大蒜素对人皮肤基底细胞癌A431细胞的放疗增敏作用研究要点
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（１０ Ｉｘｇ／ｍＬ）１５０斗Ｌ，温育３０ ｍｉｎ后放入流式细胞 仪检测。
； 氯 冬 嬉
ｏ．１
爿０．０ｌ
０
２
４
６
８
１０
照射剂量（Ｇｙ）
图１
１．２．６统计学处理统计学处理：采用ＳＰＳＳｌ７．０软 件对实验数据进行分析，如为定量资料，需先进行正 态性检验，数据用平均值±标准差（戈±ｓ）表示，如实 验数据不服从正态分布，则采用秩和检验。Ｐ＜ ０．０５为差异有统计学意义。
【摘要】
目的探讨大蒜素（Ａｌｈｃｉｎ）是否能增加人皮肤基底细胞癌Ａ４３１细胞的放疗敏感性及其
作用机制ｏ．方法ＭＴｒ法检测Ａｌｌｉｃｉｎ对Ａ４３１细胞的生长抑制率，筛选出半数抑制浓度（ＩＣ５０）；将细胞 分为对照组、照射组（ＩＲ组）、Ａｌｌｉｃｉｎ组和ＩＲ＋Ａｌｌｉｃｉｎ组。采用流式细胞仪检细胞自噬水平。结果
细胞培养和大蒜素处理：人皮肤基底细胞癌
Ａ４３１细胞采用１０％胎牛血清ＲＰＭＩ １６４０培养液培 养，将细胞置于温度３７℃、含５％ＣＯ：培养箱中培 养，取对数生长期细胞，将细胞分为对照组、照射组 （ＩＲ组，照射剂量分别为０、１、２、４、６、８ Ｇｙ）、Ａｌｌｉｃｉｎ 组（浓度为１０、２０、４０、６０、８０斗ｇ／ｍＬ）和ＩＲ＋Ａｌｌｉｃｉｎ
Ｍ，ＩＴＩ＇法检测Ａ４３１细胞增殖活性：将细胞悬
表１
不同浓度Ａｌｌｉｃｉｎ对Ａ４３１细胞增殖活性的抵制作用（：±ｓ）
液接种于１×１０４爪／孔的９６孑Ｌ培养板中，每实验组 设８个复孔，Ｍｌｉｃｉｎ处理２４、４８和７２ ｈ后，每孔加 入ＭＴＴ溶液（５ ｍｇ／ｍＬ）１０斗Ｌ，连续培养６ ｈ，弃掉 上清，每孑Ｌ加１４０“Ｌ ＤＭＳＯ，震荡１０ ｍｉｎ上酶标仪
ｔｏ
ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ
ａｎｄ
ｃｌｉｎｉｃａｌ
ｐａｔｈｏｌｏｇｙ［Ｊ］．Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ
３讨论 皮肤基底细胞癌是一种常见的恶性肿瘤，一次 性大剂量电离辐射虽然能有效的缩小肿瘤体积，但 是也会诱发辐射旁效应，如正常组织的放射性损伤 和放射性皮炎等临床表现。体内外实验研究显示， Ａｌｌｉｃｉｎ不仅能协同增强化疗药的抗肿瘤作用，还参 与多种信号传导通路旧ｊ。本实验探讨Ａｌｌｉｃｉｎ是否 能增加人皮肤基底细胞癌Ａ４３１细胞的放疗敏感性 及其作用机制，为临床治疗皮肤基底细胞癌提供科 学依据。 本实验研究显示，Ａ４３１细胞经过Ａｌｌｉｃｉｎ处理 后，其增殖活性明显受到抑制，并且呈现时间和浓度 依赖性，而不同浓度间比较或者同一浓度不同时间 段比较也有显著差异。放射增敏实验显示，Ａｌｌｉｃｉｎ ＋ＩＲ组较ＩＲ组的肩区逐渐变窄缩小，提示细胞的 损伤修复能力呈降低趋势，Ａ４３１细胞在各照射剂量 点的ＳＦ均明显低于ＩＲ组。自噬是机体细胞对长寿 命蛋白质、高尔基体和线粒体回收再利用的过程。 肿瘤细胞在受到化学物理作用下（放化疗、乏氧和 内质网应激），其自噬水平呈差异的表达。１０。。为探 究其造成此上述实验结果的原因，我们用流式细胞 仪检测发现，Ａｌｌｉｃｉｎ组和Ａｌｌｉｃｉｎ＋ＩＲ组的细胞的自 噬水平呈不同程度升高。本研究结果首次证实Ａｌ— ｌｉｃｉｎ能增加人皮肤基底细胞癌Ａ４３１细胞的放疗敏 感性，其作用机制与细胞自噬密切相关。 参考文献
组。
１．２．２
