显微鉴定的方法.
显微鉴别步骤
显微鉴别步骤
显微鉴别是一种常用的实验技术，用于鉴定物质的组成和性质。
下面是显微鉴别的一般步骤：
1. 准备样品：选择需要鉴定的样品，并制备适当的样品制片。
可以使用切片技术，如切薄片、涂片或压片等方法来准备样品。
2. 选择合适的显微镜：根据需要选择合适的显微镜，例如光学显微镜或电子显微镜。
3. 调节显微镜参数：根据需要调节显微镜的参数，包括放大倍数、对焦、亮度和对比度等。
4. 观察样品：将样品放在显微镜台上，通过目镜或相机观察样品。
可以使用不同的增强技术，如偏光、荧光或共聚焦等技术来获取更多信息。
5. 记录观察结果：记录观察到的特征，如颜色、形状、纹理、晶体结构等。
6. 比较与参考资料：将观察结果与已知的参考资料进行
比较，例如显微镜图谱、文献或数据库中的数据。
7. 进一步鉴定：根据观察结果和比较结果，进行进一步的鉴定。
可能需要采用化学试剂、特殊显微镜镜头或其他分析技术来确定物质的组成和性质。
8. 结论和报告：根据鉴定结果得出结论，并将鉴定结果记录在报告中。
报告中应包括所使用的方法、观察结果、比较资料以及最终的鉴定结论。
这些步骤提供了一个基本的框架，但实际的显微鉴别过程可能因样品类型、鉴定目的和设备的差异而有所不同。
具体的显微鉴别步骤应根据实际情况灵活调整。
显微鉴定的操作方法包括
显微鉴定的操作方法包括显微鉴定是一种用显微镜观察和分析样品的方法，广泛应用于科研、专业实验室和法医学等领域。
下面将详细介绍显微鉴定的操作方法。
1. 准备工作在进行显微鉴定之前，需要做好以下准备工作：a. 清洁显微镜与配件：用清洁的无纺布或滤纸轻轻擦拭显微镜的各个零件，确保镜头与目镜清晰。
b. 样品准备：根据需要进行样品的处理和制备，如切片、染色等。
确保样品具有足够的细节和清晰度。
2. 调焦a. 将显微镜放在平稳的台面上，打开显微镜电源，调整照明灯的亮度，使其能够提供足够的光线。
b. 将目镜调整到最佳视角，使用调节轮使物镜与样品之间的距离最接近估计最优距离。
c. 通过转动调节轮，使样品聚焦在眼睛的焦点上。
此时可使用低倍物镜（通常为4倍或10倍）进行初步观察和调焦。
3. 焦距调整a. 在低倍物镜下调焦完成后，使用高倍物镜（如40倍或100倍）进一步调焦。
b. 将物镜转至最佳视野，使用调节轮细调焦距，使样品清晰度达到最佳状态。
c. 注意避免物镜和样品之间碰撞，以免损坏设备和样品。
4. 显微观察a. 将已调焦的显微镜放在一个适当的位置，使其稳定不动。
b. 将待观察的样品放在显微镜台上，将之与物镜对齐。
c. 通过调节台的移动装置，将样品移至物镜下方，然后逐渐移动至视野中央。
同时使用调焦和焦距调整使样品清晰可见。
d. 在观察过程中，可以旋转物镜头使得样品在不同方位显示。
若样品比较厚，可以使用调节轮改变物镜与样品距离，以观察不同深度的细胞结构。
5. 记录和分析a. 使用配备标尺的目镜深度计测量观察到的结构尺寸。
b. 观察到的细胞结构、微生物、矿物等特征可通过手绘或数码相机进行记录和保存。
c. 对观察到的样品特征进行分析和鉴定，比对参考资料，确定其可能的分类、性质或疾病。
显微鉴定是一项需要严密操作和仔细观察的技术，操作者需要具备良好的观察力和耐心。
同时，也需要对待样品具有一定的专业知识和实践经验。
在进行显微鉴定的过程中，务必保持设备和样品的清洁，以及注意显微镜和样品的安全操作。
显微制片中一些实用的小技巧
青
鸡
箱
冠
子
花
种
子
皮
种
表
皮
皮
表
细
皮
胞
细
胞
同等条件下 拍摄，大小 明显有区别。 但不是十分 稳定。
青葙子
鸡冠花子
在金相显微镜下放大到500倍
青葙子
鸡冠花子
再用电脑放大到1000倍的微性状，青葙子表皮细胞垂周壁呈 节节样，鸡冠花子表皮细胞垂周壁光滑，沟槽明显。
降香
又名：花梨木、降 香黄檀，来源：豆 科黄檀属植物降香 檀Dalbergia odorifera 心材
中药微性状观察方法的一些新的进展：
一、放大倍数更大从100倍到500倍，主要是利用金 相显微镜的内置光源的功能。 二、景深合成不用转到PHOTOSHOP，可以在显微 镜观察的过程中一步合成。
这是某型号的金相显微镜(包括普通和偏光)
这个“在Z轴的延伸”就是指 景深合成
速度明显 加快了
不同批次的鸡冠花子
最后一点的泡 沫可不切下， 让切片积在其 中和刀片上。
如果叶子小或 窄，可片叠在 一起夹着切。
叶子先泡软， 切成条，卷叠 起来夹着切。
用一稍粗一点的 棍扎一个洞，把植 物的茎塞进去（也 可把花、叶子等卷 成个棍形），可多 塞几根。
也可用打 洞法夹片
