血清过氧化氢酶活性比色测定法

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钼酸铵显色法测定血清过氧化氢酶

钼酸铵显色法测定血清过氧化氢酶
程鲁京
【期刊名称】《临床检验杂志》
【年(卷),期】1994(000)001
【摘要】介绍一种简便的以钼酸铵显色的血清过氧化氢酶分光光度测定法。

该法酶活性在１００ｋＵ／Ｌ内呈良好线性。

批内变异ＣＶ＝３．６％，天间变异ＣＶ＝４．５７％。

平均回收率为１００．１４％。

高ＴＧ、高Ｂｉｌ血清标本，可使Ａ值增加，但不影响Ｃａｔ测定值。

ＶｉｔＣ、肝素均可使酶活性减低。

由于红细胞内富含Ｃａｔ，溶血标本能显著增加酶活性。

血清标本酶活性在－４℃４８ｈ内无变化，在－２５℃能保持５～６周。

３８８例体检健康
【总页数】1页(P6)
【作者】程鲁京
【作者单位】不详;不详
【正文语种】中文
【中图分类】R446.112
【相关文献】
1.血清过氧化氢酶比色法测定及其实验条件探讨 [J], 周兴娣
2.血清过氧化氢酶快速比色法测定 [J], 周国平;杨岳琴
3.基于碘化钾-淀粉显色光度法测定过氧化氢酶活性 [J], 董娜;张爱菊;张小林
4.四甲基联苯胺显色光度法测定过氧化氢酶活性 [J], 董娜;赵红强;张作瑞;白莹;张
小林
5.钼酸铵法测定水稻过氧化氢酶活性 [J], 彭建;王丹英;徐春梅;陈丽萍;邓飞;章秀福因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

如何检测NAD激酶的活性？

如何检测CheKine™NAD激酶（NADK）活性？细胞代谢是指发生在细胞内的所有有序化学变化的总称，简单理解就是指细胞里的所有化学反应。

细胞代谢活动的测量可作为细胞研究的一个重要指标，广泛应用基础研究和药品研发当中。

Abbkine CheKine™细胞代谢学产品线包括大量相关代谢物、酶、营养和代谢物定量检测试剂盒等。

那么今天我们来一起看看有关细胞代谢分析的相关研究，希望对大家有所帮助哦！一、CheKine™硫氧还蛋白过氧化物酶（TPX）检测试剂盒（比色法），#KTB1660TPX属于过氧化物酶家族，在体内主要通过还原过氧化氢和一些氢过氧化物来实现抗氧化作用，功能与GPX 类似，也是谷胱甘肽氧化还原循环关键酶之一。

TPX普遍存在于各种生物体内，如酵母、植物、动物、原生动物、寄生虫、细菌和古细菌，在进化上高度保守。

TPX与细胞增殖、分化、细胞凋亡及肿瘤发生调控密切相关。

TPX的主要功能包括细胞脱毒、抗氧化和调节由过氧化氢介导的信号转导和免疫反应。

CheKine™硫氧还蛋白过氧化物酶（TPX）检测试剂盒，提供了一种简单易用的比色法，用于分析不同生物样品（细胞/组织裂解液，生物液体）中硫氧还蛋白过氧化物酶活性。

TPX催化H2O2氧化二硫苏糖醇（DTT），通过测定240 nm（H2O2的吸收波长）吸光度的下降速率，用对照组减去过氧化氢酶（CAT）催化分解的H2O2，即可计算出TPX活性。

因此，本试剂盒可以同时测定样品TPX和CAT活性。

二、CheKine™丙酮酸激酶（PK）活性检测试剂盒（比色法），#KTB1120PK（EC 2.7.1.40）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，催化糖酵解过程中的最后一步反应，是糖酵解过程中的主要限速酶之一，也是产生ATP的关键酶之一，因此测定PK活性具有重要意义。

CheKine™丙酮酸激酶（PK）活性检测试剂盒，提供了一种简单易用的比色法，用于分析不同生物样品（细胞/组织裂解液，生物液体）中丙酮酸激酶活性。

过氧化氢酶的活性测定

过氧化氢酶的活性测定——高锰酸钾滴定法（滴定法、比色法）【原理】过氧化氢酶（CAT）属于血红蛋白酶，含有铁，它能催化过氧化氢分解为水和分子氧，在此过程中起传递电子的作用，过氧化氢则既是氧化剂又是还原剂。

R(Fe+2)+H2O2==R(Fe+3+OH－)R(Fe+3OH－)2+ H2O2==R(Fe+2)2+2H2O+O2据此，可根据H2O2的消耗量或O2的生成量测定该酶活力大小。

在反应系统中加入一定量（反应过量）的H2O2溶液，经酶促反应后，用标准高锰酸钾溶液（在酸性条件下）滴定多余的H2O2 5 H2O2+2 KMnO4+4H2SO4-------- 5O2+2KHSO4+8H2O+2MnSO4即可求出消耗的H2O2的量。

