对虾白斑综合症病毒结构蛋白质VP12的研究

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虾苗场3种重要病原同步定量PCR检测技术的建立

文章编号：１００４－２４９０（２０２０）０３－０３７５－１０虾苗场３种重要病原同步定量ＰＣＲ检测技术的建立收稿日期：２０１９－０３－２５基金项目：中国水产科学研究院基本科研业务费（２０１７ＨＹＺＤ０３０２）；上海市虾类产业技术体系建设项目［沪农科产字（２０１４）第５号］；公益性行业（农业）科研专项基金（２０１３０３０４７）作者简介：李楠英（１９９３—），男，硕士研究生，研究方向：水产动物病害与防治。

Ｅｍａｉｌ：９３５４５４９５１＠ｑｑ．ｃｏｍ通信作者：周俊芳，副研究员。

Ｅｍａｉｌ：ｚｈｏｕｊｆ＠ｅｃｓｆ．ａｃ．ｃｎ李楠英１，２，房文红１，王　元１，马清扬１，２，李新苍１，赵　姝１，符贵红１，周俊芳１（１．中国水产科学研究院东海水产研究所，农业农村部东海渔业资源开发利用重点实验室，上海　２０００９０；２．上海海洋大学水产与生命学院，上海　２０１３０６）摘　要：白斑综合征病毒（ｗｈｉｔｅｓｐｏｔｓｙｎｄｒｏｍｅｖｉｒｕｓ，ＷＳＳＶ）、虾肝肠胞虫（Ｅｎｔｅｒｏｃｙｔｏｚｏｏｎｈｅｐａｔｏｐｅｎａｅｉ，ＥＨＰ）和虾虹彩病毒（ｄｅｃａｐｏｄｉｒｉｄｅｓｃｅｎｔｖｉｒｕｓ１，ＤＩＶ１）为近年来凡纳滨对虾（Ｌｉｔｏｐｅｎａｅｕｓｖａｎｎａｍｅｉ）育苗场内的主要生物性危害因素，其中２种或３种病原共感染的现象也较为常见，快速、准确地检测和鉴别这３种病原是大型苗场生物安保体系构建和无特定病原虾苗生产的迫切需求。

基于ＳＹＢＲＧｒｅｅｎＩ染料法，建立了同步扩增３种病原的定量ＰＣＲ检测技术。

结果显示，该同步方法对３种病原的标准曲线相关系数（Ｒ２）均大于０．９９，且检测限可低至１０ｃｏｐｙ·μＬ－１，尤其是ＷＳＳＶ，在低至１ｃｏｐｙ·μＬ－１时仍能保持较好的组内和组间重复性。

熔解曲线分析显示，该同步定量ＰＣＲ技术对对虾样品的扩增产物只在７８．４℃、７９．７℃、８３．５℃处出现３个尖锐峰，分别与３种病原（ＤＩＶ１、ＥＨＰ和ＷＳＳＶ）扩增产物的Ｔｍ值相对应。

虾白斑综合征病毒的研究进展

到全亚洲的对虾养殖地区【。１９１９５年１１１月该病毒在西半
２ＷＳＶ的形态结构、化学组成和理化特性【Ｓ３】
来自不同地域不同宿主的ＷＳＶ形态结构十分相似，Ｓ
球被发现，１９９９年到达美国中部和南部，２００１年出现在
由两条平行的宽约９ｎ的螺旋和一条宽约８ｎ的中间ｍｍ带组成。ＷＳＶ主要由蛋白质和ＤＳＮＡ组成，目前认为不含有糖类（蛋白）糖和脂类。从日本对虾分离的ＷＳＶ，用Ｓ
定的威胁【。本文以前面的系统总结【为基础，对近几２１】
外被双层结构的囊膜，囊膜内可见杆状的核衣壳，核衣壳
都加剧了该病的发生与传播。由于宿主范围广泛，ＷＳＶＳ
不仅给对虾养殖造成严重的损失，也给海洋生态平衡带来
一
内为致密的髓核。病毒的衣壳结构为螺旋圆柱体，大小约为９ｒｘ４０ｎ５ｎｎ５ｍ，螺旋带几乎与衣壳长轴垂直，螺距为３ｍ，每匝螺旋宽２ｍ，螺旋问距４ｎ０ｎ６ｎｍ，该衣壳螺旋
１ｐＮａ１处理３ｍｉ失活，用５ｐｍＮａ１处理１ｍｉｍＣ０ｐ０ｎｐＣ００ｎ
失活，用１ｐｐｍ有机碘（ｏｉｏｅｉｄｎ）０Ｐｖｄｎ．ｉ处理３ｎ失活。ｏｅ０ｍｉ在４ ℃海水中ＷＳＶ至少存活１０ｄ在２Ｓ２，５℃ 海水中ＷＳＶ存活６Ｓ０ｄ～１０ｄ；在４℃低盐度海水中ＷＳＶ只２Ｓ能存活１０ｄ，在２５℃低盐度海水中ＷＳＶ能存活７ｄ，Ｓ而在２８℃ 低盐度海水中ＷＳＶ只能存活５ｄＳ。ＷＳＶ经Ｓｕｖ（量：９×１Ｗ・／）射６ｎ完全失活，经剂０ｕｓｍ照ｃ０ｍｉ５５℃处理９ｎ和７０ｍｉ０℃ 处理５ｍｉｎ完全失活，在ｐＨ１和ｐｌ环境中１ｎ失活，经臭氧（ｌｉ２０ｍｉ有效浓度：０５￣／）．ｇｍＬ处理１ｎ失活，经１０ｍｇｍＬＮａ１和有机碘以及０ｍｉ０／Ｃ０７／５ｍｇｍＬ四级胺处理１ｎ失活。可见，射线、化学试０ｍｉ剂、酸碱度（Ｈ）ｐ、温度、盐度、和水中的游离氧对ＷＳＶＳ的感染活性均有影响。

常见的南美白对虾病害发生原因及防治对策 - 养殖技术

常见的南美白对虾病害发生原因及防治对策-养殖技术南美白对虾在我国被广泛的养殖，规模也随之不断扩大。

由于规模的不断扩大，在养殖的过程中经常会出现各种问题。

本篇文章主要对白斑综合征病毒病、桃拉综合征和红腿病病毒害的原因进行分析，并且提出相应的防治措施。

根据养殖场的经验，我们总结出了以下几点。

一、白斑综合征病毒病1.病原白斑综合症病毒病的病原是一种具有囊膜的无色液体即亚群杆状病毒，也就是白斑综合征病毒（WSSV）。

这种病毒危害很大，一旦虾体感染，死亡率可达到90%。

在虾的肠道里存在着有益和有害的微生物，有益的自然是对虾的健康有好处的，但是一旦有害的微生物多了，那么虾体健康出现问题，其免疫力就会降低，从而使白斑综合征病毒（WSSV）有机可乘。

从而虾的生命和健康受到威胁。

2.症状通常病虾的表现症状为反应迟钝，空胃，不吃食，弹跳无力即活动能力下降。

虾群可能会出现游动异常，行动迟缓。

头胸甲上有明显的针眼大小不规则的白色斑点，显微镜检查一般为花骨朵状的，肝胰脏肿大糜烂或发红或体表发红，几天内就会有大量死亡。

这种情况下的虾群会在几个小时内再次出现这种问题，如果发现这种问题就说明虾感染了白斑综合征病毒，受到威胁的对虾死亡后尸体会漂浮在水面上，那么其他对虾则会选择吃掉同伴，病从口入，其他健康的虾也会因为吃了不健康的对虾而导致死亡。

