动物细胞培养基本技术与原理
动物细胞培养
早期重组胚胎
b
另一头绵羊的子宫 妊娠、出生 克隆羊多利
3.多利面部毛色 是：白色
黑面绵羊去 核卵母细胞
白面绵羊乳 腺细胞核
根据遗传学原理 说明判断依据： 多利全部的核基因 都来自白面绵羊
4.若黑面绵羊的基因 型为AA，白面绵羊的 基因型为aa，则克隆 羊的基因型为：aa
a
重组细胞 电脉冲刺激
早期重组胚胎
动物胚胎或幼龄动物的组织、器官 胰蛋白酶处理 原代培养特点：细 单个细胞 加培养液稀释 原代
胞贴壁、接触抑制
配置细胞悬液
转入培养瓶 分瓶
培养
遗传物质 未改变
细胞株 遗传物 质已改 变 细胞系
10代细胞 50代细胞 无限传代
传代 培养
动物胚胎或幼龄动物的组织、器官 胰蛋白酶处理 传代10代以内， 单个细胞 加培养液稀释 遗传物质不改
5.动物细胞培养技术的应用
1.蛋白质生物制品的生产 如病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体 2.应用于基因工程 主要用于作为受体细胞 3.检测有毒物质，判断某种物质的毒性 4.培养正常或各种病变的细胞，用于细 胞的生理、药理、病理研究 如用于筛选抗癌药物
植物组织培养和动物细胞培养的比较
比较项目 原理 培养基性质 培养基特有成分 培养结果 培养目的 植物组织培养 动物细胞培养 细胞的全能性 细胞增殖 固体培养基 液体培养基 蔗糖 植物激素 葡萄糖 动物血清 植物体 细胞株、细胞系 快速繁殖、培育 获得细胞或细胞 无病毒植株 分泌蛋白 植物幼嫩部分或 胚胎或幼龄动物 花药 的器官或组织 无菌无毒，适宜 无菌无毒，适宜 条件 条件
5.体细胞核移植技术的应用前景
1.在畜牧业中可 以加速家畜遗传 改良的进程。
2.保护濒危物种。
动物细胞培养实验报告
动物细胞培养实验报告第一篇：一、实验目的1、学习并掌握动物细胞培养的无菌操作技术。
2、学习并掌握细胞传代培养的方法。
3、学习并掌握用倒置荧光显微镜观察细胞细胞形态。
二、实验原理细胞培养（cell culture）：细胞在体外条件下生长，细胞不再形成组织。
动物细胞培养（animal cell culture）就是从动物机体中取出相关的组织，将它分散成单个细胞（使用胰蛋白酶或胶原蛋白酶）然后，放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。
由于细胞具有生长和自我复制的能力，为细胞体外培养和研究提供可能。
动物细胞培养可分为原代培养和传代培养。
原代培养（primary culture）即直接从动物机体分离、获得组织细胞，在无菌条件下，用胰蛋白酶消化或机械分散等方法，将动物组织分散成单个细胞开始首次培养长出单层细胞的方法。
传代培养（subculture）当细胞生长增值达到一定密度，用胰蛋白酶将细胞消化分散成单细胞，将细胞转移到新的培养皿中扩大培养的方法。
高等生物是由多细胞构成的整体，在整体条件下要研究单个细胞或某一群细胞在体内的功能活动是十分困难的，但如果把或细胞拿到体外培养、增殖并进行观察和研究，则方便简单的多。
被培养的动物细胞是非常好的实验对象和实验研究材料，对体外培养的活细胞进行研究可以帮助人类探索防治各种疾病途径和机制，也可以人为地诱导和改变细胞的遗传性状和特性，因此，动物细胞体外培养技术是研究细胞分子机制非常重要的实验手段，被广泛应用于医学、生物技术、基因工程等研究领域。
三、细胞培养相关设施及材料1、细胞培养室无菌操作区：只限于细胞培养及其它无菌操作，与外界隔离。
孵育区：培养箱设定的条件为37℃，5%CO2。
制备区：培养液及有关培养用液体的制备，液体制备后应该在净化工作台进行过滤除菌。
储藏区：包括冰箱、干燥箱、液氮罐等。
清洗区和消毒灭菌区：清洗区为相对污染区，消毒灭菌区与清洗区分开。
2、细胞培养常用基本设施：荧光显微镜、超净工作台、孵箱、电热鼓风干燥箱、冰箱、液氮罐、消毒器、恒温水浴槽、滤器等。
动物细胞培养
动物细胞培养简介动物细胞培养是一种在体外控制环境下培养和繁殖动物细胞的技术，广泛应用于生物医学研究、药物筛选、疾病治疗等领域。
动物细胞培养是通过提供适当的养分和生长条件，使细胞可以在无体内环境的情况下生长和繁殖。
培养基选择动物细胞培养的首要任务是提供合适的培养基，以满足细胞的生长和繁殖需求。
培养基通常由基础培养液和补充物组成。
基础培养液提供细胞生长所需的基本营养物质，如糖、氨基酸、维生素等。
补充物则包括生长因子、激素、抗生素等，以促进细胞生长和抑制细菌的污染。
常用的培养基有DMEM（Dulbecco最小培养基）、RPMI （Roswell Park红斯威尔纸培养基）、MEM（最小必需培养基）等。
选择适合特定细胞类型和研究目的的培养基对细胞的生长和研究结果至关重要。
细胞分离和传代在动物细胞培养过程中，细胞通常需要经过分离和传代的步骤，以保持细胞的健康状态并扩散细胞数量。
细胞分离细胞分离是将细胞从组织中分离出来的过程。
常用的细胞分离方法包括胶原酶消化法、胰蛋白酶消化法、机械剪切法等。
分离得到的细胞可以直接用于培养，也可以进行进一步的传代。
细胞传代细胞传代是将已培养细胞进行分离并移植到新的培养皿中的过程，以维持细胞的持续生长。
传代可以通过机械分离、胶原酶等酶处理或稀释离心等方法进行。
传代过程中需要注意的是细胞的密度和周期，以避免细胞过度生长或死亡。
培养条件在动物细胞培养过程中，提供适当的培养条件对细胞的生长和繁殖至关重要。
温度和湿度动物细胞通常在37℃下生长，因此培养箱和孵育器需要保持恒定的温度。
同时，湿度的控制也是必要的，以避免细胞脱水。
CO2和pH值大多数动物细胞需要CO2的存在来维持酸碱平衡。
因此，在培养过程中，需要添加适量的CO2到培养箱中，以维持合适的pH值。
