茄子果实生物碱提取液的抑菌活性研究_丁昱文
醇提水沉法提取茄子根中总生物碱的工艺研究
醇提水沉法提取茄子根中总生物碱的工艺研究作者：钟姣姣李万林杨忆群来源：《江西饲料》 2014年第3期钟姣姣1李万林杨忆群（陕西理工学院化学与环境科学学院汉中723001）摘要：以茄子根为原料，用微波辅助醇提水沉法提取茄子根中生物碱。
选取了乙醇体积分数、微波时间、微波温度、微波功率、料液比、浸提时间、pH作为单因素试验，结果表明，最佳工艺条件为：乙醇体积分数为80%、微波时间为4min、微波温度为60℃、微波功率为300W、料液比为1∶20（g/mL）、浸提时间为120s、pH为7，在此条件下茄子根总生物碱的提取率达1.604%。
关键词：醇提水沉法；提取；茄子根；总生物碱中图分类号：S816.7文献标识码：A文章编号：1008-6137（2014）03-0004-030前言生物碱是一类具有重要的化学、生物以及商品价值的天然产物。
生物碱具有多种生物活性，在生物体内还具有良好的分布和较强的疏导能力，是高效、低毒、无污染、对人畜安全的天然产物[1]。
生物碱在畜禽饲料中的应用很早，如甜菜碱作为水产动物诱食剂，能增强动物对其它氨基酸的味觉反应，对促进摄食、提高增重、改善饲料报酬、降低死亡率均有效果[2]；作为营养性添加剂，在动物机体内用作甲基供体与蛋氨酸的功能类似，在配合饲料中添加甜菜碱替代一部分蛋氨酸可以取得相同的饲养效果，而且较经济[3]；作为动物减肥剂，甜菜碱可以促进脂肪代谢，抑制脂肪在肝脏中蓄积，减少腹脂和降低背膘厚度，改善肉产品品质[4]。
醇提水沉法（醇水法）系指先以适宜浓度的乙醇提取药材成分，将提取液回收乙醇后，加适量水搅匀，静置冷藏一定时间，沉淀完全后滤除的方法。
药材用乙醇为溶剂提取，可避免淀粉、蛋白质、黏液质等成分的浸出，加水处理后可除去醇提液中树脂、脂溶性色素等杂质。
应用此方法要慎重，避免醇溶性有效成分因水溶性差而被一起沉淀除去。
目前，我国大多数生物碱更多地依赖进口，但是价格十分昂贵。
为更好利用废弃资源，服务于经济，本试验研究茄子根中总生物碱的最佳提取条件，为其进一步分离提纯和用于生产实践打下基础。
新疆五种特色植物提取物抑菌活性初步研究
新疆五种特色植物提取物抑菌活性初步研究
王春娟;谢慧琴;吴晓峰;林楠
【期刊名称】《石河子大学学报（自然科学版）》
【年(卷),期】2006(024)002
【摘要】采用生长速率法测定了阿魏等5种新疆特色植物提取物对10 种常见植物病原菌的抑菌作用.结果表明:有5种植物均表现一定程度的抑菌活性,其中阿魏提取物活性最好,且抑菌谱较广;在0.01g/mL的浓度下,对小麦纹枯病菌、番茄早疫病菌、番茄灰霉病菌、辣椒疫霉病菌、苹果干腐病菌、苹果霉心病菌等6种植物病原菌72h都有较好的抑制作用,抑制率都在90%以上;其中对番茄灰霉病菌抑菌效果最好,达100%.在0.05g/mL的浓度下,72h抑制效果都有所降低,但都在53.70%以上.
【总页数】3页(P192-194)
【作者】王春娟;谢慧琴;吴晓峰;林楠
【作者单位】石河子大学农学院,新疆石河子,832003;石河子大学农学院,新疆石河子,832003;石河子大学农学院,新疆石河子,832003;石河子大学农学院,新疆石河子,832003
【正文语种】中文
【中图分类】S482.292
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曼陀罗种子生物碱提取物抑菌活性的研究
备注：“－”表示无菌生长，“＋”表示菌落生长少，“＋＋”表示菌落生长较 多，“＋＋＋”表示菌落生长很多，“＋＋＋＋”结果数不清，“＋＋＋＋”
备注：S 金黄色葡萄球菌，E 大肠杆菌，B枯草杆菌，M四叠球菌，AO米 为 CK。
曲霉，A黑曲霉，P 桔青霉，H啤酒酵母，CK无菌水，“/ ”为无抑菌活
试验结果表明曼陀罗种子生物碱粗提取物为谱广抗菌剂之 一，对常见细菌的抑菌活性要强于真菌。对 ３ 种革兰氏阳性菌而 言，曼陀罗种子生物碱提取物对金黄色葡萄球菌和四叠球菌的 抑菌活性最强，其（ＭＩＣ）为 ２ｍｇ／ｍｌ。对革兰氏阴性菌（大肠杆菌） 的抑菌活性也较强。但对真菌及酵母的抑菌活性弱，其（ＭＩＣ）为 ６ ｍｇ／ｍＬ 和 ８ ｍｇ／ｍＬ，而其最低抑菌浓度（ＭＩＣ）亦较大，
三、讨论
性，下同；同行不同字母表示差异达 p<0. 05 显著水平。 表 １ 的结果表明，曼陀罗种子生物碱提取物对各受试菌的
抑菌圈直径都在 １０ｍｍ 以上，表明曼陀罗种子生物碱提取物对革
兰氏阳性细菌和革兰氏阴性细菌、霉菌和酵母都有抑菌作用。但 相对而言，曼陀罗种子生物碱提取物对受试细菌的抑菌活性明 显要大于酵母和霉菌，尤其对四叠球菌抑菌圈直径达到了 １７．８
已有研究表明曼陀罗水浸提液对革兰氏阳性和阴性细菌都 有一定程度的抑制作用［７］。本试验证明了曼陀罗种子生物碱乙 醇提取物对几种常见致病菌和腐败菌有明显的和广泛的抑制作 用，尤其对四叠球菌、金黄色葡萄球菌等致病菌具有显著抑制作 用，这一点略与王颖等不同的是提示曼陀罗种子生物碱乙醇粗 提取物中所含的有效抑菌成分内可能有一定量的黄酮类物质 ［７］。抑菌作用随浸提物浓度的增大而增加，成正相关，说明曼陀 罗种子生物碱醇提取物在预防细菌性食物中毒方面具有应用前 景。
茄子叶际固氮菌的分离鉴定·培养特性及抑菌活性
茄子叶际固氮菌的分离鉴定㊃培养特性及抑菌活性幸翀１，郭青云２∗㊀（１．赣南医学院医学信息工程学院，江西赣州３４１０００；２．赣南师范大学生命科学学院，江西赣州３４１０００）摘要㊀采用Ａｓｈｂｙ无氮培养基从茄子叶际分离得到１株具有高效固氮性能的自生固氮菌ＱＺ－１，经１６ＳｒＤＮＡ序列鉴定，该菌株与克雷伯氏菌属各菌株同源性高达９９％以上，初步鉴定为克雷伯氏菌（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａｓｐ．），其在酵母粉为碳源㊁ｐＨ为５．０时生长最好㊂菌株ＱＺ－１具有广谱抗真菌活性，对油菜菌核病㊁葡萄炭疽病㊁番茄灰霉病抑制效果可达４０％以上㊂自生固氮菌ＱＺ－１具有固氮和生防作用，可为进一步研发优良的叶际固氮菌肥提供微生物资源㊂关键词㊀茄子；叶际固氮菌；克雷伯氏菌；分离鉴定；培养特性；抑菌活性中图分类号㊀Ｓ１８２㊀㊀文献标识码㊀Ａ㊀㊀文章编号㊀０５１７－６６１１（２０２３）１０－０００１－０４ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．０５１７－６６１１．２０２３．１０．００１㊀㊀㊀㊀㊀开放科学（资源服务）标识码（ＯＳＩＤ）：Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ，Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ，ＣｕｌｔｕｒａｌＣｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓａｎｄＡｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌＡｃｔｉｖｉｔｙｏｆＮｉｔｒｏｇｅｎ⁃ｆｉｘｉｎｇＢａｃｔｅｒｉａｆｒｏｍＰｈｙｌｌｏｓｐｈｅｒｅｏｆＳｏｌａｎｕｍｍｅｌｏｎｇｅｎａＬ．ＸＩＮＧＣｈｏｎｇ１，ＧＵＯＱｉｎｇ⁃ｙｕｎ２㊀（１．ＳｃｈｏｏｌｏｆＭｅｄｉｃａｌａｎｄＩｎｆｏｒｍａｔｉｏｎＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，ＧａｎｎａｎＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｇａｎｚｈｏｕ，Ｊｉａｎｇｘｉ３４１０００；２．ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅｓ，ＧａｎｎａｎＮｏｒｍａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｇａｎｚｈｏｕ，Ｊｉａｎｇｘｉ３４１０００）Ａｂｓｔｒａｃｔ㊀Ａｎｉｔｒｏｇｅｎ⁃ｆｉｘｉｎｇｂａｃｔｅｒｉａｓｔｒａｉｎＱＺ⁃１ｉｎｔｈｅｐｈｙｌｌｏｓｐｈｅｒｅｏｆＳｏｌａｎｕｍｍｅｌｏｎｇｅｎａＬ．ｗａｓｓｃｒｅｅｎｅｄｕｓｉｎｇＡｓｈｂｙｎｉｔｒｏｇｅｎ⁃ｆｒｅｅｍｅｄｉｕｍ．Ｂｙ１６ＳｒＤＮＡｓｅｑｕｅｎｃｅａｎａｌｙｓｉｓ，ｔｈｅｈｏｍｏｌｏｇｙｂｅｔｗｅｅｎｓｔｒａｉｎＱＺ⁃１ａｎｄＫｌｅｂｓｉｅｌｌａｉｓｏｌａｔｅｄｗａｓｕｐｔｏ９９％，ｔｈｕｓ，ｔｈｅｉｓｏｌａｔｅｄｓｔｒａｉｎｗａｓｉｄｅｎｔｉ⁃ｆｉｅｄａｓＫｌｅｂｓｉｅｌｌａｓｐ．．ＴｈｅｇｒｏｗｔｈｏｆｓｔｒａｉｎＱＺ⁃１ｗａｓｂｅｔｔｅｒｗｉｔｈｙｅａｓｔｐｏｗｄｅｒａｓｃａｒｂｏｎｓｏｕｒｃｅａｔｐＨ５．０．ＳｔｒａｉｎＱＺ⁃１ｈａｄｂｒｏａｄ⁃ｓｐｅｃｔｒｕｍａｎｔｉ⁃ｆｕｎｇａｌａｃｔｉｖｉｔｙ，ｗｉｔｈａｎｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙｅｆｆｅｃｔｏｆｏｖｅｒ４０％ｏｎＳｃｌｅｒｏｔｉｎｉａｓｃｌｅｒｏｔｉｏｒｕｍ，ｇｒａｐｅａｎｔｈｒａｃｎｏｓｅａｎｄＢｏｔｒｙｔｉｓｃｉｎｅｒｅａ．ＴｈｅａｕｔｏｔｒｏｐｈｉｃｎｉｔｒｏｇｅｎｆｉｘｉｎｇｂａｃｔｅｒｉｕｍＱＺ⁃１ｈａｄｎｉｔｒｏｇｅｎｆｉｘａｔｉｏｎａｎｄｂｉｏｃｏｎｔｒｏｌｅｆｆｅｃｔｓ，ｗｈｉｃｈｃｏｕｌｄｐｒｏｖｉｄｅｍｉｃｒｏｂｉａｌｒｅｓｏｕｒｃｅｓｆｏｒｔｈｅｆｕｒｔｈｅｒｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｏｆｎｉｔｒｏ⁃ｇｅｎ⁃ｆｉｘｉｎｇｂａｃｔｅｒｉａｆｅｒｔｉｌｉｚｅｒ．Ｋｅｙｗｏｒｄｓ㊀ＳｏｌａｎｕｍｍｅｌｏｎｇｅｎａＬ．；Ｎｉｔｒｏｇｅｎ⁃ｆｉｘｉｎｇｂａｃｔｅｒｉａｆｒｏｍｐｈｙｌｌｏｓｐｈｅｒｅ；Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａｓｐ．；Ｉｓｏｌａｔｉｏｎａｎｄｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ；Ｃｕｌｔｕｒａｌｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓ⁃ｔｉｃ；Ａｎｔｉｆｕｎｇａｌａｃｔｉｖｉｔｙ基金项目㊀国家自然科学基金项目（３２１６０３１４）㊂作者简介㊀幸翀（１９７０ ），男，江西南康人，副教授，硕士，从事生物检测研究㊂∗通信作者，副教授，博士，硕士生导师，从事生物防治㊁昆虫－微生物互作研究㊂收稿日期㊀２０２２－０７－２９㊀㊀植物叶际存在许多有益的微生物种群，在一定程度上促进植物生长㊁拮抗植物病原菌㊂固氮菌可以定殖在植物叶际，通过固定空气中的氮气为植物生长提供必需营养物质，促进植物生长繁殖，在自然生态系统氮循环中发挥着重要的作用［１－２］㊂固氮菌是植物叶际的主要微生物类群，大多为细菌，目前已分离出的叶际固氮菌主要包括固氮菌属（Ａｚｏｔｏ⁃ｂａｃｔｅｒ）㊁气杆菌属（Ａｅｒｏｂａｅｔｅｒ）㊁拜氏固氮菌属（Ｂｅｉｊｅｒｉｎｅｋｉａ）㊁黄杆菌属（Ｆｌａｖｏｂａｅｔｅｒｉｕｍ）㊁假单胞杆菌属（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）㊁分枝杆菌属（Ｍｙｅｏｂａｅｔｅｒｉｕｍ）㊁克氏杆菌属（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）㊁螺菌属（Ｓｐｉｒｉｌｌｕｍ）等［２－４］㊂研究发现叶际固氮菌不仅具有较高的固氮能力，还能促进作物生长，提高作物产量㊂如将森林植物叶际分离出Ｆｌａｖｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｓｐ．ＴＫ２，接种于玉米叶际，可使产量提高约１／３［５］㊂水稻叶际固氮菌具有溶磷作用并能产生吲哚乙酸，可促进水稻生长［６］㊂叶际固氮菌还能产生抗菌物质，降低玉米大㊁小斑病的发病率，提高植物抗病能力，间接促进作物生长发育［３－４］㊂因此，固氮菌被广泛用于生物菌肥中，在取代氮肥的施用上具有广阔前景㊂茄子（ＳｏｌａｎｕｍｍｅｌｏｎｇｅｎａＬ．）是我国广泛种植的蔬菜作物，营养丰富，食用方法多样，深受人民喜爱㊂茄子生长周期长，需要大量的营养物质，氮素是限制茄子生长的主要营养元素［７］㊂合理施用氮肥可以使茄子增产增收，但多年连续施用氮肥，不仅会增加农业种植成本，还会污染环境，造成土壤板结㊁肥力下降，甚至威胁人体健康㊂生物固氮具有成本低㊁高效㊁无污染等优点被广泛用于生物菌肥中，大多数农作物施用叶际固氮菌剂后，可以促进养分的吸收，减少氮肥和农药的用量，提高作物的产量和品质［７－８］㊂茄子叶际存在大量固氮微生物，与茄子生长发育密切相关，该研究利用传统微生物学方法分离筛选茄子叶际固氮菌，并对其培养特性和抗菌活性进行研究，可为生物菌肥生产提供固氮菌种资源，对农业的生产发展具有重要意义㊂１㊀材料与方法１．１㊀材料㊀供试茄子样品于２０２１年９月采自农民自种蔬菜园，取样时每个样品随机选取５株植物，戴上无菌手套进行采集，选取地上叶片，所取叶片位于新叶与老叶之间，避免沾染泥土引起试验误差，将采集到的叶片混合放入无菌培养皿中，２４ｈ内对叶片进行处理㊂１．２㊀供试病原菌㊀棉花立枯病菌（Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａｓｏｌａｎｉ）㊁棉花枯萎病菌（Ｆｕｓａｒｉｕｍｏｘｙｓｐｏｒｕｍ）㊁番茄灰霉病菌（Ｂｏｔｒｙｔｉｓｃｉｎｅ⁃ｒｅａ）㊁黄瓜灰霉病菌（ＢｏｔｒｙｔｉｓｃｉｎｅｒｅａＰｅｒｓ．）㊁油菜菌核病菌（ＳｃｌｅｒｏｔｉｎｉａｓｃｌｅｒｏｔｉｏｒｕｍＬｉｂ．）㊁苹果轮纹病菌（Ｂｏｔｒｙｏｓｐｈａｅｒｉａｄｏｔｈｉｄｅａ）㊁葡萄炭疽病菌（Ｃｏｌｌｅｔｏｔ－ｒｉｃｈｕｍｇｌｏｅｏｓｐｏｒｉｏｉｄｅｓ）㊁稻瘟病菌（Ｍａｇｎａｐｏｒｔｈｅｏｒｙｚａｅ）均由赣南师范大学生命科学学院袁小勇教授提供㊂１．３㊀茄子叶际固氮菌分离筛选㊀将取回的新鲜叶片置于装有１００ｍＬ无菌磷酸缓冲液（ｐＨ７．０，含０．１％Ｔｗｅｅｎ）的锥形瓶中，保证溶液完全浸没叶片，２５ħ２００ｒ／ｍｉｎ摇床振荡３０ｍｉｎ，超声波４０ｋＨｚ超声５ｍｉｎ，用镊子取出叶片，将其余的溶液转移至５０ｍＬ离心管中，然后以１００００ｒ／ｍｉｎ离心安徽农业科学，Ｊ．ＡｎｈｕｉＡｇｒｉｃ．Ｓｃｉ．２０２３，５１（１０）：１－４㊀㊀㊀１０ｍｉｎ，倒掉上清，收集得到沉淀菌体㊂吸取１００μＬ稀释液平板涂布法均匀接种到固体Ａｓｈｂｙ无氮培养基上，２８ħ培养５ｄ㊂根据菌落形态选择长势较好㊁生长速度较快的不同菌落进行划线纯化，直至出现有规则的单菌落㊂１．４㊀菌株１６ＳｒＤＮＡ和ｎｉｆＨ基因的ＰＣＲ扩增㊀将筛选获得的固氮菌接种于ＬＢ液体培养基中，于２８ħ㊁２００ｒ／ｍｉｎ的摇床中过夜培养，收集菌体，用天根细菌基因组ＤＮＡ提取试剂盒进行基因组ＤＮＡ提取，以细菌１６ＳｒＤＮＡ全序列通用引物２７Ｆ／１４９２Ｒ［９］和固氮基因ｎｉｆＨ特定的引物ＰｏｌＦ／ＰｏｌＲ［１０］分别进行ＰＣＲ扩增，用１％琼脂糖凝胶电泳进行验证㊂扩增的ＰＣＲ产物送至北京擎科生物有限公司测序，使用ＮＣＢＩ数据库进行序列比对，利用ＭＥＧＡ７．０软件采用最大似然（ＭＬ）算法构建系统发育树㊂１．