微生物的分子生物学检测方法PPT课件
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《微生物检验技术》课件
食品中常见的微生物种类：细菌 、霉菌、酵母菌等。
微生物在食品中的分布特点：食 品的种类、加工方式、储存条件 等对微生物的分布有显著影响。
微生物的来源：食品生产、加工 、运输、储存等环节中可能引入
的微生物。
食品中微生物的检测方法与操作
01
02
03
04
传统检测方法
培养法、镜检法等。
现代检测技术
免疫分析法、PCR技术、生物 传感器等。
消毒灭菌效果的监测
对医院环境、医疗器械等进行 微生物学检测，评估消毒灭菌 效果，确保医疗安全。
抗菌药物敏感性试验
通过抗菌药物敏感性试验，指 导临床医生合理选用抗菌药物 ，降低耐药性的产生。
感染暴发调查
在发生医院感染暴发时，进行 流行病学调查和溯源分析，查 找感染源和传播途径，采取有
效控制措施。
疫苗的研究与开发
病原微生物的分离与鉴定
从患者体内分离出病原微生物，并进行鉴定，为疫苗的研制提供基础 资料。
疫苗株的筛选
通过微生物检验技术对病原微生物进行筛选，选择适合作为疫苗株的 菌株或病毒株。
疫苗制备过程的监控
在疫苗制备过程中，对原材料、半成品和成品进行质量检验和安全性 评估，确保疫苗的安全性和有效性。
疫苗效果评价
微生物的生长与繁殖
微生物的生长
微生物生长是指微生物细胞数目的增加和质量的增加。其生 长过程分为迟缓期、对数生长期、稳定期和衰亡期。
微生物的繁殖
微生物繁殖是微生物生长的必然结果，繁殖方式包括二分裂 、出芽生殖、孢子生殖等。繁殖过程中，微生物的遗传物质 会复制并传递给后代。
微生物的生理生化特性
微生物的代谢
利用微生物降解污染物，处理废水、废气等，降低环境污染。
医学检验微生物ppt课件完整版x
个人防护措施及注意事项说明
实验服与护目镜
进入实验室需穿着实验服，佩戴合适的护目镜， 防止试剂飞溅或粉尘刺激。
手套与口罩
根据实验需要选择合适的手套和口罩，避免皮肤 接触有害试剂或吸入有害气体。
实验操作规范
规范实验操作，避免产生气溶胶或飞溅物，减少 交叉污染的风险。
实验废弃物处理及环保要求讲解
废弃物分类处理
医学检验微生物ppt课件完 整版x
目录
• 微生物学基础 • 医学微生物学概述 • 常见病原微生物介绍 • 微生物检验技术与方法 • 临床标本中常见病原微生物检测实例分析 • 实验室安全与防护措施
01 微生物学基础
微生物定义与分类
微生物定义
微生物是一类形体微小、结构简单、 必须借助光学显微镜或电子显微镜 才能看到的微小生物。
微生物生长与繁殖
01
微生物营养
微生物从外界环境中摄取和利用营养物质的过程称为营养。微生物营养
类型有光能自养型、光能异养型、化能自养型和化能异养型四类。
02 03
微生物生长
微生物在适宜的环境条件下，通过摄取营养物质、合成细胞物质、增加 细胞数量的过程称为生长。生长曲线可分为迟缓期、对数期、稳定期和 衰亡期四个时期。
通过对微生物基因组进行测序和 分析，了解其基因组成和功能， 为微生物的鉴定和分型提供准确
依据。
基因芯片技术
将大量特异性基因探针固定在芯 片上，通过与待测微生物DNA杂
交来鉴定其种类和型别。
宏基因组学技术
通过对环境中所有微生物的基因 组进行高通量测序和分析，了解 微生物群落的组成和功能，为环 境微生物检测和生态学研究提供
尿液标本中常见病原微生物检测实例分析
尿常规检查
《微生物检测》课件
检测与鉴定
形态观察
通过显微镜观察微生物的形态、 大小、染色等特征，初步判断微
生物种类。
生化试验
对微生物进行生化试验，检测其代 谢产物和酶活性，进一步确定微生 物种类。
分子生物学方法
采用分子生物学方法，如PCR、基 因测序等，对微生物进行分子水平 上的检测和鉴定。
结果报告
报告内容
包括采样时间、地点、样品来源、检测方法、结 果及结论等。
总结词：染色技术
详细描述：采用不同的染色技术对微 生物进行染色，以便更好地观察其形 态和结构。
培养分离技术
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总结词：培养基
在此添加您的文本16字
详细描述：选择适宜的培养基，根据微生物的生理特性进 行培养，促进微生物的生长繁殖。
在此添加您的文本16字
总结词：分离纯化
在此添加您的文本16字
详细描述：从样本中提取微生物的DNA或RNA，作为 后续检测的基础。