Ａ４３１细胞的增殖活性明显受到抑制，呈现时间、浓 度依赖性。不同浓度间比较或者同一浓度不同时间 段比较，差异具有统计学意义（Ｐ＜０．０５）。Ａｌｌｉｃｉｎ 作用Ａ４３ｌ细胞２４、４８、７２ ｈ的ＩＣ５０分别为３５．４７、
１８．６４、６．５６ ｍｍｏｌ／Ｌ（Ｆ＝２２．５４、１８．９４和２１．６３， Ｐ＜０．０５）（表１）。
（５７０ ｎｍ）检测吸光度Ａ值，每组实验重复三次，根
据Ａ值计算细胞增殖活性。
１．２．３ １８０
照射参数：设置ｘ光机的电流１８ Ｍａ，电压
注：表不相邻浓度Ｉ司比较或者Ｉ司一浓度不Ｉ司时Ｉ司段比较， ８Ｐ＜Ｏ．０５，ＡＵｉｃｉｎ：大蒜素，下同 ２．２
ｋＶ，滤板０．２５Ｃｕ，吸收剂量率０．３６２ Ｇｙ／ｍｉｎ，靶
ｃｅｌｌ（Ｆ＝３０．１５
Ｐ＜０．０５），ｅｓｐｅｃｉａｌｌｙ ｉｎ ＩＲ＋ａｌｌｉｃｉｎ ｇｒｏｕｐ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ
Ａｌｌｉｃｉｎ ｃｏｕｌｄ ｉｎｃｒｅａｓｅ ｔｈｅ ｒａｄｉｏｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ｈｕｍａｎ
ｓｋｉｎ ｂａｓａｌ ｃｅｌｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ Ａ４３ １ ｃｅｌｌ ｗｈｉｃｈ ｗａｓ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ａｕｔｏｐｈａｇｙ．
．０１３６．・
国匿鱼瘴堂苤盍！！！！生！旦筮１２鲞筮！翅！坐！！堡望！！尘，丛些：！！！！：Ｙ塑：！！：坠：！
・论著・
大蒜素对人皮肤基底细胞癌Ａ４３１细胞的放疗
增敏作用研究
陈俊潘双双李丽王珊珊
２５１７００滨州市中心医院皮肤科
通信作者：王珊珊，Ｅｍａｉｌ：５４０９０３１６５＠ｑｑ．ｃｏｍ
ＤＯＩ：１０．３７６０／ｃｍａ—ｊ．ｉｓｓｎ．１６７３－４３９４．２０１６．０２．００８
ＤＯＩ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７１－８３４８．２００５．０３．０１４．
Ｌｉ ＸＧ，Ｔａｎ
ＷＪ，“ｕ ＷＬ。ｅｔ ａ１．Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｖａｓｃｕｌａｒ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ
注：与对照组比较，。Ｐ＜０．０５，ＩＲ：照射组
ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ ａｎｄ ｎｉｔｒｉｃ ｏｘｉｄｅ ｓｙｎｔｈａｓｅ ｉｎ ｆａｃｉａｌ ｓｋｉｎ ｃａｒｃｉｎｏｍａ ａｎｄ ｉｔｓ ｒｅｌａｔｉｏｎ
性。瑚Ｊ。探讨大蒜素（Ａｌｌｉｃｉｎ）是否能增加人皮肤基
万方数据
垦匾鱼蕉堂苤查！Ｑ！！生！旦筮！！鲞筮！翅！型』！坐坐！！！！：丛些：垫！！：Ｙ！！：翌：盟！：！
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
・１３７・
ＸＳＺ．２２０／２０固定式ｘ射线深部治疗机购自辽宁丹
东。
１．２ １．２．１
２结果
２．１
实验方法
Ａｌｌｉｃｉｎ对Ａ４３１细胞增殖活性影响 ＭＴＴ实验显示Ａｌｌｉｃｉｎ处理２４、４８、７２ ｈ后，
ｃｍ。
皮距６０
１．２．４
克隆形成实验：制备人皮肤基底细胞癌
Ａｌｌｉｃｉｎ对Ａ４３１细胞的放射增敏作用 ＩＲ组和Ａｌｌｉｃｉｎ＋ＩＲ组的ｓＦ２、Ｄｏ、Ｄｑ分别为