酸枣仁可塞可夹
怕切到手的同仁们，硬 的材料可以夹着刮。 北五味子这样切方便
这样的方法，有助于对药材显微的科学研究，也十分有助于 我们在检定工作中迅速找到我们需要看到的特征。
如果想要细粉，可用这一类细钢锉。
最后强调一下，清理锉的锈和残渣，最好用钢丝刷。
四、如何进行叶表面制片——磨片法
在叶、花、果实的表面显微观察时，往往最困难的 是如何获得足够薄的表面制片。
第四节显微鉴定
2、根茎类粉末生药的观察：
注意鳞茎、块茎、球茎常含多量 较大的淀粉粒，其形状、大小、 脐点、层纹以及复粒等特征是鉴 别的重要依据；
鳞茎的鳞叶表皮常可察见气孔；
2、根类粉末生药的观察
木栓组织：多见，注意木栓细胞 表面观的形状、颜色、壁的厚度， 有的可见木栓石细胞(如党参)。
导管：一般较粗，注意其类型、 直径、导管分子的长度及末端壁 的穿孔的形状及排列等。
石细胞：应注意形状、大小、细胞 壁增厚形态和程度、纹孔形状及大 小、孔沟密度等特征。
纤维：观察时注意纤维的类型、形 状、长短粗细等；注意纤维束的周 围细胞是否含结晶形成晶鞘纤维。
叶肉：注意栅栏组织细胞的形状、 大小、层数及所占叶肉的比例和 分布；
叶脉：观察维管组织的形状、类 型以及周围或韧皮部外侧有无纤 维层。
2．叶的表面制片
主要观察表皮细胞、气孔及各种 毛茸的全形。
注意上、下表皮细胞的形状，垂 周壁及有无纹孔，角质层纹理， 气孔的类型及副卫细胞数。
3．叶类粉末生药的观察
2. 根据处方明确专属特征
中成药显微鉴定，一般根据处方， 对各组成生药粉末特征作分析比 较，选取各药具专属性的显微特 征，作为鉴别依据。
六味地黄丸是由熟地黄、山茱萸、 牡丹皮、山药、茯苓、泽泻六味 药组成，每味药都有数个显微特 征，大部分特征又有横向类别的 交叉。选取六味药各具专属性的 显微特征，这样六味药物均可鉴 别。
鉴定时：根据观察的对象和目的， 选择具有代表性的药材，制备不 同的显微制片，依法进行鉴别。
植物性生药
显微镜的七种观察方法
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按观察方法分 7-2
2.暗场:照明光通过物镜外
围射于试样，来自试样的干涉及 衍射光进入物镜并最终被观察到。
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暗场
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1 原理 丁道尔(Tyndall)现象，微粒对斜射光反射或衍射，增 大了人眼可见性。 2 特点 观察到极其微小物体，分辨率可达0.02 ~ 0.004 um (明场0.4um)—”超显微“。 3 缺点 只能观察到物体存在、运动和外部形态 不方便调节 标本要求高（灰尘、盖片、载片）
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使用抗衰减剂的效果
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汞灯灯箱构造
灯室，上下、左右旋钮，聚光镜旋钮
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按观察方法分 7-4
4.偏光:有些物质在两个呈
一定夹角的偏光滤片之间可现呈 鲜明的对比，或根据双折射性能 和定向呈现颜色
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偏光
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1 原理
依据波动光学原理观察和精密测定标本细节,或透明物体改变光束的物理参数,以 此判别物质结构的一种显微镜
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4 应用： 微小粒子、细菌形态观察 、细菌记数，透明标本观 察等
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按观察方法分 7-3
3.荧光:利用某些物质在受
到了紫外光或短波长的光激发照 射以后能够发射出比激发光波长 长的荧光的特性的观察方法
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荧光
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什么是荧光 ?