【仪器和用具】研钵；三角瓶50ml×4；酸式滴定管（10ml）；恒温水浴；容量瓶25ml×1。

【试剂】10% H2SO4；0.2mol/L磷酸缓冲液pH7.8；0.1mol/L高锰酸钾标准液：称取KMnO4（AR）3.1605g，用新煮沸冷却蒸馏水配制成1000ml，用0.1mol/L草酸溶液标定；0.1mol/L H2O2：市售30% H2O2大约等于17.6mol/L，取30% H2O2溶液5.68ml，稀释至1000ml，用标准0.1mol/ KMnO4溶液（在酸性条件下）进行标定；0.1mol/L草酸：称取优级纯H2C2O4•2H2O 12.607g，用蒸馏水溶解后，定容至1L。

【方法】1.酶液提取取小麦叶片2.5g加入pH7.8的磷酸缓冲溶液少量，研磨成匀浆，转移至25ml容量瓶中，用该缓冲液冲洗研钵，并将冲洗液转入容量瓶中，用同一缓冲液定容，4000rpm离心15min，上清液即为过氧化氢酶的粗提液。

2.取50ml三角瓶4个（两个测定两个对照），测定瓶中加入酶液2.5ml，对照瓶中加入高温灭活酶液2.5ml，再加入2.5ml 0.1mol/L H2O2，同时计时，于30℃恒温水浴中保温10min，立即加入10% H2SO4 2.5ml。

过氧化氢酶活力的测定实验报告

竭诚为您提供优质文档/双击可除过氧化氢酶活力的测定实验报告篇一：实验35过氧化氢酶的活性测定植物在逆境下或衰老时，由于体内活性氧代谢加强而使h2o2发生累积。

h2o2可以直接或间接地氧化细胞内核酸，蛋白质等生物大分子，并使细胞膜遭受损害，从而加速细胞的衰老和解体。

过氧化氢酶可以清除h2o2，是植物体内重要的酶促防御系统之一。

因此，植物组织中h2o2含量和过氧化氢酶活性与植物的抗逆性密切相关。

本实验用分光光度法测定过氧化氢含量，利用高锰酸钾滴定法和紫外吸收法测定过氧化氢酶活性。

一、过氧化氢含量的测定【原理】h2o2与硫酸钛（或氯化钛）生成过氧化物—钛复合物黄色沉淀，可被h２so4溶解后，在415nm波长下比色测定。

在一定范围内，其颜色深浅与h2o2浓度呈线性关系。

【仪器和用具】研钵；移液管0.2ml×2支，5ml×1支；容量瓶10ml×7个，离心管5ml×8支；离心机；分光光度计。

【试剂】100μmol/Lh2o2丙酮试剂：取30%分析纯h2o257μl，溶于100ml，再稀释100倍；2mol/L硫酸；5%（w/V）硫酸钛；丙酮；浓氨水。

【方法】1.制作标准曲线：取10ml离心管7支，顺序编号，并按表40-1加入试剂。

待沉淀完全溶解后，将其小心转入10ml容量瓶中，并用蒸馏水少量多次冲洗离心管，将洗涤液合并后定容至10ml 刻度，415nm波长下比色。

2.样品提取和测定：(1)称取新鲜植物组织2~5g（视h2o2含量多少而定），按材料与提取剂1∶1的比例加入4℃下预冷的丙酮和少许石英砂研磨成匀浆后，转入离心管3000r/min下离心10min，弃去残渣，上清液即为样品提取液。

(2)用移液管吸取样品提取液1ml，按表35-1加入5%硫酸钛和浓氨水，待沉淀形成后3000rpm/min离心10min，弃去上清液。

沉淀用丙酮反复洗涤3～5次，直到去除植物色素。

(3)向洗涤后的沉淀中加入2mol硫酸5ml，待完全溶解后，与标准曲线同样的方法定容并比色。

过氧化物酶活性的测定实验报告

过氧化物酶活性的测定实验报告实验名称：过氧化物酶活性的测定实验实验目的：1. 了解过氧化物酶（CAT）的性质及其在生物体内的作用；2. 学习如何测定CAT活性。

实验原理：CAT是一种重要的氧化酶，在生物体内主要负责清除细胞内的过氧化氢（H2O2）。

CAT能够将H2O2分解为水和氧，从而减少H2O2引起的细胞损伤。

因此，CAT的活性是衡量生物体抵抗氧化损伤能力的重要指标。

该实验通过比色法对CAT活性进行测定，其原理是：CAT能够快速分解H2O2，导致溶液中H2O2浓度的降低，从而使紫外吸收波长为240nm处的吸光度降低。

实验步骤：1.制备1mg/ml的CAT标准溶液；2.制备一定浓度的H2O2溶液；3.将CAT标准溶液和H2O2溶液分别稀释为不同浓度；4.将待测样品（如动物组织、血清等）加入混合液中，使得CAT参与H2O2的分解反应；5.反应10min后，加入硫酸铨（K2Cr2O7）溶液并混匀，其中硫酸铨是一种催化剂，能够加速反应速度；6.反应后，在240nm处测定溶液的吸光度；7.根据不同CAT标准溶液的吸光度值，绘制标准曲线；8.根据待测样品的吸光度值，利用标准曲线计算出CAT的活性。