详细描述：利用PCR技术对提取的DNA或RNA进行扩 增，获得足够的目标片段。
详细描述：将扩增后的DNA或RNA进行电泳分离，通 过凝胶上的条带判断微生物种类。
03
微生物检测流程
采样
采样原则
根据检测目的和要求，选 择具有代表性的样品进行 采集。
临床样本中微生物检测案例
案例概述
临床样本中微生物检测是诊断感染性疾病 的重要手段，通过检测临床样本中的病原
微生物，为临床医生提供诊断依据。
案例分析
分析临床样本中微生物检测的难点和挑战 ，如微生物的多样性和变异，以及检测方
法的灵敏度和特异性。
案例内容
介绍临床样本中常见的病原微生物种类， 如细菌、病毒、真菌等，以及检测这些微 生物的方法和流程。
分子生物学在微生物检验中的应用优秀PPT资料
性
•增加定量的精确性
全程监控,准确的算法进行定量
•结果分析更加快捷方便,无需跑胶
基因和蛋白质芯片
原理
基因芯片(gene chip)也称为DNA微距阵(DNA
microarray)、DNA芯片(DNA chip)等。它是指
将大量靶基因或寡核苷酸片段有序地高密度地
排列固定于玻片、硅片等固相载体上，然后与
因芯片，蛋白质芯片，组织芯片等。
荧光定量 PCR（real-time PCR)
此外，该试剂盒还具有检测特异
HCG)，人生长激素(HGH)含量进行定量分析, 测定9种肿瘤(如
荧光定量PCR标记方法
可以快速分类和定量分析
National Institute of Allergy and Infectious Diseases (NIAID)圈定的最致
长因子（VEGF）和人促黄体生成激素（hLH）等也都有了诊断基
因芯片。在肿瘤方面,蛋白质芯片已成功地应用于诊断白血病、
乳腺癌、心力衰竭等疾病的诊断,诊断用的抗体芯片有霍乱毒素、
待测的标记样品的基因按碱基互补配对原理进
行杂交，通过激光共聚焦荧光检测系统等对芯
片进行扫描，再经计算机软件处理，从而获取
大量的信息。
基因微阵列技术优势
基因微阵列技术作为一种高通量的检测
新技术,可以同时检测数以万计的生物分
子，现在已经广泛应用于各个方面，其
中包括病原生物的监控和诊断。
发现未知病原体。例如确定SARS-CoV应
性的P53芯片，能诊断药物代谢缺乏症的细胞色素P450芯片. 在
病原体的检测方面, 成功的例子有HBV、丙型肝炎病毒HCV、甲型
肝炎病毒（HAV）、庚型肝炎病毒（HGV）、巨细胞病毒（CMV）、
分子生物学课件ppt
转基因技术
转基因技术是将外源基因导入生物体，实现基因的过 表达或补充。转基因技术的关键在于选择合适的载体 和导入方法。
THANKS
感谢观看
基因编辑技术的应用
基因编辑技术在许多领域都有广泛的应用，如罕见病治疗、癌症免疫治疗、农业育种等。 通过基因编辑技术，可以实现对特定基因的敲除、敲入或修饰，以达到治疗或改良的目的 。
基因编辑技术的伦理问题
虽然基因编辑技术具有巨大的潜力，但也引发了伦理和法律等方面的争议。在应用基因编 辑技术时，需要充分考虑伦理和法律问题，确保技术的合理应用和规范发展。
发展趋势
基因组学、蛋白质组学、代谢组学等 多组学研究，跨学科交叉融合，生物 信息学和计算生物学的发展等。
02
分生物学基本概念
基因与DNA
基因
基因是生物体内携带遗传信息的最小 单位，负责编码蛋白质或RNA分子 。
DNA
DNA是生物体的主要遗传物质，由四 种不同的脱氧核苷酸组成，通过特定 的序列排列储存遗传信息。
高通量测序
高通量测序是指一次可以对大量DNA或RNA分子进行序列测定的技术。高通量测序技术极大地提高了 基因组学和转录组学研究的效率，为生物医学研究提供了强大的工具。
04
分子生物学应用
生物医药研究
01
02
03
药物设计与开发
利用分子生物学技术，研 究药物与靶点的相互作用 ，提高药物的疗效和降低 副作用。
分子生物学前沿研究
表观遗传学研究
01
表观遗传学研究
表观遗传学是研究基因表达的调控机制，通过研究DNA甲基化、组蛋
白修饰等机制，揭示基因表达的调控规律，以及环境因素对基因表达的
影响。
02
分子生物学(共19张PPT)
04
蛋白质的结构与功能
蛋白质的分子组成与结构
氨基酸通过肽键连 接形成多肽链，即 蛋白质的一级结构 。
多条多肽链组合在 一起，形成蛋白质 的三级结构。
蛋白质的基本组成 单位是氨基酸，共 有20种常见氨基酸 。
多肽链经过盘绕、 折叠形成二级结构 ，主要形式包括α螺旋和β-折叠等。
在特定条件下，蛋 白质可形成四级结 构，由多个亚基组 成。