５㊀固氮酶活性测定㊀按照微生物固氮酶（ＮＩＴＳ）ＥＬＩＳＡ试剂盒说明书操作测定㊂取９６孔酶标板，分别依次加入待测样本１０μＬ，样本稀释液４０μＬ，加入辣根过氧化物酶（ＨＲＰ）标记的检测抗体１００μＬ，３７ħ温育６０ｍｉｎ，弃去液体，然后加入２００μＬ洗涤缓冲液洗板５次，加入显色液３７ħ避光孵育１５ｍｉｎ，加入终止液５０μＬ终止反应于１５ｍｉｎ内在４５０ｎｍ波长处测定ＯＤ值㊂同时以不同标准活性的标准品为对照绘制标准曲线，依据标准曲线计算样本固氮酶活性㊂每个样本至少重复３次㊂１．６㊀菌株培养特性研究１．６．１㊀ｐＨ对菌株生长的影响㊂取等量的细菌培养液接种于ｐＨ为５．０㊁６．０㊁７．０㊁８．０和９．０的ＬＢ液体培养基中，每个ｐＨ至少做３个平行试验，置于２８ħ下１８０ｒ／ｍｉｎ恒温振荡培养箱中培养４８ｈ，测定菌液ＯＤ６００的平均值，确定菌株的最适生长ｐＨ㊂１．６．２㊀ＮａＣｌ浓度对菌株生长的影响㊂取等量细菌培养液接种到含ＮａＣｌ质量分数为０㊁１％㊁２％㊁３％和４％的ＬＢ液体培养基中，至少做３个平行试验，置于２８ħ下１８０ｒ／ｍｉｎ恒温振荡培养箱中培养４８ｈ，测定其ＯＤ６００的平均值，确定菌株的耐盐性㊂１．６．３㊀碳源对菌株生长的影响㊂配制分别由麦芽糖㊁葡萄糖㊁淀粉和蔗糖代替ＬＢ培养基中的碳源（酵母粉）的液体培养基，取等量细菌培养液接种于上述培养基中，至少做３个平行试验，置于２８ħ下１８０ｒ／ｍｉｎ恒温振荡培养箱中培养４８ｈ，分别测定不同碳源下菌液ＯＤ６００㊂１．７㊀固氮菌对植物病原真菌的抑制活性㊀采用平板对峙法［１１－１２］研究固氮菌对植物病原真菌的抑制活性㊂将病原菌菌饼接种于ＰＤＡ琼脂平板（ｄ＝８．５ｃｍ）中央，在距离菌饼两侧３ｃｍ处划线接种菌株，将接种后的培养皿在２８ħ恒温培养箱中倒置培养５ｄ，同时接种只含有病原真菌的ＰＤＡ琼脂平板作为对照㊂用十字交叉法测量菌落直径，根据以下公式计算菌丝生长抑制率：菌丝生长抑制率＝（对照菌落直径－对峙板菌落直径）／对照菌落直径ˑ１００％㊂２㊀结果与分析２．１㊀固氮菌的分离及鉴定㊀从茄子叶际分离到１株能在Ａｓｈｂｙ无氮培养基上生长较快的菌株㊂经过５代的分离纯化后，其菌落为圆形半透明，边缘整齐，表面湿润，不易挑起，能够产生黏液㊂在显微镜下观察为棒杆状（图１）㊂通过扩增固氮酶基因ｎｉｆＨ进行复筛，扩增得到大小约为３６０ｂｐ的基因片段（图２），与预期结果一致，将其编号为ＱＺ－１㊂运用ＥＬＩＳＡ法测定其固氮酶活性，菌株ＱＺ－１的固氮酶活性为７８．７９ＩＵ／Ｌ，结合ｎｉｆＨ基因扩增和固氮酶活性测定确定菌株ＱＺ－１具有固氮能力㊂菌株ＱＺ－１的１６ＳｒＤＮＡ序列１４３７ｂｐ，序列提交至ＧｅｎＢａｎｋ数据库，登记号为ＯＮ７７８５６５㊂在数据库中进行ＢＬＡＳＴ比对发现，菌株ＱＺ－１和克雷伯氏菌Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ亲缘关系最近，聚为一支，序列相似度大于９９％，因此将ＱＺ－１命名为Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａｓｐ．ＱＺ－１（图３）㊂图１㊀显微镜下的细胞形态Ｆｉｇ．１㊀Ｃｅｌｌｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙｕｎｄｅｒｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ图２㊀ｎｉｆＨ基因ＰＣＲ扩增Ｆｉｇ．２㊀ＰＣＲａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｎｉｆＨｇｅｎｅ２．２㊀固氮菌的培养特性２．２．１㊀ｐＨ对菌株生长的影响㊂从图４可以看出，菌株ＱＺ－１在ｐＨ为５．０ ９．０时生长较好，生长速率随ｐＨ的增大呈减小趋势，在ｐＨ为５．０时ＯＤ６００达到最大，说明克雷伯氏菌对ｐＨ有较强的酸碱适应性㊂在ｐＨ为６．０时比ｐＨ为８．０时生长状况好，说明菌株ＱＺ－１为中性偏酸菌㊂２．２．２㊀ＮａＣｌ浓度对菌株生长的影响㊂菌株ＱＺ－１在０ ４％ＮａＣｌ浓度下均能生长，说明菌株有较广的盐度适应性㊂菌株２㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀安徽农业科学㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀２０２３年图３㊀基于１６ＳｒＤＮＡ序列的固氮菌ＱＺ－１菌株的系统发育进化树Ｆｉｇ．３㊀Ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃｅｖｏｌｕｔｉｏｎｔｒｅｅｏｆｎｉｔｒｏｇｅｎ⁃ｆｉｘｉｎｇｂａｃｔｅｒｉａｓｔｒａｉｎＱＺ⁃１ｂａｓｅｄｏｎ１６ＳｒＤＮＡｓｅｑｕｅｎｃｅ的生长速率随ＮａＣｌ浓度的增大而减小，在ＮａＣｌ浓度为０时，ＯＤ６００达到最大，ＮａＣｌ浓度为４％时，ＯＤ６００最小（图５）㊂由此可见，该菌株的最佳ＮａＣｌ浓度为０，较为适宜的ＮａＣｌ浓度为０ ３％㊂２．２．３㊀碳源对菌株生长的影响㊂当ＬＢ培养基中的酵母粉被淀粉㊁麦芽糖㊁蔗糖和葡萄糖替代后，菌株ＱＺ－１对各碳源均能利用，但是酵母粉被替代后生长状况不好，在培养４８ｈ后，以淀粉为碳源的菌液ＯＤ６００最高（１．３２），远低于在ＬＢ培养基中ＯＤ６００（２．７３），说明酵母粉为菌株的最佳碳源（图６）㊂图４㊀ｐＨ对固氮菌株ＱＺ－１生长的影响Ｆｉｇ．４㊀ＥｆｆｅｃｔｏｆｐＨｏｎｔｈｅｇｒｏｗｔｈｏｆｎｉｔｒｏｇｅｎｆｉｘｉｎｇｓｔｒａｉｎＱＺ⁃１２．３㊀固氮菌对植物病原真菌的抑制活性㊀菌株ＱＺ－１具有广谱抗真菌活性，对多种植物病原菌的抑制率从大到小依次为油菜菌核病菌（６３．５３％）㊁葡萄炭疽病菌（５７．１４％）㊁番茄灰霉病菌（４８．７５％）㊁稻瘟病菌（３３．３３％）㊁棉花立枯病菌（３１．９１％）㊁苹果轮纹病菌（２１．８８％）㊁棉花枯萎病菌（２２．２２％）㊁黄瓜灰霉病菌（８．５７％），可见，其对油菜菌核病菌㊁葡萄炭疽病菌㊁番茄灰霉病菌活性的抑制效果较好，对黄瓜灰霉病菌活性的抑制效果最弱㊂与对照组相比，各试验组的抑菌圈边界清晰，抑菌圈周围菌丝生长缓慢（图７）㊂３㊀讨论与结论自生固氮菌可以独立进行固定空气中分子态氮，促进植物生长，增加农作物产量，在农业生产中发挥重要作用㊂植物叶际存在高水平的碳水化合物和碳氮比，营养物质丰富，存在广泛的固氮作用，在自然条件下已经发现菊科㊁禾本科㊁图５㊀ＮａＣｌ浓度对固氮菌株ＱＺ－１生长的影响Ｆｉｇ．５㊀ＥｆｆｅｃｔｏｆＮａＣｌｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｏｎｔｈｅｇｒｏｗｔｈｏｆｎｉｔｒｏｇｅｎｆｉｘｉｎｇｓｔｒａｉｎＱＺ⁃１图６㊀碳源对固氮菌株ＱＺ－１生长的影响Ｆｉｇ．６㊀ＥｆｆｅｃｔｏｆｃａｒｂｏｎｓｏｕｒｃｅｏｎｔｈｅｇｒｏｗｔｈｏｆｎｉｔｒｏｇｅｎｆｉｘｉｎｇｓｔｒａｉｎＱＺ⁃１十字花科㊁蔷薇科㊁杜鹃科㊁榆科等科的植物叶际具有较高的固氮酶活性［２－３］㊂人工接种叶面固氮菌可以达到增产增收的效果，大豆喷施叶面固氮菌的增产率可达１３％以上，玉米在苗期和孕穗期喷施叶际固氮菌可增产１０％以上［４］㊂自生固氮菌因其不与植物形成宿主关系且适应能力强，具有增加农作物产量以及绿色环保等优点，已成为２１世纪新型肥料发展的重要方向之一㊂该研究从茄子叶际分离到一株自生固氮菌ＱＺ－１，经１６ＳｒＤＮＡ序列比对分析鉴定为Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ属，将其命名为Ｋｌｅｂｓｉｅｌ⁃ｌａｓｐ．ＱＺ－１㊂据研究报道，克雷伯氏菌属的一些种类是重要的条件致病菌和医源性感染菌，大部分克雷伯氏菌基因组可检测出固氮基因ｎｉｆ，说明该属细菌具有固氮的遗传基础，对植物的生长及代谢起着间接的促进作用，在农业生产中可作为一种绿色菌肥［１３］㊂罗霆等［１４］从甘蔗根系分离筛选到１株克雷伯氏固氮菌，其固氮百分率可达２９．