恩拉霉素含量测定方法的改进
饲料中恩拉霉素的微生物学含量测定方法研究
［ 收稿日期 ］２０ —０ ０ ８ ６—１ ［ ２ 文献标识码 ］Ａ ［ 文章编号］１０ ０ ２—１８ （０ ８ ０ ２ ０ ２ ０ ）９—０ １ ０ ［ ０ ７— ５ 中图分类号 ］￥５ ．４ ８９ ８
［ 摘 要 ］ 研 究并建立 了微 生物学法测 定饲 料 中恩拉 霉素含 量 的方 法。饲 料样 品经 酸性 甲醇溶 液提 取 ， 大孔 吸附树脂 层析柱 吸附洗脱 后 ， 料 中的恩 拉霉 素得 到很 好 的分 离纯化 。本 方 法采用 饲 枯 草芽孢 杆菌 为检验菌 ， 饲料 中恩拉霉 素 的最低 定 量限为 ０ ５ｍ ／ ｇ 标准 曲线 的线性范 围为 ０ ４ ． ｇ ｋ ， ．
Ｇ ｎ， Ａ ｉ Ｕ Ｘｉ Ｃ ＩＪｎ—ｈ ａ Ｌ Ｕ Ｙａ—ｎ ，Ｉ ｉｇ—ｙ ｎ ｕ ，Ｉ ｉＪＮ Ｌｎ ａ
（ ｈ ｎｈ ｉ ｎ ｉａ Ｉ ｐｃｏ ￣ｔｕ ｆｒＶｔｉａｙＤｕ ｓ ｎ ｅ￣ｔｆ ，ｈ ｎｈ ｉ ０ １３ Ｃ ｉａ） Ｓａ ｇ ａ ｉｐ ￡ｒ ｅｔ ｎｌ ｈ ｔ ｏ ｅ ｒ ｒ ｒｇ ｄＦ ｅ ｕ Ｓ ｇ １０ ；ｈｎ Ｍｕ ｃ ￣ ｉ ｅ ｅｎ ａ ｆ ｉ ａ ａ ２
Ａｂｓｒ ｔ Ａ ｍｉｒ ｂ ｏｏ ｉ ａ ｍｅ ｈ ｄ ｆｒ ｔ ｅ ｅｅ ｍｉ ａｉ ｎ ｆ ｅ ｒ ｍｙ ｉ ｉ ｅ ｄ ｓ ｔ ｄｅ ｔａｃ ： ｃ ｏ ｉ ｌｇｃ ｌ ｔ ｏ ｏ ｈ ｄ ｔｒ ｎ ｔｏ ｏ ｎ ａ ｃｎ ｎ ｆ ｅ ｓ ｗａ ｓｕ ｉｄ． Ｅｎ ａ ｃｎ ｗａ ｒ ｍｙ ｉ ｓ ｅ ｔａ ｔｄ ｆｏ ｘｒ ｃｅ ｒ ｍ ｆｅ ｓ ｍｐ ｅ ｅ ｄ ａ ｌ ｗｉｈ ｃｄ ｃ ｔ ａ ｉ ｉ ｍｅｈａ ｏ ｓ ｌ ｔｏ ａ ｄ ｔ ｎ ｌ ｏｕ ｉｎ ｎ ｗａ ｐ ｒｆ ｄ ｙ ｓ ｕ ｉ ｅ ｂ ｍａ ｒ ｐ ｒ ｕ ａ ｓ ｒ ｉ ｅ ｅ ｉ ｓ ｉ ｃ ｏ ｏ ｏ ｓ ｄ ｏｐｔ ｒ ｓｎ ｖ ｃ ｌ ｍｎ．Ｂａ ｉｌｓｓ ｂ ｉ ｗａ ａ ｅ ｓ ｔ ｅ ｔｓ ｃｏ ｒ ａ ｉｍ ，Ｔｈ ｏ ｓ ｉ ｔ ｏ ｕ ｎ ｉａｉｎ ｏ ｎ ａ ｃ ｎ ｉ ｏｕ ｃｌｕ ｕ ｔｌ ￣ ｓ ｔｋ ｎ ａ ｈ ｅ ｔｍｉｒ ｏ ｇ ｎｓ ｅ ｌｗｅ ｔｌ ｆ ｑ ａ ｔｔｔｏ ｆｅ ｒ ｍｙ ｉ ｎ ｍｉ ｆｅ ｓｗａ ５ ｍｇ ｇ， Ｔｈ ｃ ｉ ｒ ｔｏ ｕ ｖ ｗａ ｌ ｅ ｒ ｗｉｈ ｎ ｈ ｒ ｎ ｅ ｆ ０．４ ～ １ ｅ ｄ ｓ ０． ／ｋ ｅ ａ ｂ ａｉｎ ｃ ｒ ｅ ｌ ｓ ｉ ａ ｔ ｉ ｔ ｅ ａ ｇ ｏ ｎ ２．８ ／ｍＬ ｅｗｅ ｎ ｈ ｕ ｂ ｔ ｅ ｔｅ ｌｇ ｒｔ ｍ ｆｃ ｎ ｅ ｔａｉｎ ａ ｄ ｔｅ ｄ ａ ｔｒｏ ｎ ｉ ｉｉｎ ｚ ｎ ｏ ａｉｈ ｏ ｏ ｃ ｎｒ ｔｏ ｎ ｈ ｉｍｅ ｅ ｆｉｈ ｂ ｔ ｏ ｅ，ｔ ｅ ｃ ｒｅａｉ ｎ ｃ ｅ ｃｅ ｔｗａ ９ ９ １，ｔｅ ｒ ｃ ｖ ｒ ｏ ｈ ｏ ｒｌ ｔ ｏ ｆ ｉｎ ｓ０． ９ ｏ ｉ ｈ ｅ ｏ ｅ ｙ ｗａ ｒ ａｅ ｈ ｔ８ ｓｇ ｅ ｔｒｔ ａ ５％ ，ＲＳ ｗａ ｏ ｒｔ ａ ．Ｔｈ ｓｍｅｈ ｄ ａ ｐ ｉｓｔ ｈ ｅｅ ｔｏ ｆｅ ｒｍｙ ｉ ｎ ｆ ｅ ｓ Ｄ ｓｌｗｅ ｈ ｔ１ ５％ ｉ ｔ ｏ ｐ ｌ ｏ ｔ ｅ ｄ ｔｃｉｎ ｏ ｎ ａ ｃｎ ｉ ｅ ｄ ． ｅ Ｋｅ ｙ ｗｏｒ ｓ：ｅ ｒ ｍｙ ｉ ｄ ｎ ａ ｃ ｎ；ｍｉｒ ｂ ｏｏ ｉａ ｔ ｏ ｃ ｏ ｉｌ ｇｃ ｌｍｅｈ ｄ；ｆ ｅ ｅｄ
恩拉霉素 质量标准
恩拉霉素质量标准