一般来说，细胞培养需要在5% CO2下进行，pH范围为7.2-7.4。
搅拌和通气为了促进细胞的生长和分裂，培养基需要定期搅拌以保持养分的均匀分布。
动物细胞培养技术
动物细胞培养技术动物细胞培养技术是生物学领域中的一项重要技术，它可以帮助科学家们研究动物细胞的结构、功能和生理过程。
通过培养动物细胞，科学家可以模拟生物体内的生理环境，从而更好地理解细胞的生物学特性。
本文将介绍动物细胞培养的基本原理和常用的培养技术。
一、动物细胞培养的基本原理动物细胞培养是指将动物体内的细胞取出并在体外特定的培养基中进行培养的过程。
培养基是一种模拟生物体内环境的营养液，它提供了细胞所需的必要营养物质和生长因子。
在培养基中，细胞可以获得适当的营养和生长条件，从而保持其生物学特性并进行增殖。
动物细胞培养的基本原理包括以下几点：1. 细胞来源：细胞可以来源于动物组织、器官或体液中，常用的细胞来源包括胎儿组织、胚胎组织、肿瘤组织等。
2. 细胞分离：细胞从组织中分离的方法通常包括机械分离、化学分离和酶解分离。
分离后的细胞可通过离心等方式得到单个的细胞悬液。
3. 培养基选择：根据细胞的特性和要求，选择合适的培养基。
培养基可以分为无血清培养基和含血清培养基，无血清培养基常用于细胞实验室中。
4. 细胞培养条件：通过调整培养温度、湿度、pH值、氧气含量等条件，提供合适的环境促进细胞的生长和增殖。
5. 细胞传代：当细胞达到一定密度时，需要进行细胞传代以保持其活力。
传代的方法通常是将细胞分散至新的培养容器中，以维持细胞的适宜密度。
二、常用的1. 无血清培养技术：无血清培养基是一种不含胎牛血清的培养基，通过添加人工合成的生长因子和营养物质来满足细胞的生长需求。
无血清培养技术避免了胎牛血清中含有的未知因子对实验结果的干扰，提高了实验的可重复性。
2. 原代细胞培养技术：原代细胞培养是将从动物体内直接获得的组织进行分离和培养。
这种方法可用于细胞的初次培养和研究。
但由于原代细胞在培养中只能进行有限的传代，其使用寿命较短，因此需要定期重新取材。
3. 细胞系的建立：细胞系是细胞通过传代培养，并保持了一定生物学特性和遗传稳定性的细胞群。
动物细胞培养技术的发展
动物细胞培养技术的发展随着现代科技的不断发展，动物细胞培养技术正在逐步成为生命科学领域的重要研究手段。
动物细胞培养技术可以使科研人员对生命体内的细胞和分子进行深入的研究，从而更好地理解细胞和生命活动的本质。
本文将简要介绍动物细胞培养技术的基本原理、发展历程以及应用前景。
一、动物细胞培养技术的基本原理动物细胞培养技术是一种将分离的动物细胞放入培养基中，使其在适宜的环境下进行生长和繁殖的技术。
通常情况下，细胞培养基中会添加生长因子、营养物质、激素等物质，以保证细胞的正常生长和分裂。
在培养期间，科研人员可以通过各种手段对细胞进行操控、观察和分析，以获得有关生命体内各种细胞和分子的重要信息。
二、动物细胞培养技术的发展历程动物细胞培养技术的发展始于上世纪50年代，当时科学家们开始研究动物细胞的生长和繁殖机制，并尝试将其在培养基中进行体外培养。
然而，由于当时技术水平的限制，细胞培养的成活率和繁殖能力都较低，甚至无法维持长时间的培养。
随着科技水平的不断提高，人们逐渐解决了细胞培养过程中遇到的各种问题，开发出了更加成熟的动物细胞培养技术体系。
现在，动物细胞培养已经成为了现代生命科学领域的重要手段之一。
三、动物细胞培养技术的应用前景动物细胞培养技术具有广泛的研究和应用前景。
例如，在医学领域中，科学家们可以通过动物细胞培养技术研究癌症、病毒感染等疾病的治疗机制，并筛选出合适的治疗药物。
在生物技术领域中，动物细胞培养技术也被广泛应用于细胞克隆、蛋白质表达等方面。
此外，动物细胞培养技术还可以用于呼吸、毒性等方面的研究，并被广泛应用于化妆品、医疗器械、食品等商品的安全性评价。
总之，动物细胞培养技术作为生命科学中的一项重要技术，在未来的发展中将会发挥越来越重要的作用。
科学家们将继续在动物细胞培养技术的基础上，不断探索生命体内细胞和分子的奥秘，以期为人类的健康福祉做出更加卓越的贡献。
动物细胞培养基本技术
幻灯片1细胞培养基本技术幻灯片2细胞培养的甚本概念●传代：●细胞在培养器皿中生长一定时间后，被分开接种到新的培养器皿中。
●原代培养●取自体内新鲜组织并置于体外条件下生长的细胞在传代之前称为原代培养。
幻灯片3●细胞培养：使用单个细胞悬液●组织培养：使用组织块（O.5～1立方毫米）或薄片（厚0.2 毫米）●器官培养：使用器官原基或器官的一部分或整个器宫幻灯片4原代培养细胞的生命归宿●原代培养期●传代期●衰退期幻灯片5幻灯片6●有限细胞系，无限细胞系●细胞系 cell line●细胞株 cell strain幻灯片7培养细胞的分类根据形态大致的不同，主要2类：上皮样成纤维细胞样其它，不定型幻灯片8上皮样细胞型名称：仅形态上似体内来源：来源于外胚层，内胚层细胞如：皮肤及其衍生物消化道，乳腺，肺泡上皮性肿瘤形态：类似体内的上皮细胞扁平，不规则多角形，中有圆形核幻灯片9生长特点易相连成片相靠—紧密相连—成薄层—铺石状幻灯片10幻灯片11幻灯片12成纤维细胞样细胞名称：凡在培养中形态与成纤维细胞类似的来源：由中胚层间充质组织起源的组织如：真正的成纤维细胞心肌，平滑肌，成骨细胞，血管内皮形态：似体内成纤维细胞的形态胞体梭形或不规则三角形胞质向外伸出2—3个长短不等的突起中有卵圆形核幻灯片13生长特点排列成放射状并不紧靠连成片，常有几个伸长的细胞突起幻灯片14幻灯片15培养细胞的特性●培养细胞的生长方式●贴附生长：●必须贴附于支持物表面才能生长。
见于各种实体瘤细胞●悬浮生长：●于悬浮状态下即可生长，不需要贴附于支持物表面。
见于各种造血系统肿瘤细胞幻灯片16每代贴附生长细胞的生长过程●游离期●贴壁期●潜伏期●对数生长期●停止期（平台期）幻灯片17●游离期：●细胞接种后在培养液中呈悬浮状态．也称悬浮期。
