 克95%酒精25.0 毫升B液：草酸铵(NH4)2C2O4H2O 1.0 克蒸馏水100 毫升将结晶紫研细后，加入95%酒精，使之溶解，配成A液。

将草酸铵溶于蒸馏水，配成B液。

两液混合即成。

4、路戈氏(LugoI)碘液(革氏鉴别染色用)碘1.0克碘化钾 2.0克蒸馏水300毫升先将碘化钾溶于少量蒸馏水中，再将碘溶于碘化钾溶液中，溶时可稍加热，最后加足蒸馏水量。

5、番红染色液(革氏鉴别染色用)番红O(Safranin O) 2.0克蒸馏水100毫升6、孔雀绿染色液(芽孢染色用)孔雀绿(Malachite green) 5.0克蒸馏水100毫升先将孔雀绿研细，加少许95%酒精溶解，再加蒸馏水。

7、Dorner黑素液(英膜染色用)黑素(Nigrosin) 10.0克蒸馏水100毫升福尔马林(40%甲醛) 0.5毫升将黑素在蒸馏水中煮沸5分钟，加入福尔马林作为防腐剂，用玻璃棉过滤。

8、刚果红染色液刚果红(Congo red)2.0克蒸馏水100毫升9、稀释结晶紫染液(放线菌染色用)结晶紫染色液(同3) 5.0毫升蒸馏水95.010、乳酸石碳酸棉蓝染色液（真菌制片，短期保存）石炭酸10.0克甘油20.0毫升乳酸(比重l.21) 10.0毫升棉蓝0.02克蒸馏水10.0毫升将碳酸加在蒸溜水中加热溶化，加入乳酸和甘油，最后加入棉蓝，溶解即成。

实验用染色液的配制

实验用染色液的配制1．黑色素液水溶性黑素10g，蒸馏水100mL, 甲醛（福尔马林）0.5mL。

可用作荚膜的背景染色。

2．墨汁染色液国产绘图墨汁40mL，甘油2mL，液体石炭酸2mL。

先将墨汁用多层纱布过滤，加甘油混匀后，水浴加热，再加石炭酸搅匀，冷却后备用。

用作荚膜的背景染色。

3．吕氏(Loeffier)美蓝染色液A液：美蓝(methylene blue, 又名甲烯蓝)0.3g, 95%乙醇30mL;B液：0.0l% KOH l00mL。

混合A液和B液即成，用于细菌单染色，可长期保存。

根据需要可配制成稀释美蓝液，按1：10或1：100稀释均可。

4．革兰氏染色液(1)结晶紫(crystal violet)液：结晶紫乙醇饱和液(结晶紫2g溶于20mL95%乙醇中)20mL，1%草酸铵水溶液80mL 将两液混匀置24h后过滤即成。

此液不易保存，如有沉淀出现，需重新配制。

(2)卢戈(Lugol)氏碘液：碘1g，碘化钾2g，蒸馏水300mL。

先将碘化钾溶于少量蒸馏水中，然后加入碘使之完全溶解，再加蒸馏水至300mL即成。

配成后贮于棕色瓶内备用，如变为浅黄色即不能使用。

(3)95%乙醇：用于脱色，脱色后可选用以下(4)或(5)的其中一项复染即可。

(4)稀释石炭酸复红溶液：碱性复红乙醇饱和液(碱性复红1g, 95%乙醇l0mL, 5%石炭酸90mL混合溶解即成碱性复红乙醇饱和液)，取石炭酸复红饱和液l0mL加蒸馏水90mL即成。

(5)番红溶液：番红O(safranine，又称沙黄O)2.5g, 95%乙醇100mL，溶解后可贮存于密闭的棕色瓶中，用时取20mL与80mL蒸馏水混匀即可。

以上染液配合使用，可区分出革兰氏染色阳性(G+)或阴性(G-)细菌，G-被染成蓝紫色，G+被染成淡红色5. 鞭毛染色液A液：丹宁酸5.0g, FeCl3 1.5g，15%甲醛(福尔马林)2.0mL，l%NaOH 1.0mL，蒸馏水l00mL;B液：AgNO3 2.0g, 蒸馏水100mL。

