临床微生物实验室细菌鉴定指南汇总
CNAS-GL028：2018《临床微生物检验程序验证指南》
CNAS-GL028临床微生物检验程序验证指南Guidance on the Verification of Procedures used in the Clinical Microbiology中国合格评定国家认可委员会前言本文件由中国合格评定国家认可委员会（CNAS）制定，是对CNAS-CL02：2012《医学实验室质量和能力认可准则》和CNAS-CL02-A005:2018《医学实验室质量和能力认可准则在临床微生物学检验领域的应用说明》中有关临床微生物检验程序验证所做的具体解释和指导，供医学实验室和评审员参考使用。
本文件的附录A和附录B为资料性附录。
本文件代替：CNAS-GL41：2016。
本次为换版修订，相对于CNAS-GL41：2016，本次换版仅涉及文件编号改变。
临床微生物检验程序验证指南1 范围本指南适用于申请认可或已经认可的医学实验室规范其临床微生物检验程序验证的技术活动，也可供认可评审员在评审过程中使用。
本指南主要适用于医学实验室临床微生物检验，其他领域的实验室可参考使用。
临床微生物检验程序，也称临床微生物检验方法，在本指南中统一称为临床微生物检验程序（以下简称“检验程序”），包括显微镜检查、分离培养和鉴定、药物敏感试验等各项检验活动。
2引用文件3 术语和定义4 检验程序验证4.1在常规应用前，应由实验室对未加修改而使用的已确认的检验程序进行独立验证。
实验室应从制造商或方法开发者获得相关信息，以确定检验程序的性能特征。
实验室进行的独立验证，应通过获取客观证据（以性能特征形式）证实检验程序的性能与其声明相符。
验证过程证实的检验程序的性能指标，应与检验结果的预期用途相关。
细菌鉴定和药敏系统的验证，应按优先顺序依次选择标准菌株、质控菌株或其它已知菌株对商业鉴定系统（包括自动、半自动、手工）每种板（条/卡/管）的鉴定/药敏结果符合性进行验证。
注：已确认的检验程序是经国家卫生管理部门批准的体外诊断医疗器械使用说明书中规定的程序，或国际公认标准或指南中的，或国家、地区法规中规定的程序。
临床细菌培养鉴定流程及报告.介绍
3．分离培养 ⑴一般培养: 用定量接种环或无菌微量 加样器取尿液0.001ml或0.01ml(已使用 抗生素患者),接种于血平板和麦康凯/中 国兰平板,不能定量时需用倾碟法记数， 35～37℃培养18～24小时。 (2)特殊培养: 对临床要求真菌、淋病奈 瑟菌及结核菌等培养者，根据细菌所需 条件接种相应特殊培养基，放臵相应条 件下进行培养。
(三 ) 尿 尿路感染是指尿道内有大量微生物繁殖 而引起的尿路炎症。从肾脏排泌出来的 尿液正常情况下是无菌的，如果在尿液 中分离出细菌（排除污染因素）即为菌 尿，同时伴有感染症状者称为尿路感染。 根据感染部位可分为上尿路感染（肾盂 肾炎）及下尿路感染（膀胱炎），男性 还可出现前列腺炎。
1.尿中常见分离菌
⑵采血时间及采血量 采血培养应该尽量在使
用抗菌药之前进行，在24小时内采集2～3份血
培养（一次静脉采血注入到多个培养瓶中应视
为单份血培养）。对间歇性寒战或发热应在寒 战或体温高峰到来之前0.5～1小时，采集血液， 或于寒战或发热后1小时进行。成人采血量8～ 10ml，儿童1～5ml。血液和肉汤之比1：5 ～1：
(2)标本采集 a.清洁中段尿 最好是晨尿，是临床上 最常留取尿标本的方法 b.耻骨上膀胱穿刺法 是评估膀胱内细 菌感染的“金标准” c.直接导尿法 d.小儿收集包 e.留臵导尿
(3)标本运送 标本采集后应及时送检， 2小时内进行接种，否则应臵4～8℃冰箱 保存，冷藏保存标本时间不得超过8小时。
(2)报告方式 初步报告：在分离出细菌后，进行革兰 氏染色，作出初步报告。 最终报告：有意义的阳性结果报告，应 报告菌落计数、细菌种名及药敏结果。 无意义的阳性结果报告，报告菌落 数、革兰氏染色形态特征，并注明是纯 培养或是混合菌生长。 阴性结果报告:应报告无菌生长和菌落计 数＜1000cfu/ml或 ＜100cfu/ml尿。
胡方芳-临床微生物标本常见细菌培养和鉴定
三 细菌鉴定的基本依据
• 基本结构：形态与染色 • 生长特性：培养特性 • 细菌代谢产物：生化反应： • 细菌免疫学特征：血清学试验： • 遗传特征：分子生物学实验 • 其他：质谱分析技术、色谱分析技术等
四 细菌鉴定基本步骤
• （一） 挑选可疑菌落 • （二） 涂片染色 • （三） 生化反应试验 • （四） 血清学试验 • （五） 其他相关试验
• 粪便：接种血平板、SS平板和麦康凯平板 置普通温箱 35℃孵育
• 脓液及创伤感染分泌物：血平板 置普通温箱 35℃孵育
• 生殖道：接种血平板和淋球菌平板 置CO2温箱 35℃孵 育
一 常见细菌培养
• 培养特性： 1 适宜生长温度：大多数病原菌35-37℃，某些在
低温（李斯特菌属 4 ℃ 缓慢生长）或高温下生 长 2 气体环境：需氧菌、兼性厌氧、微需氧（5%O2、 10%CO2 如肺炎链球菌、淋病奈瑟氏菌等）、厌 氧菌
菌）、辣味（金黄色葡萄球菌）等
（3）菌落溶血特征 α溶血/草绿色溶血： β溶血： γ溶血/不溶血：
链球菌的溶血现象
2 液体培养基 （1）均匀浑浊生长 （2）沉淀生长 （3）表面生长（菌膜）
（二） 涂片染色
• 染色：革兰染色：革兰阳性菌、革兰阴性菌 • 形态、大小和排列：球形、杆形、螺旋形，菌体
大小，单个、成双、葡萄状等
-
迁移生长 +
洋葱 类鼻疽 巴斯特 其他
铜绿
- 靛基质
其他