Ａ４３１细胞悬液，调整密度后将细胞接种于６孔板 中，按照０、２、４、６、８、１０ Ｇｙ剂量进行体外照射，照射 后继续培养两周，弃掉上清用结晶紫染色计算集落 数量。按照如下公式计算：细胞存活分数（ＳＶ）＝实 验组克隆形成率／对照组克隆形成率，克隆形成率＝ 克隆数／接种细胞数×１００％。用软件拟合计算平均 致死量（Ｄ。）、准域剂量（Ｄｑ）、２Ｇｙ照射后细胞存活 分数（ＳＦ：）、绘制细胞存活曲线，计算外推数（Ｎ）和
ＭＴＴ结果显示大蒜素作用３．４３１细胞２４、４８、７２ ｈ后ＩＣ５０分别为３５．４７、１８．６４、６．５６ ｍｍｏｌ／Ｌ（Ｆ＝２２．５４、
１８．９４和２１．６３，Ｐ＜０．０５）。和对照组相比，Ａｌｌｉｃｉｎ组和Ａｌｌｉｃｉｎ＋ＩＲ组Ａ４３１细胞的自噬水平均增加 （Ｆ＝３０．ｔ５、２８．３６，Ｐ＜０．０５），以Ａｌｌｉｃｉｎ＋ＩＲ组升高最显著。结论 Ａ４３１细胞的自噬水平来增加其放疗敏感性。 Ａｌｌｉｃｉｎ通过上调人皮肤基底细胞癌
２．３
Ａｌｌｉｃｉｎ对Ａ４３１细胞的放射增敏作用
Ａｌｌｉｃｉｎ对Ａ４３１细胞自噬水平的影响
如表２所示，和对照组相比，Ａｌｌｉｃｉｎ组和Ａｌｌｉｃｉｎ ＋ＩＲ组的细胞自噬水平呈不同程度升高，差异具有 统计学意义（Ｆ＝３０．１５、２８．３６，Ｐ＜０．０５）。
万方数据
・１３８・
国匿鱼瘥堂苤查！Ｑ！！生！旦筮！！鲞复！翅！坐』！！婴！！！！：丛婪：！Ｑ！鱼：！尘：３１，盟！：！
【关键词】。大蒜素；皮肤基底细胞癌；放射敏感性
Ｒａｄｉｏｓｅｎｓｉｔｉｚａｔｉｏｎ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ａｌｌｉｃｉｎ ｓｈｕａｎｇ，ＬＩ Ｌｉ，Ｗａｎｇ Ｓｈａｎｓｈａｎ Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ
ｏｎ
ｈｕｍａｎ ｓｋｉｎ ｂａｓａｌ ｃｅｌｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ Ａ４３１ ｃｅｌｌ
Ｃｈｅｎ Ｊａｎ，Ｐａｎ Ｓｈｕａｎｇ—
和Ｂｃｌ－２来增强人胰腺癌ＢＸＰＣ３细胞的放射敏感
底细胞癌Ａ４３１细胞的放疗敏感性及其作用机制， 可能为临床治疗皮肤基底细胞癌提供科学依据
１材料与方法
１．１
实验材料
人皮肤基底细胞癌Ａ４３１细胞购自上海科兴生 物科技有限公司，胎牛血清和ＲＰＭＩ １６４０培养基购 自上海沪峰化工有限公司，大蒜素购自上海市禾风 制药有限公司，四甲基偶氮唑盐（ＭＴｒ）和单丹磺酰 尸胺（ＭＤＣ）荧光染料购自美国Ｓｉｇｍａ公司。国产
Ｌ ａｔ‘２４ｈ，４８ｈ ａｎｄ ｇｒｏｕｐ ａｎｄ
７２ｈ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ（Ｆ＝２２．５４，１８．９４
ｓｈｏｗｅｄ
ａｎｄ
２１．６３，Ｐ＜０．０５）．Ｃｏｍｐａｒｅｄ
ｉｎ Ａ４３１
ｗｉｔｈ ｃｏｎｔｒｏｌ，ａｌｌｉｃｉｎ ａｎｄ ２８．３６，
ＩＲ＋ａｌｌｉｃｉｎ ｇｒｏｕｐ
ｌａｒｇｅｌｙ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ａｕｔｏｐｈａｇｙ
【Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ】
Ａｌｌｉｃｉｎ；Ｈｕｍａｎ Ｓｋｉｎ Ｂａｓａｌ Ｃｅｌｌ Ｃａｒｃｉｎｏｍａ；Ｒａｄｉｏｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ
皮肤基底细胞癌是起源于表皮或者附属器的临 床常见的恶性皮肤肿瘤，常见的治疗方法包括外科 切除、化学治疗和放射治疗等¨引。放射治疗常适 用于年龄较大、手术耐受差和切除难度较大的患者， 然而硬斑病样型基底细胞癌由于对放射线敏感性较 差，增加照射剂量会导致正常组织的放射性损 伤Ｍ引。已有研究显示，大蒜素不仅具有增强机体 机体免疫、抗肿瘤活性，还能通过诱导凋亡蛋白Ｂａｘ
［１］Ｔｒｕｏｎｇ
ＢＣ，Ｔｕａｎ ＨＤ，Ｆｉｔｚｇｅｒａｌｄ
Ｍｅｄｉｃａｌ
Ｊｏｕｒｎａｌ，２００５，３４（３）：３５０－３５１．
ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｃｏｎｆ
表２
Ａｌｌｉｅｉｎ对Ａ４３１细胞自噬水平的影响（：±ｓ）
分组 对照组 ＩＲ组 自噬水平（％）
９．３６士１．２２
ｄｏｕｂｌｅ Ｄｅｂｙｅ ｍｏｄｅｌ ｐａｒａｍｅｔｅｒｓ ｉｎ ｓｋｉｎ Ｐｒｏｃ ＩＥＥＥ Ｅｎｇ Ｍｅｄ Ｂｉｏｌ
ｃａｎｃｅｒ
Ｓｏｃ，２０１４，２０１４：７１８－７２１．ＤＯＩ：１０．
ｗｅｒｅ
ｏｎ
［Ａｂｓｔｒａｃｔ】二，Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ
ｎｏｍａ
ｈｕｍａｎ ｓｋｉｎ ｂａｓａｌ ｃｅｌｌ ｃａｒｃｉ－
Ａ４３ １
ｃｅｌｌ．．Ｍｅｔｈｏｄ．Ｍ３３＂Ｗａｓ
ｄｉｖｉｄｅｄ ｉｎｔｏ ｃｏｎｔｒ０１．ｉｏｎｉｚｉｎｇ ｒａｄｉａｔｉｏｎ
．ｇⅢ＇ｏｕｐ。（ＩＲ），ａｌｌｉｃｉｎ
ｅｌ：’Ｒｅｓｕｌｔｓ
１ １０９／ＥＭＢＣ．２０１４．６９４３６９１．
［２］李晓光，谭文杰，刘文玲，等．颜面皮肤癌中ＮＯＳ和ＶＥＧＦ的表
１１．１５±２．６６
达及其临床病理意义［Ｊ］．重庆医学，２００５，３４（１３）：３５０－３５１． Ａｌｌｉｃｉｎ组 Ａｌｌｉｃｉｎ＋ＩＲ组
１６．７４±３．１２８ ２３．６３ ４－４．３２８
ｏｆＤｅｒｍａｔｏｌｏｇｙ，Ｂｉｎｚｈｏｕ
Ｃｉｔｙ Ｃｅｎｔｅｒ Ｈｏｓｐｉｔａｌ，２５１７００ Ｂｉｎｚｈｏｕ，Ｃｈｉｎａ
Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ ａｕｔｈｏｒ：ｗａｎｇ
Ｓｈａｎｓｈａｎ，Ｅｍａｉｌ：５４０９０３１６５＠ｑｑ．ｃｏｒｎ
Ｔｏ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ ｒａｄｉｏｓｅｎｓｉｔｉｚａｔｉｏｎ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ Ａｌｌｉｃｉｎ ｕｓｅｄ ｔｏ ｄｅｔｅｃｔ ＩＣ５０．Ｃｅｌｌｓ
放射增敏比（ＳＥＲ）。
９６．２４、８．６２、２．８７和７５．８５、６．４８、１．３６。如图ｌ所 示，Ａｌｌｉｃｉｎ＋ＩＲ组较ＩＲ组的肩区逐渐变窄缩小，提 示细胞的损伤修复能力呈降低趋势，Ａ４３ １细胞在各 照射剂量点的ＳＦ均明显低于ＩＲ组。
１．２．５流式细胞术检测细胞自噬和周期变化：用 １×ＰＢＳ洗涤细胞悬液两次，每管加入ＭＤＣ（０．０５ ｍｍｏｌ／Ｌ），放置３７℃孵箱温育６０ ｍｉｎ，用４％多聚 甲醛固定，１×ＰＢＳ洗涤两次后，流式细胞仪检测。 每个待检流式管加入ＲＮＡ酶、０．４％Ｔｒｉｏｎ和ＰＩ
ｇｒｏｕｐ，一ＩＲ＋ａｌｌｉｃｉｎ ｇｒｏｕｐ．Ｆｌｏｗ ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ ｗａｓ ｕｓｅｄ ｔｏ ａｎａｌｙｚｅ ｔｈｅ ｃｈａｎｇｅｓ ｏｆ ａｕｔｏｐｈａｇｙ ｌｅｖ・