实验结果：利用如上实验步骤，我们测得样品A的吸光度为0.56，样品B的吸光度为0.36，样品C的吸光度为0.22。

依据标准曲线的测定结果，我们可分别计算出样品A、B、C的CAT活性分别为12.3、8.4、5.2 U/g。

实验结论：本实验采用比色法测定了不同样品中CAT的活性。

结果表明，样品A的CAT活性最高，样品C的CAT活性最低。

通过该实验，我们可以了解CAT的性质及其在生物体内的作用，同时也掌握CAT活性的测定方法。

总抗氧化能力(T-AOC)比色法测试盒(ABTS酶催化法)

用途本试剂盒适用于检测血清（浆）、尿液、动植物组织、细胞等样本中总抗氧化能力。

检测范围及灵敏度检测范围：0.047-1.50 mmol/L灵敏度：0.047 mmol/L背景介绍机体存在两类抗氧化系统，一类是酶抗氧化系统，包括超氧化物歧化酶(SOD）、过氧化氢酶（CAT）、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px）；另一类是非酶抗氧化系统，包括尿酸、维生素C、维生素E、谷胱甘肽、胆红素、α-硫辛酸、类胡萝卜素[1-3]。

抗氧化能力被认为是血液和体液中所有抗氧化剂的累积效应[3]。

检测原理ABTS在适当的氧化剂作用下氧化成绿色的 ABTS●+，在抗氧化物存在时ABTS●+的产生会被抑制，在414 nm测定ABTS●+的吸光度即可测定并计算出样本中的总抗氧化能力。

Trolox是一种维生素E的类似物，具有和维生素E相近的抗氧化能力，用作其他抗氧化物总抗氧化能力的参考。

例如，Trolox的总抗氧化能力为1，相同浓度情况下，其他物质的总抗氧化能力用其抗氧化能力和Trolox相应的倍数来表示。

本试剂盒测组织和细胞样本时，需测定总蛋白浓度，推荐使用BCA法（货号：E-BC-K318-M）。

提供试剂和物品注：试剂严格按上表中的保存条件保存，不同批次试剂盒中的试剂不能混用。

Focus on your research Service for life science 耗材：枪头（1000 μL ，200 μL ，10 μL ）。

仪器：酶标仪（405-425 nm ）、微量移液器（1000 μL ，200 μL ，100 μL ，10 μL ）。

所需自备物品配制试剂之前，请穿戴好防护装备。

试剂盒中部分试剂含有危险性物质。

禁止食入，吸入，直接接触眼睛、皮肤和衣物。

使用完后的试剂瓶经彻底清洗后再处理。

安全提示试剂：双蒸水、生理盐水（0.9% NaCl ）、PBS （0.01 M，pH 7.4）、80%乙醇。

实验关键点ABTS工作液配制完成后，室温避光保存，在30 min内使用完毕。

各种酶活性测定方法

抗坏血酸过氧化物酶（APX）活性的测定过氧化氢酶（CAT）活性测定过氧化物酶（POD）测定方法超氧化物歧化酶（SOD）活性测定小组第一次讨论结果：一、抗坏血酸过氧化物酶（APX）活性的测定1.原理APX 是植物体内重要的抗氧化酶, 主要功能是分解H2O2, 此过程通过抗坏血酸- 谷胱甘肽循环来完成。

此外, 它还直接参与抗坏血酸的氧化还原代谢, 而抗坏血酸能有效地清除多种活性氧自由基。

因此，APX被认为与果实的抗热性直接相关。

2.所用方法（1）采用碘液滴定法:称取新鲜材料1 g，剪碎置研钵中，加少量石英砂及pH值6.0 的磷酸盐缓冲液，迅速研磨成浆，20 ℃下浸提30 min，中间摇动数次，3000 r /min 离心后保留上清液即为酶液。

反应底物为抗坏血酸，加入酶液2 mL，20 ℃下反应10 min 后，立即加入偏磷酸1 mL，终止酶的活动，抗坏血酸被消耗的量，可用碘液滴定剩余的抗坏血酸来进行测定，加淀粉溶液几滴作指示剂，以碘液滴定出现浅蓝色为止，记录滴定值，用底物被消耗的量来表示APX 的活性。

每个处理设3 个重复。

（2）紫外吸收法：称取1g芥蓝叶片组织，加入1.6 mL预冷的磷酸缓冲液（PBS-K）（pH 7.8）提取液（含1 mmol·L-1 AsA，3 mmol·L-1β-巯基乙醇，0.5 mmol·L-1PMSF，2% PVP，1 mM EDTA）。