沙雷 枸橼 肠杆菌 嗜麦芽 不动 沙门 其他
+
变形杆菌
大肠
革兰阴性球菌
氧化酶（+） G- Co：
脑膜炎双Co 卡他布兰汉
淋球菌
血平板 + 巧克力 + 普通平板 （除卡他）
微生物细菌鉴定试验汇总
5.枸橼酸盐（或柠檬酸盐）利用试验
【原理】：当细菌可以利用铵盐作为唯一氮源，同时柠檬酸
盐为惟一碳源时，可在柠檬酸盐培养基上生长，分解柠檬 酸盐为碳酸盐，使培养基变碱，指示剂溴麝香草酚蓝由绿
色变为深蓝色为阳性，培养基不变色（绿色）为阴性。
【方法】：大肠埃希菌和产气肠杆菌分别接种于柠檬酸盐培 养基中，35º C，24-48h，观察。 【结果】：菌苔出现，培养基变为深蓝色为阳性。细菌不能 生长，培养基不变色（绿色）为阴性。
变黑，说明该菌产生硫化氢，生成黑色的硫化铁
沉淀。
7.动力、吲哚及脲酶（MIU）复合试验
【原理】：培养基为含尿素、蛋白胨的半固体培养基，指示 剂为酚红。具色氨酸酶的细菌能分解色氨酸产生吲哚，加 入吲哚试剂后，培养基上层的吲哚会变红；具脲酶的细菌 能分解尿素产氨，使整个培养基变碱呈红色；有动力的细 菌沿穿刺线扩散生长。 【方法】：将大肠埃希菌和普通变形杆菌穿刺线接种于MIU 培养基，35º C，18-24h，观察动力和脲酶反应后，再滴加 吲哚试剂。 【结果】：扩散生长为动力阳性；滴加吲哚试剂后呈玫瑰 红色为阳性；培养基变红脲酶阳性。
分 解
致病菌：
不分解乳糖，菌落呈 无色、半透明。
美蓝
伊红 结合
紫黑色或紫红色化合物
其它类似培养基？
SS培养基
（Salmonella Shigella Agar Medium）
SS平板
基质
抑制物 底物 指示剂
肉汤基础培养基
胆盐、煌绿、枸橼酸钠、硫代硫酸钠 乳糖 中性红 pH（6.8—8.0） 碱性→黄色 酸性→红色
常用细菌生化反应
触酶试验
凝固酶试验
胆汁溶菌试验 氧化/发酵试验 氧化酶试验 苯丙氨酸脱氨酶试验 硝酸盐还原试验 糖发酵试验
CNAS-GL41临床微生物检验程序验证指南
包括显微镜检查、分离培养及鉴定、药敏试验等在内的临床微生物的检验方法（检验程序）如何验证？很多人对此非常困惑。
由CNAS2016.5.30新鲜发布的《临床微生物检验程序验证指南》犹如一盏明灯给大家指明了具体的方向。
虽然是针对认可实验室制定的指南文件，其他实验室亦可参考。
部分内容节选4.3 显微镜检查显微镜检查程序包括涂片制备、染色镜检和结果报告过程。
实验室在开展各种类型显微镜检查（如革兰染色、抗酸染色、墨汁染色等）前应对本实验室使用的检验程序进行验证，并由经培训有涂片镜检能力的实验室人员操作。
检查方法可包括手工染片法和自动化染片法。
所有样品及其盛放容器均应当作有传染性物质，并按照实验室生物安全要求进行操作。
4.3.1 验证要求显微镜检查程序的验证应包括能力验证/实验室间比对和实验室内人员比对（当多名人员从事该项目时）。
如果没有可获得的能力验证或室间质评，实验室应自行组织实验室间比对（宜与通过认可的实验室比对）。
若实验室同时开展手工染片法和自动化染片法，应进行两种方法的实验室内部比对。
4.3.2比对方案4.3.2.1 样品数量每项检查应使用至少 5 份样品进行验证，覆盖全部样品类型，无菌样品类型包含阴性和阳性结果。
实验室应优先使用已知结果的留样样品，当不可获取时可采用模拟样品。
4.3.2.2 检验程序按临床标本常规方式处理,由本岗位工作人员使用实验室检验程序进行涂片制备、染色、镜检、判读。
4.3.2.3 结果报告根据实验室程序文件规定进行结果报告，其中抗酸杆菌应根据“分级报告标准”报告镜检结果。
4.3.3 可接受标准每项检查的比对结果符合率≥80% 。
4.4.1 血培养血培养检验程序包括从病人血液采集、运送、接收、孵育及监测的全过程。
目前临床实验室广泛使用全自动血培养系统。
临床微生物实验室血培养系统性能验证的主要目的是评估系统使用的培养基能否用于培养临床常见微生物（包括酵母菌、厌氧菌、苛养菌等）以及仪器（自动化系统）能否及时检测出血液中的大部分病原菌。
细菌鉴定技术-临床微生物学跟微生物学检验资料文档
6.克氏双糖铁（KIA）复合试验
【方法】：将待检菌接种于克氏双糖铁培养基（底 层穿刺，上层斜面划线），35ºC，24h，观察。
【结果】：发酵乳糖和葡萄糖产酸产气，则上层和 底层均呈黄色且有气泡产生；只发酵葡萄糖而不 发酵乳糖，则底层变黄，上层仍为红色。如底层 变黑，说明该菌产生硫化氢，生成黑色的硫化铁 沉淀。
【方法】：大肠埃希菌和产气肠杆菌分别接种葡萄糖蛋白胨 水培养基中，35ºC18-24h，加入甲基红指示剂2-3滴观察 结果。
【结果】：红色为阳性，黄色为阴性。
－
+
4.V-P（Voges-Proskauer）试验
【原理】：某些细菌分解葡萄糖生成丙酮酸，进一步脱羧生成乙 酰甲基甲醇，在碱性环境下被氧化成二乙酰，后者与蛋白胨中 的精氨酸所含的胍基起作用，生成红色胍缩二乙酰，为VP试验 阳性。若培养基中胍基含量少，加入少量含胍基的化合物如肌 酐，以加速其反应。
实验内容
生化反应培养基的制备。 常用细菌生化反应。 数字编码鉴定 。
一、生化反应培养基的制备
不同生化反应需选择不同生化反应培养 基。
按相应培养基配方及配制要求，制备所 需生化反应培养基。
制备方法同培养基制备技术
二、常用细菌生化反应
糖发酵试验 吲哚试验（靛基质试验） 甲基红试验 V-P（Voges-Proskauer）试验 枸橼酸盐（或柠檬酸盐）利用试验 克氏双糖铁（KIA）复合试验 动力、吲哚及脲酶（MIU）复合试验