物质中的电子吸收光的能量由低能状态转变 为高能状态，再回到低能状态时释放出的光，是 非温度辐射光——冷光。即：物质吸收短波光， 发射出的长波光。
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按观察方法分 7-7
显微鉴别法操作规程
内容：1 显微鉴别法：系指用显微镜对药材或饮片的切片、粉末、解离组织或表面制片及含饮片粉末的制剂中饮片的组织、细胞或内含物等特征进行鉴别的一种方法。
2 仪器和用具2.1 仪器生物光学显微镜、显微描绘器、滑走切片机、小型粉碎机或徒手圆筒生物切片器、镜台测微尺、离心机。
2.2 用具2.2.1 放大镜、刀片、解剖刀、镊子（包括粗镊及眼科弯镊与直镊）、剪（眼科剪与手术剪）、解剖针。
2.2.2 载玻片、盖玻片2.2.3 吸湿器（即玻璃干燥器改装蒸馏水加微量苯酚，潮气润湿药材样品用）、培养皿或小烧杯（放切片用，切片后的处理均可在其中进行）、酒精灯、铁三角架、石棉网、滴瓶、试管、试管架、滴管、玻璃棒（粗与细）、乳钵、量筒等2.2.4毛笔（从刀上刷取切片用）、铅笔（HB、3H、6H绘图用）、带盖搪瓷盘（装切片标本用）、纱布、吸水纸（滤纸）、火柴等。
3 试药与试液3.1 水合氯醛试液取水合氯醛50g，加水15ml与甘油10ml使溶解，即得。
此液为透化剂，可使干缩的细胞壁膨胀而透明，并能溶解淀粉粒、树脂、蛋白质及挥发油等。
3.2 甘油醋酸试液（斯氏液）取甘油、冰醋酸与水各等份，混合即得。
此液专用于观察淀粉形态，可使淀粉不膨胀变形，便于测量其大小。
3.3 甘油-乙醇溶液取甘油1份，50%乙醇1份，混合即得。
此液为封藏液，用于保存植物材料及临时切片，有软化组织的作用。
3.4 苏丹Ⅲ试液取苏丹Ⅲ0.01g，加90%乙醇5ml溶解后，加甘油5ml，摇匀即得。
本液应置棕色玻璃瓶内保存，在2个月内应用。
此液可使木栓化、角质化细胞壁及脂肪油、挥发油、树脂等染成红色或淡红色。
3.5 钌红试液取10%醋酸钠溶液1～2ml，加钌红适量使呈酒红色即得。
本液应临用新制。
此液可使粘液染成红色。
3.6 间苯三酚试液取间苯三酚1g，加90%乙醇100ml使溶解，滤过即得。
应置棕色玻璃瓶内，在暗处保存。
此液与浓盐酸合用，可使木化细胞壁染成红色或紫红色。
显微鉴别制片流程
显微鉴别制片流程一、引言显微鉴别制片是一种常用的实验方法，用于观察和鉴定样品的微观结构和组成。
本文将介绍显微鉴别制片的流程和步骤。
二、材料准备在进行显微鉴别制片之前，需要准备一些基本的材料和设备，包括显微镜、载玻片、盖玻片、显微镜镜片液、吸水纸、刮片器等。
确保这些材料都是干净的，并做好消毒处理。
三、样品制备1. 样品的选择：根据需要鉴定的对象，选择合适的样品进行制备。
可以是生物组织、细胞、昆虫、植物等。
2. 样品的固定：将样品进行固定处理，常用的方法有乙醛固定、福尔马林固定等。
固定处理的目的是保持样品的形态结构和化学组成。
3. 样品的切片：将固定的样品切成薄片，常用的方法有手工切片和切片机切片。
切片的厚度通常在几微米到几十微米之间，根据需要进行调整。
4. 制片：将切好的样品片放在载玻片上，加入适量的显微镜镜片液，然后用盖玻片盖住样品，使样品均匀分布在载玻片上。
四、制片处理1. 倒置法：将制好的载玻片倒置放在吸水纸上，使吸水纸吸去多余的显微镜镜片液，然后轻轻擦拭载玻片的边缘，以去除多余的显微镜镜片液。
2. 加热法：将制好的载玻片置于加热板上，加热一段时间，使显微镜镜片液快速挥发，加快制片的干燥速度。
3. 固定法：将制好的载玻片放置在通气干燥器中，使其自然干燥，确保样品的完整性和稳定性。
五、显微镜观察1. 调节显微镜：将制好的载玻片放在显微镜的载物台上，调节显微镜的倍数和焦距，使样品清晰可见。
2. 观察样品：通过显微镜观察样品的细节和结构，可以使用不同的显微镜技术，如亮场显微镜、荧光显微镜、相差显微镜等，以获取不同的信息。