用液氮研磨，提取液于4℃，12000×g离心20 min，上清液用于酶活性的测定。

取0.10 ml 酶液（可视情况调整），加入1.70 ml 含0.1 mM EDTA-Na的PBS（0.05 mol/L，pH7.0），再加入0.10 ml 5 mM的AsA，最后加入0.10 ml 220mM H2O2，立即在20℃下测定D290（紫外）值在一定时间内的变化，计算单位时间内AsA减少量，并求酶活性（室温下测定，缓冲液调零）。

功能酶学研究中酶活性测定方法的优化

功能酶学研究中酶活性测定方法的优化随着生物技术的不断发展, 酶在生产和生命科学研究中发挥着至关重要的作用。

酶的功能是由其催化活性决定的，因此测定酶的活性是酶学研究的基础。

酶活性测定方法的优化可以提高酶活性测定的精确度、准确度和稳定性。

本文将讨论常用的酶活性测定方法，以及它们的优缺点和如何进行优化。

一、对于不同类型的酶有不同的活性测定方法常见的酶活性测定方法包括光度法、比色法、荧光法、放射性同位素法等。

不同方法的选择取决于酶的类型和特性。

例如，对于氧化还原酶，可以使用比色方法，如NADH测定过氧化氢酶的活性。

在NADH的存在下，过氧化氢酶与过氧化氢反应，生成H2O和O2。

在反应过程中，NADH被氧化为NAD+并释放出H+，同时产生吸收波长为340nm的NAD+光学吸收。

另一个例子是，蛋白酶的活性测定可以使用比色法或荧光法，不同蛋白酶使用的底物也不同。

对于Serine 蛋白酶，可以使用小分子底物，如p-芒果酰-氨基苯甲酸-methylcoumarin amide (MCA)。

蛋白酶水解底物MCA时，会释放出荧光物质，其荧光值随蛋白酶活性的增加而增加。

二、优化光度法光度法是测定酶活性最常用的方法之一，其基本原理是通过光学测量反应物的浓度变化来测定酶的活性。

在吸光度法中，测量过程包括两个步骤：酶促反应的初速度测量和反应终点测量。

初速度测量包括对反应物质量、反应时间、反应体系中涉及到的物质浓度和反应温度等各项参数的优化。

在终点测量中，可以使用单一波长吸光度法或者连续多波长吸光度法。

单一波长吸光度法适用于只含有单一反应产物的酶促反应。

而多波长吸光度法适用于含有多个反应产物的酶促反应。

三、优化比色法比色法是通过与产生的产物的染色反应进行酶的活性测定。

对于某些酶来说，染色反应的产物是不稳定的，因此半衰期较短。

这样的反应不能用于连续测量，需要进行终点测量。

为了获得本底和最佳反应条件，实验过程需要对反应溶液的pH 值、温度、反应物比例等参数进行优化。

过氧化氢酶活性测定实验报告

过氧化氢酶活性测定实验报告实验目的，通过测定过氧化氢酶活性，探究不同条件下过氧化氢酶的活性变化规律，为进一步研究过氧化氢酶的功能和应用提供实验数据支持。

实验原理，过氧化氢酶是一种重要的酶类，在生物体内起着重要的氧化还原作用。

本实验采用比色法测定过氧化氢酶活性，其原理是过氧化氢酶催化过氧化氢分解成水和氧气，过氧化氢酶活性与生成的氧气量成正比。

实验材料与方法，实验中所需材料包括过氧化氢酶、过氧化氢、磷酸盐缓冲液、吡啶甲酸钠盐等。

首先，按照一定比例将过氧化氢酶和过氧化氢混合，然后加入磷酸盐缓冲液和吡啶甲酸钠盐，使混合液在一定温度下进行反应。

接着，通过比色法测定生成的氧气量，进而计算出过氧化氢酶的活性。

实验结果与分析，在不同温度、pH值、底物浓度等条件下，测得过氧化氢酶的活性数据。

通过对比分析不同条件下的活性数据，发现过氧化氢酶在不同条件下呈现出不同的活性变化规律。

在温度较低时，过氧化氢酶活性较低；在酸性环境下，过氧化氢酶活性受到抑制；随着底物浓度的增加，过氧化氢酶活性呈现出逐渐增加的趋势。

结论与讨论，通过本实验，我们得出了过氧化氢酶活性与温度、pH值、底物浓度等因素之间的关系。

这些结果对于深入研究过氧化氢酶的功能机制，以及在生物医学、生物工程等领域的应用具有一定的指导意义。

同时，我们也发现过氧化氢酶在不同条件下表现出不同的活性变化规律，这为进一步探究过氧化氢酶的调控机制提供了重要的实验数据支持。

综上所述，本实验通过测定过氧化氢酶活性，揭示了过氧化氢酶在不同条件下的活性变化规律，为进一步研究过氧化氢酶的功能和应用提供了实验数据支持。

希望本实验结果能够为相关领域的研究工作提供一定的参考价值。

愈创木酚比色法测定过氧化氢酶活性

过氧化物酶活性的测定（愈创木酚比色法）原理过氧化物酶广泛分布于植物的各个组织器官中。

在有过氧化氢存在下，过氧化物酶能使愈创木酚氧化，生成茶褐色物质，可用分光光度计测量生成物的含量。

仪器药品721型分光光度计离心机秒表天平研钵磁力搅拌器愈创木酚30%过氧化氢20mmol/L KH2PO4100mmol/L磷酸缓冲液，pH6.0（见附表2）反应混合液：100mmol/L磷酸缓冲液(pH6.0)50ml于烧杯中，加入愈创木酚28μl，于磁力搅拌器上加热搅拌，直至愈创木酚溶解，待溶液冷却后，加入30%过氧化氢19μl，混合均匀，保存于冰箱中。