恩拉霉素（Erythromycin）是一种广谱抗生素，主要用于治疗
细菌感染。
质量标准是确保药物制剂的质量和安全性的关键要素，对于恩拉霉素这样的药物也有相应的质量标准。
以下是一般性的恩拉霉素质量标准的一些方面：
1.外观：应为白色至微黄色结晶性粉末或结晶。
2.纯度：恩拉霉素的纯度要符合国家或国际标准，通常采用高效液相色谱法（HPLC）进行检测。
3.含量：药品中恩拉霉素的含量应在规定范围内，确保药物的治疗效果。
这也通过化学分析方法来进行检测。
4.水分含量：恩拉霉素制剂中的水分含量应符合标准，以确保稳定性。
5.重金属含量：应符合国家或国际标准，以确保产品的安全性。
6.微生物限度：药物中的微生物限度也是一个重要的质量标准，以防止细菌污染。
7.有关杂质：药物中的其他杂质，如溶剂残留物等，也需要在一定范围内。
这些标准通常由药典（例如美国药典、欧洲药典）或制药行业的相关规范和法规规定。
具体的质量标准可能会因生产厂家、国家地区和药物剂型的不同而有所差异。
生产和销售恩拉霉素的药厂需要确保其产品符合这些质量标准，以提供高质量、安全有效的药物。
恩拉霉素发酵培养基优化研究
恩拉霉素发酵培养基优化研究杨金环【摘要】以杀真菌素链霉菌(Streptomyces fungicidious)FYFJ08作为研究试材,通过单因子试验及正交试验,对菌株的培养基配方进行优化,确定其适宜的摇瓶培养基.优化后的培养基配方使摇瓶发酵恩拉霉素产量由1474 U/mL上升至2030U/mL.【期刊名称】《园艺与种苗》【年(卷),期】2016(000)003【总页数】2页(P72-73)【关键词】杀真菌素链霉菌;恩拉霉素;发酵培养基【作者】杨金环【作者单位】安徽丰原发酵技术工程研究有限公司,安徽蚌埠233010【正文语种】中文【中图分类】F950恩拉霉素（Enramycin）又名恩来霉素、恩霉素、持久霉素，是由土壤中分离出来的杀真菌素链霉菌（Streptomyces fungicidious CGMCCNO.4113）发酵产生的一种多肽类抗生素［1-2］，主要由恩拉霉素A和恩拉霉素B组成。
恩拉霉素是目前饲料添加剂中广泛使用的抗生素之一，具有广谱、无残留、不产生耐药性等优点［3-5］，能改变肠道内的细菌群落分布，有利于饲料营养成分的消化吸收，促进动物增重和提高饲料利用率。
由于恩拉霉素独特的优点，使其具有良好的社会效益和环境效益，成为新型抗生素的重要来源，具有广阔的市场前景。
该研究以杀真菌素链霉菌FYFJ08为供试菌株，优选一种用于提高恩拉霉素产量的发酵培养基，其发酵产恩拉霉素含量达到2 030U/mL，比优化前提高了约37.7%。
1.1 菌株杀真菌素链霉菌FYFJ08，由安徽丰原发酵技术工程研究有限公司菌种室提供。
1.2 培养基常规发酵培养基（W/V）：葡萄糖4.0%，玉米淀粉2.0%，玉米蛋白粉4.5%，磷酸二氢钾0.02%，氯化钠0.5%，碳酸钙0.5%，其余为水，pH 6.5～7.0。
500 mL三角瓶中装液量50mL，接种量10%，在转速220 r/min，温度为28℃的恒温摇床中培养7 d，测定恩拉霉素的含量。
恩拉霉素质量标准的建立
HO
N
N
H
O
H N O
O NH
OH H
O
N
N
O
O
H HN
OH
O O
H2N
HO
HO OH
HN O
NH O
OH
OO
H N
NH2
O
H2N N HN O
HN
N
N H
NH
HN
O
NH
O
OH HN
Cl
N
NH O
OH NH2
Cl
恩拉霉素A： 恩拉霉素B：
R =CH3
C107H138Cl2N26O31
R =CH2CH3 C108H140Cl2N26O31
. 1170 .