3. 记录结果：将观察到的结果进行记录和描述，包括样品的形态特征、细胞结构、组织构成等。
六、鉴别分析根据观察到的结果和已有的知识，对样品进行鉴别分析。
可以比对数据库中的标准样品，进行相似性分析和对比，确定样品的种类和属性。
七、结果解释根据鉴别分析的结果，对样品的性质和特点进行解释和阐述。
显微镜的七种观察方法
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3 缺点 需要光强高，双折射物质不能达到DIC镜检效果，不能应用于塑料容器培养物的观察，镜检灵敏度有方向性，调节较复杂
2021/6/16
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4 应用： 无色透明活体标本的细微结构，无色荧光标本，染色标本，显微操作等
2021/6/16
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按观察方法分 7-7
7.霍夫曼:光线穿过设于聚光镜内的狭缝光阑后并经“相位物体”（透明体）折射，再经过专用物镜内的具有暗、灰、明三个区的一块滤光片，而最终使光线按折射角的不同呈明暗的变化，其所成的像也类似DIC那样具有浮雕效果。
偏振器1
偏振器2
偏振光（单一振动面）
各向同性：单折射体，光性质不因照射方向而改变，普通气体、液体、非结晶固体等 各向异性：双折射体，光速度、折射率、吸收和振动面、振幅随照射方向不同，晶体、纤维等
2021/6/16
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应用： 矿物质、化学物品鉴别 鉴别纤维、染色体、淀粉粒、细胞中晶体 植物病理检验 鉴别骨骼、牙齿、胆固醇、神经纤维、肿瘤细胞、横纹肌和毛发等
2021/6/16
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明场观察方式
常规观察方式 应用领域： 常规镜检、病理、染色标本 优点： 视野亮度高、均匀， 应用范围广， 操作简单，价格低， 物镜适用于荧光观察 缺点： 透明标本对比度低， 标本没有立体感
2021/6/16
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按观察方法分 7-2
2.暗场:照明光通过物镜外围射于试样，来自试样的干涉及衍射光进入物镜并最终被观察到。
T%
nm
BAND PASS
入射光
发射光
激发 滤色镜
分光 滤色镜
吸收 滤色镜
2021/6/16
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落射荧光显微镜各部件特性和作用
显微鉴定概述
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淀粉粒：一般较小，应注意淀粉粒 的多少、形状、类型、大小、脐点 形状及位置、层纹等特征。
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(二)根茎类中药
1、根茎类中药的组织构造
根据中柱、维管束的类型，区别 其为蕨类植物、双子叶植物或单 子叶植物的根茎。
双子叶植物茎 单子叶植物茎
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双子叶植物茎：
草质茎：有表皮；皮层为初生皮 层，有的可见内皮层；中柱鞘常 分化为纤维或夹杂有石细胞；束 中形成层明显；次生韧皮部大多 成束状或板状，少数呈筒状；髓 射线较宽；髓较大。
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木质茎：外层为木栓组织；皮层 多为次生皮层；中柱鞘厚壁组织 多连续成环或断续；形成层环明 显；次生韧皮部及次生木质部呈 筒状结构；射线较窄，细胞壁常 木化；髓较小。