操作步骤1．称取植物材料1g，加20mmol/L KH2PO45ml，于研钵中研磨成匀浆，以4000r/min离心15分钟，倾出上清液保存在冷处，残渣再用5mlKH2PO4溶液提取一次，合并两次上清液，贮于冷处备用。

2．取光径1cm比色杯2只，于1只中加入反应混合液3ml，KH2PO41ml，作为校零对照，另1只中加入反应混合液3ml，上述酶液1ml（如酶活性过高可稀释之），立即开启秒表记录时间，于分光光度计上测量吸光度值，每隔1分钟读数一次，读数于波长470nm下进行。

3．以每分钟吸光度变化值表示酶活性大小，即以△A470/min·mg蛋白质（或鲜重g）表示实验三十八过氧化物酶活性的测定（比色法）过氧化物酶是植物体内普遍存在的、活性较高的一种酶，它与呼吸作用、光合作用及生长素的氧化等都有密切关系，在植物生长发育过程中，它的活性不断发生变化，因此测量这种酶，可以反映某一时期植物体内代谢的变化。

在有过氧化氢存在的条件下，过氧化物酶能使愈创木酚氧化，生成茶褐色物质，该物质在470nm 处有最大吸收，可用分光光度计测量470 nm处的吸光度变化速率来测定过氧化物酶活性。

一、仪器、药品与材料（一）实验材料xx植物组织。

（二）仪器与用品分光光度计，研钵，恒温水浴锅，100 mL容量瓶，吸管，高速冷冻离心机，秒表，磁力搅拌器。

两种方法测定土壤中过氧化氢酶比较

两种方法测定土壤中过氧化氢酶比较过氧化氢酶是一种重要的酶类，在生物体内具有多种生理功能。

它能够分解体内产生的过氧化氢，防止过度氧化反应的发生。

土壤中的过氧化氢酶也扮演着非常重要的角色。

因此，测定土壤中过氧化氢酶的含量具有一定的科学意义和应用价值。

本文将介绍两种常用的测定土壤中过氧化氢酶含量的方法，并从测定原理、步骤、优缺点等方面进行比较。

一、表面法表面法又称为“叶绿素酶体毒素快速测定法”，是一种常见的测定土壤中过氧化氢酶的方法。

其测定原理是：通过将土壤与表面泡沫溶液混合，加入过氧化氢，产生氧气泡来观察其反应情况，以测定土壤中过氧化氢酶的相对含量。

步骤：1、取一定量的土壤样品并压实，将其放置在离心管中。

2、制备表面泡沫溶液：将酵母菌浸泡在水中，添加适量的葡萄糖和碳酸钠，充分搅拌，制成泡沫溶液。

3、将制备好的表面泡沫溶液加入到土壤样品所在的离心管中，并加入一定量的过氧化氢。

4、等待反应 10~15 分钟后，观察生成的氧气泡的数量和大小，并记录。

优缺点：优点：该方法操作简单、方便、快速，且可以在野外进行，并能够比较准确地测定土壤样品中过氧化氢酶含量的大小。

缺点：由于土壤样品与表面泡沫溶液混合后会产生许多气体反应，因此测定结果的稳定性较差，而且对于样品数量较大的情况下，需要重复操作多次，操作量较大。

二、比色法比色法是另一种常用的测定土壤中过氧化氢酶含量的方法。

该方法是通过加入双酚甲蓝（OPD）和过氧化氢，在催化作用下会发生化学反应，形成可比色物质，根据可比色物质的吸光度来计算过氧化氢酶的活性浓度，进而测定土壤样品中过氧化氢酶的含量。

1、取一定量的土壤样品并进行均质处理。

2、制备比色液：首先制备催化剂缓冲液（0.1M 磷酸缓冲液，pH=7.0），然后将 OPD 溶于催化剂缓冲液中，最终制成含有过氧化氢的比色液。

3、将土壤样品与比色液混合，在常温下反应一定时间。

4、高速离心后，取稀释后的混合液在特定波长下测定吸光度。

催化分光光度法快速测定血清过氧化氢酶活性

第19 卷第4 期Vol . 19 No . 4四川省卫生管理干部学院学报J OU R NAL O F SICHUAN CON TINU IN G EDU C A TION COLL E G E O F MS2000 年12 月Dec . 2000 催化分光光度法快速测定血清过氧化氢酶活性Ξ陈大义1 ,余蓉1 ,许沧1 ,汪勇2( 1.四川省卫生管理干部学院检验系,四川成都610041 ;2 .遂宁市卫生防疫站,四川遂宁629000)[ 摘要] 目的:建立一种简单快速的血清过氧化氢酶活性分光光度测定方法。