ｌＭＴｔ＂ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ，ａｆｔｅｒ ｃｏ—ｃｕｌｔｕｒｅｄ ｗｉｔｈ ａｌｌｉｅｉｎ，ｔｈｅ ＩＣ５０ ｏｆ ａｌｌｉｃｉｎ ｗａｓ ３５．４７，１８．６４，６．５６ ｍｍｏｌ／
； 氯 冬 嬉
ｏ．１
爿０．０ｌ
０
２
４
６
８
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照射剂量（Ｇｙ）
图１
１．２．６统计学处理统计学处理：采用ＳＰＳＳｌ７．０软 件对实验数据进行分析，如为定量资料，需先进行正 态性检验，数据用平均值±标准差（戈±ｓ）表示，如实 验数据不服从正态分布，则采用秩和检验。Ｐ＜ ０．０５为差异有统计学意义。
【摘要】
目的探讨大蒜素（Ａｌｈｃｉｎ）是否能增加人皮肤基底细胞癌Ａ４３１细胞的放疗敏感性及其
作用机制ｏ．方法ＭＴｒ法检测Ａｌｌｉｃｉｎ对Ａ４３１细胞的生长抑制率，筛选出半数抑制浓度（ＩＣ５０）；将细胞 分为对照组、照射组（ＩＲ组）、Ａｌｌｉｃｉｎ组和ＩＲ＋Ａｌｌｉｃｉｎ组。采用流式细胞仪检细胞自噬水平。结果
细胞培养和大蒜素处理：人皮肤基底细胞癌
Ａ４３１细胞采用１０％胎牛血清ＲＰＭＩ １６４０培养液培 养，将细胞置于温度３７℃、含５％ＣＯ：培养箱中培 养，取对数生长期细胞，将细胞分为对照组、照射组 （ＩＲ组，照射剂量分别为０、１、２、４、６、８ Ｇｙ）、Ａｌｌｉｃｉｎ 组（浓度为１０、２０、４０、６０、８０斗ｇ／ｍＬ）和ＩＲ＋Ａｌｌｉｃｉｎ
Ｍ，ＩＴＩ＇法检测Ａ４３１细胞增殖活性：将细胞悬
表１
不同浓度Ａｌｌｉｃｉｎ对Ａ４３１细胞增殖活性的抵制作用（：±ｓ）
液接种于１×１０４爪／孔的９６孑Ｌ培养板中，每实验组 设８个复孔，Ｍｌｉｃｉｎ处理２４、４８和７２ ｈ后，每孔加 入ＭＴＴ溶液（５ ｍｇ／ｍＬ）１０斗Ｌ，连续培养６ ｈ，弃掉 上清，每孑Ｌ加１４０“Ｌ ＤＭＳＯ，震荡１０ ｍｉｎ上酶标仪
ｔｏ
ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ
ａｎｄ
ｃｌｉｎｉｃａｌ
ｐａｔｈｏｌｏｇｙ［Ｊ］．Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ
３讨论 皮肤基底细胞癌是一种常见的恶性肿瘤，一次 性大剂量电离辐射虽然能有效的缩小肿瘤体积，但 是也会诱发辐射旁效应，如正常组织的放射性损伤 和放射性皮炎等临床表现。体内外实验研究显示， Ａｌｌｉｃｉｎ不仅能协同增强化疗药的抗肿瘤作用，还参 与多种信号传导通路旧ｊ。本实验探讨Ａｌｌｉｃｉｎ是否 能增加人皮肤基底细胞癌Ａ４３１细胞的放疗敏感性 及其作用机制，为临床治疗皮肤基底细胞癌提供科 学依据。 本实验研究显示，Ａ４３１细胞经过Ａｌｌｉｃｉｎ处理 后，其增殖活性明显受到抑制，并且呈现时间和浓度 依赖性，而不同浓度间比较或者同一浓度不同时间 段比较也有显著差异。放射增敏实验显示，Ａｌｌｉｃｉｎ ＋ＩＲ组较ＩＲ组的肩区逐渐变窄缩小，提示细胞的 损伤修复能力呈降低趋势，Ａ４３１细胞在各照射剂量 点的ＳＦ均明显低于ＩＲ组。自噬是机体细胞对长寿 命蛋白质、高尔基体和线粒体回收再利用的过程。 肿瘤细胞在受到化学物理作用下（放化疗、乏氧和 内质网应激），其自噬水平呈差异的表达。１０。。为探 究其造成此上述实验结果的原因，我们用流式细胞 仪检测发现，Ａｌｌｉｃｉｎ组和Ａｌｌｉｃｉｎ＋ＩＲ组的细胞的自 噬水平呈不同程度升高。本研究结果首次证实Ａｌ— ｌｉｃｉｎ能增加人皮肤基底细胞癌Ａ４３１细胞的放疗敏 感性，其作用机制与细胞自噬密切相关。 参考文献
组。
１．２．２