【方法】：大肠埃希菌和产气肠杆菌分别接种于柠檬酸盐培 养基中，35ºC，24-48h，观察。
【结果】：菌苔出现，培养基变为深蓝色为阳性。细菌不能 生长，培养基不变色（绿色）为阴性。
6.克氏双糖铁（KIA）复合试验
CNAS-GL028：2018《临床微生物检验程序验证指南》
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本文件的附录A和附录B为资料性附录。
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临床微生物检验程序验证指南1 范围本指南适用于申请认可或已经认可的医学实验室规范其临床微生物检验程序验证的技术活动，也可供认可评审员在评审过程中使用。
本指南主要适用于医学实验室临床微生物检验，其他领域的实验室可参考使用。
临床微生物检验程序，也称临床微生物检验方法，在本指南中统一称为临床微生物检验程序（以下简称“检验程序”），包括显微镜检查、分离培养和鉴定、药物敏感试验等各项检验活动。
2引用文件3 术语和定义4 检验程序验证4.1在常规应用前，应由实验室对未加修改而使用的已确认的检验程序进行独立验证。
实验室应从制造商或方法开发者获得相关信息，以确定检验程序的性能特征。
实验室进行的独立验证，应通过获取客观证据（以性能特征形式）证实检验程序的性能与其声明相符。
验证过程证实的检验程序的性能指标，应与检验结果的预期用途相关。
细菌鉴定和药敏系统的验证，应按优先顺序依次选择标准菌株、质控菌株或其它已知菌株对商业鉴定系统（包括自动、半自动、手工）每种板（条/卡/管）的鉴定/药敏结果符合性进行验证。
注：已确认的检验程序是经国家卫生管理部门批准的体外诊断医疗器械使用说明书中规定的程序，或国际公认标准或指南中的，或国家、地区法规中规定的程序。
临床微生物检验知识点
临床微生物检验知识点1.微生物学基础知识：了解细菌、真菌、病毒、寄生虫等病原微生物的基本特征，包括形态、生长要求、代谢特性等。
2.微生物的分离和培养：熟悉常规培养基的选择和制备，掌握不同微生物的适宜培养条件，如温度、pH值、氧气需求等。
3.微生物鉴定：根据微生物的形态和特性进行初步鉴定，如形态学特征、革兰氏染色、厌氧性检测等。
此外，还可以使用生物化学试纸、血清学试验、分子生物学等方法进行鉴定。
4.耐药性检测：对微生物进行药敏试验，了解其对各类抗生素、抗真菌药物、抗病毒药物的敏感性和耐药性。
这有助于临床医生选择合适的药物治疗感染。
6.检验流程和规范：了解微生物检验的标本采集、处理和保存的基本要求，掌握各类检验方法的操作步骤，遵守无菌操作规范，以保证检验结果的准确性和可靠性。
7.抗生素治疗和微生物学监测：了解抗生素的分类、作用机制和临床应用，以及微生物的产生耐药性的机制和监测方法。
合理应用抗生素，避免滥用和不当使用，是临床微生物检验的重要目标之一8.感染控制：了解医院感染控制的基本原则和措施，包括手卫生、环境清洁、消毒灭菌、隔离措施等。
临床微生物检验在感染控制中发挥着重要作用，通过对患者、环境和医务人员的监测，提供科学依据进行感染防控。
9.病原微生物的定量检测：对一些病原微生物，如HIV、肺结核菌等，需要进行定量检测。
这有助于预测疾病进展、评估治疗效果和制定治疗方案。
10.新技术和新方法的应用：随着科技的进步，临床微生物检验也不断发展，新的方法和技术被广泛应用，如实时荧光PCR、质谱技术、核酸杂交等。
了解这些新技术的原理和应用，可以提高检验的灵敏度和特异性。
总结起来，临床微生物检验的知识点涉及微生物学基础、分离培养、鉴定、药敏试验、诊断、标本采集处理、抗生素治疗和感染控制等方面。
掌握这些知识，可以提高临床微生物检验的准确性和可靠性，为临床医生提供更科学的诊断和治疗建议。
微生物检验实验室细菌鉴定操作规程
微生物检验实验室细菌鉴定操作规程
1．目的
规范细菌鉴定标准操作规程。
2．适用范围
革兰阴性菌、革兰阳性菌等。
3．职责
检验人员严格执行本程序。
4．程序
4.1 观察菌落大小、颜色、气味、溶血、形态特征等，观
察内容应记录在《细菌鉴定流程表》。
4.2 涂片，革兰染色，观察染色性及细菌形态、大小和排列，球菌、杆菌或螺形菌等，观察内容记录在《细菌鉴定流程表》。
4.3 初步生化反应根据菌落特征和涂片结果选择初步生化反应，如氧化酶、触酶、凝固酶（玻片法）等。
4.4 制定细菌鉴定方案
4.4.1 仪器鉴定方案（以VITEK2为例）
革兰阴性杆菌：选择GN卡（阴性菌鉴定卡）。
革兰阳性球菌：选择GP卡（阳性菌鉴定卡）。
酵母菌：选择YST卡（酵母菌鉴定卡）。
需氧芽孢杆菌：选择BBL卡（需氧芽孢杆菌卡）。
4.4.2 手工细菌鉴定法
氧化酶阳性革兰阴性杆菌，选择非发酵鉴定生化反应组合：葡萄糖O/F、木糖、麦芽糖、硝酸盐、动力、七叶苷等生化反应。
氧化酶阴性革兰阴性杆菌，选择肠杆菌科细菌鉴定生化反应组合：触酶、硝酸盐、葡萄糖O/F、动力、乳糖、VP、吲哚、甲基红、枸橼酸盐、精氨酸、鸟氨酸、赖氨酸等生化反应。
疑不动杆菌氧化酶阴性革兰阴性杆菌，选择非发酵鉴定生化反应组合。
革兰阳性球菌，选择革兰阳性球菌鉴定生化反应组合：触酶、葡萄糖O/F、胆汁七叶苷、蔗糖、木糖、甘露醇、硝酸盐、脲酶等。
临床微生物标本的送检与采样指南
临床微生物标本的送检与采样指南呼吸道标本采集及运输一、上呼吸道标本1、送检指征上呼吸道感染包括咽炎、喉炎、会厌炎等，凡具有以下情况任何一项者疑似患者。
1.1 病毒性普通感冒伴有明显咽痛时，怀疑为咽部链球菌感染，应做细菌培养。