方法: 利用过氧化氢酶催化分解底物过氧化氢,剩余的过氧化氢与钼酸铵、碘化钾反应生成单质碘,后者与淀粉反应生成蓝色,其蓝色深浅与酶的活性成反比。

结果:底物过氧化氢浓度在0 . 025～100μmol/ ml 范围内线性关系良好γ,为0 . 9995 ,检测限为0 . 025μmol/ ml 。

用本法测定316 例正常人血清,过氧化氢酶活性为50 . 78 ±17 . 46 KU/ L 。

结论: 本方法灵敏度高,稳定性较好,简单快速,适用于血清过氧化氢酶活性的测定。

[ 关键词] 血清;过氧氢化酶;活性测定[ 中图分类号] R44611 [ 文献标识码]A [ 文章编号]1003 - 403 X(2000) 04 - 0249 - 02Active Determination of CAT in Serum by Spectrophotometry/ Chen D a yi , Yu Rong , Xu Ca ng , W a ng Yong ∥Sichu an Contin2 uing Education College of Medical Sciences ,610041Abstract Objective : To establish a simple ,rapid determining met hod of CA T in serum. Method :CA T deco mposes a certain amount of H2 O2 . The surplus can act wit h ammo nium hep tamolybdate and potassium iodide. I odine ,o ne of t he p roduct s ,changes into blue colour when meeting starch mucilage. The intense of colour is inverse ratio wit h t he activit y of enzyme. R esults :There is a good linear relatio n ship in t he range of 0 . 025～100μmol/ ml H2 O2 ( r = 0 . 9995) . The detectio n limit is 0 . 025μmol/ ml . U s2 ing t he met hod ,we detected 316 serums of healt h people. The activit y of CA T in t hese people was 50 . 78 ±17 . 46 KU/ L (珔x ±s) . Conclusion :The met hod is sensitive ,stable and rapid. It is suitable to determine t he activity of CA T in serum.K ey w ords Serum ; C A T ;Activit y ;Determinatio n过氧化氢酶( CA T) 亦称触酶,主要参与体内自由基的清除,催化H2 O2 分解为H2 O 和O2 。

CAT过氧化氢酶活性测定方法

CAT过氧化氢酶活性测定方法过氧化氢酶（catalase，CAT）是一种常见的酶，广泛存在于细胞质和线粒体中，能够催化过氧化氢分解为氧气和水。

CAT活性的测定是评价细胞氧化应激和抗氧化能力的重要方法之一、本文将介绍两种常用的CAT活性测定方法：碘化钾法和比色法。

1.碘化钾法：碘化钾法是利用过氧化氢在碱性条件下与碘离子反应生成氧气，然后通过滴定测定碘化钾的消耗量，间接测定CAT活性。

实验步骤如下：1）制备适量的超纯水溶解适量的碘化钾，并与浓度为0.1M的Na2CO3缓冲溶液混合，调整pH至10-112）将待测样品加入上述溶液中，使得总体积约为2mL。

3）在和样品相同条件下作空白对照实验。

4）加入10%的H2O2溶液激活酶，使得最后的浓度约为0.1%。

5）停止反应，一般方法是加入0.1M的硫酸停止酶促反应，使得酶催化生成的氧气转化为水。

6）滴定反应液中的I2溶液，直至反应液呈深蓝色为止。

7）计算CAT活性，根据滴定的I2溶液量计算反应液中过氧化氢含量，再用过氧化氢摩尔浓度除以单位时间，得到CAT的活性。

2.比色法：比色法是通过测量酶催化H2O2分解时产生的物质的吸光度或荧光强度变化来间接测定CAT活性。

实验步骤如下：1）将待测样品加入适量的酶活化缓冲液中。

2）加入适量的过氧化氢（一般浓度为10mM）。

3）在和样品相同条件下作空白对照实验。

4）置于适当的反应温度下孵育一段时间。

5）停止反应，一般方法是加入NaOH溶液，将反应液pH调至碱性，停止酶促反应。

6）测定反应液中的吸光度或荧光强度。

7）根据标准曲线计算CAT活性，通过反应液的吸光度/荧光强度与CAT活性的关系曲线，计算待测样品中CAT的活性。

总结：CAT活性的测定方法主要有碘化钾法和比色法，两种方法均是通过间接测定过氧化氢酶催化反应产物氧气的生成量来计算CAT活性。

碘化钾法利用滴定I2溶液的消耗量计算CAT活性，而比色法则通过测定酶催化反应产物的吸光度或荧光强度来计算CAT活性。

过氧化氢酶（CAT）活性检测试剂盒说明书

过氧化氢酶（CAT ）活性检测试剂盒说明书紫外分光光度法注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。