考马斯亮蓝G250染液的配制

考马斯亮蓝G250染液的配制
1R250。

2100mg考马斯亮蓝G-250，溶于50mL 90%乙醇中，加入85%的磷酸100mL，最后用蒸馏水定容到1000mL。

此溶液在常温下可放置一个月。

310mg G-250，溶于5mL的95%乙醇中，此时溶液为蓝色，再加入了10mL的85%的磷酸，溶液为血红色，可是加水定容到100mL时又成为了蓝色，据文献说应该是褐色，原因：配置溶液的容器未洗干净，可能沾有蛋白质类药品。

用乙醇把容器全部认真的洗干净后重配，不过配好之后需要过滤才可以用。

4中文名为考马斯亮蓝G250，简称G250，分子式为C47H48N3O7S2Na，分子量为854.02，分析纯。

考马斯亮蓝G250是常用蛋白染色剂，在游离状态下呈红色，当它与蛋白质结合后变为青色。

蛋白质含量在0～1000μg范围内，蛋白质一色素结合物在595nm下的吸光度与蛋白质含量成正比，故可用比色法测定。

5中文名为考马斯亮蓝R250，简称R250，分子式为C45H44N3O7S2Na，分子量为825.97，考马斯亮蓝R250是常用蛋白染色剂，可用于染色丙烯酰氨凝胶和琼脂糖凝胶中的蛋白质。

6、考马斯亮蓝G250和R250都可以作为染色剂，不同的配方、不同的染色方法适合于不同性质的蛋白质。

7、考马斯亮蓝分为G250、R250和R350等，R为红蓝色，G为蓝绿色。

例如考马斯亮蓝G250即二甲花青亮蓝。

微生物染色液配制及染色法

微生物染色液配制及染色法2.1 美蓝染色法2.1.1 吕氏碱性美蓝染色液美蓝0.3g95%乙醇30mL0.01%氢氧化钾溶液100mL 将美蓝溶解于乙醇中，然后与氢氧化钾溶液混合。