２％㊂李树品等［１５］和黄磊等［１６］从小麦根系分离得到３株具有高固氮酶活性的克雷伯氏菌㊂韩梅等［１７］从玉米中分离的内生固氮菌克雷伯氏菌（Ｋ．ｔｒｅｖｉｓａｎ），具有促进玉米生长的作用㊂该研究分离的自生固氮菌ＱＺ－１在碳源氮源的利用方面基本与同属的固氮菌利用情况相似，在淀粉为碳源或者无氮条件下都能生长良好，能耐受低浓度的盐类，在偏酸（ｐＨ５．０）的环境下生长良好，而现阶段报道的菌株适应的ｐＨ为５．５ ７．２，该试验筛选菌株与一般的在酸性环境下难以生存的菌株形成差异，在菌肥应用中能更好地用于不同酸碱度的土壤，因此可以更广泛３５１卷１０期㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀幸翀等㊀茄子叶际固氮菌的分离鉴定·培养特性及抑菌活性地应用在农业生产中㊂图７㊀菌株ＱＺ－１拮抗真菌活性检测Ｆｉｇ．７㊀ＡｎｔａｇｏｎｉｓｔｉｃａｂｉｌｉｔｙｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆｔｈｅｓｔｒａｉｎＱＺ⁃１㊀㊀克雷伯氏菌作为生防菌，对多种植物病原真菌均有抑菌活性㊂如Ｐａｒｋ等［１８］研究发现产酸克雷伯氏菌（Ｋ．ｏｘｙｔｏｃａ）可防治胡萝卜软腐病㊂从石斛上分离到一株内生细菌（Ｋ．ｖａｒｉ⁃ｉｃｏｌａ）可防治由链格孢引起的烟草赤星病㊁甘蓝黑斑病和番茄早疫病等［１９］㊂该研究中分离的菌株Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａｓｐ．ＱＺ－１具有广谱抗真菌活性，对油菜菌核病菌㊁葡萄炭疽病菌㊁番茄灰霉病菌抑制效果可达４０％以上㊂因此，自生固氮菌ＱＺ－１的筛选为叶际固氮菌的研究提供了微生物资源，由于克雷伯氏菌繁殖速度快，对环境的适应能力强，具有固氮和生防作用，繁殖过程中能够产生黏液，易于在植物叶际定殖等优点，可望高效地应用于固氮菌剂中进行资源化利用㊂参考文献［１］ＶＯＲＨＯＬＴＪＡ．Ｍｉｃｒｏｂｉａｌｌｉｆｅｉｎｔｈｅｐｈｙｌｌｏｓｐｈｅｒｅ［Ｊ］．ＮａｔＲｅｖＭｉｃｒｏｂｉｏｌ，２０１２，１０（１２）：８２８－８４０．［２］潘建刚，呼庆，齐鸿雁，等．叶际微生物研究进展［Ｊ］．生态学报，２０１１，３１（２）：５８３－５９２．［３］沙小玲，梁胜贤，庄绪亮，等．植物叶际固氮菌研究进展［Ｊ］．微生物学通报，２０１７，４４（１０）：２４４３－２４５１．［４］王楠，李刚强，李云龙，等．固氮类芽孢杆菌的分离鉴定及其促生㊁抑菌活性的测定［Ｊ］．中国农业科技导报，２０１９，２１（５）：９５－１０３．［５］ＧＩＲＩＳ，ＰＡＴＩＢＲ．ＡｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅｓｔｕｄｙｏｎｐｈｙｌｌｏｓｐｈｅｒｅｎｉｔｒｏｇｅｎｆｉｘａｔｉｏｎｂｙｎｅｗｌｙｉｓｏｌａｔｅｄＣｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍｓｐ．＆Ｆｌａｖｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｓｐ．ａｎｄｔｈｅｉｒｐｏｔｅｎ⁃ｔｉａｌｉｔｉｅｓａｓｂｉｏｆｅｒｔｉｌｉｚｅｒ［Ｊ］．ＡｃｔａＭｉｃｒｏｂｉｏｌＩｍｍｕｎｏｌＨｕｎｇ，２００４，５１（１／２）：４７－５６．［６］ＭＷＡＪＩＴＡＭＲ，ＭＵＲＡＧＥＨ，ＴＡＮＩＡ，ｅｔａｌ．Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎｏｆｒｈｉｚｏｓｐｈｅｒｅ，ｒｈｉ⁃ｚｏｐｌａｎｅａｎｄｐｈｙｌｌｏｓｐｈｅｒｅｂａｃｔｅｒｉａａｎｄｆｕｎｇｉｉｓｏｌａｔｅｄｆｒｏｍｒｉｃｅｉｎＫｅｎｙａｆｏｒｐｌａｎｔｇｒｏｗｔｈｐｒｏｍｏｔｅｒｓ［Ｊ］．ＳｐｒｉｎｇｅｒＰｌｕｓ，２０１３，２：１－９．［７］奚辉，陈喜靖，景金富，等．滴灌施肥对秋茄子生长㊁产量及品质的影响［Ｊ］．浙江农业科学，２０１５，５６（７）：１０００－１００１，１００３．［８］焦永刚，郭敬华，董灵迪，等．生物菌肥对土壤生态环境改良效果［Ｊ］．北方园艺，２０１７（１３）：１３５－１３９．［９］李瑞芳，赵玉峰，薛雯雯，等．一株芽孢杆菌１６ＳｒＲＮＡ的基因序列测定和系统进化分析［Ｊ］．广东农业科学，２０１１，３８（３）：１２１－１２２，１２５．［１０］ＲÖＳＣＨＣ，ＭＥＲＧＥＬＡ，ＢＯＴＨＥＨ．Ｂｉｏｄｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆｄｅｎｉｔｒｉｆｙｉｎｇａｎｄｄｉｎｉ⁃ｔｒｏｇｅｎ⁃ｆｉｘｉｎｇｂａｃｔｅｒｉａｉｎａｎａｃｉｄｆｏｒｅｓｔｓｏｉｌ［Ｊ］．ＡｐｐｌＥｎｖｉｒｏｎＭｉｃｒｏｂｉｏｌ，２００２，６８（８）：３８１８－３８２９．［１１］王家和．烟草根病拮抗真菌的分离与筛选［Ｊ］．中国生物防治，１９９８，１４（１）：２８－３１．［１２］冯蓉，刘丽，陈海念，等．解淀粉芽孢杆菌Ｆ１１抗真菌活性研究［Ｊ］．农业资源与环境学报，２０２１，３８（５）：８４９－８５７．［１３］李梦娇，彭晟，徐绍忠，等．克雷伯氏菌在农业与环境治理上的应用［Ｊ］．生物技术进展，２０１４，４（６）：４１５－４２０．［１４］罗霆，欧阳雪庆，杨丽涛，等．１株有固氮能力的甘蔗克雷伯氏菌的分离鉴定及固氮特性［Ｊ］．热带作物学报，２０１０，３１（６）：９７２－９７８．［１５］李树品，蒋千里，楚杰，等．产酸克雷伯氏杆菌（ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａｏｘｙｔｏｃａ）的分离及其特性研究［Ｊ］．山东科学，１９９１，４（３）：１９－２５．［１６］黄磊，石万瑜，董绍佩，等．小麦根系克雷伯氏杆菌的分离与鉴定［Ｊ］．新疆农业科学，１９９０，２７（１）：２７－２８．［１７］韩梅，罗培宇，肖亦农，等．玉米内生固氮菌的分离鉴定及其促生长作用研究［Ｊ］．沈阳农业大学学报，２０１０，４１（１）：９４－９７．［１８］ＰＡＲＫＭＲ，ＫＩＭＹＣ，ＬＥＥＳ，ｅｔａｌ．ＩｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆａｎＩＳＲ⁃ｒｅｌａｔｅｄｍｅ⁃ｔａｂｏｌｉｔｅｐｒｏｄｕｃｅｄｂｙｒｈｉｚｏｂａｃｔｅｒｉｕｍＫｌｅｂｓｉｅｌｌａｏｘｙｔｏｃａＣ１０３６ａｃｔｉｖｅａ⁃ｇａｉｎｓｔｓｏｆｔ⁃ｒｏｔｄｉｓｅａｓｅｐａｔｈｏｇｅｎｉｎｔｏｂａｃｃｏ［Ｊ］．ＰｅｓｔＭａｎａｇＳｃｉ，２００９，６５（１０）：１１１４－１１１７．［１９］李祖红，曾嵘，文国松，等．一株植物内生细菌ＳＨ－１及其应用：ＣＮ２０１３１０３８３４６４．０［Ｐ］．２０１４－０１－０１．４㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀安徽农业科学㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀２０２３年。
两种园林植物提取液抑菌活性的研究