因此可导致一周内全塘的对虾死亡，危害之大，影响之深，于此可见。

3.流行情况该病为水平传播，病虾排泄物夹杂着病毒从而污染水体，健康的虾呆在污染的水体内通过吞食病虾也随之感染到病毒。

二、桃拉综合征病毒病1.病原该病毒病原是直径32纳米左右的桃拉病毒（TSV），这种病毒式一种单链的RNA，外形呈现球的形状。

南美白对虾成为其寄宿的主要目标，因此此病的发病率很高，并且死亡率也很高。

2.症状主要表现为不吞食饲料，不好动；游泳无力、反应迟钝；虾体的壳变软，虾的身体体呈现红色，尤其是尾扇变红，所以桃拉综合征病毒病病又称为红尾病。

对虾白斑综合征病毒VP12的原核表达及其与VP24和VP26的相互作用

于揭示ＷＳＳＶ分子组装机制，阐明其致病机理具有重要意义。
关键词：对虾白斑综合征病毒；ＶＰ１２；原核表达；ＶＰ２４；ＶＰ２６；相互作用
中图分类号：￥９４５．１９；Ｑ７８６文献标识码：Ａ文章编号：１００７ — ５０３８（２０１３）０１ — ００１１ — ０５
动物医学进展。２０１３，３４（１）：１１１５
ＰｒｏｇｒｅｓｓｉｎＶｅｔｅｒｉｎａｒｙＭｅｄｉｃｉｎｅ

对虾白斑综合征病毒ＶＰ１２的原核表达及其与ＶＰ２４和ＶＰ２６的相互作用
高辛（ＤＩＧ）购自Ｒｏｃｈｅ公司；质粒小提试剂盒与ＤＮＡ
时起着与宿主受体互作的配体作用［４］。到目前为止
大约有５８种ＷＳＳＶ结构蛋白通过ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、双向电泳、质谱分析等蛋白组学的研究方法得以鉴定和初
囊膜蛋白，不仅参与病毒的形态变化，而且通过与宿主相互作用达到侵染及在宿主中复制］，特别是暴露
在表层的囊膜蛋白，可能属于吸附蛋白，在病毒感染
公司；氨苄青霉素、Ｌ－阿拉伯糖购自Ｓｏｌａｒｂｉｏ公司；地
１９ｋｕ相符合的目的蛋白。以Ｃｏ豺亲和层析方法，获得纯化ＶＰ１２蛋白。采用Ｆａｒ－Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ结合ＥＬＩＳＡ方