中国抗生素杂志2019年10月第44卷第10期 文章编号：1001-8689(2019)10-01170-06
恩拉霉素质量标准的建立
韩宁宁 杨秀玉 戴青 赵晖*
(中国兽医药品监察所，北京 100081)
摘要：目的 建立恩拉霉素质量标准。方法 采用HPLC-PDA法建立鉴别及恩拉霉素组分检查方法，采用效价法建立恩拉 霉素含量测定方法，并根据药品质量标准分析方法验证指导原则的要求，进行相应方法验证。结果 鉴别恩拉霉素组分检查方 法专属性良好，在100~350u/mL范围内浓度与组分A与B峰面积之和具有良好的线性关系(r=0.9999)；效价含量测定方法专属性良 好，在10~48u/mL范围内浓度与抑菌圈直径具有良好的线性关系(r=0.9995)，方法准确度回收率96.3%，RSD为2.9%。 结论 该 质量标准考察项目全面，方法简单准确，可作为恩拉霉素质量控制的方法。
的市场需求。 恩拉霉素预混剂于20世纪90年代由日本武田药
恩拉霉素微生物检定法的研究
恩拉霉素微生物检定法的研究陈敏;金萍;方中【摘要】Samples containing enramycin were determinated by the double disk method with Bacillus subtilis as test microorganism and antibiotics standardization medium Ⅱ . The determination conditions were optimized through the investigations of extraction solution composition, extraction time and the concentrations of Bacillus subtilis. The linearity of the dose-response relationship was analysised upon it, and the accuracy of the method was checked. The results showed that the optimum detern-mination conditions were acidic acetone solution B and 80 min for extraction. The calibration curve was linear within the rangefrom 0. 56 to 35. 79 U/raL between the logarithm of concentration and the diameter of inhibition zone with the 10' spores /mL of test microorganism constration, the correlation coefficient was 0. 9960. The proposed method has been applied to the determination of samples containing enramycin. The recoveries was 95. 90%, relative standard deviation (RSD) was 1. 95%. This method applies to the detection of enramycin sample.%以枯草芽孢杆菌为检定菌,检定培养基Ⅰ号为试验用培养基,采用双碟法进行恩拉霉素样品测定.通过浸提溶液组成、浸提时间、检定菌浓度考察,优化了检定条件.在此基础上,确立了恩拉霉素浓度的对数值与抑菌圈直径的线性范围,并对所建立的微生物检定法进行准确度、最小检出限等考察.结果表明,采用丙酮浸提液B、浸提恩拉霉素样品80 min,恩拉霉素浸提较完全.在检定菌浓度106个/mL的条件下,恩拉霉素浓度在0.56～35.79 U/mL之间,其浓度的对数值与相应的抑菌圈直径呈直线相关,相关系数r为0.9960.将建立的恩拉霉素微生物检定法用于恩拉霉素样品测定,回收率为95.90％,相对标准偏差(RSD)为1.95％.本方法可用于含恩拉霉素的样品测定.【期刊名称】《中国畜牧兽医》【年(卷),期】2012(039)001【总页数】5页(P56-60)【关键词】恩拉霉素;浸提;效价测定;微生物检定法【作者】陈敏;金萍;方中【作者单位】浙江工商大学食品与生物工程学院,浙江杭州310012;浙江工商大学食品与生物工程学院,浙江杭州310012;浙江凯胜科技有限公司,浙江杭州310014【正文语种】中文【中图分类】Q936恩拉霉素（enramycin），又名安来霉素、恩霉素、持久霉素，系1966年自日本兵库县西宫市土壤中的链霉菌（Streptomyces fungicidicus No.B5477）所产生的抗生素（Higashide等，1968）；它是不饱和脂肪酸与十几种氨基酸结合的多肽类抗生素，主要成分为恩拉霉素A和恩拉霉素B，还有少量的C和D组份（Iwasaki等，1973）。
响应面法优化恩拉霉素发酵培养基
响应面法优化恩拉霉素发酵培养基
□ 许铭玉 王小琴 冯疆涛 罗文伟 李 虎 邢雪岩 新疆阿克苏地区疾病预防控制中心
摘 要：本试验通过 Box-Behnken Design 中心组合试验对出发培养基 X24 进行优化，选取玉米粉、黄豆粉、硫酸铵、 葡萄糖 4 个因素建立模型，对菌株 TCCC 21101 进行发酵测活并进行验证试验，最终得到优化后的培养基配方，即玉米粉 7.88%、黄豆粉 2.82%、硫酸铵 0.4%、葡萄糖 0.6%、硫酸亚铁 0.01%、L- 乳酸 0.2%、碳酸钙 0.5%、耐高温 α- 淀粉酶 0.07% 和豆油 0.05%。该培养基发酵测活得出抑菌圈直径的大小约为 19.35 mm，其效价约为 4 147 U/g，对比工业发酵培养基， 该培养基配制简单，成分廉价易得，较适合实验室研究用。