1.2 细菌性咽-扁桃体炎：明显咽痛、咽部发红、畏寒、发热，体温可达39°C以上。
1.3 喉咙痛、咳嗽、喉部有脓样分泌物等临床症状。
1.4 上呼吸道感染易并发鼻窦炎、中耳炎、气管-支气管炎，需送相应部位分泌物或痰液进行细菌培养。
2、标本采集上呼吸道标本包括鼻、鼻咽、咽拭子标本。
应根据临床表现和感染部位的不同有选择性的采集标本，以便更好地分离出病原菌。
采集时应选择无菌、不含抑制剂的棉拭子，预先用无菌生理盐水或营养肉汤蘸湿拭子，并直取感染部位，减少污染。
2.1 鼻拭子的采集：最好使用扩鼻器，先用拭子拭去鼻黏膜表面的分泌物并丢弃，用第2个试子蘸取无菌生理盐水或营养肉汤，插入鼻孔采集病灶标本。
2.2 咽拭子的采集：采集标本时患者先用清水漱口，由检查者将舌向外拉，使腭垂尽可能向外牵引，用无菌的鼻咽拭子（一端弯曲的金属棉拭）由口腔进入，越过舌根到咽后壁或腭垂后侧，采集鼻咽红肿处标本，取材后小心将试子退出，立即放人无菌试管内。
若咽部明显发红或有假膜存在时，应在局部擦拭取标本（最好拭子从膜底下擦拭）。
采集标本可在咽部多点采集标本，以提高检出率。
若无局部病变或做带菌者测试应于咽部或扁桃体上擦拭。
3、采集时间及频率3.1 检查时间：应于抗菌药物应用之前。
时间上无严格限制，但咽部是呼吸和食物的通路，也应晨起后采集为佳。
3.2 采集频率：重复采集标本的频率一般每日最多1次。
4、标本的运输标本采集后应立即送检，室温运送时间小于2小时，如果不能立即接种，必须装在无菌运送培养基中，避免由于干燥而使某些细菌死亡。
检测淋病奈瑟菌或脑膜炎奈瑟菌的拭子应放人含碳的转运培养基，采集后2小时内接种平板，以防细菌死亡。
《医学微生物学》临床常见病原菌的培养与鉴定
《医学微生物学》临床常见病原菌的培养与鉴定病原菌的鉴定是将一个未知菌株按其生物学特征，经过与所有已知菌种进行比较后到一个已知菌种的分析过程。
根据感染特性选择合适的培养基，首先要明确被鉴定菌种已获得纯培养。
然后确定革兰氏染色性、形态，再按科、属、种逐步鉴定下来。
应该利用已具备的条件，尽可能地缩小鉴定范围，这是在作实验设计时必须想到的，要用最小数量的试验方法作出鉴定。
基于鉴定菌的特点，选用合适的鉴定体系，力求方法学简单，反应判断明确，价廉的方法。
血清学鉴定由于操作简便、快速、特异性高，给细菌学鉴定提供了快速诊断方法。
对培养困难的病原菌，可考虑应用基因水平的鉴定技术。
最后还要提示，对检测人员应把知识和经验运用到每一鉴定步骤。
【球菌】球菌主要引起化脓性炎症，故又称化脓性球菌。
包括葡萄球菌、链球菌、肺炎链球菌、脑膜炎奈瑟菌及淋病奈瑟菌等，根据革兰氏染色可将其分为两类，均无鞭毛和芽孢，少数可形成荚膜。
本实验要求了解化脓性球菌的形态特征及染色性、链球菌溶血素“O”试验；葡萄球菌、链球菌及奈瑟球菌的检验程序和主要的鉴定方法；肺炎链球菌Op—tochin敏感试验。
一、葡萄球菌属葡萄球菌属(Staphylococcus)的细菌常堆聚成葡萄串状。
能引起皮肤粘膜、多种组织器官的化脓性炎症，是最常见的化脓性球菌。
有的菌株还可引起食物中毒、烫伤样皮肤综合征、毒性休克综合征等，又是医院内交叉感染的重要传染源。
近年来，耐药性菌株逐年增多。
临床上首先要与其他革兰氏阳性球菌鉴别，然后再作属内种的鉴定及致病性的检测。
[材料]1．菌种：葡萄球菌培养物。
2．培养基：血琼脂平板，普通琼脂平板，甘露醇发酵管，氧化、发酵(OF)管，甲苯胺蓝核酸琼脂。
3．试剂：兔血浆、3％H2O2、致敏胶乳／红细胞制剂。
4．其他：革兰氏染液、玻片、一次性卡片。
[方法]1．形态学观察：取普通琼脂平板上葡萄球菌培养物少许，涂片，革兰氏染色，镜检。
可见到葡萄状排列的革兰氏阳性球菌。
微生物鉴定
临床微生物实验室细菌鉴定指南一．细菌的鉴定步骤1．鉴定的概念：将一个未知的菌株按其生物学特性，经过与所有已知菌种进行比较后划归到一个已知菌种的分析过程。
2．对待鉴定的菌种要明确已经获得纯化培养或者该菌种在血平板上生长良好，有单个菌落可以进行生化试验。
（我们这里一般都是预先纯化培养）3．对待鉴定的菌种进行革兰染色，观察形态（G+c，G–b，G–c，G+b），做触酶，氧化酶实验，然后按科，属，种逐步鉴定。
要注意对待鉴定的菌种选择一个合适的鉴定系统，临床常见细菌的快速简单的鉴定系统我们都已经设计好，参考鉴定质控单。
4．按鉴定质控单的要求填写好病人姓名，年龄，性别；标本类型，标本编号，送检日期等。
另外最重要的是要填写好该菌种的菌落形态以及有无溶血。
5．复习革兰染色，触酶实验，氧化酶实验。
⑴．革兰染色：是细菌鉴定过程中最常用最基本最重要的染色方法。
首先要将待鉴定的细菌涂片，固定（目的：杀死细菌，改变细菌对染料的通透性）。
第一步：以结晶紫初染（染色液Ⅰ）第二步：以卢戈氏碘液媒染（染色液Ⅱ）第三步：用95%乙醇脱色（染色液Ⅲ）第四步：最后用稀释复红复染（染色液Ⅳ）⑵．触酶实验(H2O2实验)：a.原理：具有过氧化氢酶的细菌能催化双氧水生成水和初生态氧，继而形成氧分子出现气泡。
b.方法：一般用玻片法，就是挑取菌落在洁净的玻片上涂开，滴加3%过氧化氢数滴，观察结果（立即有大量气泡产生者为阳性，不产生气泡者为阴性）。
要注意不能在血平板上进行实验，这样易出现假阳性；另外陈旧菌落要是进行实验可能会导致假阴性结果；还有不能在接种针或环上进行实验。
c.阳性对照用金黄色葡萄球菌，阴性对照用链球菌；试剂要避光置4℃冰箱保存。
d.应用：绝大多数含细胞色素的需氧和兼性厌氧细菌触酶实验阳性，链球菌属阴性。
临床常见细菌鉴定实验中我们一般用于区别葡萄球菌属（+），微球菌属（+），链球菌属（－）。