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2、根茎类粉末中药的观察：
注意鳞茎、块茎、球茎常含多量 较大的淀粉粒，其形状、大小、 脐点、层纹以及复粒等特征是鉴 别的重要依据；
鳞茎的鳞叶表皮常可察见气孔；
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单子叶植物根茎较易见到环纹导 管；
蕨类植物根茎一般只有管胞，无 导管。.Biblioteka 23(三)茎藤类中药
1．茎藤类中药的组织构造 根据维管束的类型及排列：
根类中药中常有各种草酸钙结晶， 如簇晶、方晶、砂晶或针晶等， 兼有簇晶与针晶或砂晶与簇晶共 生。
纤维、石细胞及淀粉粒、菊糖的 有无及其形状亦应注意。
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2、根类粉末中药的观察
木栓组织：多见，注意木栓细胞 表面观的形状、颜色、壁的厚度， 有的可见木栓石细胞(如党参)。
导管：一般较粗，注意其类型、 直径、导管分子的长度及末端壁 的穿孔的形状及排列等。
中药鉴定基本技术—显微鉴定
分泌 组织
花粉粒
气孔
为被子植物的主要输导组 织，其次生壁未完全木化增 厚而形成纹孔。根据纹孔的 类型，分为具缘纹孔导管、 网纹导管、梯纹导管、螺纹 导管、环纹导管、孔纹导管 等。
⒈木薄壁细胞 ⒉⒊环纹导管 ⒋⒌⒍螺纹导管 ⒎梯纹导管 ⒏梯、网纹导管 ⒐孔纹导管
知识拓展
二、显微鉴别常见的细胞及细胞内含物
主要用于观察淀粉粒，或配合其他试剂 检查细胞壁或细胞内含物的性质。
多用于观察菌类药材的菌丝团块和菌丝。
知识拓展
二、显微鉴别常见的细胞及细胞内含物
纤维 石细胞
为两端尖锐的细长细 胞，具次生增厚壁， 细胞壁纤维化或木质 化，有少数纹孔。
导管
木栓 细胞
腺毛、 非腺毛
分泌 组织
花粉粒
气孔
⒈五加皮 ⒉苦木 ⒊关木通 ⒋肉桂 ⒌丹参 6.分隔纤维（姜） ⒎纤维束 ⒏嵌晶纤维（南五味子根） ⒐晶纤维(甘草)
纤维
石细胞
导管
木栓 细胞
腺毛、 非腺毛
分泌 组织
花粉粒
气孔
细胞壁木栓化，断面观呈扁方形，
表面观呈多角形或类方形，有的部 分增厚，如杜仲、肉桂。
木 栓
细
胞
特
征
图
知识拓展
二、显微鉴别常见的细胞及细胞内含物
纤维
石细胞
导管
木栓 细胞
腺毛、 非腺毛
分泌 组织
花粉粒
气孔
腺毛 为具有分泌作用的毛茸，分为腺头和 腺柄两部分。 非腺毛 为表皮上无分泌作用的保护毛。
菊糖
酸钙结晶、淀粉粒等比较常见的
细胞内含物。
淀粉粒
草酸钙簇晶
④不定式：副卫细胞数目不定，大小基本相同，形状与表皮细胞相似，如菊科；
显微鉴定法——精选推荐
显微鉴定法是利⽤显微技术对中药进⾏显微分析，以确定其品种和质量的⼀种鉴定⽅法。
显微鉴定主要包括组织鉴定和粉末鉴定，利⽤显微镜来观察药材的组织构造、细胞形状及内含物的特征、矿物的光学特性，和⽤显微化学⽅法，确定细胞壁及细胞执业药师,中药鉴定学,辅导,精华,内含物的性质或某些品种有效成分在组织中的分布等，⽤以鉴别药材的真伪与纯度甚⾄品质。
（⼀）显微制⽚⽅法 显微鉴定时可根据检品的不同情况制作相应的制⽚，包括横切⽚或纵切⽚、表⾯制⽚、粉末制⽚、解离组织⽚、花粉粒与孢⼦制⽚、磨⽚制⽚、含粉末药材的制剂显微纸⽚等。
制作解离组织⽚时，解离液选择原则为：如样品中薄壁组织占⼤部分，⽊化组织少或分散存在，可⽤氢氧化钾法；如果样品坚硬，⽊化组织较多或集成较⼤群束，可⽤硝铬酸法或氯酸钾法。
（⼆）植物细胞壁和内含物的鉴别 （1）细胞壁性质的鉴别： ①⽊质化细胞壁加间苯三酚试液显红⾊或紫红⾊。
②⽊栓化或⾓质化细胞壁加苏丹Ⅲ显橘红⾊⾄红⾊。
③纤堆素细胞壁加氯医`学教育搜集整理化锌碘试液显蓝⾊或紫⾊。
④硅质化细胞壁加硫酸⽆变化。