1.1.1 试验菌株 产恩拉霉素的杀真菌链霉菌 TCCC 21101；生物测定指示菌枯草芽孢杆菌 CMCC（B）63501， 以 上 两 株 菌 均 由 应 用微生物与酶工程实验室保藏。 1.1.2 主要试剂和仪器 参见文献 [8]。 1.1.3 培养基和溶液 GYT 培养基，参见文献 [8]；种子 培 养 基， 参 见 文 献 [8]； 发 酵 培 养 基 X24： 玉 米 粉 8%， 葡 萄 糖 0.5%， 黄 豆粉 3%，硫酸铵 0.4%，玉米浆粉 2%， 碳酸钙 0.5%，豆油 0.05%，耐高温 α淀粉酶 0.07%，灭菌前 pH 为 7.0 ～ 7.2； 抗生素检定培养基：25 g/L。以上培 养基灭菌条件均为湿灭法。121 ℃、
关键词：恩拉霉素；响应面；发酵培养基；抑菌圈；效价
恩 拉 霉 素， 是 1966 年 自 日 本 兵 库县土壤中分离得到的一株杀真菌素 链 霉 菌（Streptomyces fungicidicus No. B5477）发酵获得的次级代谢产物 。 [1-3] 恩拉霉素对革兰氏阳性菌特别是有害 梭状芽孢杆菌具有较强的抑制作用。
恩拉霉素市场与技术发展状况
恩拉霉素市场与技术发展状况一、概况恩拉霉素(Enramycin)是由土壤中分离出来的放线菌Streptomyces fungicidiousNO.B5477发酵产生的一种由不饱和脂肪酸和十几种氨基酸结合成的多肽类抗生素。
该药于1966年由日本武田药品工业株式会社研发,1974年在日本正式注册,其后在许多国家被注册和广泛使用。
1993年,我国农业部批准该药在我国注册。
2005年,国内生产企业与美国先灵葆雅动物保健品有限公司(Schering Plough AnimalHealth Corp.)开始合作生产恩拉霉素预混剂。
它对革兰氏阳性菌有很强的抑制作用，长期使用后不易产生抗药性。
它能改变肠道内的细菌群落分布，有利于饲料营养成份的消化吸收，促进动物增重和提高饲料利用率,因此被世界上许多国家推荐作为抗生素促生长剂。
恩拉霉素不易被吸收，故残留畜禽体内较少。
建议肉鸡饲料每吨添加1-10克（效价），仔猪料添加2.5-20克／吨。
产蛋期禁用，无停药期的规定。
恩拉霉素为多肽类抗生素，其抗菌作用机理是抑制细菌细胞壁的合成。
恩拉霉素对革兰氏阳性菌有很强的活性，特别是对肠道内的有害梭菌有很强的抑杀作用，对革兰氏阳性菌的最小抑菌浓度(MIC)为0.3～3.12g／ml。
恩拉霉素还可通过抑制肠道中有害细菌的生长和繁殖来改变肠道内的菌群平衡，饲料中营养物质的吸收和利用增加。
长期使用恩拉霉素，细菌对其也不易产生耐药性，恩拉霉素与其他抗生素之间也不产生明显交叉耐药二、恩拉霉素的特点2.1恩拉霉素多由30多个氨基酸片段组成，不同来源多肽的氨基酸序列具有较强的保守性且具有以下共同特点：（l）N端由碱性氨基酸片段组成；（2）C端均酰胺化；（3）绝大多数多肽在第2位均为Trp，它对杀菌活性至关重要；（4）它们具有较广的杀菌谱2.2作用机制：恩拉霉素的作用机制与传统抗生素有很大的不同。
目前，关于恩拉霉素的作用机制主要包括以下几种：（1）离子通道的形成；（2）抑制细胞呼吸；(3) 抑制细胞外膜蛋白的合成；（4）抑制细胞壁的形成。
恩拉霉素的研究进展
恩拉霉素的研究进展周岷江1,严玉宝1,胡娟1,余华1,叶建强2,谢晶2,汤华钊2(1.四川出入境检验检疫局,成都 610041; 2.四川省畜牧科学研究院,成都 610066)[收稿日期]2007207226 [文献标识码]A [文章编号]100221280(2007)1220042203 [中图分类号]R978.16[摘 要] 概述了恩拉霉素的理化特性、药效学、毒理学和临床应用研究进展,展望了今后恩拉霉素的研究方向。
[关键词] 恩拉霉素;理化特性;药效学;毒理学;临床应用作者简介:周岷江(1976年-),男,兽医药理及毒理学硕士,主要从事进出境动物和动物产品的检验检疫工作。
E -mail:m injiangzhou_ciq@yahoo Progress i n Research of Enram yc i nZHOU M in -jiang 1,Y AN Yu -bao 1,HU Juan 1,Y U Hua 1,YE J ian -qiang 2,X I E J ing 2,T ANG Hua -zhao2(1.S ichuan Entry -exit Inspection and Q uarantine B ureau of P .R.China,Chengdu,S ichuan P rovince,610041;2.S ichuan Ani m al Husbandry Science A cade m y,Chengdu,S ichuan Province,610066)Abstract:I n this paper,the p r ogress of study on physical and che m ical characteristic,phar macodyna m ics,t oxicol 2ogy and clinical app licati on of enra mycin were reviewed .A t the sa me ti m e,outl ook on the research trend of enra 2mycin was put f or ward .Key words:enra mycin;physical and che m ical characteristic;phar macodyna m ics;t oxicol ogy;clinical app licati on 恩拉霉素(Enra mycin ),又名恩来霉素、恩霉素、安来霉素、持久霉素,是由土壤中分离出来的放线菌S trepto m yces fungicidious NO.B5477发酵产生的一种多肽类抗生素[1-2]。
恩拉霉素含量测定方法的改进