Ａ４３１细胞的增殖活性明显受到抑制，呈现时间、浓 度依赖性。不同浓度间比较或者同一浓度不同时间 段比较，差异具有统计学意义（Ｐ＜０．０５）。Ａｌｌｉｃｉｎ 作用Ａ４３ｌ细胞２４、４８、７２ ｈ的ＩＣ５０分别为３５．４７、
１８．６４、６．５６ ｍｍｏｌ／Ｌ（Ｆ＝２２．５４、１８．９４和２１．６３， Ｐ＜０．０５）（表１）。
（５７０ ｎｍ）检测吸光度Ａ值，每组实验重复三次，根
据Ａ值计算细胞增殖活性。
１．２．３ １８０
照射参数：设置ｘ光机的电流１８ Ｍａ，电压
注：表不相邻浓度Ｉ司比较或者Ｉ司一浓度不Ｉ司时Ｉ司段比较， ８Ｐ＜Ｏ．０５，ＡＵｉｃｉｎ：大蒜素，下同 ２．２
ｋＶ，滤板０．２５Ｃｕ，吸收剂量率０．３６２ Ｇｙ／ｍｉｎ，靶
ｃｅｌｌ（Ｆ＝３０．１５
Ｐ＜０．０５），ｅｓｐｅｃｉａｌｌｙ ｉｎ ＩＲ＋ａｌｌｉｃｉｎ ｇｒｏｕｐ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ
Ａｌｌｉｃｉｎ ｃｏｕｌｄ ｉｎｃｒｅａｓｅ ｔｈｅ ｒａｄｉｏｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ｈｕｍａｎ
ｓｋｉｎ ｂａｓａｌ ｃｅｌｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ Ａ４３ １ ｃｅｌｌ ｗｈｉｃｈ ｗａｓ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ａｕｔｏｐｈａｇｙ．
．０１３６．・
国匿鱼瘴堂苤盍！！！！生！旦筮１２鲞筮！翅！坐！！堡望！！尘，丛些：！！！！：Ｙ塑：！！：坠：！
・论著・
大蒜素对人皮肤基底细胞癌Ａ４３１细胞的放疗
增敏作用研究
陈俊潘双双李丽王珊珊
２５１７００滨州市中心医院皮肤科
通信作者：王珊珊，Ｅｍａｉｌ：５４０９０３１６５＠ｑｑ．ｃｏｍ
ＤＯＩ：１０．３７６０／ｃｍａ—ｊ．ｉｓｓｎ．１６７３－４３９４．２０１６．０２．００８
ＤＯＩ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７１－８３４８．２００５．０３．０１４．
Ｌｉ ＸＧ，Ｔａｎ
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注：与对照组比较，。Ｐ＜０．０５，ＩＲ：照射组
ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ ａｎｄ ｎｉｔｒｉｃ ｏｘｉｄｅ ｓｙｎｔｈａｓｅ ｉｎ ｆａｃｉａｌ ｓｋｉｎ ｃａｒｃｉｎｏｍａ ａｎｄ ｉｔｓ ｒｅｌａｔｉｏｎ
性。瑚Ｊ。探讨大蒜素（Ａｌｌｉｃｉｎ）是否能增加人皮肤基
万方数据
垦匾鱼蕉堂苤查！Ｑ！！生！旦筮！！鲞筮！翅！型』！坐坐！！！！：丛些：垫！！：Ｙ！！：翌：盟！：！
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
・１３７・
ＸＳＺ．２２０／２０固定式ｘ射线深部治疗机购自辽宁丹
东。
１．２ １．２．１
２结果
２．１
实验方法
Ａｌｌｉｃｉｎ对Ａ４３１细胞增殖活性影响 ＭＴＴ实验显示Ａｌｌｉｃｉｎ处理２４、４８、７２ ｈ后，
ｃｍ。
皮距６０
１．２．４
克隆形成实验：制备人皮肤基底细胞癌
Ａｌｌｉｃｉｎ对Ａ４３１细胞的放射增敏作用 ＩＲ组和Ａｌｌｉｃｉｎ＋ＩＲ组的ｓＦ２、Ｄｏ、Ｄｑ分别为
Ａ４３１细胞悬液，调整密度后将细胞接种于６孔板 中，按照０、２、４、６、８、１０ Ｇｙ剂量进行体外照射，照射 后继续培养两周，弃掉上清用结晶紫染色计算集落 数量。按照如下公式计算：细胞存活分数（ＳＶ）＝实 验组克隆形成率／对照组克隆形成率，克隆形成率＝ 克隆数／接种细胞数×１００％。用软件拟合计算平均 致死量（Ｄ。）、准域剂量（Ｄｑ）、２Ｇｙ照射后细胞存活 分数（ＳＦ：）、绘制细胞存活曲线，计算外推数（Ｎ）和