发展历程
从20世纪50年代DNA双螺旋结构 的发现开始，分子生物学经历了 飞速的发展，成为现代生命科学 中最为活跃和前沿的领域之一。
分子生物学的研究对象与任务
研究对象
主要包括DNA、RNA、蛋白质Байду номын сангаас生 物大分子，以及它们之间的相互作用 和调控机制。
研究任务
揭示生物大分子的结构、功能及其相 互作用机制；阐明基因表达调控的分 子机制；探索生物大分子在生命过程 中的作用和意义。
转录因子
01
真核生物中存在大量转录因子，它们与DNA特定序列结合，激
活或抑制基因转录。
表观遗传学调控
02
通过DNA甲基化、组蛋白修饰等方式，改变染色质结构，影响
基因表达。
microRNA调控
03
microRNA是一类小分子RNA，通过与mRNA结合，抑制其翻
译或促进其降解，从而调节基因表达。
基因表达调控的分子机制
发育生物学研究生物体的发育过程，而分子 生物学则揭示了发育过程中基因表达和调控 的分子机制。
02
DNA的结构与功能
DNA的分子组成与结构
DNA的基本组成单位
脱氧核糖核苷酸，由磷酸、脱氧核糖 和碱基组成。
DNA的碱基
DNA的双螺旋结构
微生物检测技术演示文稿ppt课件
2019
-
134
pH
低温保藏
腌制
微生物 食品
aw
干燥
高温保藏
2019
-
15
消毒 --杀灭或清除传播媒介上病原微生物，使其达 到无害化的FF。
灭菌 --用物理和化学方法杀灭或清除传播媒介上一 切微生物的方法。
2019
-
16
利用温度进行灭菌、消毒或防腐，是最常用而又方便有效的方
细菌的特殊结构有荚膜、鞭毛、菌毛、芽孢等。
2019
-
32
大肠杆菌
2019
-
33
金黄色葡萄球菌
2019
-
34
2019
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35
2019
-
36
2、酵母
酵母菌（yeast）是一通俗名称，没有确切定义。 一般认为酵母菌具有以下五个特点： ➢ 个体一般以单细胞状态存在 ➢ 多数出芽繁殖，也有的裂殖 ➢ 能发酵糖类产能 ➢ 细胞壁常含有甘露聚糖 ➢ 喜在含糖量较高、酸度较大的环境中生长酸度较
法。高温可使微生物细胞内的蛋白质和酶类发生变性而失活， 从而起灭菌作用。低温通常起抑菌作用。 嗜冷微生物适合于－ 10℃生活的细菌，最适生长温度在20℃左右。 嗜温微生物生 长温度在15～45℃之间，最适生长温度在37℃左右的细菌。
嗜热微生物生长温度在30～75℃之间，最适生长温度在55℃， 在100℃以上温度生长，称为嗜高热微生物。
2019
-
28
2. 快速酶触反应及代谢产物的检测
快速酶触反应是根据细菌在生长繁殖过程中 可合成和释放某些特异性的酶，根据酶的特性，选 用相应的底物和指示剂，反应的测定结果有助于细 菌快速诊断。如美国3M Petfifilm TM微生物测试片 可分别快速测定细菌总数、霉菌、酵母菌、大肠杆 菌、金黄色葡萄球菌、大肠菌群等。
分子生物学方法鉴定微生物
③ 核酸探针
广泛用于微生物鉴定、传染病诊断、流行病调查、食品卫生微生 物检测以及分子生物学许多领域。 所谓核酸探针(probe)是指能识别特异核苷酸序列的、带标记的 一段单链DNA或RNA分子。因此，一种核苷酸片断能否作为探 针用于微生物鉴定，最根本的条件是它的特异性，即它能与所检 测的微生物的核酸杂交而不能与其他微生物的核酸杂交。 根据特异性的不同，在微生物鉴定与检测中的作用也不同，有的 探针只用于某一菌型的检测，有的可能用于某一种、属、科甚至 更大类群范围的微生物的检测或鉴定。 例如，从一株淋病奈瑟氏菌(Neisseria gonorrhoeae)隐蔽性质 粒制备的DNA探针，它具有种的特异性，可用来检测和鉴定这 种引起人类性行为传播疾病的细菌。
16S rDNA微生物鉴定流程
培养微生物 提取基因组DNA rDNA序列测定
PCR扩增16S rDNA片段
分析比较
微生物之间的系统发育关系
从样品中分离提取总微生物DNA
从样品中提取微生物遗传物质DNA或RNA，这是进行PCR 扩增16S rRNA的前提。 一种方法是直接提取总DNA，对易于培养的微生物可通过培 养富集后再进行提取，另一种选择是提取微生物细胞中的 rRNA。RNA的提取技术相对于 DNA的提取较为复杂，一般 多采用提取细胞总 DNA，但也可根据情况选择提取 rRNA。
微生物分子生物学鉴定