恩拉霉素含量测定方法的改进作者：朱曦董文婷胡深梁利妺来源：《湖北畜牧兽医》2013年第06期摘要：针对《进口兽药质量标准》1999年版收录的恩拉霉素预混剂含量测定方法中部分检测条件进行了适当的改进，将pH 4.0醋酸盐缓冲液改为pH 7.8的磷酸盐缓冲液，检验用菌株改为金黄色葡萄球菌，培养基改为Ⅱ号pH 7.8的培养基，终浓度由10～40 U/mL改为100～400 U/mL，由振摇30 min改为超声提取90 min。
优化了检验条件，使检验结果更精准可靠。
关键词：恩拉霉素；效价测定；微生物检定法中图分类号：S859.79+6 文献标识码：B 文章编号：1007-273X（2013）06-0015-02恩拉霉素（Enramycin）是由放线菌（Streptomyces fungicidicus）发酵而得，其包括13个不同种类的17个氨基酸分子和脂肪酸分子所组成的有机碱。
其中氨基酸分子构成环状多肽结构，脂肪酸位于多肽结构末端，据其末端脂肪酸种类不同，分为恩拉霉素 A（C107H138Cl2N26O31）和恩拉霉素B（C108H140Cl2N26O31）。
恩拉霉素对革兰氏阳性菌有很强的抑制作用，如梭状芽孢杆菌、链球菌、葡萄球菌、肺炎双球菌等革兰氏阳性菌均具有很强的抑制作用。
尤其是对梭状芽孢杆菌（Clostridium）作用更加显著。
恩拉霉素不同于其他抗生素的是长期使用后不容易产生耐药性，并能促进猪、鸡增重和提高饲料转化率。
目前国内兽药恩拉霉素含量测定方法的依据为中国农业部发布的1999年版《进口兽药质量标准》。
依据恩拉霉素的药理学特点，在实际检测工作中对样品提取、缓冲液及终浓度等检测条件进行优化，建立新的检测方法，使得检测条件更合理，结果更精准。
1 材料与方法1.1 试验材料（1）试剂及培养基。
冰醋酸、醋酸钠、磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、丙酮、盐酸等试剂均为分析纯。
试验用水为蒸馏水。
pH 4.0醋酸盐缓冲液按照1999年版《进口兽药质量标准》提供方法配制[1]，pH 7.8的磷酸盐缓冲液按照2010版的《中国兽药典》一部附录抗生素微生物检定法配制[2]。
恩拉霉素人工抗原的合成与鉴定
恩拉霉素人工抗原的合成与鉴定【摘要】恩拉霉素是一种重要的抗生素，人工合成的恩拉霉素人工抗原在免疫治疗中具有重要意义。
本文首先介绍了恩拉霉素人工抗原的合成方法和鉴定方法，然后探讨了其在药物研究中的应用意义。
进一步提出通过刺激免疫应答来治疗相关疾病的方法，并展望了将恩拉霉素人工抗原应用于免疫疗法发展的潜力。
结论部分总结了恩拉霉素人工抗原合成与鉴定的研究意义，探讨了未来发展方向和对药物研究的启示。
该研究对于推动免疫治疗的发展，提高药物疗效具有重要意义。
【关键词】恩拉霉素、人工抗原、合成、鉴定、药物研究、免疫应答、免疫疗法、发展方向、药物研究启示1. 引言1.1 研究背景恩拉霉素（Emilitin）是一种植物生长素，具有促进植物生长的作用。
近年来，恩拉霉素在药物研究领域引起了广泛关注，因其可能具有抗肿瘤、抗感染等特性。
恩拉霉素的纯天然来源较为有限，限制了其在医药领域的进一步应用。
人工合成恩拉霉素成为一种重要的研究方向。
过去，恩拉霉素人工合成的方法较为困难，需要耗费大量时间和资源。
随着化学合成技术的不断发展，研究人员逐渐探索出了一些高效、低成本的合成方法。
这些方法不仅可以提高恩拉霉素的产量，还可以调整其结构，以提高其药物活性和稳定性。
对恩拉霉素人工抗原的合成与鉴定研究具有重要意义。
通过研究恩拉霉素的人工合成方法，可以为药物研究提供更多的选择；而通过对其鉴定方法的探索，可以确保合成产品的纯度和稳定性。
这将为利用恩拉霉素开展免疫疗法研究打下坚实的基础。
1.2 研究目的研究目的是为了合成和鉴定恩拉霉素人工抗原，从而探索其在药物研究和免疫治疗中的应用价值。
通过这项研究，我们希望能够开发出更有效的免疫疗法，提高相关疾病的治疗效果。
我们也希望通过制备恩拉霉素人工抗原，可以为其他药物研究提供新的思路和方法，推动医学领域的进步。
通过对恩拉霉素人工抗原的合成与鉴定研究，我们还可以深入了解其结构与功能之间的关系，为未来的药物研究提供重要的参考依据。
恩拉霉素生物检测方法的改进
恩拉霉素生物检测方法的改进许铭玉;宋淑婷;张莹;张会图【期刊名称】《中国畜牧兽医》【年(卷),期】2017(044)002【摘要】The national standard pinella mildew element biological detection method was improved,using dry filter paper method instead of cylinder plate method,the potassium content of different samples of pinella mold were determined,and the extract composition,extraction time,the concentration of bacteria test and other factors influence on the test results of the established enramycin between concentration and the antibacterial circle diameter of linear equations was studied.The results showed that using acetone extraction liquid acetone (A ∶ 1 mol/mL HCl ∶ water =35∶12∶56,pH value was adjusted to 3.0 with 1 mol/mL HCl) leaching provided sample,extraction time of 3.5 h could fully immersed test of e