2.1.2 染色法将涂片在火焰上固定，待冷。

滴加染液，染1～3min，水洗，待干，镜检。

2.1.3 结果菌体呈蓝色。

2.2 革兰氏染色法2.2.1 结晶紫染色液结晶紫1g95%乙醇20mL1%草酸铵水溶液80mL将结晶紫溶解于乙醇中，然后与草酸铵溶液混合。

2.2.2 革兰氏碘液碘1g碘化钾2g蒸馏水300mL将碘与碘化钾先进行混合，加入蒸馏水少许，充分振摇，待完全溶解后，再加蒸馏水至300mL。

2.2.3 沙黄复染液沙黄0.25g95%乙醇10mL蒸馏水90mL将沙黄溶解于乙醇中，然后用蒸馏水稀释。

2.2.4 染色法2.2.4.1 将涂片在火焰上固定，滴加结晶紫染色液，染1min，水洗。

2.2.4.2 滴加革兰氏碘液，作用1min，水洗。

2.2.4.3 滴加95%乙醇脱色，约30s；或将乙醇滴满整个涂片，立即倾去，再用乙醇滴满整个涂片，脱色10s。

2.2.4.4 水洗，滴加复染液，复染1min。

水洗，待干，镜检。

2.2.5 结果革兰氏阳性菌呈紫色。

革兰氏阴性菌呈红色。

注：亦可用1：10稀释石炭酸复红染色液作复染液，复染时间仅需10s。

2.3 耐酸性染色法(萎－倪二氏法)2.3.1 石炭酸品红染色液碱性品红0.3g95%乙醇10mL5%酚水溶液90mL将品红溶解于乙醇中，然后与酚溶液混合。

2.3.2 3%盐酸－乙醇浓盐酸3mL95%乙醇97mL2.3.3 复染液吕氏碱性美蓝染色液。

2.3.4 染色法2.3.4.1 将涂片在火焰上加热固定，滴加石炭酸品红染色液，徐徐加热至有蒸气出现，但切不可使沸腾。

染液如因蒸发减少时，应随时添加。

染5min，倾去染液，水洗。

2.3.4.2 滴加盐酸－乙醇脱色，直至无红色脱落为止(所需时间视涂片厚薄而定，一般为1～3min)，水洗。

Harris苏木素染液的新配制

3.2 氧化剂添加要适时。Harris苏木素染色周期短，我们发现与氧化剂的添加时间有关。Harris苏木素原配方是在近100℃时加入氧化汞后，继续用小火加温。而实际工作中，根据观察配制过程，当苏木素染液温度在91℃左右时，添加氧化汞，即能使氧化汞完全分解于苏木素液中，又不会很快完全氧化，使染液一直处于染色力最强的三氧化苏木素状态，达到Harris苏木素染液长期最佳使用效果。
3.3 媒染剂剂量减少。苏木红要对细胞具有强的亲和力，必须加入媒染剂——硫酸铝钾。从苏木精分子的结构式来看不可能结合很多的铝离子，故Harris苏木素原配方常用1g苏木素配20g硫酸铝钾为媒染液，在实际应用中，当冷却和久置后有大量沉淀生成，甚至有明矾结晶析出。以上不良现象主要是因为媒染剂用量过大。我们根据文献报道，用1g苏木素配8.8g硫酸铝钾，不但节约试剂，而且减轻了媒染剂副作用的影响。
1.5 次日晨，将配制的苏木素液进行过滤。加入2g柠檬酸搅匀，此时的 Harris液为绛红色。
2．结果
配制好的染液即可使用。切片染1′—3′，涂片30″—1′，然后入水、分化、蓝化，胞核呈鲜蓝色。
3．讨论
3.1 Harris苏木素染液,有很多优点,所用试剂较少,操作步骤简单。但在实际运用中也有些缺点,如染色周期短,有沉淀现象和氧化膜等。我们根据文献报道反复摸索,对Harris苏木素染液进行了一些调整。
1.2 将2.5g苏木素放入25ml无水乙醇中，搅拌至完全溶解。
1.3 将22g硫酸铝钾加入500ml蒸馏水内，加热溶解，然后加入苏木素无水乙醇液，使溶液尽快沸腾后，移离开火焰。
1.4 搅拌溶液，待温度下降至91℃左右时，将氧化汞缓缓加入。此时，烧瓶内液体变成紫红色，但不会沸腾溅出。继续搅拌至看不到氧化汞的黄颜色为止，迅速将烧瓶放置于冷水中，用纱布置于瓶口处盖之。注意，瓶口不能用橡皮塞，否则会有氢氧化铝凝胶形成。