（2）细胞内含物性质的鉴别： ①淀粉拉加碘试液显蓝⾊或紫⾊。
②糊粉粒加碘试液显棕⾊或黄棕⾊。
加硝酸汞试液显砖红⾊。
③脂肪油、挥发油或树脂加苏丹Ш试液显橘红⾊、红⾊或紫红⾊。
④菊糖加10%α-萘酚⼄醇溶液，再加硫酸显紫红⾊并很快溶解。
⑤黏液加钌红试液显红⾊。
⑥草酸钙结晶加稀醋酸不溶解，加稀盐酸溶解⽽⽆⽓泡医`学教育搜集整理发⽣。
加硫酸逐渐溶解，析出结晶。
⑦碳酸钙结晶（钟乳体）加稀盐酸溶解，同时有⽓泡发⽣。
⑧硅质加硫酸不溶解。
（三）显微测量 （四）显微常数测定 常见的显微常数主要有⽤于叶类鉴别的⽓孔数、⽓孔指数、栅表⽐、脉岛数和脉端数等。
（五）显微临时制⽚常⽤封藏试液 显微鉴定所⽤试剂包括⽔、稀⽢油、⽢油醋酸试液及⽔合氯醛试液。
（六）扫描电⼦显微镜和偏光显微镜的应⽤ 扫描电镜已⼴泛应⽤于⽣物样品表⾯及其断⾯⽴体形貌的观察。
显微鉴定要点
显微鉴定要点显微鉴定是一种常用的分析技术，可以用于材料的组成分析、结构分析、形态分析等方面。
在显微鉴定中，需要注意以下几个要点。
一、样品制备样品制备是显微鉴定的第一步，样品的制备质量直接影响到后续的分析结果。
在样品制备过程中，需要注意以下几个方面。
1. 样品的选择：样品应该具有代表性，能够反映出整个样品的特征。
2. 样品的制备：样品的制备应该尽量避免对样品的结构和形态造成影响，同时要保证样品的纯度和完整性。
3. 样品的保存：样品在制备完成后应该妥善保存，避免受到外界环境的影响。
二、显微镜的选择显微镜是显微鉴定的核心工具，不同类型的显微镜适用于不同类型的分析。
在选择显微镜时，需要注意以下几个方面。
1. 分析目的：根据分析目的选择不同类型的显微镜，如光学显微镜、电子显微镜等。
2. 分析样品：根据样品的性质和形态选择适合的显微镜。
3. 分析条件：根据分析条件选择适合的显微镜，如分辨率、放大倍数等。
三、显微镜操作显微镜操作是显微鉴定的关键步骤，需要注意以下几个方面。
1. 样品的放置：样品应该放置在显微镜的适当位置，避免对样品造成损伤。
2. 显微镜的调节：根据分析需要调节显微镜的放大倍数、焦距等参数。
3. 观察样品：观察样品时需要注意样品的结构和形态，同时要注意观察样品的不同部位。
四、数据分析数据分析是显微鉴定的最后一步，需要注意以下几个方面。
1. 数据的准确性：数据的准确性是显微鉴定的关键，需要注意数据的来源和准确性。
2. 数据的解释：数据的解释需要结合样品的结构和形态进行分析，同时要注意数据的可靠性和合理性。
3. 结果的呈现：结果的呈现需要清晰明了，同时要注意结果的可读性和易于理解性。
总之，显微鉴定是一项复杂的分析技术，需要在样品制备、显微镜选择、显微镜操作和数据分析等方面注意各种要点，才能得到准确可靠的分析结果。
生药鉴定(显微)
用量少；
但该技术所需的一对引物设计，需要
知道物种的遗传信息，因而在生药研
究中具有一定的局限性。
聚合酶链反应（polymerase chain reaction,
PCR）是1985年美国Cetus公司 Kary Mullis等建
立的最新生物技术。
一、PCR的定义：是在体外模拟体内条件
下应用DNA聚合酶反应特异性扩增某一DNA片段 的技术。
常用的理化鉴定方法
物理常数
包括相对密度、旋光度、折光率、硬度、
黏稠度、沸点、熔点等。
一般理化鉴别
呈色反应：
利用生药的某些化学成分能与某些试 剂产生特殊的颜色反应来鉴别。
多在试管中进行，或在生药切面或
粉末上滴加各种试液，观察呈现的 颜色以了解某成分所存在的部位。
沉淀反应：
利用生药某些化学成分能与某些试
二、PCR的原理
1. PCR扩增首先需要一对引物，根据待扩增区
域两端已知序列合成两个与模板DNA互补的寡核苷
酸引物（一般长15~30bp），这一单链引物序列将决 定扩增片段的特异性和片段长度。 2. PCR反 应 体 系 由 基 因 组 DNA、 一 对 引 物 、 dNTP、TaqDNA聚合酶、酶反应缓冲体系及必需的 离子浓度等组成。