of biological indicator bacteria CMCC (B) 63501 spore count of 3.4× 107 per mL of the measurement of living flat dish,the formation of the inhibitory circle edge rule was clear,good ing dry filter paper method could effectively eliminate the extraction or dilute acidic fluid itself to detect strains inhibitory effect,and the utility model had the advantages of simple operation,good repeatability.It could be used for large quantities of samples of enramycin content determination.Enramycin standard solution at concentrations for 150～500 U/mL and itsbacteriostatic circle diameter and valence have good linear regression.The resulting regression equation was Y=0.00944X+11.55344,the correlation coefficient was R=0.9962,the final effective range was 0.75～2.5 U,the measured results were more close to the true value.It could be used as an efficient enduracidin determination method,worthy of promotion and use.%试验对国家标准中恩拉霉素的生物检测方法进行了改进,以干燥滤纸片法代替管碟法对不同样品中的恩拉霉素含量进行了测定;并研究了浸提液组成、浸提时间、检定菌浓度等因素对检测结果的影响,建立了恩拉霉素浓度与抑菌圈直径之间的线性方程.研究结果表明,利用丙酮浸提液A(丙酮:1 mol/mL HC1∶水=35∶12∶56,用1 mol/mL HCl将pH调至3.0)浸提供试品,浸提时间3.5h,可以充分浸提供试品中的恩拉霉素;使用生物测定指示菌CMCC(B)63501芽孢数为3.4×107个/mL的平皿,形成的抑菌圈边缘规则清晰,准确度好;使用干燥滤纸片法可有效消除浸提液或酸性稀释液本身对检测菌株的抑制作用,且操作简单、重复性好,可以同时对大批量的样品进行恩拉霉素含量的测定.恩拉霉素标准溶液在浓度为150～500 U/mL的范围内,其产生的抑菌圈直径与效价有较好的线性回归性,所得回归方程:Y=0.00944X+11.55344,相关系数R=0.9962,最终有效区间是0.75～2.5U,测得的结果更接近真实值,可作为一种高效、快速的恩拉霉素含量测定方法,值得推广和使用.【总页数】7页(P384-390)【作者】许铭玉;宋淑婷;张莹;张会图【作者单位】天津科技大学生物工程学院,应用微生物与酶工程实验室,天津300457;天津科技大学生物工程学院,应用微生物与酶工程实验室,天津300457;天津科技大学生物工程学院,应用微生物与酶工程实验室,天津300457;天津科技大学生物工程学院,应用微生物与酶工程实验室,天津300457【正文语种】中文【中图分类】S859.79+6【相关文献】1.生物表面活性剂排油圈检测方法的改进和应用 [J], 毕思宁;王彦杰;左豫虎2.黄酒中生物胺的检测方法改进 [J], 彭金龙;胡健;张凤杰;肖蒙;叶小龙;倪斌3.细菌生物膜检测方法改进与应用 [J], 尤理想;赵青;周敏;汪意涛;吴淑燕;李嫄渊;黄瑞4.黄酒中生物胺的检测方法改进 [J], 张梦薇5.化妆品微生物指标检测方法的改进建议 [J], 白雪梅因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
恩拉霉素提取工艺研究
恩拉霉素提取工艺研究
闵江;娄燕;刘正光;赵才兵;张翠芬;高鹏;王丹丹;陈森;梁景乐
【期刊名称】《中国兽药杂志》
【年(卷),期】2022(56)2
【摘要】为优化恩拉霉素提取工艺,以70%甲醇溶液为提取剂,提取恩拉霉素,经过浓缩、脱色、结晶、重结晶,制备高含量恩拉霉素产品。
得到最佳提取工艺条件是:浸提pH3.5~4.0,浸提温度30℃,三次浸提时间1 h,一次浸提料液比1∶7,二次浸提料液比1∶3,三次浸提料液比1∶3,活性炭用量是浓缩液体积的1.0%~1.5%,粗精粉重结晶得到纯品,含量97%。
【总页数】4页(P42-45)
【作者】闵江;娄燕;刘正光;赵才兵;张翠芬;高鹏;王丹丹;陈森;梁景乐
【作者单位】山东胜利生物工程有限公司;中牧实业股份有限公司
【正文语种】中文
【中图分类】S859.79
【相关文献】
1.羊血中超氧化物歧化酶提取工艺研究——热变温度、热变时间和热变方式对SOD提取的影响及最佳工艺条件选择
2.左旋龙脑的不同提取工艺对比研究及其HHLSE提取工艺优化
3.中药制剂中间提取物制备工艺路线设计思路探讨——通塞脉微丸中间提取物制备工艺比较研究
4.恩拉霉素摇瓶发酵工艺研究
5.恩拉霉素预混剂生产工艺研究
因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
恩拉霉素的研究进展
恩拉霉素的研究进展
周岷江;严玉宝;胡娟;余华;叶建强;谢晶;汤华钊
【期刊名称】《中国兽药杂志》
【年(卷),期】2007(041)012
【摘要】概述了恩拉霉素的理化特性、药效学、毒理学和临床应用研究进展,展望了今后恩拉霉素的研究方向.
