不同固化液对相分离微球体外性质的影响
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本研究的创新点在于固定相分离阶段的条件，
只改变固化液组成，对比不同固化液组成对相分离 微球体外性质的影响．采用一系列表征方法对微球 体外性质进行了研究，如扫描电子显微镜（ＳＥＭ）观 察微球表面和内部形貌，激光粒度仪测定微球粒径， 气相色谱法（ＧＣ）测定微球内溶剂残留，高效液相色 谱法（ＨＰＬＣ）测定微球载药量和体外释放．
不同固化液对相分离微球体外性质的影响
赵明玉１，王腾腾１，薛 鹏２，王 磊１，梁荣财１，２
（１．烟台大学新型制剂与生物技术药物研究山东省高校协同创新中心，长效和靶向制剂国家重点实验 室，山东 烟台 ２６４００５；２．山东绿叶制药有限公司，山东 烟台 ２６４００３）
摘要：本研究的目的是对比油酸乙酯和正庚烷两种体系的固化液对相分离法所制备的醋 酸奥曲肽微球体外性质的影响．固定相分离阶段处方工艺，改变 ２种固化液体系中乙醇含 量，以形貌、粒径、载药量、溶剂残留及体外累计释放为指标，对比 ２种体系形成的微球体 外性质差别．结果表明，增加乙醇的用量，微球载药量、药物突释量降低，且能够减少二氯 甲烷在微球内的残留量．在乙醇加入量相同的情况下，油酸乙酯体系形成的微球体外释放 快于正庚烷体系形成的微球．２种不同固化液的对比研究为更好地理解相分离法微球形 成过程提供了一种新的思路． 关键词：固化液；油酸乙酯；正庚烷；乙醇；形貌；释放 中图分类号：Ｒ９４４ 文献标志码：Ａ
称量 ＰＬＧＡ５５／４５２ｇ溶于 ２０ｍＬ二氯甲烷作 为有机相，醋酸奥曲肽 ０１５２ｇ溶于 ２ｍＬ甲醇作为 水相．磁力搅拌下，将水相缓慢注入到有机相中，３００ ｒ·ｍｉｎ－１搅拌 ５ｍｉｎ即得均一混合溶液．然后将硅油 倒入混合溶液中，调大转速至 ７００ｒ·ｍｉｎ－１并搅拌 １０ｍｉｎ，将相分离的混合物迅速转移到 １０００ｍＬ由 不同成分组成的 ６种固化液（分别编号为Ⅰ—Ⅵ） 中，见表 １．待微球固化后，经 １０００目筛过滤，收集 微球．用正庚烷洗去微球表面的硅油，加入 ２０ｍＬ ２％甘露醇水溶液冻干 ３ｄ即得．６种固化液形成 ６ 批微球（分别编号为 Ａ—Ｆ）．
制备缓释微球常用的方法包括乳化溶剂挥发 法、喷雾干 燥 法 以 及 相 分 离 法［６］．本 研 究 中 的 模 型 药物醋酸奥曲肽是一种多肽，不仅水溶性较好，而且 容易加热失活，所以本研究选用相分离法制备醋酸 奥曲肽微球．ＴＨＯＭＡＳＩＮＣ等学者对 ＰＬＡ／ＰＬＧＡ相 分离的文献进行了总结［７－１１］，文献多集中于聚合物 和硅油性质对相分离阶段凝聚液滴形成的影 响［１２－１４］．
１ 实验部分
１１ 试剂与仪器 １０００ＣＳＴ硅 油 （陶 氏 （张 家 港 ）投 资 有 限 公
司）；醋酸奥曲肽（上海苏豪逸明制药公司）；二氯甲 烷（中国化工试剂公司）和甲醇 （中国化工试剂公 司）；正庚烷（国药集团化学试剂有限公司）；油酸乙 酯（江西益普生药业有限公司）；ＰＬＧＡ５５／４５（实验 室自制）；乙酸乙酯（国药集团化学试剂有限公司）； Ｎ，Ｎ－二甲基甲酰胺 （国药集团化学试剂有限公 司）．