感染白斑综合征病毒的斑节对虾免疫酶变化特征

感染白斑综合征病毒的斑节对虾免疫酶变化特征摘要:研究了斑节对虾(Penaeus monodon)感染白斑综合征病毒(White spot syndrome virus,WSSV)后的发病情况和4种免疫酶活性的变化特征｡通过对斑节对虾进行WSSV急性攻毒试验,发现在感染50 h左右出现死亡高峰,感染60 h后大部分死亡虾出现明显的白斑｡血液酚氧化物酶(PO)､过氧化物酶(POD)､超氧化物歧化酶(SOD)､酸性磷酸酶(ACP)活性在感染WSSV后都呈现先降低再升高再降低的趋势,并在感染后60 h左右,活性达到最大值｡肝脏､肌肉组织中的ACP､SOD活性变化规律与其在血液中的变化类似,肝脏中的ACP､SOD活性明显高于肌肉组织中的活性｡关键词:斑节对虾;白斑综合征病毒(WSSV);免疫酶Characteristics of Immuno-enzymes of Penaeus monodon Infected with White Spot Syndrome VirusAbstract: The mortality of WSSV-infected Penaeus monodon, and the enzyme avtivity for four immuno-enzymes were investigated. It found that the highest shrimp mortality appeared around 50 hours, and the white spots occurred on most of the died shrimps around 60 hours after WSSV infected. The activity of phenoloxidase(PO),peroxidase(POD), superoxide dismutase (SOD) and acid phosphatase(ACP) in blood decreased at first after WSSV infected, then increased to the highest enzyme avtivity around 60 hours and decreased at last. The trends of SOD and ACP activity in liver and muscle were similar to the changes in blood, however, the activity of SOD and ACP in liver were higher than those in muscle.Key words: Penaeus monodon; WSSV; immuno-enzymes甲壳类动物缺乏由抗体介导的免疫反应,不能通过抗原抗体反应来达到自我保护的目的｡其免疫机制为非特异性免疫,通过血细胞及体液因子的活性来抵抗病原微生物的入侵｡血液酚氧化物酶(PO)､超氧化物歧化酶(SOD)､过氧化物酶(POD)以及酸性磷酸酶(ACP)等免疫酶的活性高低经常被用作评价免疫强弱的指标｡对虾的非特异性免疫系统也受很多因素的影响,比如蜕壳､水温突变､溶氧高低､外界刺激和病毒入侵等｡关于虾类的免疫应答机制,已经有很多研究报道,刘庆慧等[1]对中国对虾感染白斑综合征病毒(White spot syndrome virus,WSSV)后血细胞数量变化做了研究报道;Songa等[2]分析了感染桃拉病毒后凡纳斌对虾血淋巴和肌肉组成的生化变化;Yoganandhan等[3]报道印度明对虾在感染WSSV后,血淋巴细胞密度和血清蛋白浓度等免疫参数与正常虾有很大差异;宋林生等[4]报道过南美白对虾感染WSSV后SOD活性和过氧化氢酶(CAT)活性的变化｡还有很多其他学者关于对虾免疫反应机理的报道,但这些文献资料所阐述的反应规律不尽相同,有不同的试验结果和理论解释｡由于WSSV病毒病已经成为制约对虾养殖业发展的主要因素,而对虾的抗病能力主要通过非特异性免疫系统实现,因此对参与非特异性免疫的各种免疫酶活性的研究是对虾抗病研究的热点之一｡本研究通过斑节对虾(Penaeus monodon)WSSV急性感染试验,探讨了斑节对虾在感染WSSV后的发病情况和4种免疫酶在体内不同组织的活性变化｡1材料和方法1.1试验材料1.1.1试验用虾试验用斑节对虾由中国水产科学研究院南海水产研究所三亚热带水产研究中心提供｡挑选大小均匀(7.0±0.2)cm､活力旺盛的个体进行WSSV 急性攻毒试验｡1.1.2WSSV病原用白斑症状明显的斑节对虾作为感染材料(PCR检测WSSV阳性,超低温保存)｡取其肌肉组织0.1 g,加入1 mL磷酸盐缓冲液(NaCl 8 g,KCl 0.2 g,KHPO4 1.44 g,KH2PO4 0.24 g,用HCl调节pH值至7.4,定容至1 000 mL,灭菌常温保存)冰浴匀浆,10 000 r/min离心20 min后取上清液,上清液经0.45 μm滤膜过滤后稀释1 000倍作为试验用病毒液｡1.1.3试剂左旋多巴(L-dopa)(Sigma公司生产);PCR buffer､dNTP､Taq DNA聚合酶等购自大连宝生物工程公司;ACP检测试剂盒､SOD检测试剂盒､考马斯亮蓝蛋白测定试剂盒购自南京建成生物工程研究所;邻苯二胺等试剂均为国产分析纯｡1.2试验方法1.2.1WSSV急性攻毒试验试验前随机取虾10尾,进行WSSV病原抽样检测,检测方法采用巢式PCR法[5]｡攻毒试验设感染组和对照组,感染组4个平行,对照组4个平行,每个平行30尾,用于统计试验虾的死亡时间｡另设与前述相同的两个试验组,用于采集血液､肝组织和肌肉组织; 感染组每尾虾用1 mL一次性注射器注射病毒液0.05 mL;对照组每尾虾注射PBS 0.05 mL｡试验在16个500 L的玻璃钢桶中进行｡记录每尾虾的死亡时间,并在试验开始后0､12､24､36､48､60､72 h采集发病对虾的血液､肝组织和肌肉组织｡肝组织和肌肉组织采集后及时冷冻保存;血液采集后4℃保存过夜,第二天离心取血清｡试验期间,水温29~31℃,盐度3.0%~3.2%,pH值7.8~8.2,溶氧6.6~7.0 mg/L｡1.2.2免疫酶活性检测肝组织和肌肉组织加0.9%的生理盐水研磨成10%的组织匀浆,离心后取上清液｡血清和上清液用于免疫酶活性的检测｡1)PO活性的检测｡以L-dopa为底物,采用改进的Ashida[6]的方法按以下步骤进行测定:①配制50 mL 0.01 mol/L的L-dopa(L-dopa 0.0986 g,去离子水50 mL)和0.1 mol/L pH值为6.0的磷酸盐缓冲液(K2HPO4 1 mol/L 13.2 mL,KH2PO4 1 mol/L 86.8 mL,稀释至1 000 mL);②在96孔酶标板中,每孔加200 μL的0.1 mol/L pH 值为6.0的磷酸盐缓冲液;③每孔再加入10 μL血清和10 μL 0.01 mol/L的L-dopa,室温下混匀;④置于酶标仪中,室温28℃左右,固定吸收波长490 nm,每隔2 min测量1次,连续测量10次,测其血清酶动力学OD490值;⑤以OD490对反应时间作图,以试验条件下每分钟OD490值增加0.001定义为一个酶活力单位｡2)POD相对活性的检测,采用改进的雷质文等[7]的方法:①在96孔酶标板中加入血淋巴上清液,20 μL/孔;②加入180 μL显色缓冲液(一水柠檬酸7.3 g,Na2HPO4·2H2O 11.86 g,去离子水定容至1 000 mL);③置于酶标仪中,读取490 nm处的OD值(A1);④向所有样品孔中加入20 μL显色液(邻苯二胺4 mg,30% H2O2 4 μL;显色缓冲液10 mL);⑤置酶标仪中摇匀后,避光显色15 min,读取490 nm处的OD值(A2);⑥血淋巴上清液中POD 相对活性以APOD=(A2-A1)×稀释倍数表示｡SOD､ACP活性及蛋白质浓度的检测,按南京建成试剂盒内说明进行｡1.3数据处理统计不同时间段虾的死亡个数,计算免疫酶活性高低,用SPSS 16.0对不同时间点4种免疫酶的活性高低进行单因素方差分析,并做Duncan’s多重比较,结果以平均数±标准差来表示｡2结果2.1斑节对虾WSSV急性感染后的发病情况斑节对虾在抽样检测中均为WSSV阴性｡如图1所示,综合感染组4个平行斑节对虾的发病情况发现,注射感染24 h前后,部分虾活力减弱,弹跳无力,对外界刺激反应迟钝;感染32 h左右开始有虾死亡;感染50 h后,部分虾的虾壳轻度红色,头胸甲膨大易剥落,肝肥大,血液变稀,凝血力下降,出现死亡高峰;感染54 h左右,出现第一尾带有明显白斑的死虾｡在感染60 h左右,大部分死亡对虾出现明显白斑｡对照组试验期间没有死亡对虾｡2.2免疫酶活性分析2.2.1血液PO活性的变化特征斑节对虾感染WSSV后,0~24 h血液PO活性下降;24 h后,活性开始恢复,到感染60 h活性达到峰值,并且略高于初始活性;60~72 h,血液PO活性又开始下降;感染0､60 h血液PO活性与感染24､36､48､72 h血液PO 活性存在显著差异(P<0.05)(图2)｡对照组7个时间点血液PO活性大小范围(6.08±0.18)U,不同时间点活性基本相同,没有显著差异｡2.2.2血液POD相对活性的变化特征感染WSSV后,0~36 h血液POD相对活性下降;36 h后,相对活性开始恢复,到60 h相对活性达到峰值(图3)｡各时间点血液POD相对活性没有显著差异｡对照组7个时间点血液POD相对活性大小范围(2.22±0.18),比较稳定,活性基本相同｡2.2.3不同组织ACP活性的变化特征由表1可知,血液､肌肉组织､肝脏组织ACP 活性随感染时间的延长均有先降低再升高再降低这样一个过程,与血液PO和POD活性随感染时间的变化(图2和图3)类似｡血液ACP活性在感染60 h达到峰值,与其他时间点ACP活性存在显著(P<0.05)或极显著差异(P<0.01);肝脏与肌肉ACP活性在感染36 h达到峰值,肌肉组织ACP活性随感染时间延长没有显著差异;肝脏组织36 h ACP活性与12､24 h存在出现极显著差异(P<0.01);另外肝组织ACP活性明显高于肌肉组织｡对照组血液､肌肉及肝脏7个时间点ACP活性没有显著差异,分别与其0 h活性值相近｡2.2.4不同组织SOD活性的变化特征由表2可知,三种组织SOD活性随感染时间的变化与血液PO和POD的变化(图2和图3)类似｡血液与肝脏SOD活性在感染60 h达到峰值;肌肉SOD活性在感染36~48 h达到最大值;60 h血液SOD活性与24 h存在显著差异(P<0.05);36 h和48 h肌肉SOD活性与12､60､72 h存在显著(P<0.05)或极显著差异(P<0.01);肝脏组织SOD活性明显高于肌肉组织;对照组血液､肌肉及肝脏7个时间点SOD活性没有显著差异,分别与其0 h的活性值相近｡3讨论Tang等[8]用病毒定量检测的方式研究了病毒在斑节对虾体内的扩增过程,结果显示0~24 h为缓慢扩增期,24~48 h为指数增长期,48 h后为平台期｡本试验所得死亡曲线(图1)与病毒扩增过程吻合,32 h左右斑节对虾出现死亡,说明已经到了病毒大量扩增的阶段,体质较弱的开始死亡;48 h后病毒扩增到了平台期,病毒粒子大量存在,此时为本试验感染50 h左右斑节对虾的死亡高峰｡感染50 h内死亡的对虾,在甲壳上没有明显的白斑;而感染60 h后死亡对虾,甲壳上大部分有明显白斑,这一结果与谢数涛等[9]的研究结果基本吻合｡通过与已报道的研究结果进行比较,本试验所使用的病毒材料在感染斑节对虾时的毒力与10年前没有明显变化,具有广谱性特征,因此用这些病毒感染斑节对虾后所测定的免疫酶活性的结果,具有一定的代表性｡PO是一种氧化还原酶,酚氧化物酶原激活系统是一个复杂的酶级联系统,该系统中的因子以非活化状态酚氧化酶原的形态存在于血细胞颗粒中,类似于高等动物的补体激活系统｡王雷等[10]､江晓路等[11]报道了中国对虾PO活性的存在和激活机制,认为PO在甲壳动物中起识别和防御作用｡POD的功能是通过过氧化氢酶的作用,将有害的细胞代谢产物过氧化氢分解成水和氧气,起到细胞保护作用,但POD在免疫反应中的地位仍不十分清楚｡ACP是一种磷酸单酯酶,在对虾体内具有清除､消化､水解异物的作用｡刘树青等[12]认为ACP是巨噬细胞溶酶体酶的标志酶,在甲壳类血液和血细胞中有重要的防御功能｡SOD是生物体内非常重要的一种抗氧化酶,能保护功能大分子不被破坏､减缓机体衰老｡近年来的研究表明,SOD活性与生物的免疫水平密切相关,可以用它的活性变化作为衡量对虾免疫状态的指标,甚至是定量指标｡本试验通过对斑节对虾进行WSSV急性攻毒试验,动态检测了这几个指标在不同感染时间的活性,除血液POD､肝脏SOD和肌肉ACP活性在不同的感染时间变化不显著以外,其他的都存在显著(P<0.05)或极显著性差异(P<0.01),加之在对照组中4种免疫酶的活性很稳定,可以推测PO､SOD､ACP的活性变化与WSSV感染复制有关,是斑节对虾机体应激后所作出的防御反应｡综合本试验中PO､POD､SOD和ACP活性在血淋巴､肌肉和肝脏中的变化,可以发现它们都有在感染初期活性降低,感染中期活性升高,感染后期活性再次降低的规律｡这一结论与邱德全等[13]研究在不同氨氮浓度下携带WSSV的凡纳滨对虾发病后酚氧化物酶酶活性变化规律具有一致性;与黄旭雄等[14]试验中明对虾急性感染哈维弧菌和WSSV后,血液SOD､PO变化规律相类似｡但是关于感染病菌后血液免疫酶的活性变化,不同学者有不同的结论,有报道显示中国对虾在注射一定量弧菌和大肠杆菌后,其血淋巴PO活性降低[10],严重感染WSSV的中国对虾PO活性也显著下降[7]｡同时也有报道称给斑节对虾投喂芽孢杆菌后,PO活性比对照组显著增高[15];用活的嗜水气单胞菌注射罗氏沼虾,血液PO活性24 h内升高4倍后又恢复到原来水平[16]｡本试验中4种免疫酶活性变化与上述报道也有类似之处,PO､SOD等感染72 h后最终酶活性也都显著下降,符合酶活性在感染后下降的观点,而且在最终活性降低之前有一个活性恢复的过程,这也与酶活性升高观点相吻合｡另外肝脏组织中的ACP､SOD活性均高于肌肉组织可能是由于肝脏为免疫器官的原因｡参考文献:[1] 刘庆慧,黄捷,杨冰,等. 人工选育中国对虾两个群体WSSV感染相关免疫与生化因子的变化[J]. 海洋水产研究,2005,26(6):22-27.[2] SONGA Y L,YU C L,LIEN T W,et al. Haemolymph parameters of Pacific white shrimp(Litopenaeus vannamei) infected with Taura syndrome virus [J]. Fish & Shellfish Immunology,2003,14(4):317-331.[3] YOGANANDHAN K,THIRUPATHI S,HAMEED A S S. Biochemical,phsiological and hematological changes in white spot syndrome virus-infected shrimp,Penaeus indicus [J]. Aquaculture,2003,221(1-4):1-11.[4] 宋林生,苏建国,蔡中华,等. 正常与感染白斑病的凡纳滨对虾几项免疫指标的初步研究[A].甲壳动物学论文集(第四辑)[C]. 北京:科学出版社,2003.335-340.[5] 李文杰,周国勤,朱菲莉,等. 检测克氏原螯虾白斑综合症病毒(WSSV)的巢式PCR方法的建立与初步应用[J]. 南京师大学报(自然科学版),2009,32(2):98-101.[6] ASHIDA M. Purification and characterization of pre-pheonoloxidase fromhemolymph of the silkworm Bombyx morl[J]. Arch Biochem Biophy,1971,144(2):749-762.[7] 雷质文,黄捷,杨冰,等. 感染白斑综合症病毒(WSSV)对虾相关免疫因子的研究[J]. 中国水产科学,2001,8(4):46-51.[8] TANG K F J,LIGHTNER D V. Quantification of white spot syndrome virus DNA through a competitive polymerase chain reaction[J]. 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南美白对虾4种病原体可视化快速检测试剂盒（生物芯片法）的研发