【总页数】3页(P42-44)
【作者】周岷江;严玉宝;胡娟;余华;叶建强;谢晶;汤华钊
【作者单位】四川出入境检验检疫局,成都,610041;四川出入境检验检疫局,成都,610041;四川出入境检验检疫局,成都,610041;四川出入境检验检疫局,成
都,610041;四川省畜牧科学研究院,成都,610066;四川省畜牧科学研究院,成
都,610066;四川省畜牧科学研究院,成都,610066
【正文语种】中文
【中图分类】R978.16
【相关文献】
1.恩拉霉素的最新研究进展 [J], 张子臣;张翠芬;刘宪军;王向前
2.恩拉霉素与雷莫拉宁生物合成研究进展 [J], 苏敏;李继安;邵雷;陈代杰
3.制备液相色谱法分离纯化恩拉霉素预混剂中恩拉霉素A和恩拉霉素B [J], 唐阳刚;李敬辉;徐新军;黄洁云
4.恩拉霉素作用机制及基因簇改造研究进展 [J], 叶婷婷;陈方龙;曹丹;赵淑娟;葛晓
萍;殷晓浦
5.恩拉霉素国内研究进展 [J], 段志刚;张军立;崔克娇
因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
恩拉霉素含量测定方法的改进
作者：朱曦董文婷胡深梁利妺
来源：《湖北畜牧兽医》2013年第06期
摘要：针对《进口兽药质量标准》1999年版收录的恩拉霉素预混剂含量测定方法中部分检测条件进行了适当的改进，将pH 4.0醋酸盐缓冲液改为pH 7.8的磷酸盐缓冲液，检验用菌株改为金黄色葡萄球菌，培养基改为Ⅱ号pH 7.8的培养基，终浓度由10～40 U/mL改为100～400 U/mL，由振摇30 min改为超声提取90 min。
优化了检验条件，使检验结果更精准可靠。
关键词：恩拉霉素；效价测定；微生物检定法
中图分类号：S859.79+6 文献标识码：B 文章编号：1007-273X（2013）06-0015-02
恩拉霉素（Enramycin）是由放线菌（Streptomyces fungicidicus）发酵而得，其包括13个不同种类的17个氨基酸分子和脂肪酸分子所组成的有机碱。
其中氨基酸分子构成环状多肽结构，脂肪酸位于多肽结构末端，据其末端脂肪酸种类不同，分为恩拉霉素 A
（C107H138Cl2N26O31）和恩拉霉素B（C108H140Cl2N26O31）。
恩拉霉素对革兰氏阳性菌有很强的抑制作用，如梭状芽孢杆菌、链球菌、葡萄球菌、肺炎双球菌等革兰氏阳性菌均具有很强的抑制作用。
尤其是对梭状芽孢杆菌（Clostridium）作用更加显著。
恩拉霉素不同于其他抗生素的是长期使用后不容易产生耐药性，并能促进猪、鸡增重和提高饲料转化率。
目前国内兽药恩拉霉素含量测定方法的依据为中国农业部发布的1999年版《进口兽药质量标准》。
依据恩拉霉素的药理学特点，在实际检测工作中对样品提取、缓冲液及终浓度等检测条件进行优化，建立新的检测方法，使得检测条件更合理，结果更精准。
1 材料与方法
1.1 试验材料
（1）试剂及培养基。
冰醋酸、醋酸钠、磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、丙酮、盐酸等试剂均为分析纯。
试验用水为蒸馏水。
pH 4.0醋酸盐缓冲液按照1999年版《进口兽药质量标准》提供方法配制[1]，pH 7.8的磷酸盐缓冲液按照2010版的《中国兽药典》一部附录抗生素微生物检定法配制[2]。
抗生素检定培养基Ⅰ号pH 7.8、Ⅱ号pH 7.8均购于北京海淀中海动物保健科技公司。
（2）菌种及标准品。
枯草芽孢杆菌[CMCC（B）63501]，金黄色葡萄球菌[CMCC（B）26003]来源于中国兽医药品监察所。
标准品由武汉兴鼎生物科技公司提供，标示效价为1 216 U/mg。
（3）样品4%的恩拉霉素预混剂由兴鼎生物科技公司提供。
（4）仪器设备。
TOMY ES310高压灭菌器，干燥箱，恒温水浴培养箱，ZY-300IV多功能微生物自动测量分析仪，移液枪（最大量程1 000 μL）。
1.2 试验方法
（1）按文献[2]分别制备pH 7.8培养基Ⅰ铺加枯草芽孢杆菌[CMCC（B）63501]菌悬液和pH 7.8培养基Ⅱ铺加金黄色葡萄球菌[CMCC（B）26003]菌悬液的双碟备用。
（2）精密称取标准品适量，按文献[1]加提取液（丙酮：1mol/l盐酸：水 =35：12：56），制成含1 000 U/mL的备用液，再分别用pH4.0的缓冲液与pH 7.8的磷酸缓冲液制成浓度分别为10、40 U/mL与 100、400 U/mL的两组高低剂量溶液备用。