⑶．氧化酶实验（Kovac实验）：a. 原理：氧化酶又称细胞色素酶，是细胞色素呼吸酶系统的最终呼吸酶。
微生物实验室菌型鉴定法规或指南
微生物实验室菌型鉴定法规或指南微生物实验室菌型鉴定是微生物学研究中至关重要的一环，为了确保实验室工作的准确性和可靠性，需要遵循一系列的法规和指南。
本文将从法规和指南的重要性、相关法规和指南的概述、鉴定方法的具体步骤以及质量控制等方面进行介绍。
一、法规和指南的重要性微生物实验室菌型鉴定法规和指南的制定，是为了确保微生物实验室工作的规范化、标准化和可控性，在实验过程中提高数据的可靠性和准确性。
通过遵守相关法规和指南，可以提高实验室的工作效率和质量，保障科学研究的进展和应用的可行性。
二、相关法规和指南的概述在微生物实验室菌型鉴定方面，国际上较为常用的法规和指南包括《美国药典》（USP）、《欧洲药典》（EP）、《中国药典》（CP）等。
这些法规和指南包括了实验室的组织管理、标本的采集、保存和运输、试剂和仪器的选择和使用、鉴定方法的具体步骤以及结果分析和报告等方面的要求和规定，对实验室的工作提供了非常重要的指导。
三、鉴定方法的具体步骤微生物实验室菌型鉴定的具体步骤包括了样本的准备、培养、鉴定和结果确认等几个关键环节。
首先是样本的准备，需要根据标本的来源和特点选择合适的采样方法，并对采集的标本进行适当的处理和保存。
其次是培养，通过不同的培养基和条件，促使菌株在实验室中迅速增殖，以便进行鉴定。
然后是鉴定，通过生理生化试验、分子生物学方法和形态学观察等手段，对培养出的菌株进行鉴定和分类。
最后是结果确认，通过对鉴定结果的分析和验证，确认菌型的种属和特性。
四、质量控制在微生物实验室菌型鉴定中，质量控制是非常重要的一环。
质量控制包括实验室内部的质量管理和外部的质量评价，通过标准化的操作流程和规范化的管理机制，确保实验室工作的准确性和可靠性。
同时，实验室需要参与外部的质量评价活动，接受第三方的审核和检验，提高实验室工作的透明度和公信力。
综上所述，微生物实验室菌型鉴定法规和指南的制定和执行，对于实验室工作的规范化和标准化具有重要的意义。
临床微生物检验知识点
临床微生物检验知识点临床微生物检验是通过对临床样本进行微生物学检验，利用各种实验方法和技术手段，对病原微生物进行鉴定、分离、培养和药敏试验，从而帮助医生进行准确诊断和合理治疗的一项重要检测技术。
以下是一些临床微生物检验的知识点。
1.微生物的鉴定：通过观察病原微生物的形态特征、生理生化指标、生物学特征等，进行鉴定。
常用的方法包括显微镜观察、革兰染色、培养特性观察等。
2.微生物的分离：将样本中的微生物分离出来，使其能够单独生长并进行后续的检验和鉴定。
常用的方法包括涂布法、稀释涂布法、过滤法等。
3.微生物的培养：将分离后的微生物进行培养，使其能够增殖形成纯种，并提供足够的数量用于进一步检验。
常用的培养基包括富养基、选择性富养基、增菌富养基等。
4.微生物的药敏试验：通过对分离的病原微生物进行不同抗菌药物的敏感性试验，确定该微生物对抗菌药物的敏感性和抗药性。
常用的方法有纸片法、扩散法、微量稀释法等。
5.微生物的快速检测方法：为了达到更快速、准确的临床微生物检测结果，目前发展了许多快速检测方法，如PCR技术、基因测序技术、质谱技术等。
6.微生物的标本采集和保存：正确的标本采集对于临床微生物检验结果的准确性和可靠性至关重要。
常见的标本有血液、尿液、痰液、脑脊液、伤口分泌物等。
标本采集后应存放在适当的条件下，以避免微生物的生长和变质。
7.常见病原微生物的检验：临床微生物检验主要涉及到常见的病原微生物，如细菌、真菌、病毒和寄生虫等。
对于每种病原微生物的检验方法和操作要点有所不同。
8.质量控制：临床微生物检验对质量控制要求较高，包括内、外质控。
内质控主要通过引入质控菌株进行培养和药敏试验等操作，确保检测结果的准确性和可靠性。
外质控则是通过参加各种质量评估项目来衡量实验室的检测质量。
在临床微生物检验过程中，需要严格遵守相关的操作规范和质量控制要求，以确保检验结果的准确性和可靠性。
临床医生在接到微生物检测结果后，应结合临床病情和患者的病史等信息，合理解读检验结果，并进行科学的诊断和治疗。
临床微生物实验室细菌鉴定指南汇总
临床微生物实验室细菌鉴定指南(续)温州医学院附属第一医院实验诊断中心潘钦石一．细菌的鉴定步骤1．鉴定的概念：将一个未知的菌株按其生物学特性，经过与所有已知菌种进行比较后划归到一个已知菌种的分析过程。
2．对待鉴定的菌种要明确已经获得纯化培养或者该菌种在血平板上生长良好，有单个菌落可以进行生化试验。
（我们这里一般都是预先纯化培养）3．对待鉴定的菌种进行革兰染色，观察形态（G+c，G–b，G–c，G+b），做触酶，氧化酶实验，然后按科，属，种逐步鉴定。
要注意对待鉴定的菌种选择一个合适的鉴定系统，临床常见细菌的快速简单的鉴定系统我们都已经设计好，参考鉴定质控单。
4．按鉴定质控单的要求填写好病人姓名，年龄，性别；标本类型，标本编号，送检日期等。
另外最重要的是要填写好该菌种的菌落形态以及有无溶血。
5．复习革兰染色，触酶实验，氧化酶实验。
⑴．革兰染色：是细菌鉴定过程中最常用最基本最重要的染色方法。
首先要将待鉴定的细菌涂片，固定（目的：杀死细菌，改变细菌对染料的通透性）。
第一步：以结晶紫初染（染色液Ⅰ）第二步：以卢戈氏碘液媒染（染色液Ⅱ）第三步：用95%乙醇脱色（染色液Ⅲ）第四步：最后用稀释复红复染（染色液Ⅳ）⑵．触酶实验(H2O2实验)：a.原理：具有过氧化氢酶的细菌能催化双氧水生成水和初生态氧，继而形成氧分子出现气泡。