微生物分类学定义： 按微生物的亲缘关系和进化规律 把它们安排成条理清楚的各种分类单元 或分类群的科学。
微生物的鉴定
主要步骤：纯化、测定一系列必要的指标、查找 权威性鉴定手册 鉴定方法分四个水平：
1. 细胞的形态和习性水平：形态特征、运动、酶反应、营 养要求及生长条件等 2. 细胞组分水平：细胞壁成分、氨基酸库、脂类、醌类、 光合色素等的分析 3. 蛋白质水平：氨基酸序列分析、凝胶电泳和血清学反应 等 4. 基因或DNA水平：核酸分子杂交、（G+C）mol%、转 化和转导、16SrRNA寡核苷酸族分分析、DNA或RNA 核苷酸序列分析等
分子生物学课件(共51张PPT)
二级结构
蛋白质局部主链的空间结构， 包括α-螺旋、β-折叠等。
三级结构
整条肽链中全部氨基酸残基的 相对空间位置Байду номын сангаас即整条肽链每 一原子的相对空间位置。
四级结构
由两条或两条以上的多肽链组 成的一类结构，每一条多肽链
都有完整的三级结构。
蛋白质的功能与分类
结构蛋白：作为细胞的结构，如膜蛋白，染色体蛋白等 。 酶：催化生物体内的化学反应。
分子生物学是生物学的重要分支
01
分子生物学以生物大分子为研究对象，揭示生命现象的分子基
础，是生物学的重要分支之一。
分子生物学推动生物学的发展
02
分子生物学的发展推动了生物学的研究从细胞水平向分子水平
深入，为生物学的发展提供了新的理论和技术支持。
分子生物学与其他学科的交叉融合
03
分子生物学与遗传学、生物化学、微生物学、免疫学等学科存
。
表观遗传学调控
通过改变染色质结构和DNA 甲基化等方式来调控基因表达
。
05
蛋白质的结构与功能
蛋白质的分子组成
氨基酸
蛋白质的基本组成单元，共有20 种标准氨基酸。
肽键
连接氨基酸之间的主要化学键。
辅基与辅酶
某些蛋白质还包含辅基或辅酶， 以辅助其功能的发挥。
蛋白质的结构层次
一级结构
指蛋白质中氨基酸的排列顺序 。
重组DNA分子的构建和 筛选
PCR技术及其应用
01
02
PCR技术的基本原理和步骤
引物的设计和选择
03
04
PCR反应体系和条件优化
PCR技术在DNA扩增、突变 分析、基因分型等领域的应用
基因克隆与基因工程
蛋白质局部主链的空间结构， 包括α-螺旋、β-折叠等。
三级结构
整条肽链中全部氨基酸残基的 相对空间位置Байду номын сангаас即整条肽链每 一原子的相对空间位置。
四级结构
由两条或两条以上的多肽链组 成的一类结构，每一条多肽链
都有完整的三级结构。
蛋白质的功能与分类
结构蛋白：作为细胞的结构，如膜蛋白，染色体蛋白等 。 酶：催化生物体内的化学反应。
分子生物学是生物学的重要分支
01
分子生物学以生物大分子为研究对象，揭示生命现象的分子基
础，是生物学的重要分支之一。
分子生物学推动生物学的发展
02
分子生物学的发展推动了生物学的研究从细胞水平向分子水平
深入，为生物学的发展提供了新的理论和技术支持。
分子生物学与其他学科的交叉融合
03
分子生物学与遗传学、生物化学、微生物学、免疫学等学科存
。
表观遗传学调控
通过改变染色质结构和DNA 甲基化等方式来调控基因表达
。
05
蛋白质的结构与功能
蛋白质的分子组成
氨基酸
蛋白质的基本组成单元，共有20 种标准氨基酸。
肽键
连接氨基酸之间的主要化学键。
辅基与辅酶
某些蛋白质还包含辅基或辅酶， 以辅助其功能的发挥。
蛋白质的结构层次
一级结构
指蛋白质中氨基酸的排列顺序 。
重组DNA分子的构建和 筛选
PCR技术及其应用
01
02
PCR技术的基本原理和步骤
引物的设计和选择
03
04
PCR反应体系和条件优化
PCR技术在DNA扩增、突变 分析、基因分型等领域的应用
基因克隆与基因工程
《分子生物学基础》课件
近年来，随着基因组学、蛋白 质组学和生物信息学等新兴领 域的发展，分子生物学的研究 范围和应用领域不断扩大和深 化。
目前，分子生物学已经成为生 命科学领域中最重要的学科之 一，对于未来的生命科学研究 和新技术的开发具有重要的推 动作用。
02
分子生物学基本概念
基因与DNA
基因是生物体遗传信息的载体， 由DNA分子组成。
DNA是双螺旋结构，由四种不 同的脱氧核苷酸组成，通过碱基
配对维持其稳定性。
DNA复制是遗传信息传递的关 键过程，通过半保留复制确保遗
传信息的准确传递。
蛋白质与酶
蛋白质是生物体的重要组成成分，具有多种结构 和功能。
酶是生物体内具有催化功能的蛋白质，能够加速 化学反应的速率。