此时细胞质回缩，胞体呈圆球形。
● 10分钟一4小时幻灯片18●贴壁期：●细胞附着于底物上，游离期结束。
细胞株平均在10分钟一4小时贴壁。
动物细胞培养技术的进展及应用
动物细胞培养技术的进展及应用动物细胞培养技术是一种生物医学研究中极为重要的技术，主要用于生产药品、细胞学、分子生物学和免疫学等领域的研究。
自从细胞培养技术的出现，它的应用范围越来越广泛，也越来越深入，本文将为您介绍动物细胞培养技术的进展及应用。
一、动物细胞培养技术的研究进展1. 细胞培养的基本原理细胞培养的基本原理是利用体外条件来模拟体内环境，为细胞提供适宜的营养物和生理调节因子，使细胞在体外生长、分化、增殖。
2. 培养基的制备培养基的制备是动物细胞培养技术中的关键步骤，它能够为细胞提供必需的营养物和生长因子，如氨基酸、维生素、激素等。
目前，常用培养基包括麦克尼五十五培养基、迈格林五十三号培养基等。
3. 细胞培养的技术方法细胞培养的技术方法主要有悬浮培养和附着培养两种方式。
其中，悬浮培养常用于细胞生长阶段的初步生长，主要是用于细胞的扩增；附着培养主要用于细胞的育种。
4. 细胞分离技术细胞分离技术将组织或器官中的细胞分离出来并对其进行分级培养。
常用的细胞分离技术主要包括胰酶、碎草酸和牛血清等。
5. 细胞传代技术细胞传代技术是指将已经生长到一定程度的细胞离心，将细胞培养上清液丢弃并重悬细胞，再一次培养出与上一代相同的数量和质量的细胞。
其目的是为了维持细胞的正常生理状态和扩大培养规模。
二、动物细胞培养技术的应用方向1. 生产药品细胞培养技术的重要应用之一就是生产药品。
细胞培养可以生产多种药品，如激素、抗体、血液制品等，与传统药品相比，细胞培养药品具有高纯度、低污染的优点。
2. 动物学研究细胞培养技术在动物学研究中也起着重要的作用。
细胞培养可以用于体外模拟动物器官的建立，从而研究生物功能和对病原体的免疫反应等。
3. 生物技术领域的应用细胞培养技术在生物技术领域也广泛应用。
例如细胞间相互作用的研究、生物反应器的建立、基因工程的研究等。
4. 医学领域的应用细胞培养技术在医学领域也有广泛的应用，如癌症的研究、干细胞和组织工程的应用等，这些领域都离不开细胞培养技术。
动物细胞培养原理
动物细胞培养原理
动物细胞培养是一种基于细胞生物学原理的实验技术，用于在体外环境中维持和增殖动物细胞。
其基本原理可以归结为以下几点：
1. 细胞培养基的准备：动物细胞培养基是一种含有营养物质、生长因子和激素的培养液。
它提供了细胞生长所需的基本养分和环境条件。
培养基的配方可以根据不同细胞类型的要求进行调整。
2. 细胞来源和分离：动物细胞通常来自活体组织或已经培养的细胞系。
活体组织需要进行分离，通过消化酶或机械切碎等方法将组织细胞单元分离开来。
3. 细胞接种和传代：分离得到的细胞被接种到含有培养基的培养皿中，放入培养箱内进行培养。
细胞根据其生长速度和密度定期传代，即将细胞从原培养皿中剥离并转移到新的培养皿中。
4. 培养环境的控制：细胞培养中，一系列环境因素需要得到严格控制，如温度、湿度、气体浓度和pH值等。
这些条件的维
持可以使用培养箱、CO2和空气混合器以及培养皿的设计来
实现。
5. 感染与检测：细胞培养过程中，存在着细菌、真菌、病毒等微生物的污染风险。
为了防止细胞感染，通常会添加抗生素或抗真菌剂到培养基中。
同时，也需要进行细胞的纯度和活性检测，如形态学观察、细胞计数、细胞周期的测定以及特定蛋白
质或基因的表达分析等。
总而言之，动物细胞培养是一项复杂而精细的技术，依靠培养基的配制、细胞来源和分离、细胞接种和传代、培养环境的控制以及感染与检测等步骤来实现。
这项技术的发展和应用对于细胞生物学、药物研发、组织工程等领域有着重要的意义。
043动物细胞工程-第四章第三节 细胞的基本培养技术
4．重新加入TdR培养基(浓度同上)进行第2次阻断，作用16 h。
5．再弃掉TdR培养基，Hanks液洗2—3次后换上普通培养基。第2次 TdR释放0 h时取样则细胞处于G1/S期交界处；如2-7 h取样则为不同 阶段的S期细胞。 注意：具体TdR作用和释放的时间应参考每一种待 同步化细胞的细胞周期各时相测定的参考值，也可根据经验确定。
有的只有永生性和无异体接种致癌性，有些则相反（恶性）。
第四节 细胞系和细胞株的建立 一、细胞系和细胞株的种类 1．初代培养 初代培养又称原代培养，即直接从体内 取出的细胞、组织和器官进行的第一次的 培养物。
2．细胞系 初代培养物开始第一次传代培养后的细胞，即称之为细胞 系。如细胞系的生存期有限，则称之为有限细胞系(finite cell line)；已获无限繁殖能力能持续生存的细胞系，称连续细胞 系或无限细胞系(infinite cell line)。
位是否准确、组织是否保持活性、材料处理是否恰当，直接
1.鸡胚组织的取材：用于病毒与疫苗的研究
受精鲜蛋--孵化箱37℃孵育9-12d--从气室处
破壳--挑取鸡胚--按需取材。
2.鼠胚组织的取材：常用材料，易于培养。
杀死小鼠---75%酒精溶液整体消毒2--3s---固
定---剪开皮肤解剖取材。
2.取鼠胚：常用 材料，易于培养。
一次进行传代之前的时期，一个特征性的必然 的生长阶段。
完成了从体内环境到体外环境的过渡和适
应过程，恢复了分裂增殖与生长发育 的能力
取材——分离细胞——接种
一、原代培养
优点：组织和细胞刚刚离体，生物学特性未发生很 大变化，仍具有二倍体遗传特性，最接近和反映体内生 长特性，很适合作药物测试、细胞分化等实验研究。 （一）．组织取材 决定实验的成败。 取材是原代培养的最初环节，取材的部
动物细胞培养技术与应用
动物细胞培养技术与应用近年来，动物细胞培养技术越来越受到广泛关注和应用。