b.方法：一般用玻片法，就是挑取菌落在洁净的玻片上涂开，滴加3%过氧化氢数滴，观察结果（立即有大量气泡产生者为阳性，不产生气泡者为阴性）。
要注意不能在血平板上进行实验，这样易出现假阳性；另外陈旧菌落要是进行实验可能会导致假阴性结果；还有不能在接种针或环上进行实验。
c.阳性对照用金黄色葡萄球菌，阴性对照用链球菌；试剂要避光置4℃冰箱保存。
d.应用：绝大多数含细胞色素的需氧和兼性厌氧细菌触酶实验阳性，链球菌属阴性。
临床常见细菌鉴定实验中我们一般用于区别葡萄球菌属（+），微球菌属（+），链球菌属（－）。
临床微生物学检验
临床微生物学检验一、痰培养1．英文或缩写：Bacterial Culture of Sputum2．标本采集及注意事项：患者清晨起床，用清水反复漱口后，用力咳深部第一口浓痰置无菌容器中尽快送检。
痰量极少者可用45℃ 10％氯化钠雾化吸入导痰。
对咳嗽乏力或昏迷病人，可用吸痰管经鼻腔或口腔抵达气管腔内吸引痰液。
或用纤维支气管刷直接在病灶部位采集高浓度的感染病原菌，但不能完全避免咽喉部正常菌群污染。
双侧肺部感染伴人工气道如气管切开或气管插管者，可用吸痰管经人工气道估插至肺支气管水平吸引痰液。
对重症、难治、或伴免疫抑制、或疑似厌氧菌引起的医院内肺部感染可采用环甲膜穿刺经气管吸引(TTA)、经胸壁穿刺肺吸引(LA)、经纤维支气管镜或人工气道作防污染双套管毛刷(PSB)或防污染支气管肺泡灌洗(PBAL)采集无口咽部菌群污染的痰液，进行精确的感染病原学诊断。
小儿取痰可用弯压舌板向后压舌，用棉拭子深入咽部，小儿经压舌刺激咳嗽时岢喷出肺部和气管分泌物，粘在棉拭子上，取出检查。
厌氧菌培养通过气管穿刺取痰液，采集后立即排出空气，插入无菌的橡皮塞送检。
痰标本不能及时送检者，可暂存4℃冰箱。
室温下延搁数小时，定植于口咽部的非致病菌呈过度生长，而肺炎球菌、葡萄球菌和流感杆菌检出率则明显下降。
3．检测及报告时间：每天检测，3 天报告结果。
4．正常参考值：正常人只有正常菌群生长，且正常情况下不致病。
5．临床意义：大叶性肺炎、小叶性肺炎、中毒性肺炎等多为肺炎链球菌引起。
近年来，由于抗生素的大量应用，耐药性金葡菌引起的肺炎有所增加，肺炎克雷伯菌、化脓性链球菌、流感嗜血杆菌引起的肺炎则有所减少，少数肺炎也可由大肠埃希菌等革兰阴性杆菌引起。
新儿肺炎产前或产时感染者以病毒、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、变形杆菌最为常见，而产后感染者则以金黄色葡萄菌、链球菌、肺炎链球菌为多见。
慢性支气管炎的病因是多方面的，目前一般认为，病毒感染削弱呼吸道的防御功能，因而招致“条件致病菌”，主要是流感嗜血杆菌和肺炎链球菌的继发感染。
微生物通用技术指南
微生物通用技术指南1. 无菌操作技术
- 正确使用无菌操作台
- 培养基和器皿的无菌处理
- 无菌接种和转种技术
2. 显微镜观察技术
- 光学显微镜的使用和操作
- 制备固定染色和活体染色样品
- 显微镜下观察和拍照技术
3. 培养基制备技术
- 固体培养基的配制和灭菌
- 液体培养基的配制和灭菌
- 选择性和差异性培养基的制备
4. 菌种纯化和保存技术
- 平板划线分离法
- 连续稀释法
- 菌种冷冻保存和活化技术
5. 生化鉴定技术
- 革兰氏染色
- 生化反应试验
- 自动化生化鉴定系统的使用
6. 抗生素敏感性测试
- 纸片扩散法
- 肉汤稀释法
- 自动化药敏分析系统的使用
7. 分子生物学技术
- 基因组DNA提取
- 聚合酶链式反应(PCR)技术
- 基因测序和序列分析
8. 生物安全和废弃物处理
- 生物安全操作规程
- 实验室废弃物的适当处理
- 个人防护设备的正确使用
以上是微生物实验常用的一些通用技术指南。
根据具体实验目的和要求,还需要掌握相关的专门技术和方法。
同时,严格遵守实验室安全规范也是非常重要的。
临床微生物实验室细菌鉴定指南(上)
高层中出现黑色（FeS）：产H2S阳性
⑵．苯丙氨酸脱羧酶试验
细菌产生的苯丙氨酸脱羧酶使苯丙氨酸氧化脱羧后生成苯丙酮酸，再与10%的FeCl3试剂产成深绿色反应。（变形杆菌属﹑普罗威登菌属和摩根菌属为阳性，其他为阴性）
⑶．枸橼酸盐试验（碳源利用实验）
在枸橼酸盐培养基中细菌能利用的碳源只有枸橼酸盐，分解后生成碳酸钠，使培养基变碱性，pH指示剂溴麝香草酚蓝由淡绿色变为深兰色，即为枸橼酸盐试验阳性。（埃希氏菌属，志贺氏菌属，爱德华菌属为阴性，其他为阳性）
a． 动力（－）：克雷伯菌属，属内种的鉴定主要根据吲哚试验（肺克吲哚实验阴性，三个亚种鉴别试验IMViC：肺炎－－＋＋，臭鼻－＋－d，鼻硬结－＋－－）
b． 动力（＋），DNA酶（＋）：沙雷氏菌属
动力（＋），DNA酶（－），枸橼酸盐（＋）：肠杆菌属（主要是阴沟肠杆菌和产气肠杆菌，前者赖氨酸阴性，而后中为阳性）
注意：接种时不能被糖，蛋白胨污染，要单独接种）
⑷．甲基红（MR）试验
细菌分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸进一步分解为甲酸、乙酸、乳酸和琥珀酸等，使培养基的pH下降至4.5以下时，加入甲基红指示剂由桔黄色变桔红色为弱阳性；变红色为阳性。
培养基成分：葡萄糖蛋白胨水
试剂：甲基红0.1g，酒精300ml，水200ml
主要用于大肠埃希菌（＋）和产气肠杆菌（－）的鉴别；常与V-P实验联合使用，一般情况下两者结果正好相反，但也有例外如奇变两者同为阳性。