酶的活性受多种因素调节，包括温度、pH值、抑 制剂和激活剂等。
分子生物学具有跨学科的特点，涉及到化学、物理学、生物学等多个领域的知识。
分子生物学的研究方法和技术手段多种多样，包括基因组学、蛋白质组学、生物信 息学等。
分子生物学的重要性
分子生物学是现代生物学的核心学科之一，对于理解 生命的本质和机制具有重要意义。
分子生物学在医学、农业、工业等领域有着广泛的应 用，对于疾病的诊断和治疗、新药的研发和农业生产
VS
详细描述
干细胞研究涉及胚胎干细胞和成体干细胞 等多种类型。在再生医学中，通过诱导干 细胞定向分化或利用干细胞的旁分泌效应 ，可以实现受损组织的修复和再生。目前 ，干细胞治疗已在多种疾病中取得初步成 效，如糖尿病、帕金森病等。
表观遗传学在疾病研究中的应用
总结词
表观遗传学是研究基因表达水平上遗传信息的变异和传递的学科，与疾病的发生和发展 密切相关。
详细描述
微生物检验基本技能ppt课件
物理消毒灭菌法
热力灭菌法 辐射杀菌法 滤过除菌法 超声波杀菌法 干燥与低温抑菌法
热力灭菌法
干热灭菌法— 焚烧：废弃物、尸体
灼烧：接种环、试管口 干烤：玻璃器皿 红外线：医疗器械
湿热灭菌法— 巴氏消毒法：61.6-62.8 ℃30min或71.7
℃15-30s,主要用于牛乳消毒。
多数氨基酸、简单蛋白 质等
有 机 碳
糖、有机酸、醇、脂类 等
烃类
葡萄糖、蔗糖、各种淀粉、 糖蜜等
天然气、石油及其不同馏份、 石蜡油等
C(?)
C· O
—
CO2
—
CO2
C· O· X
NaHCO3
NaHCO3、CaCO3、等
微生物的氮源谱
类 型 元素水平 N· C· H· O· X N· C· H· O N· H 无 机 氮 化合物水平 复杂蛋白质、核酸等 培养基原料水平 牛肉膏、酵母膏、饼粕 粉、蚕蛹粉等
化学消毒灭菌法
消毒剂的种类：酚类、醇类、重金属盐类、氧
化剂、表面活性剂、烷化剂。
消毒剂的应用：病人排泄物与分泌物、皮肤、
粘膜、饮水、厕所、空气、手。
影响消毒灭菌效果的因素
消毒剂的性质、浓度与作用时间 微生物的种类与数量 温度 酸碱度 有机物
二、 培养基(culture medium)
无机盐的生理功能
细胞内一般分子成分（P、S、Ca、Ma 、Fe等） 一般功能 渗透压的维持（Na+等）
生理调节物质
大量元素 无
酶的激活剂（M a2+等）
pH的稳定
化能自养菌的能源（S、Fe2+、NH4+、NO2-等）
机
分子生物学检测
生态系统的监测与评估
检测方法：DNA条形码技术、 宏基因组学等
应用领域：生物多样性评估、 生态系统健康评估等
监测内容：物种多样性、生态 系统功能、生态系统稳定性等
评估指标：物种丰富度、物种 均匀度、生态系统生产力等
生物多样性的研究
生物多样性的定 义：生物种类的 多样性、基因的 多样性和生态系 统的多样性
控制措施：制定生物入侵防控策略，如生物防治、化学防治等 案例分析：介绍一些成功的生物入侵检测与控制案例，如澳大利亚的兔子 入侵等
06
分子生物学检测的未来 发展
高通量测序技术的进一步发展
技术进步：高通量测序技术的不断发展，提高了检测速度和准确性
应用领域：高通量测序技术在医学、农业、环境等领域的应用越来越广泛
遗传性疾病的检测
遗传性疾病：由基 因突变引起的疾病
检测方法：基因测 序、基因芯片、 PCR等
应用领域：癌症、 遗传病、罕见病等
检测意义：早期发 现、早期治疗、预 防遗传性疾病
肿瘤的检测与诊断
基因突变检测：通过检测肿瘤细胞中的基因突变，判断肿瘤类型和分期
生物标志物检测：通过检测肿瘤细胞中的生物标志物，判断肿瘤的恶性 程度和预后
分子生物学检测的原理
利用DNA、RNA、蛋白质等生物大分子的特性进行检测 通过PCR、基因测序、蛋白质分析等技术进行检测 检测结果可用于疾病诊断、遗传病筛查、药物研发等领域 检测过程需要严格的实验操作和精确的数据分析
分子生物学检测的应用
基因诊断：检测基因突变、基因表达异常等，用于疾病诊 断和预后评估
注意事项：探 针设计、杂交 条件、荧光显
微镜操作等
基因芯片法
原理：利用基因芯片技术，将大量基因片段固定在芯片上，通过检测基因片段的表达情况， 实现对基因的检测。
微生物的分子生物学检测方法
语