HE染色和吉姆萨染液

HE染色和吉姆萨染液试剂和方法如下。

一、HE染色试剂：苏木素染液：苏木精1g；无水乙醇25mL；硫酸铝钾10g；蒸馏水350mL；碘酸钾0.1g；冰醋酸10mL。

A 液：用25mL 无水乙醇溶解1g苏木精，摇动即可溶解。

B 液：用350mL 蒸馏水溶解10g硫酸铝钾，摇动或振荡即可溶解。

把A 液和B 液混合，加入碘酸钾摇动至颜色加深。

最后加入10mL冰醋酸，摇动颜色变为深葡萄酒红色。

染液配制当日即可应用于染色。

酸化液：醋酸20-35mL加蒸馏水至700mL。

伊红染液：储液：取1g伊红，溶于100mL 95%的乙醇，待溶解完全后加几滴冰醋酸至染液呈半透明状，避光保存备用。

工作液：取一定量的伊红储液，加入等量70%乙醇，此液即为伊红染液的工作液。

染色步骤：（1）细胞爬片放用PBS漂洗3次，每次5min，无水乙醇固定5min，风干。

（2）95%乙醇1min，75%乙醇1min，三蒸水1min。

( 3 ) 浸洗5 % 的醋酸液( 酸化液) 数秒。

( 4 ) 苏木精染液3 - 5 m i n，胞核呈橙红色。

( 5 ) 自来水冲洗至颜色变蓝。

( 6) 盐酸乙醇液分化数秒，颜色再次返红。

(7) 自来水再次冲洗，返蓝。

( 8) 伊红染液5min，流水漂洗15min左右。

二、吉姆萨染色试剂：吉姆萨染液配制：取吉姆萨粉末1g溶于66ml甘油中研磨混匀，然后放置55-60℃水浴2h，冷却后加入66ml甲醇中混匀，过滤后棕瓶分装保存。

PBS甲醇液：PBS与甲醇一比一混合。

染色步骤：（1）细胞爬片使用PBS漂洗3次，每次5min。

（2）加PBS甲醇液静置2min，去掉PBS甲醇液。

（3）加甲醇固定10min，去掉甲醇，加入新无水甲醇漂洗去掉。

（4）加吉姆萨染液2ml/25cm2，2min后加入8ml水稀释并晃动染液2min，去掉染液。

（5）流水冲洗10~20s，湿润时观察。

88ml 1g
碘化钾
2g
蒸馏水 95%酒精溶液
300ml
0.1%碱性品红水溶液
[操作步骤] 1．Stirling 氏结晶紫溶液过滤滴于涂片上 50~60 秒钟。
2．充分水洗。
3．革兰氏碘溶液 30 秒钟。 4．水洗。
5．95%酒精溶液分化至清晰为止。 6．水洗。 7．0.1%碱性品红溶液 30 秒钟；
先将碘化钾溶于少量蒸馏水中，再将碘溶于碘化钾溶液中，溶解时可稍加热，最
后补足蒸馏水量。配成后贮于棕色瓶内备用，如变为浅黄色即不能使用。
脱色剂：
95%乙醇
或丙酮乙醇溶液
100 mL
95%乙醇
70 mL
丙酮
30 mL
3 . 番红花红染色液： 2.5%番红 95%酒精溶液
10 mL
蒸馏水
90 mL
21.革兰氏染色液 (1)结晶紫(cristal violet)液：结晶紫乙醇饱和液(结晶紫 2g 溶于 20mL95%乙醇中)20mL， 1%草酸铵水溶液 80mL。将两液混匀置 24h 后过滤即成。此液不易保存，如有沉淀出现，需重新配制。 (2)芦戈(Lugol)氏碘液：碘 1g，KI 2g，蒸馏水 300mL。先将 KI 溶于少量蒸馏水中，然后加入碘使之完全溶解，再加蒸馏水至 300mL，即成。配成后贮于棕色瓶内备用，如变为浅黄色能使用。 (3)95%乙醇：用于脱色，脱色后可选用以下(4)或(5)的其中一项复染即可。 (4)稀释石炭酸复红溶液：碱性复红乙醇饱液(碱性复红 1g，95%乙醇 10mL，5%石炭酸 90mL)10mL，加蒸馏水 90mL。 (5)番红溶液：番红 O(safranine O，又称沙黄 O)2.5g，95%乙醇 100mL，溶解后可贮存于密闭的棕色瓶中，用时取 20mL 与 80mL 蒸馏水混匀即可

巴氏染液配制

巴氏染液配制1、苏木精：Harris苏木精：苏木精5g溶于无水乙醇50ml ，硫酸铝钾100g溶于蒸馏水1000ml ，混合后煮沸，待稍冷加入氧化汞2.5g，再煮沸2min，用前加冰醋酸20ml改良Gill氏半氧化苏木精：苏木精2g, 无水乙醇250ml, 硫酸铝17.6g,（可减半量）碘酸钠0.2g, 柠檬酸2g，甘油50ml, 蒸馏水750ml。

配制方法：将苏木精溶于无水乙醇，硫酸铝溶于蒸馏水，完全溶解后两液混合，依次加入碘酸钠，柠檬酸，甘油。

此配方特点：配制时勿须加温。

配后即可应用。

性能稳定，基本消除了过度氧化的苏木精结晶污染涂片的麻烦。

唯染色时间较长，须5～10min。

2、桔黄G6(orangeG6)：桔黄G 0.5g，溶于95%酒精100ml, 加磷钨15mg。

3、EA染液：EA36：由三种贮备液按比例混合而成：0.5%亮绿(light green)酒精溶液45ml，0.5%裨士麦褐(bismark brown)酒精溶液10ml，0.5%伊红Y(eosin yellowish)酒精溶液45ml，混合后，再加磷钨酸0.2g，饱和碳酸锂水溶液1滴。