polymorphic DNA marker ， AFLP ）；
DNA 测序法和基于 DNA 序列测定的 PCR-RFLP 、特 异引物 PCR 方法。
二、DNA遗传标记技术的方法及原理
1、限制性内切酶酶切片段长度多态性(RFLP， restriction fragment length polymorphism)
identification)：
中药鉴定专项技能—显微鉴定技术
三、显微镜使用注意事项
1．搬动显微镜时，要一手握镜臂，一手扶镜座，两上臂紧靠 身体。切勿一手斜提或前后摆动，不要发生太大震动，以防镜 头或其他零件跌落。
2．观察标本时，显微镜离实验台边缘应保持一定距离(5cm)， 以免显微镜翻倒落地。
3．使用时要严格按步骤操作，熟悉显微镜各部件性能，掌握 粗、细调节钮的转动方向与载物台升降关系。转动粗调节钮向 下时，眼睛必须注视物镜头。
二、使用方法
（2）高倍镜的使用
①依照低倍镜操作步骤，先用低倍镜找到清晰物像。
②将需要观察的部分移到视野的中央。
③眼睛从侧面注视物镜，用手移动转换器，换高倍镜40X。
④眼睛向目镜内观察，同时微微上下转动细调节钮，直至视野内看到清晰的物 像为止。此时应把聚光器的孔径光阑适当调大，使之与物镜的镜口率相匹配。光 源的强度也应调高。
党参菊糖（水合氯醛装置）
五、装置液的作用
水合氯醛装 置液的作用
➢使细胞膨胀,便于观组织、细胞及 其内含物特征。 ➢去除细胞表面或内部杂质。 ➢增强透明度。
五、装置液的作用
稀甘油装置 液的作用
➢增加透明度。 ➢防止气泡生成。 ➢防止水合氯醛结晶析出。
显微鉴定技术
目录
CONTENTS
01 02 03
二、测微尺的使用方法
中药粉末制片
目录
CONTENTS
01
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03 04 05
粉末临时制片操作要领 水装片或斯氏液装片 水合氯醛加热透化装片 水合氯醛或乙醇装片 装置液的作用
一、粉末临时制片操作要领
➢粉末用量：米粒大小，尽可能少。 ➢每次滴加装置液2~3滴。 ➢每次滴加装置液后需要搅拌均匀。 ➢控制搅拌范围约为盖玻片大小。 ➢如加热透化，则重复进行3~4次， 沸即离火，勿烧干、焦。
中药材粉末显微鉴定pdf
中药材粉末显微鉴定一、中药材粉末显微鉴定的基本原理中药材粉末显微鉴定是通过观察中药材粉末的显微特征，结合中药学理论，对中药材进行真伪鉴别和质量评价的方法。
其基本原理包括显微镜的基本原理和中药材粉末显微鉴定的基本原理。
1.显微镜的基本原理显微镜是一种利用光学原理将物体放大并呈现清晰图像的仪器。
通过调整显微镜的焦距和放大倍数，可以将中药材粉末的微小特征放大并清晰地呈现在视野中，以便观察和鉴别。
2.中药材粉末显微鉴定的基本原理中药材粉末显微鉴定的基本原理是根据中药材粉末的形态、结构、颜色、纹理等特征，结合中药学理论，对中药材进行真伪鉴别和质量评价。
不同种类的中药材具有不同的显微特征，这些特征可以作为鉴别中药材真伪和质量的重要依据。
二、显微制片技术显微制片技术是中药材粉末显微鉴定的关键技术之一。
通过采用适当的制片方法，可以将中药材粉末制成可以在显微镜下观察的制片。
常用的制片方法包括直接制片法和复型制片法等。
1.直接制片法直接制片法是将中药材粉末直接撒在载玻片上，然后盖上盖玻片制成制片。
该方法操作简单，适用于大多数中药材的显微鉴定。
2.复型制片法复型制片法是将中药材粉末先制成薄膜或涂片，然后再用盖玻片将其压在载玻片上制成制片。
该方法可以获得更加清晰和准确的显微特征信息。
三、显微镜下的形态特征中药材粉末在显微镜下呈现出各种形态特征，如细胞形态、细胞壁性质、细胞内含物等。
通过对这些特征的观察和分析，可以鉴别出不同种类的中药材及其真伪。