ＭＴＴ结果显示大蒜素作用３．４３１细胞２４、４８、７２ ｈ后ＩＣ５０分别为３５．４７、１８．６４、６．５６ ｍｍｏｌ／Ｌ（Ｆ＝２２．５４、
１８．９４和２１．６３，Ｐ＜０．０５）。和对照组相比，Ａｌｌｉｃｉｎ组和Ａｌｌｉｃｉｎ＋ＩＲ组Ａ４３１细胞的自噬水平均增加 （Ｆ＝３０．ｔ５、２８．３６，Ｐ＜０．０５），以Ａｌｌｉｃｉｎ＋ＩＲ组升高最显著。结论 Ａ４３１细胞的自噬水平来增加其放疗敏感性。 Ａｌｌｉｃｉｎ通过上调人皮肤基底细胞癌
２．３
Ａｌｌｉｃｉｎ对Ａ４３１细胞的放射增敏作用
Ａｌｌｉｃｉｎ对Ａ４３１细胞自噬水平的影响
如表２所示，和对照组相比，Ａｌｌｉｃｉｎ组和Ａｌｌｉｃｉｎ ＋ＩＲ组的细胞自噬水平呈不同程度升高，差异具有 统计学意义（Ｆ＝３０．１５、２８．３６，Ｐ＜０．０５）。
万方数据
・１３８・
国匿鱼瘥堂苤查！Ｑ！！生！旦筮！！鲞复！翅！坐』！！婴！！！！：丛婪：！Ｑ！鱼：！尘：３１，盟！：！
【关键词】。大蒜素；皮肤基底细胞癌；放射敏感性
Ｒａｄｉｏｓｅｎｓｉｔｉｚａｔｉｏｎ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ａｌｌｉｃｉｎ ｓｈｕａｎｇ，ＬＩ Ｌｉ，Ｗａｎｇ Ｓｈａｎｓｈａｎ Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ
ｏｎ
ｈｕｍａｎ ｓｋｉｎ ｂａｓａｌ ｃｅｌｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ Ａ４３１ ｃｅｌｌ
Ｃｈｅｎ Ｊａｎ，Ｐａｎ Ｓｈｕａｎｇ—
和Ｂｃｌ－２来增强人胰腺癌ＢＸＰＣ３细胞的放射敏感
底细胞癌Ａ４３１细胞的放疗敏感性及其作用机制， 可能为临床治疗皮肤基底细胞癌提供科学依据
１材料与方法
１．１
实验材料
人皮肤基底细胞癌Ａ４３１细胞购自上海科兴生 物科技有限公司，胎牛血清和ＲＰＭＩ １６４０培养基购 自上海沪峰化工有限公司，大蒜素购自上海市禾风 制药有限公司，四甲基偶氮唑盐（ＭＴｒ）和单丹磺酰 尸胺（ＭＤＣ）荧光染料购自美国Ｓｉｇｍａ公司。国产
Ｌ ａｔ‘２４ｈ，４８ｈ ａｎｄ ｇｒｏｕｐ ａｎｄ
７２ｈ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ（Ｆ＝２２．５４，１８．９４
ｓｈｏｗｅｄ
ａｎｄ
２１．６３，Ｐ＜０．０５）．Ｃｏｍｐａｒｅｄ
ｉｎ Ａ４３１
ｗｉｔｈ ｃｏｎｔｒｏｌ，ａｌｌｉｃｉｎ ａｎｄ ２８．３６，
ＩＲ＋ａｌｌｉｃｉｎ ｇｒｏｕｐ
ｌａｒｇｅｌｙ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ａｕｔｏｐｈａｇｙ
【Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ】
Ａｌｌｉｃｉｎ；Ｈｕｍａｎ Ｓｋｉｎ Ｂａｓａｌ Ｃｅｌｌ Ｃａｒｃｉｎｏｍａ；Ｒａｄｉｏｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ
皮肤基底细胞癌是起源于表皮或者附属器的临 床常见的恶性皮肤肿瘤，常见的治疗方法包括外科 切除、化学治疗和放射治疗等¨引。放射治疗常适 用于年龄较大、手术耐受差和切除难度较大的患者， 然而硬斑病样型基底细胞癌由于对放射线敏感性较 差，增加照射剂量会导致正常组织的放射性损 伤Ｍ引。已有研究显示，大蒜素不仅具有增强机体 机体免疫、抗肿瘤活性，还能通过诱导凋亡蛋白Ｂａｘ