长期以来,人们试图找到一种既简便又快速、又有足够分辨力的技术 来鉴别和区分各种病原微生物，各种新方法和新技术不断涌现，但每一 种方法都有其局限性，为了弥补各自的不足，使用一种以上的技术即采 用多种方法联合使用的策略,一种技术的缺点会被其他技术的优点所代替。 选择检测方法应考虑到自身所拥有的条件,检测所要求达到的灵敏度,而 提高灵敏度和去除假阳性是检测方法发展的趋势。近年来,随着计算机技 术的不断发展,临床病原菌检测将向着简便、快速、高通量、自动化的方 向发展。分子生物学技术通过自动化仪器的使用,将在病原菌诊断、鉴定 和耐药基因检测方面越来越广泛地应用于临床。
（1）灵敏度高、 特异性强； （2）用于 DNADNA和RNARNA 的定性、定量检 测。
（1）检测特异 DNADNA序列 （2）特异基因克隆 的筛选； （3）核酸序列的初 略分析； （4）PCR技术的分 子基础。 应用
特点
原位杂交：直接在组织切片或细胞涂片上进行 杂交反应。该技术可检出细胞中单拷贝mRNA， 估算病毒在宿主细胞中复制和转录的程度，对 于病毒感染（特别是具有长潜伏期的病毒感染） 和其它退行性疾病的诊断很有用。
03
04
ห้องสมุดไป่ตู้
核酸打点杂交：它是将一定量的病毒 核酸(DNA或RNA)打点在固相支持膜 上,然后与放射性或非放射性标记的 (DNA或RNA)探针进行杂交,杂交后 通过放 射自显影或显色反应检测杂 交信号。
05
原位杂交 原位杂交
斑点杂交
Southern印迹杂交
核酸杂交 核酸杂交
Northern 印迹杂交
结
随机扩增的多态 性DNA 技术
添加标题
重复序列PCR技术（Rep－PCR）是利用细菌基因组中广泛分布 的短重复序列为引物靶序列,进行PCR扩增,通过对PCR产物电泳 结果的比较,分析菌株间基因组存在的差异
微生物的分子生物学检测方法
同菌株基因组的dna特点从而对他们进行分型添加标题重复序列pcr技术重复序列pcr技术reppcr是利用细菌基因组中广泛分布的短重复序列为引物靶序列进行pcr扩增通过对pcr产物电泳结果的比较分析菌株间基因组存在的差异优点已成功地用于分型的细菌重复dna序列有肠道菌重复基因间共有eric序列重复基因外回纹序列rep和box序列的分析与其他分类技术相比这种技术有更高的分辨力缺点reppcr分辨力稍低添加标题免疫pcr它的基本原理是用一段已知dna分子标记抗体作为探针用此探针与待测抗原反应用pcr扩增粘附在抗原抗体复合物上的这段dna分子电泳定性根据特异性pcr产物的有无来判断待测抗原是否存在
语
长期以来,人们试图找到一种既简便又快速、又有足够分辨力的技术 来鉴别和区分各种病原微生物，各种新方法和新技术不断涌现，但每一 种方法都有其局限性，为了弥补各自的不足，使用一种以上的技术即采 用多种方法联合使用的策略,一种技术的缺点会被其他技术的优点所代替。 选择检测方法应考虑到自身所拥有的条件,检测所要求达到的灵敏度,而 提高灵敏度和去除假阳性是检测方法发展的趋势。近年来,随着计算机技 术的不断发展,临床病原菌检测将向着简便、快速、高通量、自动化的方 向发展。分子生物学技术通过自动化仪器的使用,将在病原菌诊断、鉴定 和耐药基因检测方面越来越广泛地应用于临床。
微生物的分子生物学检测方法
1
2 3
PCR核酸技术 核酸分子技术 结语
目录
简介
PCR核酸 技术
聚合酶链反应( PCR)技术自1985年发明以来,各种各样以 PCR 为基础的DNA序列的扩增和检测方法得到了迅猛发展。 各种衍生技术如反转录PCR ( RTR) 、多重PCR 、巢式PCR、 PCR单链构象多态性(PCRSSCP)、限制性片段长度多态性 （RFLP）、随机扩增的多态性DNA 技术(RAPD)和重复序列 PCR技术(Rep - PCR)、荧光定量PCR等。其中定量PCR 既可 以用于临床感染性疾病的诊断,又可用于监测其疗效，PCR 及其衍生的技术近年来在病原微生物分型研究上得到了广 泛应用。
语
长期以来,人们试图找到一种既简便又快速、又有足够分辨力的技术 来鉴别和区分各种病原微生物，各种新方法和新技术不断涌现，但每一 种方法都有其局限性，为了弥补各自的不足，使用一种以上的技术即采 用多种方法联合使用的策略,一种技术的缺点会被其他技术的优点所代替。 选择检测方法应考虑到自身所拥有的条件,检测所要求达到的灵敏度,而 提高灵敏度和去除假阳性是检测方法发展的趋势。近年来,随着计算机技 术的不断发展,临床病原菌检测将向着简便、快速、高通量、自动化的方 向发展。分子生物学技术通过自动化仪器的使用,将在病原菌诊断、鉴定 和耐药基因检测方面越来越广泛地应用于临床。
微生物的分子生物学检测方法
1
2 3
PCR核酸技术 核酸分子技术 结语
目录
简介
PCR核酸 技术