例如，草药的细胞形态多为长方形或方形，木本植物的细胞形态多为长柱形或方形，而动物类药材的细胞形态则较为复杂。
此外，植物细胞的细胞壁性质也可以作为鉴别依据之一。
例如，双子叶植物的细胞壁多为纤维素性质，而单子叶植物的细胞壁则多为角质性质。
四、粉末药材的显微分析粉末药材的显微分析是中药材粉末显微鉴定的重要环节之一。
通过对粉末药材进行显微分析，可以获得更加详细和准确的显微特征信息。
例如，可以采用显微镜观察粉末药材的颜色、光泽、纹理等表面特征，同时也可以采用显微镜观察粉末药材的内部结构特征。
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制片
进行显微鉴定，首先根据观察的对象和目的，选择具有代表性的生药，制作不同的显微制片，包括组织制片、表皮制片和粉末制片。
组织制片的方法主要有徒手制片、滑走制片、冰冻制片及石蜡制片等。
对植物类中药，如根、根茎、茎藤、皮、叶等类，一般制作横切片观察，必要时制纵切片；果实、种子类须制作横切片及纵切片观察；木类药材须制作横切片、径向纵切片及切向纵切片三个面观察。
表皮制片系将表皮细胞组织制成显微观察片的一种方法，适用于观察叶片、花瓣、花萼和其它器官表皮的细胞形状、气孔、腺毛、非腺毛的类型和角质层的纹理以及各种细胞内含物等的显微特征。
粉末制片用于观察药材的组织、细胞及细胞后含物特征，制片时根据观察目的物的不同可以选用斯氏液或水合氯醛制片。
有时为了观察某些细胞组织如纤维、石细胞、导管等，可制解离组织片。
显微观察与结果记录
组织特征特别是横切面组织特征的观察与描述，一般是由外向内依次进行，如双子叶植物茎的初生构造由外向内依次为表皮、皮层和中柱三个部分。
在观察与描述中，首先注意其各部分的位置、形态、有无其它组织分布等特征。
其次应注意各种细胞及其内含物的颜色、形状、大小。
颜色是指在显微镜下所见到的颜色，描述方法同前已述及的性状鉴定。
形状一般指在显微切片中所见到的平面形状。
大小指在显微镜下用目镜测微尺测量的数据，一般取直径（椭圆形、长方形均量短径），如长度有鉴别意义，可加长度数据；导管、分泌细胞的直径常指外径；分泌腔、分泌道的直径常指内径；当目的物的大小差异很小时，可记载 1 个数字，如直径约50 μm，当目的物的大小有一定差距时，可记载最小值与最大值，如直径为15~ 40 μm（50μm ），括号内的数字表示少数目的物的大小数字；若目的物的大小差距很大时，可记载最小值、常见值和最大值，如长 20~ 40 ~80μm 。
粉末制片在显微镜下观察时，可见到多种组织碎片、细胞及内含物的特征。
描述方法同上，在描述顺序上，一般可以按照“先多后少”或“先特殊后一般”的原则进行。
显微测量是指在显微镜下用目镜测微尺测量细胞和后含物的大小。
先将目镜测微尺用载台测微尺标化，计算出每一小格的μm数，应用时将测得目的物的小格数，乘以每一小格的μm数，即得所欲测定物的大小。
测量微细物体时宜在高倍镜下进行，因在高倍镜下目镜测微尺的每一格的μm数较少，测得的结果比较准确，而测量较大物体时可在低倍镜下进行。
显微鉴定结果的记录，除用文字来描述之外，均需附图说明。
附图可以用显微绘图法绘制，也可以应用显微摄影技术摄制。
显微摄影是利用显微照相设备将显微镜下观察的影像摄录下来的一项技术。
显微照相设备种类很多，可分为无测光系统和有测光系统或自动、手动系统。
数码显微摄影技术是一项新的显微摄影技术，其工作原理类似数码相机，只是 CCD （ charge couple device ，电荷耦合元件）直接安装在显微镜上。
数码显微摄影与普通显微摄影是相似的，只是利用显微镜上方的 CCD 将显微镜下看到的图像，转变为数字信号输出，通过相关的计算机图像采集软件直接在显示器上显示，使显微镜中观察的图像即时生成。
目前计算机图像采集软件较多，一般多具有静态图像、动态图像及连续图像采集功能，数码显微摄影图像清晰逼真，操作方便快捷，便于存储与编辑，且还具图像编辑、显微测量功能。