［１］Ｔｒｕｏｎｇ
ＢＣ，Ｔｕａｎ ＨＤ，Ｆｉｔｚｇｅｒａｌｄ
Ｍｅｄｉｃａｌ
Ｊｏｕｒｎａｌ，２００５，３４（３）：３５０－３５１．
ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｃｏｎｆ
表２
Ａｌｌｉｅｉｎ对Ａ４３１细胞自噬水平的影响（：±ｓ）
分组 对照组 ＩＲ组 自噬水平（％）
９．３６士１．２２
ｄｏｕｂｌｅ Ｄｅｂｙｅ ｍｏｄｅｌ ｐａｒａｍｅｔｅｒｓ ｉｎ ｓｋｉｎ Ｐｒｏｃ ＩＥＥＥ Ｅｎｇ Ｍｅｄ Ｂｉｏｌ
ｃａｎｃｅｒ
Ｓｏｃ，２０１４，２０１４：７１８－７２１．ＤＯＩ：１０．
ｗｅｒｅ
ｏｎ
［Ａｂｓｔｒａｃｔ】二，Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ
ｎｏｍａ
ｈｕｍａｎ ｓｋｉｎ ｂａｓａｌ ｃｅｌｌ ｃａｒｃｉ－
Ａ４３ １
ｃｅｌｌ．．Ｍｅｔｈｏｄ．Ｍ３３＂Ｗａｓ
ｄｉｖｉｄｅｄ ｉｎｔｏ ｃｏｎｔｒ０１．ｉｏｎｉｚｉｎｇ ｒａｄｉａｔｉｏｎ
．ｇⅢ＇ｏｕｐ。（ＩＲ），ａｌｌｉｃｉｎ
ｅｌ：’Ｒｅｓｕｌｔｓ
１ １０９／ＥＭＢＣ．２０１４．６９４３６９１．
［２］李晓光，谭文杰，刘文玲，等．颜面皮肤癌中ＮＯＳ和ＶＥＧＦ的表
１１．１５±２．６６
达及其临床病理意义［Ｊ］．重庆医学，２００５，３４（１３）：３５０－３５１． Ａｌｌｉｃｉｎ组 Ａｌｌｉｃｉｎ＋ＩＲ组
１６．７４±３．１２８ ２３．６３ ４－４．３２８
ｏｆＤｅｒｍａｔｏｌｏｇｙ，Ｂｉｎｚｈｏｕ
Ｃｉｔｙ Ｃｅｎｔｅｒ Ｈｏｓｐｉｔａｌ，２５１７００ Ｂｉｎｚｈｏｕ，Ｃｈｉｎａ
Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ ａｕｔｈｏｒ：ｗａｎｇ
Ｓｈａｎｓｈａｎ，Ｅｍａｉｌ：５４０９０３１６５＠ｑｑ．ｃｏｒｎ
Ｔｏ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ ｒａｄｉｏｓｅｎｓｉｔｉｚａｔｉｏｎ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ Ａｌｌｉｃｉｎ ｕｓｅｄ ｔｏ ｄｅｔｅｃｔ ＩＣ５０．Ｃｅｌｌｓ
放射增敏比（ＳＥＲ）。
９６．２４、８．６２、２．８７和７５．８５、６．４８、１．３６。如图ｌ所 示，Ａｌｌｉｃｉｎ＋ＩＲ组较ＩＲ组的肩区逐渐变窄缩小，提 示细胞的损伤修复能力呈降低趋势，Ａ４３ １细胞在各 照射剂量点的ＳＦ均明显低于ＩＲ组。
１．２．５流式细胞术检测细胞自噬和周期变化：用 １×ＰＢＳ洗涤细胞悬液两次，每管加入ＭＤＣ（０．０５ ｍｍｏｌ／Ｌ），放置３７℃孵箱温育６０ ｍｉｎ，用４％多聚 甲醛固定，１×ＰＢＳ洗涤两次后，流式细胞仪检测。 每个待检流式管加入ＲＮＡ酶、０．４％Ｔｒｉｏｎ和ＰＩ
ｇｒｏｕｐ，一ＩＲ＋ａｌｌｉｃｉｎ ｇｒｏｕｐ．Ｆｌｏｗ ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ ｗａｓ ｕｓｅｄ ｔｏ ａｎａｌｙｚｅ ｔｈｅ ｃｈａｎｇｅｓ ｏｆ ａｕｔｏｐｈａｇｙ ｌｅｖ・
ｌＭＴｔ＂ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ，ａｆｔｅｒ ｃｏ—ｃｕｌｔｕｒｅｄ ｗｉｔｈ ａｌｌｉｅｉｎ，ｔｈｅ ＩＣ５０ ｏｆ ａｌｌｉｃｉｎ ｗａｓ ３５．４７，１８．６４，６．５６ ｍｍｏｌ／