聚合酶链反应( PCR)技术自1985年发明以来,各种各样以 PCR 为基础的DNA序列的扩增和检测方法得到了迅猛发展。 各种衍生技术如反转录PCR ( RTR) 、多重PCR 、巢式PCR、 PCR单链构象多态性(PCRSSCP)、限制性片段长度多态性 （RFLP）、随机扩增的多态性DNA 技术(RAPD)和重复序列 PCR技术(Rep - PCR)、荧光定量PCR等。其中定量PCR 既可 以用于临床感染性疾病的诊断,又可用于监测其疗效，PCR 及其衍生的技术近年来在病原微生物分型研究上得到了广 泛应用。
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1 PCR核酸技术
2 核酸分子技术
目录
3 结语
PCR核酸 技术
简介
聚合酶链反应( PCR)技术自1985年发明以来,各种各样以 PCR 为基础的DNA序列的扩增和检测方法得到了迅猛发展。 各种衍生技术如反转录PCR ( RTR) 、多重PCR 、巢式PCR、 PCR单链构象多态性(PCRSSCP)、限制性片段长度多态性 （RFLP）、随机扩增的多态性DNA 技术(RAPD)和重复序列 PCR技术(Rep - PCR)、荧光定量PCR等。其中定量PCR 既可 以用于临床感染性疾病的诊断,又可用于监测其疗效，PCR
随机扩增的多态 性DNA 技术
添加标题
核酸分子杂交 技术
具有一定互补序列的核苷酸单链在液相或固 相中按碱基互补配对原则缔合成异质双链的 过程叫核酸分子杂交。具有一定同源性的原 条核酸单链在一定的条件下（适宜的温室度 及离子强度等）可按碱基互补原成双链。杂 交的双方是待测核酸序列及探针（probe）, 待测核酸序列可以是克隆的基因征段，也可 以是未克隆化的基因组DNA和细胞总RNA。
优点
RAPD是目前最简单的DNA分型方法, 分辨力高于RFLP, 但低于 Rep－PCR，RAPD技术的使用范围也非常广,分辨结果也有较好 的实验室再现性，在疾病暴发流行时,PAPD仍是一种分析相关 菌株和排除不相关菌株的良好技术。
缺点
由于其对引物和DNA浓度、DNA模板质量、凝胶电泳和DNA聚合 酶类型的变化高度敏感, 故RAPD的重复性不够理想。虽然RAPD 的分型结果在不同实验室间变化较大,分辨力不如PFGE技术。
（1）灵敏度高 、特异性强； （2）用于 DNADNA和 RNARNA的定 性、定量检测。
特点
（1）检测特异 DNADNA序列 （2）特异基因克
隆的筛选； （3）核酸序列的
初略分析； （4）PCR技术的分
子基础。
应用
原位杂交：直接在组织切片或细胞涂片上进行 杂交反应。该技术可检出细胞中单拷贝mRNA ，估算病毒在宿主细胞中复制和转录的程度， 对于病毒感染（特别是具有长潜伏期的病毒感
染）和其它退行性疾ຫໍສະໝຸດ 的诊断很有用。02Northern 印迹杂交 ：基本原理与 Southern印迹杂交相同，不同的是它 检测mRNA而不是DNA，因此可分析和 了解基因的表达状态。
04
斑点杂交 将待测DNA或细胞裂解物变 性后直接点在硝酸纤维素膜上（无需限 制酶酶解），与探针进行杂交反应。
01
Southern印迹杂交：根据基因探 针与待测DNA限制酶酶解片段杂交 的带谱，可以直接确定宿主基因的 缺陷所在或病原体的存在状态
及其衍生的技术近年来在病原微生物分型研究上得到了广 泛应用。
重复序
随机扩增 列PCR
的多态性
技术
DNA 技
术 免疫
PCR
随机扩增的多态性DNA技术（RAPD）是一种典型PCR衍生技术, 在低复性温度下用短任意序列引物(10～15m ers) 扩增有密切 同源性的基因组DNA序列, 模板上任意引物杂交点的数目和位 置因种的不同株而异, 理论上特定株形成特定图谱。反应出不 同菌株基因组的DNA特点,从而对他们进行分型
03
核酸打点杂交：它是将一定量的病毒
核酸(DNA或RNA)打点在固相支持膜
上,然后与放射性或非放射性标记的
(DNA或RNA)探针进行杂交,杂交后
通过放 射自显影或显色反应检测杂
交信号。
05
原原位位杂杂交交
斑点杂交
Southern印迹杂交
核核酸酸杂杂交交
Northern 印迹杂交
结语