动物细胞培养技术能够提供一种高效、可重复、可控的生物制造平台，广泛应用于医药、生物科技、农业、食品和环境等领域。
本文将从基本原理、培养价值、应用领域等方面综述动物细胞培养技术的相关内容。
1.基本原理动物细胞培养技术是利用体外细胞培养技术使动物细胞在特定的培养基中繁殖和分化的过程。
在细胞培养中，必须提供足够的营养物质和适宜的环境条件，以维持细胞的正常生长、分裂和分化等生理功能，同时不断移除代谢废物，保持培养基内的成分和水平的动态平衡。
细胞培养的主要流程包括细胞的来源、细胞的分离、细胞的培养、细胞的检测和细胞的储存等环节。
2.培养价值细胞培养技术作为一种新型的生物制造系统，与传统的生物制造方法相比，有着明显的优势。
首先，细胞培养技术可以通过体外大规模培养已知功能和性状的细胞，实现单一和纯化产物的生产，避免了传统制备方法复杂、低效、昂贵等缺点。
其次，细胞培养技术还能使基因重组、修饰和表达更加方便和精准，避免了传统的生物试验与生产之间的差异。
最后，细胞培养技术还能提供量身定制的生物试验平台，用于研究动物细胞代谢、毒理学、病理学等方面的问题。
3.应用领域（1）制药业动物细胞培养技术已经成为现代制药业中生产重要药物的主要手段。
利用细胞培养技术可以制备大量高质量、高纯度的药物，避免了传统制备方法复杂、低效、成本高昂的情况。
细胞培养技术所得到的药物小分子毒性低、有效性高，已经成为现代药物开发的主要方向之一。
（2）生物医学研究细胞培养技术也是生物医学研究的重要手段之一。
利用细胞培养技术，可以研究细胞的生长、分化、代谢以及生理功能，有助于探索疾病形成的机制、评估新药的效果和安全性等问题。
（3）食品工业细胞培养技术可以使得肉类、奶制品和卵制品等食品的生产更加高效、环保、健康、可控，避免了动物残留药物、抗生素等问题。
同时，细胞培养技术还可以在最短时间内开发出一系列的新鲜和安全的食品产品，满足当前多样化、高品质的食品需求。
动物细胞融合与单克隆抗体、细胞培养原理和基本技术
植物体细胞杂交过程3.融合过程：为什么灭活的病毒能作诱导剂？动物细胞融合物理法：化学法：生物法：诱导融合的方法原理：细胞膜的流动性过程：离心、震动、电激聚乙二醇（PEG)灭活的病毒动、植物细胞融合的主要区别用途：最重要的用途是制备单克隆抗体单克隆抗体的制备•单克隆抗体:单个细胞克隆产生的化学性质单一特异性强的抗体设计方案：⏹利用效应B细胞产生抗体的功能⏹利用肿瘤细胞无限增殖的特性⏹利用细胞融合的技术将两种细胞融合获得杂交瘤细胞⏹利用动物细胞培养技术大量培养杂交瘤细胞单克隆抗体的制备骨髓瘤细胞免疫小鼠体外培养体内培养(“生物导弹”—单抗导向，药物为弹头看书上53页图，分组讨论，单抗制备过程分哪几步？请用箭头把以下代表单克隆抗体制备过程步骤的图解的字母按正确顺序连接起来。
顺序是？有梦想，才会有创造！生物种间杂交想像图已成功的动物细胞融合实例有很多，如人—小鼠、人—兔、人—鸡、鼠—兔、鸡—鼠等上百种融合细胞。
甚至已成功完成了酵母菌—鸡、人—胡萝卜等细胞的融合。
想了解更多信息，可通过网络、电视、杂志等途径关注细胞融合和单克隆抗体的最新信息。
•••••扦插生根发芽成为植株培养植物克隆丰富了人民的生活转基因植物•外源目的基因细胞、组织、器官克隆种子、植株抗蚜虫小麦抗旱耐盐碱水稻；富含铁的水稻；富含β胡萝卜素水稻•无菌温度营养••上能反映体内状态。
采用原代培养细胞进行药物测试、细胞分化等，效果较好•••细胞系•细胞株二体内、外细胞的差异•体内细胞：机体神经体液调节和其他类型细胞影响基因表达受到外来信号调节增殖过程中不断发生着分化（由一般到特殊）高度特化的结构和功能•体外细胞：失去机体神经体液调节和其他类型细胞影响细胞的许多外来信号被切断特定分化基因表达减弱或停止而进化中保守的增殖活动维持（由特殊到一般）与体内细胞结构和功能的差异特征：失去原有形态，分化特性减弱形态和功能趋于单一一定代数后衰老死亡，或发生转化，获不死性而成为能无限传代三培养细胞的类型及其特点••四培养细胞的生存条件•••••••••••••。
《动物细胞培养技术》课件
动物细胞培养技术可以用于组织工程和再 生医学领域，为损伤或病变的组织和器官 提供替代疗法。
02
动物细胞培养的基本原理
细胞周期与细胞分裂
细胞周期
描述细胞生长和分裂的阶段，包 括间期和分裂期。
细胞分裂
细胞繁殖的方式，包括有丝分裂和 减数分裂。
细胞分裂调控
介绍细胞分裂的调控机制，如周期 蛋白、激酶等。
调整细胞浓度
将分离出的单个细胞调整到合适的浓度。
接种
将调整好的细胞悬液接种到培养容器中，轻轻晃 动容器使细胞均匀分布。
培养
将接种好的容器放置在恒温、恒湿、恒光的培养 箱中培养，定期观察记录细胞的生长情况。
细胞观察与检测
01
02
03
04
形态观察
定期观察细胞的形态变化，如 细胞大小、形态、染色深浅等
。
• 干细胞治疗是一种新兴的治疗方法，利用干细胞的再生和分化能力来修复或替换受损的组织和器官。动物细胞培养技术在 干细胞治疗领域的应用，为干细胞分离、培养和扩增提供了重要的技术支持，有助于推动干细胞治疗的发展。
动物细胞培养技术的发展前景 干细胞治疗领域的应用
药物筛选与毒性测试
药物研发过程中，需要进行大量的药物筛选和毒性测试。动物细胞培养技术可以 模拟人体细胞对药物的反应，为药物筛选和毒性测试提供更为准确和可靠的数据 支持，有助于加速新药的研发进程。
动物细胞培养技术广泛应用于生物医 学、药物研发、食品安全等领域。
培养基是动物细胞培养的关键因素， 它为细胞提供营养、生长因子和适宜 的生存环境。
动物细胞培养技术的外培养动物细胞。
20世纪初，随着组织培养技术 的不断发展，动物细胞培养技术
逐渐成熟。
21世纪初，随着基因编辑技术 的发展，动物细胞培养技术在疾 病治疗、药物研发等领域的应用