南美白对虾4种病原体可视化快速检测试剂盒（生物芯片法）的研发作者：宋居易刘昱辰张苏楠江高伟杨华卫来源：《江苏农业学报》2020年第03期摘要：利用反向點杂交技术，研制灵敏度较高的南美白对虾4种病原体检测试剂盒，其检测指标包括致对虾急性肝胰腺坏死病副溶血弧菌（VpAHPND）、对虾白斑综合征病毒（WSSV）、对虾传染性皮下及造血组织坏死病毒（IHHNV）、对虾肝肠胞虫（EHP），用重组质粒分别对其进行了最低检测限测试，并与现有推荐方法进行比较。

本研究研发的检测试剂盒对4种病原体的最低检测限为1 μl 10～100 拷贝。

特异性检测结果表明，4种病原体彼此不产生交叉反应，特异性良好，与各病原体推荐检测方法的结果相比，阳性符合率完全一致。

本研究研发的检测试剂盒具有操作方便，灵敏度高，特异性好，检测时间短，设备要求简单等特点，适合应用于南美白对虾VpAHPND、WSSV、IHHNV、EHP的检测、筛查工作中。

关键词：南美白对虾;病原体;生物芯片法;反向点杂交技术中图分类号：S945.4文献标识码：A文章编号：1000-4440（2020）03-0656-10Development of a rapid visualization detection kit （biochip method） for four pathogens in Penaeus vannameiSONG Ju-yi1，LIU Yu-chen2，ZHANG Su-nan2，JIANG Gao-wei2，YANG Hua-wei2（1.Jiangsu Institute of Agriculture Sciences for Region along the Yangtze River， Rugao 226541， China;2.Jiangsu Huntarray Biological Technology Co.， Ltd.， Nantong 226400，China）Abstract：The reverse hybridization technique was used to develop the rapid visualization detection kit （biochip method） for four pathogens in Penaeus vannamei. The detection indices included acute hepatopancreatic necrosis disease-causing Vibrio parahaemolyticus （VpAHPND），white spot syndrome virus （WSSV）， infectious hypodermal and hematopoietic necrosis virus （IHHNV）， Enterocytozoon hepatopenaei （EHP）. The recombinant plasmid was used to test the minimum detection limit， and the results based on kits were compared with those based on the common methods. The minimum detection limit of four pathogens based on this detection kit was 10-100 copies per microliter. In addition， the results of specificity tests showed that there was no cross-reaction among four pathogens. Compared with the results of the recommended detection methods，the positive coincidence rate was completely consistent. The detection kit introduced in this study has the characteristics of easy operation， high sensitivity， good specificity， short detection time and simple equipment. It is suitable for the screening and detection of VpAHPND， WSSV， IHHNV and EHP in Penaeus vannamei.Key words：Penaeus vannamei;pathogen;biochip method;reverse hybridization technique南美白对虾是重要的经济虾品种，具有较大的经济效益和社会效益[1-3]。