⑸．MIU（动力－靛基质－尿素）试验
①．动力：在半固体培养基中穿刺接种细菌培养后，若穿刺线周围有细菌扩散生长，则为动力（＋）；清晰则为动力（－）。
②．靛基质试验（吲哚试验）：某些细菌有色氨酸酶，能分解培养基中的色氨酸生成吲哚。吲哚再与试剂对位二氨基苯甲醛作用形成玫瑰吲哚而呈红色。
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临床微生物实验室细菌鉴定指南(续)温州医学院附属第一医院实验诊断中心潘钦石一．细菌的鉴定步骤1．鉴定的概念：将一个未知的菌株按其生物学特性，经过与所有已知菌种进行比较后划归到一个已知菌种的分析过程。
2．对待鉴定的菌种要明确已经获得纯化培养或者该菌种在血平板上生长良好，有单个菌落可以进行生化试验。
（我们这里一般都是预先纯化培养）3．对待鉴定的菌种进行革兰染色，观察形态（G+c，G–b，G–c，G+b），做触酶，氧化酶实验，然后按科，属，种逐步鉴定。
要注意对待鉴定的菌种选择一个合适的鉴定系统，临床常见细菌的快速简单的鉴定系统我们都已经设计好，参考鉴定质控单。
4．按鉴定质控单的要求填写好病人姓名，年龄，性别；标本类型，标本编号，送检日期等。
另外最重要的是要填写好该菌种的菌落形态以及有无溶血。
5．复习革兰染色，触酶实验，氧化酶实验。
⑴．革兰染色：是细菌鉴定过程中最常用最基本最重要的染色方法。
首先要将待鉴定的细菌涂片，固定（目的：杀死细菌，改变细菌对染料的通透性）。
第一步：以结晶紫初染（染色液Ⅰ）第二步：以卢戈氏碘液媒染（染色液Ⅱ）第三步：用95%乙醇脱色（染色液Ⅲ）第四步：最后用稀释复红复染（染色液Ⅳ）⑵．触酶实验(H2O2实验)：a.原理：具有过氧化氢酶的细菌能催化双氧水生成水和初生态氧，继而形成氧分子出现气泡。
b.方法：一般用玻片法，就是挑取菌落在洁净的玻片上涂开，滴加3%过氧化氢数滴，观察结果（立即有大量气泡产生者为阳性，不产生气泡者为阴性）。
要注意不能在血平板上进行实验，这样易出现假阳性；另外陈旧菌落要是进行实验可能会导致假阴性结果；还有不能在接种针或环上进行实验。
c.阳性对照用金黄色葡萄球菌，阴性对照用链球菌；试剂要避光置4℃冰箱保存。
d.应用：绝大多数含细胞色素的需氧和兼性厌氧细菌触酶实验阳性，链球菌属阴性。
临床常见细菌鉴定实验中我们一般用于区别葡萄球菌属（+），微球菌属（+），链球菌属（－）。
⑶．氧化酶实验（Kovac实验）：a. 原理：氧化酶又称细胞色素酶，是细胞色素呼吸酶系统的最终呼吸酶。
酶并不直接与试剂（1%盐酸四甲基对苯二胺）起反应，而是首先使细胞色素c氧化，然后氧化型细胞色素c使对苯二胺氧化，出现深兰色反应。
b. 方法（滤纸法，菌落法，试剂纸片法）：一般我们采用滤纸法，取白色洁净滤纸条，沾取菌落少许，加试剂一滴，阳性者立即呈粉红色，继而出现深兰色。
结果读取在10秒钟时为最佳，60秒内读取可靠。
本实验避免接触含铁物质（假阳性），也不能在含糖培养基上生长的菌落进行实验（假阴性）。
c. 阳性对照用铜绿假单胞菌，阴性对照用大肠埃希菌。
d. 应用：奈瑟氏属的菌种均阳性，也用于区别假单胞菌属和肠杆菌，前者阳性，后者阴性。
二．葡萄球菌属的鉴定葡萄球菌属主要的种有金黄色葡萄球菌，表皮葡萄球菌，腐生葡萄球菌。
1．形态与染色：葡萄球菌直径0.5～1.5μm，菌体圆形，呈单个，成双以及不规簇状排列。
染色呈紫色，为革兰阳性球菌。
2．与链球菌的区别：触酶实验为阳性，而链球菌阴性；菌体形态链球菌小于葡萄球菌，呈成双和链状排列的卵圆形的革兰阳性球菌。
3．与微球菌的区别：触酶实验同为阳性，但微球菌的菌体呈四联状，要大于葡萄球菌，微球菌葡萄糖氧化发酵实验（操作方法同甘露醇OF试验）为氧化型；而葡萄球菌为发酵型。
另外呋喃唑酮（即痢特灵50μg/片）敏感实验微球菌为耐药，而金黄色葡萄球菌为敏感。
4．葡萄球菌属的种间鉴定：⑴．菌落色素与溶血毒素：金黄色葡萄球菌在血平板上呈金黄色，柠檬色或者淡黄色，而其他葡萄球菌则在血平板上菌落大多数为白色，也有部分为柠檬色或深黄色。
⑵．溶血毒素：金黄色葡萄球菌有α﹑β﹑γ﹑δ溶血毒素，各毒素的区别是对动物红细胞的溶血范围﹑抗原性及溶血时的温度等。
其中以α溶血毒素为主。
而其他葡萄球菌大多数不产生溶血毒素，只有表葡有极少能产生溶血毒素。
⑶．血浆凝固酶实验：用与区别金黄色葡萄球菌（阳性），表皮葡萄球菌（阴性），腐生葡萄球菌（阴性）。
血浆凝固酶是金葡菌所产生的，有结合凝固酶和游离凝固酶两种。
血浆凝固酶检测有两种方法，为玻片法和试管法，我们一般采用玻片法。
a. 操作方法：挑取少许金黄色葡萄球菌菌落在玻片上与血浆乳化，结合凝固酶能作用于血浆中的纤维蛋白原，从而在金黄色葡萄球菌表面发生凝集，所以我们肉眼能看见凝集颗粒。
玻片法主要由结合凝固酶作用产生；游离凝固酶是金黄色葡萄球菌产生的胞外酶，能与血浆中的血浆凝固反应因子（类似凝血酶的一种物质）作用，形成复合物再使纤维蛋白原转化成纤维蛋白而发生凝集。
试管法主要由游离凝固酶作用产生。
b. 注意事项：菌落不能太多，否则会影响结果观察；凝固酶阳性要做自凝阴性对照（用生理盐水代替血浆），只有在阴性对照也不凝集才能认为是真正的阳性，有一部分葡萄球菌有自凝现象。
⑷．新生霉素敏感实验：金黄色葡萄球菌，表皮葡萄球菌对新生霉素纸片（5μg/片）敏感；而腐生葡萄球菌，微球菌则对之耐药。
抑菌环直径>16mm即为新生霉素敏感。
⑸．甘露醇氧化发酵实验：a.操作方法：取两支甘露醇微量生化管，在微量管内接种待检细菌，然后一支加两滴石腊密封，另外一支则不加，放37℃孵箱内18～24h后观察结果。