动物实验细胞实验报告
一、实验目的1. 掌握动物细胞培养的基本操作技术。
2. 了解细胞培养过程中可能出现的常见问题及其解决方法。
3. 观察细胞在不同培养条件下的生长状态，了解细胞生长规律。
二、实验原理动物细胞培养是指将动物体内的细胞取出，在体外条件下进行培养、繁殖的过程。
细胞培养技术是生物学研究的重要手段，广泛应用于细胞生物学、分子生物学、遗传学等领域。
本实验采用动物细胞培养技术，通过观察细胞在不同培养条件下的生长状态，了解细胞生长规律。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：小鼠胚胎成纤维细胞、胎牛血清、DMEM培养基、青霉素、链霉素、无菌培养皿、无菌移液器、细胞计数板等。
2. 实验仪器：细胞培养箱、倒置显微镜、超净工作台、离心机、电子天平等。
四、实验步骤1. 准备工作（1）将小鼠胚胎成纤维细胞接种于无菌培养皿中，放入细胞培养箱中培养。
（2）配制DMEM培养基，加入青霉素、链霉素，混匀后过滤除菌。
2. 细胞传代（1）将培养好的细胞取出，用无菌移液器吸取适量的细胞悬液，加入无菌离心管中。
（2）以1500r/min的速度离心5分钟，弃去上清液。
（3）加入适量的DMEM培养基，混匀后用无菌移液器吸取适量的细胞悬液，接种于新的无菌培养皿中。
（4）将培养皿放入细胞培养箱中培养。
3. 细胞计数（1）用细胞计数板对细胞进行计数，计算细胞密度。
（2）根据细胞密度调整细胞传代比例。
4. 观察细胞生长状态（1）用倒置显微镜观察细胞在不同培养条件下的生长状态。
（2）记录细胞形态、细胞密度、细胞周期等指标。
五、实验结果与分析1. 细胞生长状态在适宜的培养条件下，细胞呈长梭形，排列整齐。
随着培养时间的延长，细胞密度逐渐增加，细胞体积逐渐增大。
2. 细胞计数结果经过多次传代，细胞密度逐渐增加，细胞计数结果如下：第1代：1.5×10^6个/mL第2代：2.0×10^6个/mL第3代：2.5×10^6个/mL第4代：3.0×10^6个/mL3. 细胞周期分析通过观察细胞形态，发现细胞处于不同的生长阶段，包括G1期、S期、G2期和M 期。
动物细胞培养实验报告
一、实验目的1. 掌握动物细胞培养的基本原理和方法。
2. 熟悉动物细胞培养过程中常用的仪器和试剂。
3. 通过动物细胞培养实验，了解细胞生长、增殖、分化的过程。
二、实验原理动物细胞培养是指将动物组织或器官中的细胞取出，在体外模拟体内环境，使其在适当的营养和条件下生长、增殖、分化。
动物细胞培养是生物学、医学、药理学等领域的重要研究手段。
三、实验材料1. 试剂：胎牛血清、DMEM培养基、青霉素、链霉素、胰蛋白酶。
2. 仪器：超净工作台、细胞培养箱、移液器、培养皿、显微镜等。
四、实验方法1. 细胞复苏：将冻存的细胞取出，用无菌生理盐水洗涤，加入适量DMEM培养基，在37℃、5%CO2培养箱中复苏。
2. 细胞传代：将复苏后的细胞用胰蛋白酶消化，加入适量的DMEM培养基终止消化，用移液器吹打细胞，制成单细胞悬液。
将单细胞悬液接种于培养皿中，在37℃、5%CO2培养箱中培养。
3. 细胞观察：在显微镜下观察细胞的生长状态，记录细胞生长、增殖、分化的过程。
4. 细胞传代：待细胞铺满培养皿底部时，用胰蛋白酶消化细胞，制成单细胞悬液。
将单细胞悬液接种于新的培养皿中，重复上述步骤。
五、实验结果1. 细胞复苏：复苏后的细胞在显微镜下观察到细胞呈圆形，细胞质清晰，细胞核明显。
2. 细胞生长：细胞接种后，在培养箱中培养，细胞逐渐铺满培养皿底部。
细胞生长过程中，细胞体积逐渐增大，细胞核逐渐增多。
3. 细胞增殖：细胞生长过程中，细胞数量逐渐增多，细胞铺满培养皿底部的时间逐渐缩短。
4. 细胞分化：在培养过程中，部分细胞发生分化，形成不同形态的细胞。
如神经细胞、肌肉细胞等。
六、实验讨论1. 细胞培养过程中，温度、CO2浓度、培养基成分等条件对细胞生长、增殖、分化具有重要影响。
实验中应严格控制这些条件，以确保细胞正常生长。
2. 细胞传代过程中，应注意防止污染。
操作应在超净工作台中进行，使用无菌器材，避免细菌、真菌等微生物污染。
3. 细胞培养实验过程中，应定期观察细胞生长状态，及时调整实验条件，以保证细胞正常生长。
动物细胞培养技术小鼠脾脏细胞
姓名：XX 系年级：2013级XX班学号：201300XXXXXXX实验题目:动物细胞培养同组者: XXXXX动物细胞培养技术【实验目的】1.学习掌握细胞培养的基本原理以及具体方法，并对小鼠脾细胞进行原代培养；2.掌握无菌操作的具体过程及无菌操作台的使用；3.学习掌握染色法鉴别细胞的生死状态的原理及方法；4.学习使用血球计数板对细胞总数及活细胞数进行计数，计算细胞存活率；【实验原理】（一）. 动物细胞培养技术动物细胞培养技术是指从动物体内取出组织或细胞，在体外模拟动物体内的生理坏境，在无菌，适当温度和一定的营养条件下，使之生存，生长和繁殖，并维持其结构和功能的方法。
细胞培养的意义:⑴.具有其他生物技术无可比拟的优点；⑵.培养条件易改变和控制，便于单因子分析；⑶.便于人们直接对细胞内结构、细胞生长及发育等过程的观察；⑷.在生物学的各个领域（如分子生物学、细胞生物学、遗传学、免疫学、肿瘤学及病毒学等）已被广泛应用细胞培养的局限性：（1）.在脱离机体复杂环境下，细胞培养条件与躯体环境有一定距离；(2).观察到的结果有时难以正确反映机体内的状况；(3).细胞培养得到的产物少。
培养细胞的生存条件有水的质量、无菌环境，最适温度、渗透压、气体条件、最适PH、营养条件和培养基质等。
细胞培养的方法：1. 原代培养：直接从生物体内获取细胞，组织或器官，进行体外培养直至第一次传代为止。
2. 传代培养：当培养的细胞增殖达到一定密度之后，则需要再做培养，即将培养的细胞分散后，从一个容器以1:2或其他比例转移到另一个容器中的扩大培养。