长期以来,人们试图找到一种既简便又快速、又有足够分辨力的技术 来鉴别和区分各种病原微生物，各种新方法和新技术不断涌现，但每一 种方法都有其局限性，为了弥补各自的不足，使用一种以上的技术即采 用多种方法联合使用的策略,一种技术的缺点会被其他技术的优点所代替。 选择检测方法应考虑到自身所拥有的条件,检测所要求达到的灵敏度,而 提高灵敏度和去除假阳性是检测方法发展的趋势。近年来,随着计算机技 术的不断发展,临床病原菌检测将向着简便、快速、高通量、自动化的方 向发展。分子生物学技术通过自动化仪器的使用,将在病原菌诊断、鉴定 和耐药基因检测方面越来越广泛地应用于临床。
2 核酸分子技术
目录
3 结语
PCR核酸 技术
简介
聚合酶链反应( PCR)技术自1985年发明以来,各种各样以 PCR 为基础的DNA序列的扩增和检测方法得到了迅猛发展。 各种衍生技术如反转录PCR ( RTR) 、多重PCR 、巢式PCR、 PCR单链构象多态性(PCRSSCP)、限制性片段长度多态性 （RFLP）、随机扩增的多态性DNA 技术(RAPD)和重复序列 PCR技术(Rep - PCR)、荧光定量PCR等。其中定量PCR 既可 以用于临床感染性疾病的诊断,又可用于监测其疗效，PCR
随机扩增的多态 性DNA 技术
添加标题
核酸分子杂交 技术
具有一定互补序列的核苷酸单链在液相或固 相中按碱基互补配对原则缔合成异质双链的 过程叫核酸分子杂交。具有一定同源性的原 条核酸单链在一定的条件下（适宜的温室度 及离子强度等）可按碱基互补原成双链。杂 交的双方是待测核酸序列及探针（probe）, 待测核酸序列可以是克隆的基因征段，也可 以是未克隆化的基因组DNA和细胞总RNA。
优点
RAPD是目前最简单的DNA分型方法, 分辨力高于RFLP, 但低于 Rep－PCR，RAPD技术的使用范围也非常广,分辨结果也有较好 的实验室再现性，在疾病暴发流行时,PAPD仍是一种分析相关 菌株和排除不相关菌株的良好技术。
缺点
由于其对引物和DNA浓度、DNA模板质量、凝胶电泳和DNA聚合 酶类型的变化高度敏感, 故RAPD的重复性不够理想。虽然RAPD 的分型结果在不同实验室间变化较大,分辨力不如PFGE技术。
（1）灵敏度高 、特异性强； （2）用于 DNADNA和 RNARNA的定 性、定量检测。
特点
（1）检测特异 DNADNA序列 （2）特异基因克
隆的筛选； （3）核酸序列的
初略分析； （4）PCR技术的分
子基础。
应用
原位杂交：直接在组织切片或细胞涂片上进行 杂交反应。该技术可检出细胞中单拷贝mRNA ，估算病毒在宿主细胞中复制和转录的程度， 对于病毒感染（特别是具有长潜伏期的病毒感
染）和其它退行性疾ຫໍສະໝຸດ 的诊断很有用。02Northern 印迹杂交 ：基本原理与 Southern印迹杂交相同，不同的是它 检测mRNA而不是DNA，因此可分析和 了解基因的表达状态。
04
斑点杂交 将待测DNA或细胞裂解物变 性后直接点在硝酸纤维素膜上（无需限 制酶酶解），与探针进行杂交反应。
01
Southern印迹杂交：根据基因探 针与待测DNA限制酶酶解片段杂交 的带谱，可以直接确定宿主基因的 缺陷所在或病原体的存在状态
及其衍生的技术近年来在病原微生物分型研究上得到了广 泛应用。
重复序
随机扩增 列PCR
的多态性
技术
DNA 技
术 免疫
PCR
随机扩增的多态性DNA技术（RAPD）是一种典型PCR衍生技术, 在低复性温度下用短任意序列引物(10～15m ers) 扩增有密切 同源性的基因组DNA序列, 模板上任意引物杂交点的数目和位 置因种的不同株而异, 理论上特定株形成特定图谱。反应出不 同菌株基因组的DNA特点,从而对他们进行分型
03
核酸打点杂交：它是将一定量的病毒
核酸(DNA或RNA)打点在固相支持膜
上,然后与放射性或非放射性标记的
(DNA或RNA)探针进行杂交,杂交后
通过放 射自显影或显色反应检测杂
交信号。
05
原原位位杂杂交交
斑点杂交
Southern印迹杂交
核核酸酸杂杂交交
Northern 印迹杂交
结语
长期以来,人们试图找到一种既简便又快速、又有足够分辨力的技术 来鉴别和区分各种病原微生物，各种新方法和新技术不断涌现，但每一 种方法都有其局限性，为了弥补各自的不足，使用一种以上的技术即采 用多种方法联合使用的策略,一种技术的缺点会被其他技术的优点所代替。 选择检测方法应考虑到自身所拥有的条件,检测所要求达到的灵敏度,而 提高灵敏度和去除假阳性是检测方法发展的趋势。近年来,随着计算机技 术的不断发展,临床病原菌检测将向着简便、快速、高通量、自动化的方 向发展。分子生物学技术通过自动化仪器的使用,将在病原菌诊断、鉴定 和耐药基因检测方面越来越广泛地应用于临床。