对虾白斑综合征的研究进展

等优点，但这种方法需要操作者具有较丰富的实践经
验。值得注意的是，由于某些病毒存在于正常虾体中使
对虾终生带毒而不发生病毒病，因此检测到病毒也不能
就一定推断为对虾发生了病毒病。
３．电子显微技术
７分子生物学方法．
主要有核酸探针法（Ｎｒｂ）ＤＡｐｏｅ、聚合酶链式反应（Ｃ）随机扩增多态性ＤＡＰＲ和Ｎ技术（ＡＤ。核酸探针是ＲＰ）指被某种物质标记了的从而可以被探测到的核酸片段，它能特异性地与待检测的核酸结合、杂交。ＰＲＣ技术的原理是根据已克隆的病毒ＤＡＮ序列，设计ＰＲＣ引物，利用该引物直接扩增样品中待检测病毒的ＤＡＮ片段，从而通
究，认为其病原是一种无包涵体的杆状病毒。但由于命名依据不同，或是按虾种类、或是以患病组织、或是以
病症命名，故名称不尽相同。我国台湾学者将其命名为白斑杆状病毒（ＳＶ，日本学者将分离的病毒命名为日ＷＢ）
雨水较多，发病后一周内死亡率高达９％０以上。该病的
流行区域主要在亚洲，尤其是东亚和东南亚地区，近年
膨胀，细胞质结构溃散，直至胞质溃散，仅剩裸露、膨大的细胞核，以至细胞核破裂，释放出病毒粒子。三、对虾白斑综合征的病原
有关学者对对虾白斑综合征的病原进行了深入研
该病的暴发期南方从３月份开始，北方一般在６月
上、中旬至７底，此时气温较高，一般为２￣２ ℃ ，月６９
一
、
对虾白斑综合征的发病和流行情况

关于对虾白斑综合症的研究进展与讨论

关于对虾白斑综合症的研究进展与讨论摘要：对虾白斑综合症病毒(White spot syndrome virus, WSSV)是对虾养殖的主要病害之一，能导致养殖的对虾大规模死亡。

WSSV是含有囊膜的无包涵体杆状双链DNA病毒，属于线形病毒科(Nimaviridae)，白斑病毒属(Whispovirus)。

WSSV传染能力强，致死率高，且能感染多种虾、蟹。

本文对对虾白斑综合症病毒的研究现状做了详尽的报道，以期为后来的研究提供便利，并在最后用哲学的观点对其进行了相关讨论。

关键词：对虾；病害；对虾白斑综合症病毒；检测；基因；蛋白质1 对虾养殖及其病害1.1 世界对虾养殖情况由于全球对虾消费市场的不断扩大，且海洋中能捕捞的量逐年减少并已不能满足市场的需求，所以对虾养殖业便逐渐兴起。

1982年，对虾养殖产量在世界虾类总产量中的比重不到5%，到2003年，已上升到37%。

目前，虾类的消费主要集中在美国、欧盟、日本、中国，消费量约占世界虾类产销量的75%，而主要对虾类生产国，包括海洋捕捞和人工养殖对虾却主要分布在东南亚，少部分在西半球。

1997年-1999 年养殖对虾的国际市场价格非常好，于是一个新的对虾养殖高潮突然掀起，越南和印度成为对虾主要出口国。

2002年，中国养殖对虾产量超过泰国居世界第一。

2004年全世界虾关产量达到607。

9x104t，全球最大虾类生产国依次为中国、泰国、印尼、越南等，而西半球国家只有拉丁美洲厄瓜多尔居于主要产虾国的第十位，其次是墨西哥[1]。

在此背景下，全球养殖对虾的面积激增，产量大幅度增加，给国家和地区带来了巨额利润，使对虾养殖业得到更迅猛的发展。

近几十年来，世界各国对虾养殖业的快速发展，为全球粮食安全、食物供给、经济增长、国际贸易平衡、就业和扶贫等做出了巨大的贡献。

对虾养殖起源于亚洲，随着全球化进程的不断加快，许多南美国家基于本国的资源优势，大力发展对虾养殖业，特别是南美白对虾的人工养殖，目前亚洲总产量仍然位居世界对虾养殖产量的80%以上[2]。

对虾白斑综合征病毒蛋白质组的研究进展

白斑综合征病毒ＷＳＶ（ｉｐｔｙｄｏｒｓＷＳＶ）引起对虾大规模死亡的主ＳＷｈｔＳｏｎｒｍｅＶｉ，ｅＳｕＳ是
要病毒性病原，该病毒感染的宿主广泛。自ＷＳＶ基因组全序列公布以来，内外的学者对且Ｓ国ＷＳＶ的研究热点转移到该病毒基因产物功能的相关研究上面来。弄清ＷＳＶ感染机理是有效防ＳＳ治病毒的基础，而对其感染机理的阐释则主要是搞清病毒各蛋白在感染中的作用，些是ＷＳＶ蛋这Ｓ白质组学的研究内容之一。分析ＷＳＶ蛋白同时可以在分子水平上为研究海洋和陆地生物病毒的Ｓ进化趋势提供有力的基础。
ｇｅｃｒｎｅａｅｒｓｒａｎｉｌｖｒｓｓＴｈｅｅｓｕｉｓｔｇｔｒｃｍｐｅｏｈＳｎｅｏｆｍａｉｎｄｔｒｅｔｉｌａｍａｉｕｅ．ｓｔｄｅｏｅｈｅｏｏｓｆｔｅＷＳＶｐｏｅｍｉｓ，ａｎｅｒｓａｃｉｌｈａａｅｎｔａｅｅｅｔｙＩｈｉａｅ，ｔｉｄｉｇｎｒｔｏｃｗｅｅｒｈｆｅｄｔｔｈｓｂｅｎｉｉｉｔｄｒｃｎｌ．ｎｔｓｐｐｒｈｅｆｎｎｓｉ
许华黄健杨官品
（中国海洋大学，岛２６０）青６０３
（农业部海洋渔业资源可持续利用重点开放实验室，国水产科学研究院黄海水产研究所，岛２６７）中青６０１

对虾白斑综合症病毒研究进展

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第２１卷
第１期
２０年３月０２
浙江海洋学院学报（自然科学版）Ｊｕｎｌｆｈｊｎｃａｉｅｓｔ（ｔｍｌＳｉｎｅｏｒａｅｉｇＯｅｎＵｎｖｒｉＮａｏＺａｙｕｃｅｃ）
状ＤＡ病毒（ＲＮＰＤＶ）黄捷等称之为皮下及造血组织坏死杆状病毒（ｔ；ＨＨＮＶ）战文斌等称之为中国Ｂ；
对虾杆状病毒（ＣＶ）陈细法等＂称之为淋巴样细胞核性杆状病毒（ＮＶ）这些病毒在形态、质上都ＰＢ；ＬＢ。性很相似，它们同属于杆状病毒科无包涵体型杆状病毒亚群即Ｃ型杆状病毒亚群，鉴于国际病毒分类委员会（Ｃｖ已将无包涵体型杆状病毒从杆状病毒科中划出，ＩＴ）因此，ｉｈｎｒ建议将这几种病毒统称为ＷＳＶＬｇｔｅｔ引Ｓ（ｉｐｔｙｄｏｉｓ，不再冠以杆状病毒这一名称。ＷｈｔＳｏｎｒｍｅＶｒ）而ｅＳｕ
摘