两种园林植物提取液抑菌活性的研究马海旭;郭阿君【期刊名称】《林业勘查设计》【年(卷),期】2017(000)001【摘要】运用琼脂扩散法、琼脂平板法,比较了兴安落叶松(Larix gmelinii)与银中杨(Populus alba × P.berolinensis)叶片的水提液、醇提液、鲜汁液对5种目标菌种的抑菌能力,结果表明:两种植物的水提液低浓度下即可实现对绿脓杆菌的抑制.62.50mg/mL浓度的银中杨水提液、125mg/mL浓度的兴安落叶松水提液可以有效抑制绿脓杆菌;250mg/mL的银中杨水提液可杀灭木霉,1000mg/mL的银中杨水提液可杀灭黑曲霉.%The antibacterial activity of leaf extract from Larix gmelinii and Populus alba × P.berol inensis was evaluated and measured by paper-disc agar-diffusion method and agar dilution method.Antibacterial experiment indicated that water extract from tested 2 plants presented significant antimicrobial activitie on Pesudomonas aeruginosa.The minimal b actericidal concentration(MBC) of Populus alba × P.berolinensis against Pesudomonas aeruginosa was 62.50mg/mL.MBC of Larix gmelinii against Pesudomonas aeruginosa was 125mg/mL.MBC ofPopulus alba ×P.berolinensis againstTrichoderma virens and Aspergillus niger was250mg/mL, 1000mg/mL respectively.【总页数】3页(P54-56)【作者】马海旭;郭阿君【作者单位】吉林北华大学林学院;吉林北华大学林学院【正文语种】中文【相关文献】1.不同溶剂艾蒿提取液对黄瓜枯萎病菌的抑菌活性研究 [J], 秦凯;刘永震2.茄非食部分生物碱提取液抑菌活性研究 [J], 刘艳芳;张德欣;丁寅寅3.两种园林植物提取液抑菌活性的研究 [J], 马海旭;郭阿君4.紫茎泽兰提取液对猪链球菌的抑菌活性研究 [J], 张小苗;周玉照;张以芳5.金银花枝叶提取液体外抑菌活性与体内抗炎作用研究 [J], 吕归红;陈宇因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
玫瑰茄水提物抗氧化及抑菌活性研究
引用格式：欧小勇，潘文章，杨通莲，等. 玫瑰茄水提物抗氧化及抑菌活性研究[J]. 湖南农业科学，2023（11）：59-62，92. DOI:DOI:10.16498/ki.hnnykx.2023.011.0122020年，中华人民共和国农业农村部公告第194号文件指出，为维护我国动物源性食品安全和公共卫生安全，决定停止生产、进口、经营、使用部分药物饲料添加剂。
随着该公告的颁布，多种促生长的药物添加剂及抗生素不得在饲料中使用。
因此，寻找富含生物活性物质、毒副作用小且残留性低的植物提取物添加剂迫在眉睫[1-2]。
玫瑰茄（Hibiscus sabdariffa L.）属锦葵科木槿属药食同源类植物，其花萼色彩鲜艳、色质好，富含有机酸、花色苷、多酚、多糖及黄酮等活性成分，具有抗氧化、抗癌及降血糖等功效[3-5]，广泛用于食品、化妆品等领域[6]。
除此之外，近年来国内外研究还发现，玫瑰茄还具有防治心血管疾病和杀菌驱虫等功效[4-5]。
目前，国内对玫瑰茄的研究集中在其醇提花色苷的抗氧化和抗肿瘤作用等方面。
刘小琳等[5]发现，玫瑰茄醇提花色苷具有较强的抗氧化能力，清除羟自由基的IC50值为169.1 μg/mL，优于VC的448.5 μg/mL。
Malacrida等[7]和Lin等[8]研究表明，玫瑰茄花色苷对乳腺癌和胃癌肿瘤细胞的生长均有显著的抑制作用。
而关于玫瑰茄水提物的抗氧化及抑菌活性鲜有报到。
基于此，笔者以玫瑰茄水提物为研究对象，探索玫瑰茄作为饲用抗氧化剂及抑菌防腐剂时的综合利用效果。
1 材料与方法1.1 试验材料供试的玫瑰茄购买于云南省武定县，生产标准玫瑰茄水提物抗氧化及抑菌活性研究欧小勇，潘文章，杨通莲，欧工华（贵州省从江县动物疫病预防控制中心，贵州从江 557400）摘 要：研究采用DPPH法、FRAP法和ABTS法评价了玫瑰茄水提物（HWE）的抗氧化活性，并采用纸片抑菌法和微量稀释法评价了HWE的抑菌活性，以期为开发玫瑰茄饲料添加剂提供依据。
费菜提取液抑菌效果和抗氧化研究开题报告
毕业论文开题报告食品质量与安全费菜提取液抑菌效果和抗氧化研究一、选题的背景与意义费菜俗称“土人参”，又名土三七、救心菜，属景天科多年生草本植物。
费菜主要分布于我国长江以南各地，不论在平原、丘陵地带还是高原山区费菜均能生长。
它含有齐墩果酸、谷甾醇、生物碱、景天庚糖、黄酮类、有机酸、维生素E等多种成份，费菜中的这些成份使得它具有抑菌、抗氧化、增强免疫、扩张脑血管、改善冠状动脉循环等途径，达到降血压、防中风、防心脏病降血脂、抗肿瘤等功效，有很高的食用价值和医疗保健功能。
随着人们对生活水平的不断提高，对身体保健也越来越重视，近年来世界上掀起了植物药及保健品的开发热潮。
通过对费菜提取液抑菌和抗氧化效果的研究，可以提高费菜的使用价值，有助于生产出具有治疗和预防多种疾病的药品和天然保健品，为费菜的综合利用开辟新途径，创造更大的社会效益和经济效益。
二、研究的基本内容与拟解决的主要问题：基本内容1.研究费菜提取液对大肠杆菌的抑制效果2.研究金黄色葡萄球菌的抑制效果3.研究枯草芽孢杆菌的抑制效果4.测提取液中总黄酮的浓度5.研究费菜提取液还原力的测定6.研究费菜提取液对羟自由基的清除能力7.研究对DPPH·自由基的清除率三、研究的方法与技术路线：1.费菜提取液制取取新鲜费菜叶在70℃烘干24h，然后用药物粉碎机粉粉碎并过80目筛，得到的叶粉备用，在提取之前将叶粉在105℃烘干2h左右。
称取5g干粉，置于150ml锥形瓶中，按照料液比1:50加入浓度为70%的乙醇，超声提取50min，60℃水浴浸提6h，趁热抽滤，得到滤液。
将粗提液用旋转蒸发仪在45-50℃下浓缩至适量后，加入3-4倍体积的95％乙醇以沉淀多糖6h以上，再将粗提液用旋转蒸发仪在45-50℃下浓缩至适量，备用。
2.抑菌圈法测定抑菌效果提前3天把大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌进行活化，接种斜面上备用。
制备营养琼脂培养基, 营养肉汤用于细菌的液体培养。
天然植物提取物对茄子黄萎病菌的抑制活性
ｓ ｒ ｂｕｇｏ ａ ｆｕｄａ ｅ ｔ ａ ｄｗｔ ｓｒｍ ｓ ｂｌｉ ｏｔ ｈｎｎｉ ｎｄＭ ｇ ｏｉ ｏ￣ ｎ Ｕ ｅｔ ｃ ． ｏ ｐ ｅ ｏｒ ｎＷ ｏｎ ｆｒ ｒ ｔ ｉ Ａａｕ ｉ ｏ ｉ ｐｉ ｅｉ ｓ ，ａ ａ ｎｌ ｊｃ ａ ｘｒ ｔ ｅ ｓ ｔ ｅ ｅ ｈ ｅ ｄ ，Ｃ ｓ ｅ ｓ ａｙ ｉ ｌ ａｓ
Ｔ ｅｅ ｔ ｃ ｆ ａｉ ａｅｈ ｄｎ ｔ ｎ ｂｔ ｈ ｒｗ ｈｏ ｃ ｌ ｍ。ｂ ｔ ｅｔａｎ ｅｓ ｒ ｅｍｉａｉｎｂ ０ ％ ． ｈ ｘｒ ｔ ｃａｃｔｅ ｕｄ ｏ ｈ ｉｔｅｇｏ ｆｍｙｅｉ ａ ｏ Ａｃ ｉ ｉｉ ｔ ｕ ｕ ｓｒｉｅ ｔ ｐ ｅｇｒ ｎ ｔ ｙ１０ ｒ ｄ ｈ ｏ ｏ
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宁夏地区20种植物丙酮提取物抑菌活性研究
宁夏地区20种植物丙酮提取物抑菌活性研究摘要采用生长速率法和孢子萌发法测定了20种植物丙酮提取物对番茄早疫病菌(Alternaria solani)、玉米大斑病菌(Exserohilum turcicum)的抑制效应。