原代细胞培养的方法有：单层细胞培养法和组织块培养法细胞传代培养包括：贴附生长细胞的传代：洗细胞——酶消化——接种——观察悬浮生长细胞的传代：A.直接传代 B.离心传代单层培养细胞的生长过程分为：游离期，吸附期，繁殖期，维持期，衰退期培养细胞的形态分型：A. 贴附型 B.悬浮型（二）. 细胞死活鉴定细胞生死状态的鉴别方法主要是化学染色法和荧光染色法。
第四章 动物细胞培养的基本技术和方法
境
二、细胞传代方法
1.贴壁细胞的消化法传代：
（1）吸弃或者倒掉瓶内陈旧的培养液
（2）于培养瓶内加入适量消化液 （3）消化2-5min，在显微镜下观察细胞状态，发现细胞质回缩，细胞间隙 增大后，应即刻停止消化 （4）吸除或者倒掉消化液 （5）吸管吸取新鲜培养液，按照顺序吹打瓶壁细胞，注意动作要轻柔 （6）计数后，按要求的接种量接种在新的培养基内
结果分析：
（1）作图法 （2）公式法
三、细胞培养的污染检测及排除
培养细胞的污染包括：微生物、化学物质、细胞交叉
1.微生物污染
污染途径：空气、器材、操作、血清、组织样本 污染对细胞的影响：抑制细胞生长，产生有毒物质，促使细胞死亡 微生物污染的检测与排除： （1）真菌污染 培养液中有白色或者浅黄色的漂浮物，细胞间有丝状菌丝体，可以采用霉菌素或者酮康唑对细 胞进行处理 （2）细菌污染 培养液短期颜色变黄、变浑浊，使用5-10倍抗生素剂量冲击法 （3）支原体感染 相差显微镜检测；荧光染色法；电镜检查；DNA分子杂交检查
2.悬浮细胞的传代方法：
（1）直接传代法 （2）离心传代法
三、细胞系的维持
细胞系的维持是通过换液、传代、再换液、再传代和细胞冻存实现的 注意事项： （1）做好细胞系的档案记录工作
（2）遵从细胞生长规律
（3）防止细胞间的交叉污冻存、复苏和运输技术
一、细胞的冻存
第四节 动物细胞传代培养技术
一、原代培养的首次传代
传代：细胞由原培养瓶内分离稀释后传到新的培养瓶的过程 首次传代注意事项： （1）待细胞生长到足以覆盖瓶底壁的大部分表面后再传代 （2）传代时候不同细胞需要消化的时间不同，要根据需要具体观察，
及时进行处理
（3）首次传代时，细胞接数量要多一些，促使细胞尽快适应生长环
动物细胞培养的原理
动物细胞培养的原理动物细胞培养是一种重要的生物技术，它在生物医学研究、药物筛选、疾病治疗等领域有着广泛的应用。
动物细胞培养的原理主要包括细胞来源、培养基、培养条件等几个方面。
首先，细胞来源是动物细胞培养的基础。
动物细胞可以来源于不同的组织和器官，比如肝细胞、肾细胞、心肌细胞等。
这些细胞可以通过组织切割、细胞分离等方法获得。
在细胞培养的过程中，细胞的来源对培养效果有着重要的影响。
其次，培养基是动物细胞培养的关键。
培养基是一种含有各种营养物质的液体或凝胶，可以提供细胞生长和分裂所需的营养物质、生长因子、激素等。
培养基的种类繁多，根据不同的细胞类型和培养目的可以选择适合的培养基。
另外，培养条件也对动物细胞培养起着至关重要的作用。
培养条件包括温度、湿度、气体氛围、pH值等因素。
细胞在不同的培养条件下会呈现不同的生长状态，因此培养条件的控制对细胞培养的成功至关重要。
此外，动物细胞培养还需要注意无菌操作、细胞传代、细胞检测等方面的技术要求。
无菌操作可以有效地避免细胞培养过程中的细菌、真菌等微生物的污染。
细胞传代是指将已经培养的细胞继续传代到新的培养皿中，以保持细胞的生长状态。
细胞检测可以帮助我们了解细胞的纯度、活性等信息，为后续的实验和应用提供参考。
总的来说，动物细胞培养的原理涉及到细胞来源、培养基、培养条件等多个方面，需要综合考虑各种因素，合理设计实验方案，才能取得良好的培养效果。
在实际操作中，需要严格控制培养条件，注意无菌操作，以确保细胞培养的成功。
动物细胞培养技术的不断发展将为生物医学研究和临床治疗带来更多的可能性。
动物细胞培养原理
动物细胞培养原理动物细胞培养是一种重要的生物技术手段，它在生物医学研究、药物筛选、疾病治疗等领域发挥着重要作用。
动物细胞培养是指将动物组织或细胞置于含有适当营养物质的培养基中，通过控制温度、湿度、气体成分等条件，使细胞在体外得到生长和增殖的过程。
本文将介绍动物细胞培养的原理及其相关知识。
首先，动物细胞培养的基本原理是提供细胞所需的营养物质和适宜的生长环境。
培养基是动物细胞培养的基础，它含有细胞生长所需的营养物质，如氨基酸、葡萄糖、维生素等，同时还含有必需的无机盐和生长因子。
培养基的配方种类繁多，可根据不同细胞类型的要求进行选择。
除了培养基，适宜的温度、湿度、气体成分等环境条件也是细胞正常生长的重要保障。
其次，细胞的培养需要严格的无菌操作。
细胞在培养过程中很容易受到外界微生物的污染，因此在培养过程中需要严格控制无菌操作。
培养器皿、培养基、操作台面等都需要经过严格的消毒处理，操作者也需要穿戴无菌衣、手套等防护用具，以确保细胞培养过程的无菌性。
另外，细胞的培养还需要定期更换新的培养基，以及定期观察细胞的生长情况。
培养基中的营养物质会随着时间的推移而逐渐消耗殆尽，因此需要定期更换新的培养基，以满足细胞生长的需要。
同时，也需要定期观察细胞的形态、数量等情况，及时发现并处理细胞的异常情况。
最后，动物细胞培养的成功还需要适当的细胞密度和通气量。
细胞密度过高会导致细胞之间竞争营养物质，影响细胞的生长和增殖，而细胞密度过低则会导致细胞生长缓慢。
通气量不足也会导致细胞缺氧，影响细胞的正常代谢。
因此，需要根据不同细胞类型的特点，合理控制细胞密度和通气量。
总之，动物细胞培养是一项复杂而又重要的生物技术，它需要在严格的无菌条件下，提供适宜的营养物质和生长环境，定期观察细胞的生长情况，并合理控制细胞密度和通气量，才能取得成功。
希望本文的介绍能够帮助读者更深入地了解动物细胞培养的原理及其相关知识。