微球是药物与载体材料聚合而成的微粒分散 体，缓释微球递送系统不仅能增加药物在生物体内 的半衰期、提高生物利用度，而且还能减少患者的给 药次数，提高患者的依从性［１］．近年来，使用生物可 降解材料作 为 缓 释 微 球 载 体 的 数 量 越 来 越 多 ［２－３］， 其中，聚乳 酸 羟 基 乙 酸 共 聚 物 （ＰＬＧＡ）应 用 最 为 广 泛［４］．本研究使用的 ＰＬＧＡ５５／４５是由课题组人员 根据丙交酯（ＬＡ）和乙交酯（ＧＡ）的开环聚合反应合 成的［５］．
球表面的甘露醇，用滤纸过滤微球并晾干．晾干后在 培养皿中加入液氮没过微球，在液氮完全挥发之前， 用刀片迅速切割微球．将双面导电胶带粘附于铝板 上，取适量干燥的微球均匀涂布在导电胶带上，喷金 后进行扫描电子显微镜观察． １４ 粒径的测定
采用激光粒度仪测定微粒的粒径．为使微球分 散更加均匀，使用 ０１％ 吐温 ２０溶液作 为 分 散 介 质． １５ 载药量的测定
称取醋酸奥曲肽微球约 ２５ｍｇ，加入冰醋酸 ２ ｍＬ，超声处理 １０ｍｉｎ，使 ＰＬＧＡ充分溶解，１３×１０４ｒ ·ｍｉｎ－１离心 １０ｍｉｎ，取上清液作为样品溶液，采用 ＨＰＬＣ法 测 定 醋 酸 奥 曲 肽 的 药 物 浓 度，实 际 载 药 量 计算如下：
实际载药量 ＝（微球中实际药物含量 ／微球总
ＥＭ－３０型扫描电子显微镜 （韩国 ＣＯＸＥＭ 公
收稿日期：２０１８１２１４ 通信作者：梁荣财（ＬＲＣ２０１８１０２６＠１６３．ｃｏｍ），副教授，研究方向：缓释制剂．
第 ４期ห้องสมุดไป่ตู้
赵明玉，等：不同固化液对相分离微球体外性质的影响
３４１
司）；３０００型激光粒度仪 （英国 Ｍａｓｔｅｒｓｉｚｅｒ公司）； １２００型高效液相色谱仪（美国 Ａｇｉｌｅｎｔ公司）；７８９０Ｂ 型气相色谱仪（美国 Ａｇｉｌｅｎｔ公司）． １２ 微球的制备
质量）×１００％． １６ 残留溶剂的测定
称取醋酸奥曲肽微球约 ２０ｍｇ，加入 ００５％ Ｎ， Ｎ－二甲基甲酰胺 －乙酸乙酯溶液 １ｍＬ，静置 １ｈ， 使 ＰＬＧＡ充分溶解后，采用气相色谱法（ＧＣ）直接进 样测定醋酸奥曲肽微球中的有机溶剂残留． １７ 体外加速释放测定
表 １ 固化液的组成 Ｔａｂ．１ Ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｏｆｓｏｌｉｄｉｆｉｅｄｌｉｑｕｉｄ
固化液编号 正庚烷 ／ｍＬ 乙醇 ／ｍＬ 油酸乙酯 ／ｍＬ
Ⅰ
－
－
１０００
Ⅱ
－
２５０
７５０
Ⅲ
－
５００
５００
Ⅳ
１０００
－
－
Ⅴ
７５０
２５０
－
Ⅵ
５００
５００
－
１３ 扫描电子显微镜（ＳＥＭ）观察形貌 取适量微球置于培养皿中，加去离子水洗涤微
第 ３２卷第 ４期 ２０１９年 １０月
烟台大学学报（自然科学与工程版）
ＪｏｕｒｎａｌｏｆＹａｎｔａｉＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（ＮａｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇＥｄｉｔｉｏｎ）
Ｖｏｌ．３２Ｎｏ．４ Ｏｃｔ．２０１９
文章编号：１００４８８２０（２０１９）０４０３４００５