b.结果观察：微量生化管变黄色为阳性，也就是能利用甘露醇。
若两管都变黄色则说明是发酵型；其中加石蜡管不变色，没加石蜡管变黄色则为氧化型；如果两管都不变色则说明该细菌是不利用甘露醇（产碱型）。
c.应用：金黄色葡萄球菌在需氧和厌氧的条件下都能利用甘露醇（即两管都变黄色）；表皮葡萄球菌需氧部分产酸，厌氧条件下不利用甘露醇（即没加石蜡管有部分会变黄色，加石蜡管不变黄色）；腐生葡萄球菌与表皮葡萄球菌类似。
三．微球菌属的种间鉴定微球菌属主要的种有易变微球菌，藤黄微球菌，玫瑰微球菌。
鉴定生化见下表色素产生黄色黄色粉红色需氧葡萄糖产酸＋＋－硝酸盐还原＋－－脲素酶 d d ＋氧化酶－＋－/＋（弱）新生霉素敏感 S/R S Rd：不定 S：敏感 R：耐药四．链球菌属1．形态和染色：链球菌的直径为0.5～1.0μm，呈成双和链状排列的卵圆形革兰阳性球菌，菌体小于葡萄球菌，无鞭毛，没有芽胞，但有些菌株会形成荚膜。
肺炎链球菌呈矛头状，宽端相对，尖端向外。
2．根据链球菌在血平板上溶血现象的不同分为三种：⑴甲型（α-）溶血，即菌落周围出现较窄的草绿色溶血环；⑵乙型（β-）溶血，即菌落周围出现较宽的透明溶血环；⑶丙型（γ-）溶血，即菌落周围无溶血环。
3．根据抗原结构（C多糖抗原）的不同可分为A﹑B﹑C﹑D﹑E﹑F﹑G﹑H﹑K﹑L﹑M﹑N﹑O﹑P﹑Q﹑R﹑S﹑T等18个群，对人类有致病者90%属于A群，偶见其他群链球菌致病。
4．链球菌属的种间鉴定⑴．乙型溶血链球菌的鉴定：a．对杆菌肽（0.04U/片）（抑菌圈直径≥10mm）敏感：A群链球菌（主要为化脓性链球菌）。
b．对杆菌肽不敏感，胆汁七叶苷实验阴性，但马尿酸钠水解实验﹑CAMP实验阳性：B群链球菌（主要为无乳链球菌）。
c．对杆菌肽不敏感，胆汁七叶苷实验阴性，马尿酸钠水解实验阴性，CAMP实验阴性：主要为马链球菌﹑类马链球菌﹑兽疫链球菌；对三者的区别实验要加做海藻糖和山梨醇实验。
d．CAMP实验：将能产生β-溶血的金黄色葡萄球菌在血平板上划一横线接种，再将待鉴定菌于金黄色葡萄球菌3mm处垂直种一短线，若在有CO2条件下培养5～6小时，或无CO2条件下培养18～24小时，在两细菌连接处出现一个半月型的加强溶血区即为CAMP实验阳性。
⑵．甲型溶血链球菌的鉴定：a．草绿色链球菌：对杆菌肽敏感，对奥普托欣（Optochin）不敏感，胆汁溶菌实验阴性，胆汁七叶苷实验阴性，在高盐中不生长。
主要有变异链球菌，轻型链球菌，血链球菌，唾液链球菌等。
b．肺炎链球菌：菌体呈矛头状，成双排列，钝端相对，尖端相背，较葡萄球菌，其他链球菌略大；在血平板上菌落细小﹑圆形﹑表面光滑﹑灰白色﹑半透明，开始时菌落呈扁平状，以后中心塌陷，呈脐窝状。
与草绿色链球菌的主要区别是胆汁溶菌实验阳性，对奥普托欣（Optochin）敏感。
奥普托欣（Optochin）含量为5μg/片，抑菌环>18mm为敏感，<15mm为不敏感，15～18mm应重复实验。
⑶．肠球菌（D群链球菌）的鉴定：溶血不定，主要是α-﹑γ-溶血；对杆菌肽不敏感，但其特异性实验是胆汁七叶苷实验阳性；若能在6.5%NaCl的心浸液肉汤中生长即为D群肠球菌，不能生长为D群非肠球菌。
⑷．链球菌属鉴定的系统生化结果判断a．1%美兰牛乳b．胆汁七叶苷实验：变黑为阳性。
c．PH9.6肉汤实验：变浑浊为能在碱性环境中生长（阳性）。
d．6.5%NaCl心浸液肉汤：由紫变黄为能在高盐环境中生长（阳性）。
e．精氨酸双水解酶实验：变红色（对照不变色，仍为黄色）为阳性。
五．奈瑟氏菌属和布兰汉菌属奈瑟氏菌属主要有脑膜炎奈瑟氏菌和淋病奈瑟氏菌；布兰汉氏菌属只有卡他布兰汉氏菌。
两者系需氧革兰阴性球菌。
⑴奈瑟氏菌的生物学特性：革兰阴性球菌，需氧，卵圆形或肾形，无动力，氧化酶及触酶均阳性。
培养时对营养要求高，能在巧克力平板或有丰富营养的血平板上，在5～10%CO2环境中生长。
⑵．鉴定过程：a．DNA酶实验阳性为布兰汉氏菌，阴性则为奈瑟氏菌。
b．能在普通血平板上生长的为其他奈瑟氏菌，在巧克力平板上生长的主要为脑膜炎奈瑟氏菌和淋病奈瑟氏菌。
c．能使麦芽糖氧化分解产酸的是脑膜炎奈瑟氏菌，不利用麦芽糖的是淋病奈瑟氏菌。
⑶．几种主要细菌对葡萄糖﹑麦芽糖﹑蔗糖的氧化分解产酸结果如下：氧化分解产酸菌种葡萄糖麦芽糖蔗糖淋病奈瑟氏菌＋－－脑膜炎奈瑟氏菌＋＋－粘液奈瑟氏菌＋＋＋卡他布兰汉菌－－－⑷DNA酶实验：a．方法：将待鉴定细菌点种于含0.2%DNA的DNA琼脂平板上，培养后用1mmol/LHCl覆盖平板，菌落周围出现透明环者为阳性。
b．原理：某些细菌能产生DNA酶，可使DNA长链水解成由几个单核苷酸组成的寡核苷酸链；长链DNA可被酸沉淀，而水解后形成后的寡核苷酸链则可溶于酸，故在DNA琼脂平板加盐酸，可在菌落周围形成透明的溶血环。
（肠杆菌科中只有沙雷氏菌和变形杆菌可产生DNA酶，阳性球菌中只有金葡菌能产生DNA酶。
）六．肠杆菌科肠杆菌科是一大群生物学性状相似的革兰阴性杆菌，其中对人致病性较强的鼠疫耶尔森菌（现已基本没有流行）和伤寒沙门菌；4类常引起腹泻和肠道感染的细菌（埃希氏菌﹑志贺氏菌﹑沙门氏菌﹑耶尔森氏菌）和8种常导致院内感染的细菌（枸橼酸杆菌属﹑克雷伯菌属﹑肠杆菌属﹑多源菌属﹑沙雷菌属﹑变形杆菌属﹑普罗威登菌属和摩根菌属）。
另外还有很多细菌是肠道的正常菌群，但在一定条件下也可致病（条件致病菌）。
实验过程中对于革兰阴性杆菌首先要做氧化酶实验，阴性为肠杆菌科细菌；阳性的为非发酵菌（我们实验室还没有简单的系统鉴定方法，一般要仪器上卡检测）或弧菌科细菌。