取制备好的1.2（1）中两种双碟，分别滴加这两组高低剂量的溶液，同时滴加上述两种缓冲液做空白对照，
（37±1）℃培养。
（3）按文献[1]取本品适量，精密称定样品2.500 0 g，加提取液（丙酮：1mol/l盐酸：水=35：12：56），制成含恩拉霉素1 000 U/mL的溶液，充分振摇30 min，取上清液，用醋酸盐缓冲液（pH4.0）稀释成终浓度分别为10 U/mL和40 U/mL的溶液；按文献[2]测定3批样品的含量。
（4）精密称定样品2.500 0 g，加提取液（丙酮：1 mol/l盐酸：水=35：12：56）约80 mL，水浴超声40 min，冷至室温，加提取液制成含恩拉霉素1 000 U/mL的溶液，用磷酸盐缓冲液（pH 7.8）稀释成终浓度分别为10、40 U/mL与100、400 U/mL的两组溶液；菌悬液菌株为金黄色葡萄球菌〔CMCC（B）26003〕，培养基为Ⅱ号pH7.8，其他检测条件不变，按文献[2]方法测定3批样品的含量。
（5）在1.2（4）基础上将样品超声提取时间分别设定为10 、20 、40 、60 、90 min，终浓度为100和400 U/mL的溶液，其他检测条件不变，按文献[2]方法测定3批样品的含量。
2 结果与分析
（1）按文献[1]所载方法，在pH7.8培养基Ⅰ铺加枯草芽孢杆菌菌悬液的双碟上滴加醋酸盐缓冲液（pH 4.0）做为试验空白对照，培养结果产生明显的抑菌圈。
滴加的标准溶液高、低浓度形成的抑菌圈平均差值小于1，剂间差异不明显。
按改进方法的pH 7.8培养基Ⅱ铺加金黄色葡萄球菌[CMCC（B）26003]菌悬液的双碟上滴加pH 7.8的磷酸缓冲液为空白的双碟，培养结果无抑菌圈。
剂间高低浓度为10 U/mL和40 U/mL的溶液形成的抑菌圈与文献[1]方法相比稍好，但大小抑菌圈平均差值小于1。
剂间浓度为100 U/mL和400 U/mL的溶液形成的抑菌圈大小圈差值大于2且小于3.5，剂间差异较明显（表1）。
（2）按文献[1]和改进方法测样品含量，由表2可见，文献[1]所载方法由于剂间差异不显著，所得抑菌圈数据不符合兽药检验操作规程，检测结果无效。
方法改进后可得到较为准确的检验结果。
（3）方法改进后，所使用的超声提取时间对结果的影响见表3。
由表3可见，剂间浓度为100 U/mL和400 U/mL，经过超声提取，超声时间对检测结果也有一定的影响，超声提取时间在10～40 min期间，超声时间越长检测结果越高，说明延长超声时间可以充分提取样品。
但超声时间超过40 min后特别是到90 min时，提取结果反而下降，说明超声40 min就可完全提取样品。
3 讨论
（1）原方法中所用醋酸盐缓冲液（pH 4.0）在一定程度上抑制方法中枯草芽孢杆菌的生长，使得空白醋酸盐缓冲液（pH 4.0）也能产生抑菌圈。
而抗生素微生物检定管碟法的原理是在铺加一定量菌悬液的琼脂平板上，利用抗生素在琼脂培养基内的扩散作用，比较标准品与供试品两者对接种的试验菌产生抑菌圈的大小，以测定供试品效价的一种方法。
由于抑菌圈的大小与检测结果相关，本法所用的稀释液、缓冲液不能有抑菌或杀灭病菌的作用。
而文献[1]所载检测方法使用的醋酸盐缓冲液（pH4.0）影响了恩拉霉素正常的抑菌圈的大小，掩盖了其真实的抑菌作用，使检测结果有误，此方法不适用于检测恩拉霉素的效价。
而改进后的方法避免了此类问题，所用菌株对恩（下转第 21 页）
（上接第 16 页）
拉霉素敏感，缓冲液对菌株无抑制或杀灭作用。
（2）文献[1]所载检测方法中振摇提取30 min，在实际检测中发现超声更利于提取，且超声时间对其结果有一定的影响，在超声40 min时就可完全提取主药成分，因此采用超声提取要比振摇更能得到真实准确的检测结果。
（3）文献[1]所载检测方法，上碟浓度范围为10 U/mL和40 U/mL。
改进后的方法上碟浓度范围改为100 U/mL和400 U/mL，用原方法检测发现使用该浓度范围，即使加菌量减小所形成的抑菌圈依然偏小，达不到文献[2]规定的标准品高浓度抑菌圈直径范围应在18～22 mm的要求，影响结果的准确性。
而改进后标准品高浓度抑菌圈直径范围在18～22 mm之间，且大小圈差异明显，符合文献[2]要求，使得检测结果更精准。
参考文献：
[1] 中华人民共和国农业部《进口兽药质量标准》（1999年版）[S].
[2] 中国兽药典委员会.中华人民共和国兽药典（2010年版一部）[M].北京：中国农业出版社，2011.。