动物细胞培养基本技术精讲
潜伏期：
此时细胞有生长话动，而无细胞分裂。细胞潜伏期一 般为6～24小时。
对数生长期：
细胞数随时间变化成倍增长，活力最佳，最适合进行实验研究。
停止期（平台期）：
细胞长满瓶壁后，细胞虽有活力但不再分裂 机制：接触抑制、密度依赖性
培养细胞生长的条件
细胞的营养需要 细胞的生存环境
温度: 37 ℃ O2 CO2: 5% pH: 7.2-7.4 渗透压 无污染 无毒
再混匀传代。 直接传代法：悬浮细胞沉淀在瓶壁时，将上清培养液去除l／2一 2／3，然后用吸管直接吹打形成细胞悬液再传代。 半悬浮生长细胞传代（Hela细胞） 此类细胞部分呈现贴壁生长现象，但贴壁不牢，可用直接吹打 法使纫胞从瓶壁脱落下来，进行传代。 贴壁生长细胞传代 采用酶消化法传代。常用的消化液有0.25％的胰蛋白酶液。
细胞培养基本技术
杂交瘤细胞融合技术
合成培养基： Dulbecco's Modified Eagle's Medium Iscove's Modified Dulbecco's Medium Medium 199 Earle's Minimum Essential Medium Nutrient Mixture F-10 Ham's Nutrient Mixture F-12 Ham's RPMI-1640 Medium KSOM、CZB、M16、MTF、SOF
结果的分析；易发生支原体污染。
合成培养基
合成培养基是根据细胞生存所需物质的种类和数量，用人工方法 模拟合成的。
合成培养基主要成分是氨基酸、维生素、碳水化合物、无机盐和 其它一些辅助物质。
优点：标准化生产，组分和含量相对固定，成本低 缺点： 缺少某些成分，不能完全满足体外细胞生长需要。
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（2）胶原酶消化(collagenase enzymatic digestion )
①培养瓶中放入1~5mm3大小的碎组织块，加5ml 2000 u/ml的胶原酶溶液，使 终浓度为200u/ml，pH6.5；
②36.5℃水浴24~48h，视情况可适当延长，无需摇动。期间可更换酶液一次； ③见组织块已变软，分散于瓶底时，轻微震荡使散成细胞团或单细胞。小心
5）渗透压
动物细胞培养渗透压包括两个方面的问题：
培养基的渗透压维持 细胞体内的渗透压维持 大多数动物细胞对渗透压的忍耐程度较强，只要培养基的渗 透压变化不是很剧烈，一般对培养物不会造成致命伤害。动物细 胞渗透压的维持一般采用平衡盐溶液。
四、动物细胞培养
基本概念和基本步骤: 取材分离和组织消化 细胞计数 常用培养法 细胞的常规检查 细胞系与克隆 动物细胞的大规模培养 细胞的冻存与复苏
成纤维细胞型
细胞形态与体内成纤维细胞形态相似，胞内呈梭形或不规则 三角形，中央有园形核，胞质向外伸出2～3个长短不同的突起。 细胞群常连接成网，生长时呈放射状或火焰状。除真正的成纤维 细胞外，心肌、平滑肌、成骨细胞培养时均属这一类型。
游走细胞型 在支持物上分散生
长，不连接成片，细胞胞质常伸出 伪足或突起，呈活跃的游走和变 形运动，速度快而方向不规则。在 一定条件下，可转变为成纤维细胞 型。
“代”：继代次数和存活时间的长短因细胞来源的年 龄和种族不同而有差异。年龄越大继代次数越少。人胚 成纤维细胞约可以培养50代，而成年人的成纤维细胞则 不能继代50次，同样是成纤维细胞，取自鸡胚的成纤维 细胞可继代培养30代，而小鼠的只能培养8代。
大多数细胞系在有限的代数内以不变的形式增殖，当超 过有限世代后，它们可能有两种情况：一是衰老死亡，二是 发育成永久细胞系或称连续细胞系。有限细胞系转换成永久 细胞系的过度期称为转换期(crisis)，其转换过程在动物细 胞培养中称为体外转化(in vitro transformation)。
3）pH
动物细胞培养适宜的pH一般在7.2-7.4，低于6.8 或高于7.6都不利于细胞生长，严重时会导致细胞死 亡。 培养细胞对pH的要求因培养时间长短有关，一 般原代细胞要求较严格，而永久细胞系对pH具有较强 的忍耐性。
4）气体环境及溶氧
一般细胞在培养初期要求较低的溶氧水平，而在对数生 长期或培养后期，对溶氧水平要求增加，如果供氧不足，将 导致细胞缺氧而死亡。 除了氧气供应外，还应注意培养基 的氧气和CO2的平衡。
动物相比对培养环境十分敏感，一切影响细胞膜变形的因 素都会影响动物细胞存活。
动物细胞培养对营养条件的要求也十分复杂。
三、动物细胞的环境要求
1. 动物细胞培养的环境要求
1）无污染环境 2）温度
昆虫细胞培养温度一般是25～28℃ 哺乳动物细胞的培养温度一般是37℃。 总体上讲，动物细胞忍受低温的能力比忍受高温的能力 强。如哺乳动物细胞在45℃下只能存活1小时，但在25℃条件 下仍然能慢速生长，并维持长时间不死，甚至在4℃下数小时 后，再置于适宜温度下细胞仍然可以正常生长。液氮冻存。
（二）组织消化(tissue digestion)
用生物化学的方法将剪碎的组织块分散成细胞团或单细胞。 1、常用消化液适用范围 （1）胰蛋白酶：适用于细胞间质较少的软组织，如胚胎、羊膜、
上皮、肝、肾、传代细胞等。 （2）胶原酶：适用于纤维组织、上皮组织、癌组织等。 （3）其他酶：链霉蛋白酶、粘蛋白酶、蜗牛酶等，根据酶的作
第一类和第三类细胞在适当条件下可进行离体
2壁依赖型(anchorage-dependent) 非贴壁依赖型(anchorage-independent) 兼性贴壁细胞
1）贴壁依赖型 简称为贴壁细胞，包括成纤维细胞型、上皮细胞型、游走细
胞型、多形性细胞型。
激素
免疫调节因 子
动物细胞培养的产物
治疗性抗体