EA50：3%亮绿水溶液10ml，纯甲醇250ml，20%伊红Y 水溶液20ml，冰醋酸20ml，磷钨酸2g (水溶后加入)，95%酒精700ml 。

染色方法1、经固定的涂片入水、苏木精染核、盐酸酒精分化、返兰同HE染色。

2、70%、80%、95%酒精逐级脱水各1min。

3桔黄G6 3～ 5 min 。

4、95%酒精二缸漂洗各 1 min 。

5、EA36或EA50 5 min 。

6、95%酒精二缸漂洗各 1 min 。

7、无水酒精二缸漂洗各 1 min 。

8、二甲苯二缸透明各 1 min 。

9、中性树胶封片。

染色结果核深蓝色, 鳞状上皮底层、中层及表层角化前细胞浆染绿色，表层不全角化细胞胞浆染粉红色, 完全角化细胞胞浆呈桔黄色, 红细胞染鲜红色，粘液染淡蓝色或粉红色。

苏木精苏木素染色液溶液配制方法

苏木精苏木素染色液溶液配制方法Revised by BLUE on the afternoon of December 12,2020.华越洋苏木素(苏木精)染色液的配制各类溶液的配制方法如下：1) Harry`s苏木素苏木素 1g 无水酒精 10ml硫酸铝钾 20g蒸馏水 200ml氧化汞冰醋酸 8ml分别用无水酒精溶解苏木素，蒸馏水加热溶解硫酸铝钾，然后两液混合并煮沸，加入氧化汞，继续加热和搅拌至溶液为深紫色，立即冷却，恢复至室温后过滤备用。

(2) 改良Lillie-Mayer`s苏木素苏木素无水酒精 20ml硫酸铝钾 5g蒸馏水330ml碘酸钠250mg甘油150ml冰醋酸 10ml分别用无水酒精溶解苏木素，蒸馏水溶解硫酸铝钾，然后两液混合后，依次加入碘酸钠、甘油和冰醋酸。

(3) Mayer`s苏木素苏木素100mg蒸馏水100ml碘酸钠 20mg硫酸铝铵 5g柠檬酸100ml水合氯醛5g用蒸馏水溶解苏木素后，依次加入碘酸钠、硫酸铝铵和水合氯醛，过滤后备（4）Ehrlich氏苏木素（1886）苏木素 1g无水酒精 50ml甘油50ml硫酸铝钾蒸馏水 50ml冰醋酸 5ml将苏木素溶于无水酒精里，硫酸铝钾溶于蒸馏水中，然后所有的试剂都加在一起，充分搅拌均匀后，放于窗台上阳光充足的地，让其慢慢氧化成熟，大约需四个星期，才可使用。

该液量种很好的细胞核染色液，用它染后，细胞核染色清晰，不易过染。

对于用酸脱钙组织细胞核的染色，该试剂优于其它各种苏木素。

这种自然氧化成熟的苏木素，可长期使用，不会变质。

但染色时间较长，需要20分钟以上。

如需急用而苏木素又未成熟时，该液可加入20-30mg的碘酸钠，以促使其迅速氧化成熟，但这试剂配成后，就不是原来的苏木素，不能长期使用，但起码可用半年左右。

（5）Weigert氏铁苏木素A液：苏木素 1g无水酒精100ml将苏木素溶于酒精，让其慢慢氧化成熟，约四周以后，便可以使用，或者用成熟的10%的苏木素酒精配制，即时可用。

常用染色液的配制

常用染色液的配制一、骆氏美蓝染色液（碱性美蓝染色液）甲液：美蓝0.3克，95%酒精30ML乙液：0.01%氢氧化钾溶液100ML甲、乙混合即可，密闭保存，一年后可获多色性。

二、革兰氏染色液1、草酸铵结晶紫染液甲液：结晶紫2G，95%酒精20ML，或结晶紫饱和酒精溶液2ML加蒸馏水18ML。

乙液：草酸铵0.8克，蒸馏水80ML。

甲、乙混合，静置48小时，过滤后备用，可较久贮存。

2、革兰氏碘溶液碘片1G，碘化钾2G，蒸馏水300ML碘化钾+3－5ML蒸馏水，溶解后+碘片，摇匀后+蒸馏水至足量。

3、95%酒精，用作脱色剂4、碱性复红染色液碱性复红（一品红）0.1G，蒸馏水100ML可用沙黄水溶液或稀释石炭酸复红液代替此液。

沙黄水溶液：沙黄饱和酒精溶液+10倍蒸馏水，保存期小于4个月。

稀释石炭酸复红染色液：石炭酸复红液10ML+蒸馏水90ML三、抗酸染色液1、石炭酸复红染色液3%碱性复红酒精溶液10ML+5%石炭酸水溶液90ML，过滤即可。

2、盐酸酒精液浓盐酸3ML+95%酒精97ML四、克利特氏荚膜染色液1、美蓝溶液：美蓝1G+96%酒精10ML+100ML蒸馏水2、碱性红溶液：碱性复红0.03G+1ML96%酒精+99ML蒸馏水五、瑞特氏染色液1、0.1G瑞特氏染粉研磨，再加中性甘油3ML，充分研磨，后徐徐加入甲醇液60ML，边研边搅，存于棕色瓶中过夜，过滤后贮于棕色瓶中，越久越好。