研究结果表明,在供试质量浓度为0.01 g/mL时,老瓜头、蛇果黄堇、小蓝雪花、苦豆子、苍耳、针叶短枝芸香等6种植物提取物对番茄早疫病菌菌丝生长抑制率大于60%,对番茄早疫病菌、玉米大斑病菌孢子萌发的抑制作用较强,抑制率均在80%以上,其中小蓝雪花提取物对番茄早疫病菌菌丝生长的抑制率为100%,对2种供试菌孢子萌发的抑制率分别为92.1%和95.3%。
关键词植物提取物;抑菌活性;植物病原菌;宁夏地区AntifungalActivityofAcetoneExtractsfrom20SpeciesofPlantinNingxiaAreaHEYu-ling(Yinchuan Taifeng Biotechnology Co.,Ltd,Yinchuan Ningxia 750200)AbstractWith growth rate and spore germination method,biological activity of twenty acetone extracts were assayed against Alternaria solani and Exserohilum turcicum. The results showed that in the tested concentration 0.01 g/mL,six plant extracts had more than 60% inhibition of mycelium growth in A.solani,and more than 80% inhibition of spore germination in A.solani and E.turcicum,they were Cynanchum komarovii Al.iljinski,Corydalis ophiocarpa,Plumbagella micrantha spach,Sophora alopecuroides Linn.,Xanthium sibiricum Patr.,Hap lophyllum tragaccmthoides Dids,and among them,the P.micrantha spach extract produced mycelium growth inhibition of 100% in A.solani,spore germination inhibition of 92.1% and 95.3% in A.solani and E.turcicum.Key wordsplant extracts;antifungal activity;plant pathogen;Ningxia area由于化学合成农药本身的特点及其不合理使用,造成对非靶标生物的毒害和环境污染并且导致害物产生抗药性[1],植物源杀菌剂因其具有高效、低残留、对人畜牧安全等特性,受到深入研究。
2010级生物工程毕业设计(论文)题目
2009级生物工程毕业设计（论文）题目（46）1.毕业设计题目（共23人）指导老师：陈杏洲4人1.设计年产1万吨桃子酒的果酒厂2.设计年产5000吨李子酒的果酒厂3.设计年产1万吨全麦啤酒的啤酒厂4.设计年产100万吨8°淡色啤酒的啤酒厂指导老师：曾东方7人1-4千t/a赖氨酸发酵生产工艺流程设计（生工1班4人）5-7千t/a赖氨酸发酵生产工艺流程设计（生工2班3人）指导老师：张佑红4人以薯干粉为原料年产 3.0万吨无水柠檬酸工厂设计以玉米粉为原料年产3.0万吨无水柠檬酸工厂设计以薯干粉为原料年产3.2万吨一水柠檬酸工厂设计以玉米粉为原料年产 3.2万吨一水柠檬酸工厂设计指导老师：朱圣东8人1）年产1万吨赖氨酸发酵工厂设计2）年产2万吨赖氨酸发酵工厂设计3）年产3万吨赖氨酸发酵工厂设计4）年产4万吨赖氨酸发酵工厂设计5）年产5万吨赖氨酸发酵工厂设计6）年产6万吨赖氨酸发酵工厂设计7）年产8万吨赖氨酸发酵工厂设计8）年产10万吨赖氨酸发酵工厂设计2.毕业论文题目（共37人）指导老师：程波7人1、耐盐染料降解菌株的筛选与分子鉴定：3人2、蚕蛹深加工工艺研究：2人3、耐盐菌株的筛选及分子鉴定：2人指导老师：户业丽7人1、耐盐耐酚微生物的筛选及分子鉴定：2人2、高盐高COD废水的生物处理：2人3、鲟鱼多糖的提取纯化与表征：1人4、染料降解菌株的筛选与分子鉴定：2人指导老师：吕中7人功能化纳米白藜芦醇的制备及生物活性研究2人纳米氧化锌/壳聚糖水凝胶生物活性研究2人纳米氧化铋抗菌活性研究（3人）指导老师：胡国元8人植物提取物对烟草烟草病原真菌孢子的抑制活性研究（王盼军）植物提取物对烟草烟草病原真菌抑菌作用的稳定性研究（张露允）植物提取物对烟草病原真菌菌丝形态影响研究（吴林）植物提取物对烟草赤星病和黑胫病的控制效果研究植物抗菌活性物质的分离与活性测定香菇发酵液的抗菌活性研究香菇精制备技术研究金针菇精制备技术研究指导老师：张佑红4人利用原核表达系统表达猪圆环病毒的ORF1蛋白的研究林可霉素分子印迹聚合物吸附特性的研究林可霉素分子印迹聚合物吸附动力学的研究苜蓿银蚊夜蛾核型多角体病毒Gp64蛋白的纯化指导老师：谌颉4人1、粘质沙雷氏菌的生物量检测方法方法及生长曲线测定2、氧传输对粘质沙雷氏菌代谢的影响3、粘质沙雷氏菌发酵过程优化：种子的培养策略4、粘质沙雷氏糖代谢与灵菌红素合成的关系2.宜化模式题目（共4人）指导老师：刘艳萍4人1.单克隆抗体药物的细胞学筛选2.单克隆抗体药物体外方法建立3.微生物菌剂萌发条件研究4.Bt油悬剂助剂筛选3.自主实习（共0人）。
天然提取物取代人工添加剂将成食品工业界宠儿
［ １ ０ ］李娟， 夏延斌 莲心生物碱 的保健功 能研究进 展明． 粮 食与 油脂 ， ２ ０ １ ０
（ １ ） ： ４ ０ — ４ ３ ．
［ １ １ ］王峰， 谭 兴和 ， 张 礼红 ， 等． 辣 椒 的生理 功 能及 开发利 用 ［ Ｊ ］ ． 中国食 物 与 营养 ， ２ ０ ０ ６ （ ６ ） ： １ ７ — ２ ０ ． ［ １ ２ ］ 丁昱 文 ， 周宝利， 李 志文 ． 等． 茄 子 果实 生 物碱 提取 液 的抑 菌活 性
研 究人 员认 为 ，比起 以石 油为 原料 、通 过 复杂工 艺 制 造 的传 统塑 料 ，这种 生 物塑 料成 本相 对 较低 。他 们今 后 准备 进一 步提 高其 强度 ，争 取早 日达 到实用 化 。 有关 研 究论 文将 于 近期 在美 国化学 学会 刊 物 分
睐 。美 国 化 学 会 旗 下 新 闻 杂 志 周 刊 齿 动物 患 癌 。 这 些 研 究 引起 了 消 费 味 剂 。天 然 的 绿 色 和蓝 色 色 素 很 难
０ １ ３年 大 约 有 获 得 ，但 是 研 究 人 员仍 成 功 找 到 了 妣 学和工程新 闻》 近 日 报道说 ，从 者 的关 注 。在 美 国 ，２ 藻 类 、迷 迭 香 和 罗 汉 果 中获 得 的 提 １ ／ ４ 的消费者表示他们在购物时会查 获得它们的途径。２ ０ １ ３ 年 ，美 国糖
此 前生 物 塑料 的最高 耐热 温度 是 ３ ０ ５摄 氏度 。
年
第
１ ７
这 种 塑 料 是 透 明 的 ，硬 度特 别 高 ，用 于 汽 车 上 代 替 玻
璃 ，能大 幅 度减 轻 汽车 重量 ，从 而 节约 能源 、减 少 二氧
卷
第
11种植物提取物对4种病原细菌的抑菌活性筛选
11种植物提取物对4种病原细菌的抑菌活性筛选植物源杀菌剂具有选择性高、环境友好、对非靶标生物安全、低毒、低残留等优点，从植物中寻找抑菌活性物质，是研发新型杀菌剂的热点之一。
目前，中国开发与应用的植物源杀菌剂主要有苦参碱、黄岑苷、小檗碱、丁子香酚、香芹酚、儿茶素、大蒜素、乙蒜素、大黄素甲醚等。
但前述产品多集中于对植物真菌病害的防治，对植物源杀细菌剂的研究大多侧重于食品污染菌的控制，且大多数还处于室内筛选阶段。
魏希颖等研究发现泡桐花提取液对金黄色葡萄球菌有很强的抑制作用。