要：述了近几年来对虾白斑综合症病毒（ｓ研究的进展情况，ＷＳＶ的形态特征、化特性、综ｗｓｖ）就Ｓ理引起的症状和
病理变化、行病学、测方法和防治等问题进行了较细详的介绍。流检关键词：虾；斑综合征；Ｓ对白ＷＳＶ中图分类号：９５４５￥４．文献标识码：Ａ

白斑综合症病毒膜蛋白VP124参与病毒的感染

１引言
白斑综合症病毒（ｓｖ）现于２ｗｓ发０世纪９０年代初，造成大面积暴发对虾流行病的主要病是

和试验，研究膜蛋白是否参与病毒的感染Ｌ。来６］至今为止，中和试验鉴定在ＷＳＶ的系统感染中经Ｓ起作用的膜蛋白包括ＶＰ８ＶＰ８引，２１引，２￣，６［ＶＰ８［ＶＰ６［ＶＰ６。和ＶＰ１］４６引，７￣３￣。本研究中，先前在
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朱艳冰吴成林杨丰，，
（．美大学生物工程学院，建厦门３１２；．１集福６０１２国家海洋局第三海洋研究所海洋生物遗传资源重点实验室，福建厦门３１０）６０５
摘要：白斑综合症病毒（ｉｐｔｙｄｏｉｓＷＳＶ）对虾的最主要病毒病原之一，对虾ｗｈｔｓｏｎｒｍｅｖｒ，Ｓ是ｅｓｕ给
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第３Ｏ卷
第１期
海
洋
学
报
Ｖｏ１３０。Ｎｏ．．１
２００８年１月
ＡＣＴＡＣＥＡＮＯＬｏＧＩＯＣＡＮＩＳＩＣＡ
Ｊｎａｙ２０ａｕｒ０８
白斑综合症病毒膜蛋白ＶＰ１２４参与病毒的感染
养殖造成了巨大的经济损失。ＷＳＶ分别与三种该病毒膜蛋白ＶＰ９ＶＰ２Ｓ３，１４和ＶＰ８１７的特异性抗血清在体外作用后，再注射到螯虾体内，进行中和试验。结果显示，注射同或未同ＶＰ２１４抗血清作用的ＷＳＶ，Ｓ８ｄ后螯虾的死亡率分别是１０和６，Ｓ的感染能够被抗Ｖ１４抗体中００ＷＳＶＰ２和。进一步利用定量ＰＲ分析上述三种特异性抗血清对病毒感染的影响，Ｃ结果显示，１４抗血ＶＰ２清可抑制ＷＳＶ在螯虾体内的增殖。所有结果表明，１４在病毒的感染中起作用。ＳＶＰ２

对虾白斑综合症病毒（wssv）单克隆抗体中和特性的分析

对虾白斑综合疰病毒（ｗｓｓｖ）单克瞻抗体中和特性的掰｝究摘要对虾自斑综合痉瘸毒（ＷＳＳＶ）瘸是世界对虾养戆业危害严重的瘸害，至今为止仍没有有效防治该病的药物和疫菌。

由于中和单克隆抗体的产生与病毒的保护毪撼覆位点紧密掇关，本论文醭究ＴＷＳＳＶ单克隧撬薅戆中秘特链，翘步探讨了ＷＳＳＶ的保护性抗原结合位点。

研究结果有助于对ＷＳＳＶ病毒特异性的认躲，并将态裁备ＷＳＳＶ独特鬃疫蓥、合成默痰蓠及綦霆工程痰萤等搀茯理论蔹据和实践指导。

零论文通＿ｌ建蔗糖糅度离心提纯煎｜较高纯度和密度的ＷＳＳＶ，并耱用窀镜和ＳＤＳ．ＰＡＧＥ凝胶电泳对病毒进行了形态和结构分析，进而利用ＷＳＳＶ作为抗原免疫Ｂａｌｂ／ｃ小囱鼠，将免疫小鼠的脾细胞与Ｐ３－Ｘ６３．ＡｇＳＵｌ骨髓瘤细胞融合，虚弱阏接免疫荧先攘体技术（瓤娃）戆逸获褥粥经杂交瘸细腿，最后共褥到２２椿阳性杂交瘤细胞株，并克隆了能稳定分泌强阳性单克隧抗体的８株杂交瘤细胞攮。

利用本研究制备的８株单克隆抗体和实验室原先制备的８株单克隆抗体拭１８袜革克隆抗体，疆宠氏原鏊虾（ｅａｍｂａｒｕｓｐｒｏｄａｒｋ／０为动耱穰壅，繇究了辩蠡下白斑综合症病毒（ＷＳＳＶ）单克隰抗体对ＷＳＳＶ在体内感染增魉的中和阻断作用。