2、磷酸盐缓冲液甲液：磷酸氢二钠23.86G，1000ML蒸馏水。

乙液：磷酸二氢钾9.07G，1000ML蒸馏水。

4份甲液+1份乙液即可。

常用染色液的配制.

常用染色液的配制1.番红水液番红0.1g溶入蒸馏水,定溶至100ml。

2. 番红酒液番红0.5g或1g溶入50%酒精,定溶至100ml3. 固绿染液固绿0.1g溶入95%酒精，定溶至100ml。

4. 碘-碘化钾染液碘化钾溶入100ml蒸馏水，再加入1g碘，溶解后即可使用。

5. 苏丹Ⅲ（或Ⅳ）染液将0.1g苏丹Ⅲ或Ⅳ溶解在50ml丙酮中，再加入70%酒精50ml。

6.改良苯酚品红染液原液A：将3g碱性品红溶入100ml 70%酒精，此液可长期保存。

原液B：将10mlA液加入到90ml 5%苯酚水溶液中。

原液C：将55mlB液加入到6ml的冰醋酸和6ml的38%的甲醛中。

染色液：取C液20ml，加45%冰醋酸80ml，充分混匀，再加入1g山梨醇，放置14天后使用，可保存3年。

7. 间苯三酚染液将5g间苯三酚溶入100ml 95%酒精（若溶液呈黄色，即为失效）。

8. 中性红染液将0.1g中性红溶入100ml蒸馏水，用时稀释10倍。

9. 钌红染液将5~10mg钌红溶入25~50ml蒸馏水，现用现配。

10.龙胆紫染液将0.2g龙胆紫溶入100ml蒸馏水。

现常用结晶紫代替。

必要时可将医用紫药水稀释5倍后代用。

11.铁醋酸洋红染液先将100ml 45%醋酸水溶液置入200ml的锥形瓶中煮沸，移去火苗，然后慢慢地分多次加入1g 洋红粉末（切记不可一次倒入）。

待全部倒入后，再煮沸1~2min，并悬入一生锈的小铁钉于染液中，过1min后取出，使染色剂略含铁质，以增加染色性能。

静置12h后过滤于棕色瓶中备用（置于避光处）。

12.苏木精染液苏木精的配方很多，常用的有如下3种：配方Ⅰ：苏木精水溶液0.5g苏木精溶入100ml煮沸的蒸馏水中，静置24h后可使用。

配方Ⅱ：代氏苏木精（De larfield’s haematoxylin）甲液：苏木精1g + 无水酒精6ml乙液：硫酸铝铵（铵矾）10g + 蒸馏水100ml丙液：甘油25ml + 甲醇25ml分别配制甲、乙两液，将甲液一滴滴地加入乙液中，充分搅拌后，放入广口瓶中用纱布蒙住瓶口，置于温暖和光线充足处7~10天，再加入丙液，混匀后静置1~2月，至颜色变为深紫色后，过滤备用，可长期保存。