ｄｏｉ：１０．１３９５１／ｊ．ｃｎｋｉ．３７１２１３／ｎ．２０１９．０４．００７
只改变固化液组成，对比不同固化液组成对相分离 微球体外性质的影响．采用一系列表征方法对微球 体外性质进行了研究，如扫描电子显微镜（ＳＥＭ）观 察微球表面和内部形貌，激光粒度仪测定微球粒径， 气相色谱法（ＧＣ）测定微球内溶剂残留，高效液相色 谱法（ＨＰＬＣ）测定微球载药量和体外释放．
不同固化液对相分离微球体外性质的影响
赵明玉１，王腾腾１，薛 鹏２，王 磊１，梁荣财１，２
（１．烟台大学新型制剂与生物技术药物研究山东省高校协同创新中心，长效和靶向制剂国家重点实验 室，山东 烟台 ２６４００５；２．山东绿叶制药有限公司，山东 烟台 ２６４００３）
摘要：本研究的目的是对比油酸乙酯和正庚烷两种体系的固化液对相分离法所制备的醋 酸奥曲肽微球体外性质的影响．固定相分离阶段处方工艺，改变 ２种固化液体系中乙醇含 量，以形貌、粒径、载药量、溶剂残留及体外累计释放为指标，对比 ２种体系形成的微球体 外性质差别．结果表明，增加乙醇的用量，微球载药量、药物突释量降低，且能够减少二氯 甲烷在微球内的残留量．在乙醇加入量相同的情况下，油酸乙酯体系形成的微球体外释放 快于正庚烷体系形成的微球．２种不同固化液的对比研究为更好地理解相分离法微球形 成过程提供了一种新的思路． 关键词：固化液；油酸乙酯；正庚烷；乙醇；形貌；释放 中图分类号：Ｒ９４４ 文献标志码：Ａ
称量 ＰＬＧＡ５５／４５２ｇ溶于 ２０ｍＬ二氯甲烷作 为有机相，醋酸奥曲肽 ０１５２ｇ溶于 ２ｍＬ甲醇作为 水相．磁力搅拌下，将水相缓慢注入到有机相中，３００ ｒ·ｍｉｎ－１搅拌 ５ｍｉｎ即得均一混合溶液．然后将硅油 倒入混合溶液中，调大转速至 ７００ｒ·ｍｉｎ－１并搅拌 １０ｍｉｎ，将相分离的混合物迅速转移到 １０００ｍＬ由 不同成分组成的 ６种固化液（分别编号为Ⅰ—Ⅵ） 中，见表 １．待微球固化后，经 １０００目筛过滤，收集 微球．用正庚烷洗去微球表面的硅油，加入 ２０ｍＬ ２％甘露醇水溶液冻干 ３ｄ即得．６种固化液形成 ６ 批微球（分别编号为 Ａ—Ｆ）．
制备缓释微球常用的方法包括乳化溶剂挥发 法、喷雾干 燥 法 以 及 相 分 离 法［６］．本 研 究 中 的 模 型 药物醋酸奥曲肽是一种多肽，不仅水溶性较好，而且 容易加热失活，所以本研究选用相分离法制备醋酸 奥曲肽微球．ＴＨＯＭＡＳＩＮＣ等学者对 ＰＬＡ／ＰＬＧＡ相 分离的文献进行了总结［７－１１］，文献多集中于聚合物 和硅油性质对相分离阶段凝聚液滴形成的影 响［１２－１４］．
１ 实验部分
１１ 试剂与仪器 １０００ＣＳＴ硅 油 （陶 氏 （张 家 港 ）投 资 有 限 公
司）；醋酸奥曲肽（上海苏豪逸明制药公司）；二氯甲 烷（中国化工试剂公司）和甲醇 （中国化工试剂公 司）；正庚烷（国药集团化学试剂有限公司）；油酸乙 酯（江西益普生药业有限公司）；ＰＬＧＡ５５／４５（实验 室自制）；乙酸乙酯（国药集团化学试剂有限公司）； Ｎ，Ｎ－二甲基甲酰胺 （国药集团化学试剂有限公 司）．