并且，研究了瀹合单克隆抗体进行螯虾体内中和实验豹效果，探讨了筚抗混合后对中葶鞋力的影响。

中鄹特性的研究主簧是通过渡射单觉隆抗体朔病毒混会液后观察记蒙螯虾的死亡情况和进行免疫荧光抗体技术检测病毒来判断各种单克隆抗体对旗毒夔孛秘毙力。

缝累表明：各秘擎支隆捻体均鸯不网强波懿病鸯审和活性，其中单克隆抗体２８２、２Ｄ２和４Ｆ３的中和效果较佳，单克隆抗体混合聪其中和力反雨蠢掰下降。

关键蠲：对酆；蠡邈综套瘥瘸毒；竟氏爨警蛉：中期革克睡抗体对虾白斑综合症病毒（ＷＳＳＶ）单克瞧抗体中和特性的研究ＡｂｓｔｒａｃｔＷｍｔｅＳｐｏｔＳｙｎｄｒｏｍｅＶｉｒｕｓ（ＷＳＳＶ）ｉｓｔｈｅｍｏｓｔｈａｒｍｆｕｌａｎｄｔｈｅｍｏｓｔｉｎｆｌｕｅｎｃｉｎｇｓｈｒｉｍｐｖｉｒｕｓ，ｂｕｔｎｏｍｅｄｉｃａｍｅｎｔａｎｄｖａｃｃｉｎｅａｇａｉｎｓｔＷＳＳＶａｒｅｐｒｏｄｕｃｅｄｕｐｔｏｔｈｅｐｒｅｓｅｎｔ．ｎｌｅｎｅｕｔｒａｌｉｚｉｎｇｍｏｎｏｃｌｏｎａｌａｎｔｉｂｏｄｙｗａｓｒｅｐｏｓｅｄｃｌｏｓｅｒｅｌａｔｉｖｅｗｉｔｈｔｈｅｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅａｎｔｉｇｅｎｏｆＷＳＳＶ，ｔｈｉｓｓｔｕｄｙｐｌａｎｅｄｔｏｐｒｏｄｕｃｅｍｏｎｏｃｌｏｎａｌａｎｔｉｂｏｄｉｅｓａｇａｉｎｓｔＷＳＳＶａｎｄｓｅｌｅｃｔｅｄｔｈｅｎｅｕｔｒａｌｉｚｉｎｇｍｏｎｏｃｌｏｎａｌａｎｔｉｂｏｄｉｅｓａｇａｉｎｓｔＷＳＳＶｗｈｉｃｈｗｉｌｌａｃｃｅｌｅｒａｔｅｔｈｅａｄｖａｎｃｅｍｅｎｔｏｆｂａｓａｌｔｈｅｏｒｙｏｆＷＳＳＶａｎｄｏｆｆｅｒｔｈｅｏｒｙｆｏｕｎｄａｔｉｏｎａｎｄｐｒａｃｔｉｃｅｇｕｉｄａｎｃｅｔｏｄｅｖｅｌｏｐｉｄｉｏｔｙｐｉｃｖａｃｃｉｎｅ．ｓｙｎｔｈｅｔｉｃｐｅｐｔｉｄｅｖａｃｃｉｎｅａｎｄｇｅｎｅｔｉｃａｌｌｙｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄｖａｃｃｉｎｅ．ＮｅａｔａｎｄｈｉｇｈｄｅｎｓｉｔｙｏｆＷＳＳＶｃｏｕｌｄｂｅｐｕｒｉｆｉｅｄａｎｄｇａｉｎｅｄｂｙｕｓｅｏｆｓｕｃｒｏｓｅｇｒａｄｓ’ｃｅｎｔｒｉｆｕｇｅ，ａｎｄｔｈｅｖｉｒａｌｓｔｒｕｃｔｌｌｒｅｏｆＷＳＳＶｗａｓａｎａｌｙｓｅｄｂｙｅｌｅｃｔｒｏｎｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅａｎｄＳＤＳ－ＰＡＧＥｇｅｌｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ，４ｗｅｅｋｓＢａｉｂ／ｃｍｏｕｓｅｗａｓｉｍｍｕｎｉｚｅｄｗｉｔｈＷＳＳＶｏｆｓｈｒｉｍｐ；ｐｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎｅｇｌｙｃｏｌ（ＰＥＧ）ＷａｓｕｓｅｄａｓｓｏｌｕｔｉｏｎｆｏｒｅｅｌｌｆｕｓｉｏｎｏｆＷＳＳｖ－ｉｍｎｌｕｎｅｓｐｌｅｅｎｃｅｌｌｓｗｉｔｈＰ３－Ｘ６３－Ａ９８Ｕｌｍｙｅｌｏｍａｃｅｌｌｓ，ａｎｄｈｙｂｒｉｄｏｍａｓｗｅｒｅｓｅｌｅｃｔｅｄｂｙｍｅａｎｓｏｆＩｍｍｔｍｏｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅａｓｓａｙｓ（瑾Ａ）．２２ｓｔｒａｉｎｓｏｆｈｙｂｆｉｄｏｍａｓｐｒｏｄｕｃｉｎｇｐｏｓｉｔｉｖｅａｎｔｉｂｏｄｉｅｓａｇａｉｎｓｔＷＳＳＶｏｆｓｈｒｉｍｐｗｅｒｅｇａｉｎｅｄａｎｄｅｉｇｈｔｏｆｔｈｅｍｗｅｒｅｃｌｏｎｅｄｅＡｔｏｔａｌｏｆ１６ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ。

对南美白对虾养殖中常见细菌性疾病

对南美白对虾养殖中常见细菌性疾病南美白对虾（Litopenaeus vannamei）是目前世界上养殖最常见的虾种之一。

在南美白对虾养殖过程中，常常出现细菌性疾病的问题。

这些细菌性疾病对养殖业造成了严重的经济损失。

本文将介绍一些南美白对虾养殖中常见的细菌性疾病。

1. 白化综合征（White Spot Syndrome，WSS）白化综合征是一种由白点虾病毒（White Spot Syndrome Virus，WSSV）引起的疾病。

病虾体表会出现白色小点状病灶，逐渐扩大，最终导致虾体白色化。

感染后，虾体免疫力下降，易受其他病原体感染。

该病毒传播速度快，病死率高，常常造成大面积的虾只死亡。

2. 黄连丽菌病（Yellow-head Disease，YHD）黄连丽菌病是由黄连丽菌（Yellow-head Virus，YHV）引起的一种细菌性疾病。

感染的虾只体表呈现黄色至橙色，头部变形，严重时可导致虾只死亡。

该病毒通过口器感染或食物链传播，在高温和低盐度环境下易发病。

3. 十足硬膜细菌病（Vibriosis）十足硬膜细菌病是由十足硬膜弧菌（Vibrio harveyi）引起的一种常见的细菌性疾病。

感染的虾只体表呈现红色溃疡，严重时可导致虾只死亡。

该病菌主要通过伤口感染或摄食感染进入虾体。

5. 弧菌病（Vibrio Infection）弧菌病是由多种弧菌引起的细菌性疾病。

弧菌通过虾只的溃疡、伤口、鳃等途径入侵虾体，导致虾只出现红色溃疡、丧失食欲、虚弱等症状。

弧菌病易在人工养殖条件下发生，主要受到环境和养殖管理等因素的影响。

为了预防和控制这些细菌性疾病，养殖户需要加强对养殖环境的管理，提高水质的清洁度和稳定性。

定期检测水质和虾只的健康状况，及时发现和处理疾病。

采用健康的种苗，加强饲料管理和生物安全措施，可以帮助减少细菌性疾病的发生。

严格控制养殖密度，避免过度投饲和缺氧等问题，也是预防细菌性疾病的重要措施。

南美白对虾养殖中常见的细菌性疾病给养殖业带来了很大的挑战。

对虾白斑综合症病毒功能性结构蛋白的研究的开题报告

对虾白斑综合症病毒功能性结构蛋白的研究的开题报告研究题目：对虾白斑综合症病毒功能性结构蛋白的研究研究背景：对虾白斑综合症（WSSV）是一种致命性疾病，对全球对虾养殖业造成了很大的损失。

该病毒由双链DNA组成，具有极高的基因组复杂性。

在WSSV的基因组序列中，有多个编码结构蛋白的基因。

这些蛋白在病毒的生命周期中扮演着重要的角色，包括病毒的进入、复制、组装和释放等过程。

因此，对这些蛋白的研究对于理解WSSV的病理机制和开发抗病毒药物具有重要意义。

研究目的：本研究旨在探究WSSV编码的结构蛋白的功能性结构，分析它们在病毒生命周期中的作用，了解它们与宿主细胞相互作用的机制。

研究内容：本研究将通过对WSSV编码的结构蛋白进行拓扑结构分析，预测结构蛋白的三维结构，进而构建其功能性模型，并通过蛋白质生物学实验验证模型的准确性和可靠性。

同时，通过文献调查和病毒学实验，详细分析这些结构蛋白在病毒感染过程中的作用及其与宿主细胞的相互作用的机制。

研究方法：本研究将采用多种方法，包括生物信息学分析、蛋白质组学实验、结构生物学实验等，构建WSSV编码的结构蛋白的功能性模型，并通过体内和体外实验验证其准确性和可靠性。

同时，通过对病毒感染和宿主细胞反应的文献调查和实验研究，分析这些结构蛋白的作用和与宿主细胞相互作用的机制。

研究意义：本研究的结果将深入探究WSSV编码的结构蛋白的功能性结构，揭示其在病毒感染过程中的作用，进一步加深我们对WSSV的病理机制的理解。

同时，该研究对于开发抗WSSV药物具有重要的指导意义，有助于保护全球对虾养殖业的可持续发展。

对虾白斑综合症病毒的分子生物学研究进展

对虾白斑综合症病毒的分子生物学研究进展
程伟;刘志昕
【期刊名称】《水产科学》
【年(卷),期】2005(24)5
【摘要】对虾白斑综合症病毒(wkite spot syndrome virus，WSSV)又称对虾白斑杆状病毒(white spot bacilliform virus WSBV)，是对全球对虾养殖业危害最大的病原之一。