革兰氏染色液的配制,超详细

革兰氏染色液的配制一、实验试剂：（结晶紫、草酸铵、碘、碘化钾、番红）1. 结晶紫溶液：A液：结晶紫：2g，95%乙醇：20ml。

B液：草酸铵：0.8g，蒸馏水：80ml。

需在用前24小时将A液. B液混合，过滤后装入试剂瓶内备用.2. 碘液：碘：1g，碘化钾：2g蒸馏水：300ml。

出碘与碘化钾混合并研磨，加入几毫升水，使其逐渐溶解，然后研磨，继续加入少量蒸馏水至完全溶解，最后补足水量。

也可用少量蒸馏水，先将碘化钾完全溶解，再加入碘片，待完全溶解后，加水至300ml。

3. 脱色液：95%乙醇。

4. 复染液：A.贮存液：番红：2.5g，95％乙醇：100ml。

B.应用比例：A液：10ml，蒸馏水：90ml。

菌片制备：染色的第一步是制作涂片。

菌液涂片时，用接种环蘸取菌液点在载玻片上，标本可直接在玻片上涂布，菌落涂片时，先取生理盐水1滴，置玻片上，用接种针挑去菌落，在盐水中涂布。

涂片时必须注意应轻轻操作。

猛烈的动作会改变菌细胞原有的排列形式，或造成细菌鞭毛脱落，影响结果的准确性。

制备的涂片应自然干燥，并经火焰固定，固定温度不易过高，以玻片背面接触手背不烫为准，否则可能使细胞形态改变。

将固定后的涂片进行染色。

操作步骤：1 ．涂片将培养的不同菌分别作涂片（注意涂片切不可过于浓厚），干燥、固定。

固定时通过火焰1一2 次即可，不可过热，以载玻片不烫手为宜。

2 ．染色( 1 ）初染加草酸铰结晶紫一滴，约一分钟，水洗。

( 2 ）媒染滴加碘液冲去残水，并覆盖约一分钟，水洗。

( 3 ）脱色将载玻片上面的水甩净，并衬以白背景，用95 ％酒精滴洗至流出酒精刚刚不出现紫色时为止，约20 一30 秒钟，立即用水冲净酒精。

( 4 ）复染用番红液染1 一2 分钟，水洗。

( 5 ）镜检干燥后，置油镜观察．革兰氏阴性菌呈红色，革兰氏阳性菌呈紫色。

以分散开的细菌的革兰氏染色反应为准，过于密集的细菌，常常呈假阳性。

( 6 ) 同法在一载玻片上以大肠杆菌与枯草芽孢杆菌混合制片，作革兰氏染色对比。

GUS染色液配制

一染色液配制1）X－Gluc母液：X-Gluc，用N-N-二甲基酰胺(DMF)配成20mM的贮存液，分装成每管100μL，保存于-20℃。

2）X－Gluc基液（50mM PBS，pH7.0）。

配制方法：50mM NaH2PO4・0.78g/100ml；50mM Na2HPO4 1.79g/100ml共同溶解；Na2EDTA （10mM，372mg），Triton-100（0.1％，100μl）,K3 [Fe(CN) 6] （铁氰化钾）（0.5mM，16.5mg）K4 [Fe(CN) 6] （亚铁氰化钾）（0.5mM，21.1mg）染色液：50μl X-Gluc母液＋450μl基液需要试剂：5-溴-4-氯-3-吲哚-β-葡萄糖苷酸酯（X－Gluc）；N-N-二甲基甲酰胺(DMF) ；NaH2PO4；Na2HPO4 ；Na2EDTA ；Triton-100；K3 [Fe(CN) 6] （铁氰化钾）；K4 [Fe(CN) 6] （亚铁氰化钾）二染色方法：1.将准备好的试材浸泡在染液，于25—37℃保温1小时至过夜。

2.叶片等绿色材料转入70%乙醇中脱色2—3次，至阴性对照材料呈白色。

3.肉眼或显微镜下观察，白色背景上的蓝色小点即为Gus表达位点。

三实验原理适宜的反应条件下，β- 葡萄糖苷酸酶（GUS）可将X－Gluc水解成蓝色物质，因此具有GUS活性的部位或位点呈现蓝色或蓝色斑点，可用肉眼或显微镜观察到。

gus基因是目前常用的一种报告基因，是β－D－葡萄糖苷酸酶(gus)基因，其表达产物β-葡萄糖苷酸酶(GUS)能催化裂解一系列的β－葡萄糖苷酸，它可以将5-溴-4-氯-3-吲哚-β-葡萄糖苷酸酯（X－Gluc）分解为蓝色的物质,也可以将4-甲基-伞形花酮-β-D-葡萄糖苷酯(4-MUG)分解为蓝色物质。