叶舟测定了木麻黄（Casuarina equisetifolia Forst）小枝提取液的抑菌活性，发现对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌表现出较强的抑制活性。
崔彦等的研究证明五倍子、丁香、地榆对黄瓜细菌角斑病菌表现出显著的抑制作用，其中五倍子提取物的活體防效可达60%，具有一定的开发潜力。
李玉玲发现竹焦油对甘蓝黑腐病菌、番茄细菌性斑点病菌、茄青枯病菌等多种供试细菌都有不同程度的抑制活性。
为了获得对植物细菌病害有广泛抑菌谱的植物源物质，本研究选取已报道过的具有广泛抑菌活性的11种植物提取物，对魔芋软腐病菌、猕猴桃溃疡病菌、核桃黑斑病菌、白菜软腐病菌4种常见的病原细菌进行室内抑菌活性筛选，旨在为新型植物源杀细菌剂的开发研究提供线索。
1 材料与方法1.1 材料1.1.1 供试菌种魔芋软腐病菌（Erwinia carotovora pv. carotovora）、猕猴桃溃疡病菌（Pseudomonas syringae pv. actinidiae）、白菜软腐病菌（Erwinia carotorora）均由西北农林科技大学无公害农药研究服务中心提供；核桃细菌性黑斑病菌（Xanthomonas campestris pv. juglandis）由西北农林科技大学林学院提供。
1.1.2 供试植物源物质及试剂大黄提取物（其中大黄素含量为0.30%）、博落回提取物（其中血根碱含量为0.57%）、狼毒提取物（其中狼毒素含量为1.90%）、皂荚提取物（其中皂荚素含量为6.90%）、苦参提取物（其中苦参碱含量为2.15%）均由山西德威生化有限公司提供。
5种药用植物提取液对杨树灰斑病抑菌活性研究
Ｊ ｕｒ ａ ｏ ａ ｎｉｇ ｏ ｎ ｌ ｆ Ｌｉｏ ｎ Ｆｏ ｅ ｔｙ ｉｎ ｅ ＆ Ｔｅ ｈ ｌ ｇ ｒ ｓｒ Ｓｃｅ ｃ ｃ ｎｏ ｏ ｙ
Ｎ ｏ３
５ 种药用植物提取液对杨树灰斑病抑菌活性研究
刘 莹
（ 辽宁林业职业技术学院 ， 辽宁 沈阳 １０ ０ ） １ １ １
度在 １ ／ ６ｍｇ ｍＬ时 ， 对病 菌 菌丝 生 长抑 制 率可达 到 ９ ． ％， ８０ ２ 同样 浓度 的 肉桂 、 安 白芷提 取 液抑 制 兴 率也 可达 到 ９ ％以上 ； 种 药 用植 物提 取 液对孢 子 萌发抑 制作 用强 于对 茵丝生 长的抑 制作 用 ， 中 １ ５ 其
（ｉ ｎ ｇ ｏａｏａａｄ ｅ ｎ ａＣ ｌｇ ｏＦ ｒ ｌ，ｈｎａｇ １１１Ｃ ｉ Ｌａ ｉ Ｖ ｃｔｎｌｎ Ｔｃ ｉ ｌ ｏｌ ｅ ｆ ｏｅｒ Ｓｅｙｎ １００， ｌ ｏｎ ｉ ｈｃ ｅ ｓｙ ａ ｍ）
Ａ ｓｒ ｃ ：Ｉ ｒ ｅ ｔ ｃ ｅ ｎｏ ｔ ｉ ｅｅｍｅ ｉｉ ｌ ｅｂ ｉｇ ｅ ｉｎｓｗｉ ａ ｔｒ ｓ ｆ ｃｉｉ ｏＣ ｒｎ ｕ ｂ ｔ ｔ ｎ ｏ ｄ ｒ ｏ ｓ ｒｅ ｕ Ｃｈｎ ｓ ａ ｄｃｎ ｈ ｒ ｎ ｒｄｅ ｔ ｔ ａ ｈｂ ｃｅｉ ｔｉ ａ ｔ ｔ ｏ ａｃ ｖ ｙｔ ｏｙ ｅ ｍｐ ｐ ｌ ｕ ， ｍｍｅｓ ｎ ｏ ｕｉ ｍ ｉ ｎ ｒｉ ｏ
丁香 、 茛对病原 菌的孢 子 萌发抑 制 效 果最好 。说 明 ５ 药 用植 物 ７ ％ 乙醇提 取 液 中含有 抗 菌成 毛 种 ５ 分， 为生 物防 治杨树 灰斑病 提供 参考 。
关键 词 ： 药用植 物 ； 取液 ； 茵活性 ； 提 抑 病原 菌 中图分 类 号 ： ７ ７１ ￥６． ６ 文献标 识码 ： Ａ 文章 编号 ：０ １１ １ （０ ２ ０ ．０ ５０ １０ —７ ４ ２ １ ）３０ ０ ．４
茄子果实中有效成分芦丁提取方法的研究
用７ ３ 可 见分 光光度计 以蒸馏 水为参 比液 ，在５ ０ ｍ ２Ｎ ８ ｎ 波长下
测 定 吸 光 度 值 。 含 量 为 无 水 乙 醇 ５ ． ２ ｇ ｇ 丙 酮 ５ １ｍ ／ 、
中含有 的各种糖类、蛋 白质、维生素和钙 、磷、铁等矿 物质
（１ 仪 器 ： Ａ ｉ ｅ ｔ ２ ０ 效 液 相 色 谱 仪 （ 国 ） ｇ ｌｎ １ ０ 高 美
Ａ ｉｅ ｔ 司 ） 色 谱 柱 为 Ｋ ｏ ａ ｉ５ Ｃ ８ （５ ｒ ｇｌｎ公 ， ｒｍ ｓ １ 一 １ 柱 ２ ０ｍ× ａ
４ ６ｍ ．ｍ ，江 苏汉邦 科技 有 限公 司） Ｂ ８ ；Ａ 一工研 究所 ） Ｆ ５ 硅胶预制薄层板 （ 岛海 ；Ｇ ２ ４ 青 洋 化工 集 团公 司生产 ） 甲醇 为色 谱纯 ，其 他试 剂为 分析 ； 纯 ， 实验 用水 为二 次 蒸馏 水 。无 水 乙醇 、 乙酸 乙酯 、丙
ｕ ｔ ａ ｏ ｉ ｘ ｒ ｃ ｉ ｎ ｐ ｗｅ ０ ． ｌｒ ｓ ｎ ｃｅ ｔ ａ ｔｏ ｏ ｒ １ Ｗ ６
Ｋｅ ｒ ： ｇ ｌｎ ｒ ｔＲｕ ｉ ； ｔａ ｏ ｉ ｙｗｏ ｄｓＥｇ ｐａ ｔ ｕｉ ｆ ； ｔｎ Ｕｌ ｓ ｎ ｃ ｒ
茄子为茄科植物 ，又名落苏，原产 于印度 ，西汉时传入
酮 、 石 油 醚 、 正 己 烷 等 试 剂 均 为 分 析 纯 （ 药 集 团 试 剂 生 国
子 果 实 ２ ０ ｇ ７ ￣ 回 流 ， 超 声 波 功 率 为 １０ ， 提 取 ． ０ ， ０Ｃ ６Ｗ ３ ｍ ｎ ， 冷 却 过 滤 ，观 察提 取 液 中的 芦 丁 溶 解 性及 颜 色 。 ０ｉ后
态 ，有长栓茄、大圆茄、 白茄 、青茄 、紫茄等，著名品种有 北京线茄和广东紫茄等，茄子 肉质柔软 、味道鲜美，是夏天
茄子果实生物碱提取液的抑菌活性研究_丁昱文
作用[8-11]，是一种良好的天然抑菌剂，是发展高效、安 全、环保、广谱的新型生物农药和天然食品防腐剂、 保鲜剂的潜在资源。目前，对于茄科作物糖苷生物碱 的研究和利用在国内外已引起了普遍重视，但多集中于 马铃薯和番茄上，而茄子中也含有的丰富的糖苷生物 碱，对于它的研究开发与利用将具有广阔的前景。
本实验主要研究了茄子果实生物碱提取液对七种常 见食品腐败菌的抑菌活性，并针对食品加工中常见的热 处理操作探讨了茄子果实生物碱提取液抑菌作用的热稳 定性，旨在为茄子糖苷生物碱的综合利用及在新型安全 天然食品防腐剂的开发研究方面提供理论依据。
收稿日期：2008-08-14 基金项目：国家“863”计划项目(2004AA247010) 作者简介：丁昱文(1982-)，女，硕士研究生，主要从事蔬菜载培生理与生态研究。E-mail：dingyuwen@ * 通讯作者：周宝利(1956-)，男，教授，博士，主要从事蔬菜栽培生理与生态研究。E-mail：zblaaa@
30不同浓度茄子果实生物碱提取液对食品常见污染微生物的抑菌效果tableantimicrobialactivitiesalkaloidextractfromeggplantfruitsdifferentconcentrationsagainstcommonspoilagemicroorganisms抑菌圈直径mm供试菌金黄葡萄球菌大肠杆菌枯草芽孢杆菌啤酒酵母假丝酵母黑曲霉青霉生物碱提取液添加量1001761371663412862041427515912614526620717511350133103129191153139942510688102135117104723苯甲酸钠87968582776460ck160606060606060ck260606060606060mic的测定结果是对供试菌抑菌效力的又一体现最小抑菌浓度越低抑菌能力越强这一结果与滤纸片法测定抑菌效力的结果相一致
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temperature is up to 121 ℃,the antimicrobial activities decrease following with the increase of heating time.