微球是药物与载体材料聚合而成的微粒分散 体，缓释微球递送系统不仅能增加药物在生物体内 的半衰期、提高生物利用度，而且还能减少患者的给 药次数，提高患者的依从性［１］．近年来，使用生物可 降解材料作 为 缓 释 微 球 载 体 的 数 量 越 来 越 多 ［２－３］， 其中，聚乳 酸 羟 基 乙 酸 共 聚 物 （ＰＬＧＡ）应 用 最 为 广 泛［４］．本研究使用的 ＰＬＧＡ５５／４５是由课题组人员 根据丙交酯（ＬＡ）和乙交酯（ＧＡ）的开环聚合反应合 成的［５］．
球表面的甘露醇，用滤纸过滤微球并晾干．晾干后在 培养皿中加入液氮没过微球，在液氮完全挥发之前， 用刀片迅速切割微球．将双面导电胶带粘附于铝板 上，取适量干燥的微球均匀涂布在导电胶带上，喷金 后进行扫描电子显微镜观察． １４ 粒径的测定
采用激光粒度仪测定微粒的粒径．为使微球分 散更加均匀，使用 ０１％ 吐温 ２０溶液作 为 分 散 介 质． １５ 载药量的测定
称取醋酸奥曲肽微球约 ２５ｍｇ，加入冰醋酸 ２ ｍＬ，超声处理 １０ｍｉｎ，使 ＰＬＧＡ充分溶解，１３×１０４ｒ ·ｍｉｎ－１离心 １０ｍｉｎ，取上清液作为样品溶液，采用 ＨＰＬＣ法 测 定 醋 酸 奥 曲 肽 的 药 物 浓 度，实 际 载 药 量 计算如下：
实际载药量 ＝（微球中实际药物含量 ／微球总
ＥＭ－３０型扫描电子显微镜 （韩国 ＣＯＸＥＭ 公
收稿日期：２０１８１２１４ 通信作者：梁荣财（ＬＲＣ２０１８１０２６＠１６３．ｃｏｍ），副教授，研究方向：缓释制剂．
第 ４期ห้องสมุดไป่ตู้
赵明玉，等：不同固化液对相分离微球体外性质的影响
３４１
司）；３０００型激光粒度仪 （英国 Ｍａｓｔｅｒｓｉｚｅｒ公司）； １２００型高效液相色谱仪（美国 Ａｇｉｌｅｎｔ公司）；７８９０Ｂ 型气相色谱仪（美国 Ａｇｉｌｅｎｔ公司）． １２ 微球的制备
质量）×１００％． １６ 残留溶剂的测定
称取醋酸奥曲肽微球约 ２０ｍｇ，加入 ００５％ Ｎ， Ｎ－二甲基甲酰胺 －乙酸乙酯溶液 １ｍＬ，静置 １ｈ， 使 ＰＬＧＡ充分溶解后，采用气相色谱法（ＧＣ）直接进 样测定醋酸奥曲肽微球中的有机溶剂残留． １７ 体外加速释放测定
表 １ 固化液的组成 Ｔａｂ．１ Ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｏｆｓｏｌｉｄｉｆｉｅｄｌｉｑｕｉｄ
固化液编号 正庚烷 ／ｍＬ 乙醇 ／ｍＬ 油酸乙酯 ／ｍＬ
Ⅰ
－
－
１０００
Ⅱ
－
２５０
７５０
Ⅲ
－
５００
５００
Ⅳ
１０００
－
－
Ⅴ
７５０
２５０
－
Ⅵ
５００
５００
－
１３ 扫描电子显微镜（ＳＥＭ）观察形貌 取适量微球置于培养皿中，加去离子水洗涤微
第 ３２卷第 ４期 ２０１９年 １０月
烟台大学学报（自然科学与工程版）
ＪｏｕｒｎａｌｏｆＹａｎｔａｉＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（ＮａｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇＥｄｉｔｉｏｎ）
Ｖｏｌ．３２Ｎｏ．４ Ｏｃｔ．２０１９
文章编号：１００４８８２０（２０１９）０４０３４００５
ｄｏｉ：１０．１３９５１／ｊ．ｃｎｋｉ．３７１２１３／ｎ．２０１９．０４．００７