其检测方法简单、快速、灵敏、稳定，且背景活性低。

gus基因的最大优点是它能测定外源基因表达的具体细胞和组织部位，这是其它报告基因所不能及的。

结晶紫染色液配制及使用说明

结晶紫染色液配制及使用说明结晶紫是一种常见的生物染色剂，广泛用于细胞学、组织学和遗传学的研究中。

其配制和使用方法相对简单，下面将针对结晶紫染色液的配制和使用进行详细的说明。

一、结晶紫染色液的配制方法：1.准备材料：结晶紫粉末、乙醇（95%浓度）、去离子水。

2.称取适量的结晶紫粉末，通常在0.1-0.5克之间，根据需要适量调整。

3. 将结晶紫粉末加入约50ml的去离子水中，充分搅拌溶解。

4.将溶解好的结晶紫溶液过滤，以去除杂质。

5.加入等量的乙醇，充分混合。

6.将混合后的溶液过滤，去除沉淀和残渣，得到结晶紫染色液。

7.将染色液保存在干燥、避光的容器中，可长期保存。

二、结晶紫染色液的使用方法：1.准备待染物：细胞、组织或染色玻片。

2.将待染物放置在盛有结晶紫染色液的容器中，保证染液能完全覆盖待染物。

3.染色时间一般为5-30分钟，根据实验要求适当调整。

4.染色结束后，用去离子水轻轻洗涤待染物，以去除多余的染色剂。

5.可选择性地进行漂白、脱水和透明处理，以增强显微镜观察效果。

6.将待染物倒置在载玻片上，擦干水分，待其自然干燥。

7.在干燥后，倒入透明胶泥或透明树脂，覆盖玻片，封闭完整后放置于恒温箱中固化。

8.使用显微镜观察和记录结果。

三、结晶紫染色液的注意事项：1.结晶紫为有毒物质，操作时需佩戴口罩和手套，避免直接接触皮肤和吸入气体。

2.染色液需保存在避光的容器中，避免光照下的降解和失效。

3.染色时间和染液浓度可以根据实验需求进行调整，过长的染色时间可能会导致背景染色过深。

4.在染色过程中，需严密控制温度，避免过高的温度引起细胞或组织的脱离。

5.不同的染物可能需要不同的染色条件，可以根据实验要求进行优化。

6.使用过的染色液需专门处理，以防止对环境和健康产生危害。

7.在显微镜观察过程中，可以通过调节光源的亮度和滤光片的选择，以获取最佳的观察效果。

总之，结晶紫染色液的配制和使用方法相对简单，但在操作时仍需注意安全和实验细节，以保证染色效果和实验结果的准确性。

HE染色试剂的配制

HE染色试剂的配制1．苏木素染液（1）Harri苏木素染液苏木素 1g无水乙醇 10ml硫酸铝钾 20g蒸馏水 200ml氧化汞 0.5g冰醋酸 8ml先用无水乙醇溶解苏木素，用蒸馏水加热溶解硫酸铝钾；然后将该两液合并煮沸，加入氧化汞，继续加热和搅拌溶液至深紫色，随即用冰水冷却，恢复至室温后过滤备用。

使用前加入冰醋酸并混匀、过滤。

（2）Gill改良苏木素液苏木素 2g无水乙醇 250ml硫酸铝钾 17g蒸馏水 750ml碘酸钠 0.2g冰醋酸 20ml先用无水乙醇溶解苏木素，用蒸馏水溶解硫酸铝钾；然后将该两液混合，再依次加入碘酸钠和冰醋酸。

使用前过滤。

（3）Mayer改良苏木素液A液：苏木素 2g无水乙醇 40mlB液：硫酸铝钾 100g蒸馏水 600ml将苏木素溶于无水乙醇中（A液）；稍加热，使硫酸铝钾溶于蒸馏水中（B液）。

将A液与B液混合后煮沸2min，再用蒸馏水补足至600 ml，加入400mg碘化钠充分混匀。

染液呈紫红色。

2. 盐酸－乙醇分化液浓盐酸 1 ml70%乙醇 99 ml3．伊红液（1）0.25～0.5%伊红Y水溶液伊红Y 0.25～0.5 g蒸馏水 100 ml冰醋酸 1滴（2）0.5%伊红Y-氯化钙水溶液伊红Y 0.5 g蒸馏水 100 ml无水氯化钙 0.5 g（3）0.25～0.5%伊红Y-乙醇溶液。

伊红Y 0.25~0.5 g80%乙醇 100 ml4．石炭酸-二甲苯混合液石炭酸 1份二甲苯 3份。