Key words：eggplant fruit；alkaloid；antimicrobial activities；stability
l.1.2 供试菌种 细菌菌种：金黄色葡萄球菌 (Staphylococcus
aureus)、大肠杆菌 (Escherichia coli)、枯草芽孢杆菌 ( B a c i l l u s s u b t i l i s )； 酵 母 菌 种 ： 啤 酒 酵 母 菌 (Saccharomyces cerevisiae)、假丝酵母(Candida sp.)； 霉菌菌种：黑曲霉(Aspergillus niger)、青霉(Penicillium s p ) ，以上受试菌种均由沈阳农业大学食品学院提供。
收稿日期：2008-08-14 基金项目：国家“863”计划项目(2004AA247010) 作者简介：丁昱文(1982-)，女，硕士研究生，主要从事蔬菜载培生理与生态研究。E-mail：dingyuwen@ * 通讯作者：周宝利(1956-)，男，教授，博士，主要从事蔬菜栽培生理与生态研究。E-mail：zblaaa@
1.3.5 生物碱提取液抑菌活性对酸碱稳定性实验 用 2%NaOH 和 50% 柠檬酸将生物碱提取液配成 pH
值为 3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0、9.0、10.0 的八 个梯度，以金黄色葡萄球菌、啤酒酵母、黑曲霉为指 示菌，用滤纸片法测定不同 pH 值下生物碱提取液抑菌 效力。
1.3.6 生物碱提取液抑菌活性的热稳定性实验 取部分生物碱提取液原液分别置于 40、60、80、
aureus, Saccharomyces cerevisiae and Aspergillus niger as the indicators for the stability study, the alkaloid extract plays the
best antibacterial activities to Staphylococcus aureus and Aspergillus niger in neutral condition and to Saccharomyces cerevisiae
茄子果实粉末 100g →溶于 70% 乙醇 1000ml，超声波 浸提 50min →抽滤→ 35℃旋转蒸发至浸膏→用柠檬酸溶解 浸膏调 pH 值至 2.5 →无水 Na2CO3 调 pH 值至 10.5 →产生粗 生物碱沉淀→ 20℃ 10000 r/min 离心 30 min →弃上清液→ 吹干沉淀→溶于 10ml 乙醇即得到生物碱提取液原液。
中图分类号：TS203.3
文献标识码：A
文章编号： 1002-6630(2009)07-0095-04
茄子(Solanum melomgena L.)是人们喜食的重要果类 蔬菜之一，种植面广，具有很高的营养价值及保健功 效。目前对于各种蔬菜中活性物质的研究已得到普遍重 视。生物碱是植物体内具有天然活性的次生代谢物质， 具有生物活性多样性的特点，且许多生物碱对人体具有 很好的保健作用。糖苷生物碱是广泛存在于茄科作物中 的甾体生物碱[1]，茄子果实中含有多种糖苷生物碱，如 龙葵碱( 又名茄碱) 、水苏碱、葫芦芭碱等，是茄子果 实中的重要活性成分[2]，具有多种生物功能，如强心降 压[3]、抗癌[4-5]、平喘[6]、镇痛[7]等。此外，糖苷生物 碱还对许多植物病原真菌和食物中常见腐败菌具有抑制
※基础研究
食品科学
2009, Vol. 30, No. 07 97
表 １ 不同浓度茄子果实生物碱提取液对食品常见污染微生物的抑菌效果 Ｔａｂｌｅ １ Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ ｏｆ ａｌｋａｌｏｉｄ ｅｘｔｒａｃｔ ｆｒｏｍ ｅｇｇｐｌａｎｔ
in weak base condition, respectively, but its antibacterial activities are inhibited in strong acid or alkali condition. Moreover, the
antibacterial activities of alkaloid extract have good thermal stability when temperature is not over 100 ℃. However, when
1.3.4 最低抑菌浓度(MIC)——平板涂布法[15] 用乙醇稀释，使提取液的浓度分别为 25%、12.5%、
6.25%、3.125%、1.563%。取不同浓度的生物碱提取液 0.5ml 加入到高压灭菌后冷却至 45℃熔化的培养基中，充 分混匀，倾注平皿，待培养基冷却后，用接种针在相 应的培养基中涂布供试菌种，在适宜温度下培养( 细菌 37℃，12h；霉菌 28℃，48h；酵母菌 28℃，24h)观 察菌体生长情况，无菌生长的培养基中提取液浓度最低 者即为生物碱提取液的最低抑菌浓度。
l.3.2 菌种活化及菌悬液的制备 将所有供试菌种移接入相应的试管斜面培养。细菌
置于 37℃恒温培养箱培养 24h；酵母菌、霉菌置于 30℃ 恒温培养箱培养 48h。将活化好的各种菌分别挑取一环 制成初试菌悬液，取适量初试菌悬液用生理盐水将其稀 释成含菌量为 1.0 × 108CFU/ml 的菌悬液备用。
Abstract：By means of filter paper method, the antimicrobial activities of the alkaloid extracted from eggplant fruits against
common spoilage microorganisms in food were studied. The results showed that the alkaloid extract from eggplant fruits has the
96 2009, Vol. 30, No. 07
食品科学
※基础研究
１ 材料与方法
1.1 材料与试剂
l.1.1 原材料 辽茄七号(由辽宁省农科院蔬菜所提供)，2007 年 2
月 1 日播种，5 月 15 日定植于沈阳农业大学蔬菜基地塑 料大棚内，果实达商品成熟后随机取样，洗净，去皮 去蒂，保证果肉上无果皮残留，切成均匀薄片，室外 自然晾干后室内 50 ℃烘干，粉碎，过 40 目筛，得到 茄子果实粉末，干燥保存备用。
※基础研究
食品科学
2009, Vol. 30, No. 07 95
茄子果实生物碱提取液的抑菌活性研究
丁昱文，周宝利 * ，李志文，李子昂，蔺姗姗
(沈阳农业大学园艺学院，辽宁 沈阳 110161)
摘 要：通过滤纸片法研究了茄子果实生物碱提取液对食品常见腐败菌的抑菌活性。结果表明，茄子果实生物碱 提取液对供试细菌、酵母菌、霉菌均具有较好的抑制效果，且抑菌效果明显好于 3% 的苯甲酸钠，尤其对金黄葡 萄球菌、枯草芽孢杆菌、啤酒酵母、假丝酵母、黑曲霉的抑菌效果尤为显著。以金黄葡萄球菌、啤酒酵母、黑 曲霉为指示菌研究其稳定性表明，生物碱提取液在中性条件下对金黄色葡萄球菌和黑曲霉的抑菌效力最强，而对啤抑菌活性减弱。当加热温度不超过 100℃时，生 物碱提取液的抑菌活性具有较好的稳定性，而当加热温度达到 121℃，随加热时间延长，抑菌效果减弱。 关键词：茄子果实；生物碱；抑菌活性；稳定性
作用[8-11]，是一种良好的天然抑菌剂，是发展高效、安 全、环保、广谱的新型生物农药和天然食品防腐剂、 保鲜剂的潜在资源。目前，对于茄科作物糖苷生物碱 的研究和利用在国内外已引起了普遍重视，但多集中于 马铃薯和番茄上，而茄子中也含有的丰富的糖苷生物 碱，对于它的研究开发与利用将具有广阔的前景。
本实验主要研究了茄子果实生物碱提取液对七种常 见食品腐败菌的抑菌活性，并针对食品加工中常见的热 处理操作探讨了茄子果实生物碱提取液抑菌作用的热稳 定性，旨在为茄子糖苷生物碱的综合利用及在新型安全 天然食品防腐剂的开发研究方面提供理论依据。
stronger antibacterial activities against the tested bacteria, yeast and mold than 3% Sodium benzoate, especially against
Staphylococcus aureus, Bacillus subtilis, Saccharomyces cerevisiae, Candida sp. and Aspergillus niger. With Staphylococcus
l.3.3 抑菌实验——滤纸片法[14] 分别取上述各菌悬液 0.2ml 加入已倒好相应培养基中
(15ml)，摇匀后倾注平皿，待其冷却制成含菌平板。将 灭菌后直径 6mm 的滤纸圆片在生物碱提取液原液中浸泡 1h 后取出，贴于平板上，每种菌各设置 3 个重复，以 浸有苯甲酸钠的滤纸片为对比，以乙醇和无菌水作为对 照(以上操作均在无菌条件下进行)。放入培养箱中在适 宜温度下培养一定时间(细菌 37℃，12h；霉菌 28℃， 48h；酵母菌 28℃，24h)后，测定抑菌圈直径，取其 平均值作为测定结果。判定标准：以抑菌圈直径大于 6mm 者评价为有抑菌作用，无菌水和乙醇对照组应无抑 菌圈产生，否则实验无效。
l.1.3 试剂与培养基 乙醇(分析纯) 天津市科密欧化学试剂有限公司。 细菌采用牛肉膏蛋白胨培养基；酵母菌、霉菌采
用马铃薯培养基，按照文献[ 1 2 ] 配制。 l.2 仪器与设备
EB-330H 分析天平 岛津公司；KQ-250B 型超声波 清洗器微波振荡器 昆山市超声仪器有限公司；RE-52D 型旋转蒸发器、Waters 600E 泵 上海青浦沪西仪器 厂；LD2X-40BI 型式自动电热压力蒸汽灭菌器 上海申 安医疗器械厂；MLR-350 生化培养箱 日本 Sanyo 公 司；SW-CJ-BU 洁净工作台 苏州安泰空气技术有限公 司；Biofuge Stratos 台式高速冷冻离心机 德国贺利氏 公司；PHS-3C 型数字 pH 计 上海伟业仪器厂。 1.3 方法 l.3.1 生物碱提取液的制备[13]