货号：BC0200规格：50T/48S产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

试剂名称规格保存条件提取液液体60 mL×1瓶4℃保存试剂一液体60 mL×1瓶4℃保存试剂二液体320 μL×1瓶4℃保存溶液的配制：1、试剂二：液体置于试剂瓶内EP 管中，使用前需先离心。

2、检测工作液的配制：取100μL 试剂二加入20mL 试剂一，充分混匀（约20T ），作为工作液，现用现配；或者根据比例配制。

产品说明：CAT(EC 1.11.1.6)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，是最主要的H 2O 2清除酶，在活性氧清除系统中具有重要作用。

H 2O 2在240nm 下有特征吸收峰，CAT 能够分解H 2O 2，使反应溶液240nm 下的吸光度随反应时间而下降，根据吸光度的变化率可计算出CAT 活性。

注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。

如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：紫外分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1mL 石英比色皿、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。

操作步骤：一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）1、细菌、细胞或组织样本的制备a 、细菌或培养细胞：收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积（mL ）为500-1000:1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL 提取液），超声波破碎细菌或细胞（功率200w ，超声3秒，间隔10秒，重复30次）；8000g 4℃离心10分钟，取上清，置冰上待测。

b 、组织：按照组织质量（g ）：提取液体积（mL ）为1：5-10的比例（建议称取约0.1g 组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。

过氧化氢酶活力的测定碘量法

过氧化氢酶活力的测定碘量法
过氧化氢酶活力的测定可使用碘量法来进行。

具体步骤如下：
1.准备样品：制备合适浓度的过氧化氢酶样品。

2.制备反应液：将适量的磷酸缓冲液倒入试管中，加入适量的
过氧化氢底物。

3.加入样品：向反应液中加入过氧化氢酶样品。

4.开始反应：立即加入一定浓度的碘化钾溶液。

5.反应停止：加入淀粉溶液，用以观察碘化物是否被消耗完。

6.蓝色终点的判定：当溶液出现蓝色时，立即停止加淀粉溶液，记录下此时的反应时间。

7.对照试验：进行空白对照实验，重复以上步骤，但不加入过
氧化氢酶样品。

8.测定活力：根据反应时间计算出过氧化氢酶的活力值，活力
值等于样品试验结果减去对照试验结果。

需要注意的是，测定过程中需保证反应均匀和充分，同时需要计算和排除非酶催化的部分反应速率。

过氧化氢酶检测试剂盒(钼酸铵比色法)

过氧化氢酶(CAT)检测试剂盒(钼酸铵比色法)简介：过氧化氢酶(Catalase ，CAT)又称触酶，是一类以铁卟啉为辅基的结合酶，由四个相同亚单位组成的四聚体酶，共含4分子的亚铁血红素作为辅基，分子量约为24KD 。

CAT 能将细胞代谢产生的毒性物质过氧化氢迅速清除，可与GSH-Px 共同保护巯基酶、膜蛋白、过氧化氢解离。

Leagene 过氧化氢酶(CAT)检测试剂盒(钼酸铵比色法)其检测原理是血清或血浆等样本中在最佳酶反应条件下，反应后剩余的H 2O 2与钼酸铵形成稳定的黄色复合物，其黄色深浅与酶活性成反比，通过分光光度计或酶标仪检测吸光度。

该酶的检测对于研究自由基代谢平衡，抗衰老和肿瘤发病机制具有一定的价值。

50该试剂盒可检测23-25个样本。

该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。

组成：自备材料：1、蒸馏水、生理盐水2、比色杯3、分光光度计操作步骤(仅供参考)：1、配制H 2O 2基液：本试剂盒提供的H 2O 2基液中的H 2O 2浓度约为。

由于过氧化氢不是非常稳定，使用前需自行测定过氧化氢的实际浓度。

把浓度约为的基液用本试剂盒提供的CAT Assay buffer 稀释，使H 2O 2基液中的H 2O 2浓度约为。

分光光度计测定A 240(一般情况下，新配制的H 2O 2基液A 240在0.45左右，经过3个月以后A 240在0.42左右)，H 2O 2浓度(mM)=22.94×A 240。

进而计算出本试剂盒提供的H 2O 2基液中的H 2O 2的实际浓度。

然后再根据实际的过氧化氢浓度，配制MH 2O 2基液。

2、准备样品：① 细胞或组织样品：取恰当细胞或组织进行裂解，可以采用Leagene Western 及IP编号名称TO1071 50T T01071 100T Storage试剂(A): H 2O 2基液 5ml 10ml 4℃ 试剂(B): CAT Assay buffer 52ml 104ml 4℃ 避光试剂(C): MO 显色液 50ml100ml4℃ 避光使用说明书1份细胞裂解液，如果有必要需进行适当匀浆，低速离心取上清，冻存，用于CAT的检测。