小儿麻痹症、狂犬、风疹、脑炎、乙肝表面抗原、疱疹、某些 癌症 口蹄疫、鸡瘟病、猪霍乱、马脑炎、牛痢疾、犬瘟、草鱼出血 病 尿激酶、细胞色素P450、胃蛋白酶、胰蛋白酶、纤维蛋白溶酶 原激活剂、胶原酶、酪氨酸脱羧酶
促红细胞生成素、促间质细胞激素、绒毛膜促性腺激素、促黄 体激素、促滤泡激素、生长激素
二、取材、分离和组织消化 (to draw the materials from tissue，separation ，digestion )
（一）取材——获取组织
原则上各种动物组织都可进行体外培养，而实际上幼龄组织（尤其 是胚胎组织）比老龄组织容易培养、分化程度低的比分化程度高的 容易培养、肿瘤组织比正常组织容易培养。 取材前要对所取组织的各种情况进行详细记录；
一、动物细胞培养的主要领域及意义
单克隆抗体与现代医学 动物胚胎孵育与畜牧业 动物细胞培养与现代医药业 动物克隆的广泛应用
1.单克隆抗体技术与现代医学
单克隆抗体技术步骤：*
骨髓瘤细胞(myeloma cell)
特定抗原免疫刺激的B
淋巴细胞(antigen stimulated B lymphoblast)融合
2.胚胎孵育与畜牧业
农畜动物胚胎移植：利用胚胎技术大批量生产优质胚胎，从而可以 降低胚胎成本，扩大移植胚的来源。 体外受精：加快农畜良种化。利用体外受精技术进行核移 植、性别控制和基因导入，工厂化生产遗传性状稳定、生 产性能优良的家畜。
3.动物细胞规模化培养与现代医药
类型 抗体药物 人疫苗 动物疫苗 酶
白细胞活化因子、转移抑制因子、胸腺素、白细胞介素、干扰 素、血清胸腺因子、巨噬细胞毒力因子、β-细胞生长因子
4.动物克隆技术有益应用
动物克隆技术的应用前景：
（1）保存优良的动物品种 （2）拯救濒临灭绝的珍惜动物 （3）利用克隆动物工厂生产蛋白质药物 （4）利用克隆技术生产人体器官
二、动物细胞特性
要在一定的基质（如玻璃、塑料等）上贴附，伸展后才能增殖。 当细胞在基质上分裂增殖，逐渐汇合成片即每个细胞与其周围 的细胞相互接触时，细胞就停止增殖，即细胞密度不再增加， 这一现象称之为接触抑制或密度依赖抑制现象。
3）有限细胞系和永久细胞系
动物细胞离体培养起始物--原代培养（primary culture） 经继代培养后即成为有限细胞系(finite cell line)。有 限细胞系即使培养条件均能满足细胞繁殖生长，它们也只能在 有限的时间内生存，一般经过30~50世代后细胞将逐渐死亡。
所用器皿用前严格消毒灭菌，取材时严格无菌操作。
取材方法:
处死动物 → 取出组织块，放入小烧杯中 → 用尖嘴眼科剪刀 将组织块剪碎（1mm3），用吸管吸取Hanks液冲下剪刀上的碎 块，补加3~5ml Hanks液，用吸管轻轻吹打； →低速离心，弃去上 清液，留下组织块。（也可用手术刀片将组织块切碎，优点：对细 胞损伤较小，缺点是操作时间长，容易污染） → 对某些软组织碎 组织块，可放入注射器玻璃管中或1mm不锈钢/尼龙网筛挤压分离。
倒出培养液，瓶底可能附着一些巨噬细胞，借此可将其分开（单独培养或 弃之不用）； ④800r/min离心5min，弃上清液，重悬于BSS液中，再重复离心一次； ⑤加入培养液制成细胞悬液，用于接种。
三、细胞计数(cell counting)
——计数悬浮液中细胞的形态及浓度，以判断消化或稀释程 度（亦用于培养液中细胞浓度的检查） ①染色：在干净的离心管中加入9滴细胞悬液，再加入1滴0.4% 台盼蓝，混匀，静置2~3min； ②充池：在计数板盖片边缘加入1~2滴染色的细胞悬液，使之完 全充满计数板与盖玻片间的空间（无气泡或溢出）
③计数：在显微镜下记录计数板四角四个大方格中的活细胞 （不染色细胞）总数。一团细胞按一个细胞计数。压线细胞， 数上不数下，数左不数右。
动物细胞在活体内的特性 培养条件下动物细胞生长特性 培养条件下动物细胞生理特性
1. 动物细胞在活体内的特性
在活体内，动物细胞:
增殖 分化
分化的动物细胞在功能上具有明确的分工，并具有 明显的形态学特征。
如肌肉细胞为纺锤形，以便于行使收缩伸展功能； 神经细胞具有很长的分支，很多的纤维，以便接受和传递刺激； 红细胞呈园盘状，有利于和周围环境交换气体和在血管内流动； 上皮细胞由于它要覆盖于表面，常常相互挤压成不规则形状。
动
物
细
胞
培 养 基
第 二
本章
技
术
与
原
理
细胞与组织培养（体外培养）(cell and tissue culture)： 从机体中取出组织或细胞，模拟体内生理条件在体外进行培
养，使之生存和生长。
包括三个层面：器官培养、组织培养、细胞培养 分别代表细胞水平、组织水平或器官水平的培养
主要讲3方面问题：
动物细胞培养的主要领域及意义 动物细胞的培养特性 动物细胞培养的生存条件
用特点及组织成分不同适当选用 （4）EDTA：最适于消化传代细胞时，常与胰蛋白酶配合使用。
2、组织消化操作方法(tissue digestion method of operation)
（1）胰蛋白酶消化(trypsin digestion)
①将剪碎的组织块放入有玻璃珠的三角烧瓶中，加入30~50倍体积的0.25%胰 蛋白酶； ②37℃水浴内消化30~60min，每5~10min摇动一次。根据效果可中间更换消 化液。（静止10min，吸去2/3上清液，补加新鲜胰蛋白酶） ③Hanks液漂洗两次，每次2~3min； ④800r/min离心5min，弃上清液，加入营养液。如有大块，可用纱网过滤。 如消化传代细胞，可与EDTA混用。
一、基本概念（general concept）：
细胞培养（cell culture）：将动物组织或细胞分散成单个细胞，在模
拟机体内的生长环境条件下，使其在体外环境继续生长增殖的过程。
原代（初代）培养：指将机体取出的组织或细胞进行初次培养的过程。原 代培养的细胞大约增殖10代左右，称为原代细胞。