过氧化氢酶活力的测定

过氧化氢酶活力的测定（张一顺 p138）一、实验原理植物体内的黄素氧化酶类代谢物常含有过氧化氢。

植物在逆境下或衰老时，体内活性氧代谢加强，也会是过氧化氢发生积累。

过氧化氢的积累不但可导致破坏性的氧化作用，也会直接或间接的氧化细胞内的核酸、蛋白质等生物大分子，并使细胞膜遭到损坏，从而加速细胞的衰老和解体。

过氧化氢酶是清除过氧化氢的重要保护酶，是植物中重要的酶促防御系统之一，能将过氧化氢分解为O2和H2O2,使植物有机体免受H2O2的毒害作用。

其活力与植物的抗逆性密切相关。

过氧化氢酶活力的测定原理：H2O2在240nm波长下有强烈吸收，过氧化氢酶能分解H2O2，是反应溶液吸光度随反应时间而降低，根据测定吸光度的变化速度即可测出CA T活力。

二、材料、仪器设备及试剂新鲜的子叶或茎段、研钵2个、冰浴槽两个、研锤2个、1ml注射器2个、石英砂1瓶、药勺1把、吸水纸若干、试剂瓶1个、冰块若干、大瓷缸1个、移液枪若干把、风光光度计一台、蒸馏水两瓶、干燥的试管若干个、试管架、离心机一台、离心管若干个、记号笔1个、标签纸若干、水笔1个、水浴箱1台。

Ph=7.8 0.2mol/L的磷酸缓冲液；0.1mol/L H2O2溶液：取30%的H2O2溶液5.65ml，用蒸馏水稀释至1000ml。

Ph=7.8 0.2mol/l配置：A液：91.5ml B液：8.5ml 混合后即可，总体积100ml三、试验方法与步骤1、粗酶液的提取准备工作：离心管14个，分别标号0~6和0Y~6Y（标有Y的装子叶研磨液,带0的表示实验组），冰浴槽2个，从冰箱中刚拿出的研钵2个（带研锤）放在冰浴槽中。

取1个棕色试剂瓶放入高瓷缸中，再向里面放一冰袋（目的磷酸缓冲液保持在较低温度下），从并行中拿出磷酸缓冲液倒入棕色试剂瓶中适量。

再拿出准备好的2个1ml注射器备用，取出石英砂和药勺（去石英砂用，用最小的那个）。

取出准备好的吸水纸若干放在适当位置（用于擦拭研钵中的水珠），干毛巾一个（在向离心管中到液体前用于擦拭研钵底部的水珠）。

过氧化氢酶活性测定(高锰酸钾滴定法)

过氧化氢酶活性测定（高锰酸钾滴定法）一、原理过氧化氢广泛存在于生物体和土壤中，是由生物呼吸过程和有机物的生物化学氧化反应的结果产生的，这些过氧化氢对生物和土壤具有毒害作用。

与此同时，在生物体和土壤中存有过氧化氢酶，能促进过氧化氢分解为水和氧的反应（H2O2→H2O+O2），从而降低了过氧化氢的毒害作用。

土壤中过氧化氢酶的测定便是根据土壤（含有过氧化氢酶）和过氧化氢作用析出的氧气体积或过氧化氢的消耗量，测定过氧化氢的分解速度，以此代表过氧化氢酶的活性。

测定过氧化氢酶的具体方法比较多，如气量法：根据析出的氧气体积来计算过氧化氢酶的活性；比色法：根据过氧化氢与硫酸铜产生黄色或橙黄色络合物的量来表征过氧化氢酶的活性；滴定法：用高锰酸钾溶液滴定过氧化氢分解反应剩余过氧化氢的量，表示出过氧化氢酶的活性。

本实验重点采用高锰酸钾滴定法。

二、试剂（1）2mol/L H2SO4溶液:量取5.43ml的浓硫酸稀释至500ml，置于冰箱贮存;（2）0.02mol/L高锰酸钾溶液：称取1.7g高锰酸钾，加入400mL 水中，缓缓煮沸15min，冷却后定容至500mL，避光保存，用时用0.1mol/L草酸溶液标定；（3） 0.1mol/L草酸溶液：称取优级纯H2C2O4▪2H2O 3.334g,用蒸馏水溶解后，定容至250ml；（4）3%的H2O2水溶液：取30% H2O2溶液25ml，定容至250ml，置于冰箱贮存，用时用0.1mol/L KMnO4溶液标定。

三、操作步骤（1）分别取2~5g土壤样品于具塞三角瓶中（用不加土样的作空白对照），加入0.5mL甲苯，摇匀，于4℃冰箱中放置30min。

（2）取出，立刻加入25mL冰箱贮存的3% H2O2水溶液，充分混匀后，再置于冰箱中放置1h。

（3）取出，迅速加入冰箱贮存的2mol/L H2SO4溶液25mL，摇匀，过滤。

（4）取1mL滤液于三角瓶，加入5mL蒸馏水和5mL 2mol/L H2SO4溶液，用0.02mol/L高锰酸钾溶液滴定。