该病毒分子量较大、结构特异，是已知动物病毒中最大的病毒。

自1992年以来，各国学者对WSSV进行研究。

由于他们研究的方法及研究的侧重点不同，对该病毒命名各异。

陈秀男(1993)称之为白斑综合症杆状病毒(WSBV)；荷兰Wongteerasupaya(1995)称其为系统外胚层和中胚层杆状病毒(SEMBV)；【总页数】5页(P41-45)
【作者】程伟;刘志昕
【作者单位】中国热带农业科学院,热带生物技术研究所热带作物生物技术国家重点实验室,海南,海口,571101;中国热带农业科学院,热带生物技术研究所热带作物生物技术国家重点实验室,海南,海口,571101
【正文语种】中文
【中图分类】S945.46
【相关文献】
1.对虾桃拉综合症病毒(TSV)的分子生物学研究进展 [J], 黎铭;陈晓汉
2.对虾白斑综合症病毒研究进展郑天伦 [J], 郑天伦;王国良
3.对虾白斑综合症病毒极早期基因的研究进展 [J], 冉晓卓;李钫
4.对虾的白斑综合症病毒研究进展 [J], 李秉鸿
5.对虾白斑综合征病毒的分子生物学研究进展 [J], 傅玲琳;帅江冰;许梓荣
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对虾白斑综合症病毒膜蛋白VP32和类胶原蛋白CLP的初步鉴定的开题报告

对虾白斑综合症病毒膜蛋白VP32和类胶原蛋白CLP的初步鉴定的开题报告一、研究背景对虾白斑综合症（White Spot Syndrome Virus，WSSV）是一种常见的虾类病毒性疾病，会导致对虾体表出现白点，进而影响对虾的生长和发育。

该病毒主要通过对虾间的直接接触和水源传播，对虾养殖业造成了严重的经济损失。

目前，对WSSV的研究已经取得了不少进展，其中病毒外壳蛋白是重要的研究对象之一。

病毒外壳蛋白可以作为构建病毒衣壳的基本单元，维持着病毒的形态结构。

因此，研究WSSV的外壳蛋白对于进一步了解该病毒的感染机制及其治疗方法的开发非常有意义。

二、研究目的本研究旨在通过对WSSV的结构蛋白进行鉴定，鉴定其中的膜蛋白VP32和类胶原蛋白CLP，进一步探究这些蛋白在WSSV中的作用，并为后续的病毒治疗和疫苗研发提供理论基础。

三、研究内容和方法1. 提取WSSV病毒颗粒从感染对虾的病毒颗粒中提取WSSV病毒颗粒，通过电镜进行鉴定病毒颗粒的形态和大小。

2. 通过质谱技术鉴定结构蛋白将提取的病毒颗粒进行蛋白质组学分析，通过液相色谱-串联质谱技术（LC-MS/MS）鉴定其中的膜蛋白VP32和类胶原蛋白CLP。

3. 生物学特性研究对鉴定出的蛋白进行生物学特性研究，包括分子量、等电点、糖基化等。

通过Western blotting等蛋白质学技术对蛋白进行定量分析，并通过体外和体内实验验证其在WSSV感染中的作用。

四、预期成果通过对WSSV的研究，鉴定其中的膜蛋白VP32和类胶原蛋白CLP，探究这些蛋白在WSSV中的作用，为后续的病毒治疗和疫苗研发提供理论基础。

同时，研究成果还将为虾类病毒性疾病的防控和管理提供科学参考。

对虾白斑综合征病毒研究进展

对虾白斑综合征病毒研究进展
魏克强;许梓荣
【期刊名称】《中国兽医杂志》
【年(卷),期】2005(41)5
【摘要】白斑综合征(white spot syndrome，WSS)是全球对虾养殖业所面临的危害性最大的病害之一，是国际兽医局(OIE)、联合国粮农组织(FAO)及亚太地区水产养殖发展网络中心(NACA)规定报告的重要水生动物疾病。

自20世纪90年代初首先在我国台湾地区发生以来，至今已席卷了世界各国的对虾养殖地区，造成了巨大的经济损失，
【总页数】3页(P39-41)
【作者】魏克强;许梓荣
【作者单位】浙江大学教育部动物分子营养学重点实验室,浙江,杭州,310029;浙江大学教育部动物分子营养学重点实验室,浙江,杭州,310029
【正文语种】中文
【中图分类】S945.4+5
【相关文献】
1.对虾白斑综合征病毒分子致病机制的研究进展 [J], 李一宁;梁艳;黄倢;董双林
2.对虾白斑综合征病毒免疫防治研究进展 [J], 何培民;郭媛媛;贾晓会;施定基;庄旻敏;何玲;贾睿
3.对虾白斑综合征病毒囊膜蛋白VP28研究进展 [J], 邱倩;卢永忠;刘杰
4.凡纳滨对虾白斑综合征病毒防治研究进展(一) [J], 刘敏;李色东;张海涛;王卓铎;孙
广文
5.对虾白斑综合征病毒免疫应答研究进展 [J], 张莉;柳芹
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对南美白对虾养殖中常见细菌性疾病

对南美白对虾养殖中常见细菌性疾病南美白对虾是一种重要的养殖水产种类，受到了广大养殖户和消费者的喜爱。

对南美白对虾养殖中常见细菌性疾病对养殖业构成了一定的威胁。

本文将就南美白对虾养殖中常见的细菌性疾病进行介绍，以便养殖户加强对这些疾病的防范和控制。

1. 白斑综合症病（WSS）白斑综合症病（WSS）是一种引起南美白对虾大规模死亡的重要细菌性疾病，由白斑综合症病毒（WSSV）引起。

感染虾只后，虾体表面出现不规则的白色斑点，并伴随着虾体的变软和变脆。

患病的虾极易被其他疾病或环境因素所致死亡。

预防和控制白斑综合症病的关键在于增强养殖场的生物安全措施。

养殖户应加强对水质的管理，保持水质清洁，避免废水和有害物质的污染。

定期清除池塘底泥和虾殻，减少病原体的滋生。

关于病毒的研究、防治和防范工作也应该得到加强。

2. 顶芽弯曲病（EHP）顶芽弯曲病（EHP）是一种常见的南美白对虾疾病，由顶芽弯曲病菌引起。

患病虾只头部显著变形，其顶芽出现弯曲或扭曲的症状。

患病虾体色变深，行动迟缓，极易受其他病原体的感染。

对于顶芽弯曲病，预防和控制的关键在于保持养殖水域和设施的清洁卫生，并提供适宜的养殖环境。

养殖户应加强对水质和养殖环境的管理，避免水域的污染和有害物质的积累。

饲料的合理投喂和养殖密度的控制也是预防顶芽弯曲病的重要措施。

3. 白肠病白肠病是南美白对虾养殖中常见的细菌性疾病，由白肠病菌引起。

患病虾只表现为食欲不振、消瘦、腹部肿胀和排泄物异常。

白肠病一旦发生，极易导致养殖场的虾只大规模死亡。

预防和控制白肠病的关键在于加强养殖场的卫生管理和健康监测。

水体清洁和无菌是预防白肠病的重要手段，养殖户应加强对养殖水域的管理，减少废水的排放和有害物质的积累。

定期检查和监测虾只的健康状况，发现异常情况及时采取措施进行治疗和隔离。

4. 中肠球菌病中肠球菌病是一种由中肠球菌引起的南美白对虾细菌性疾病，主要表现为虾只中肠内出现黏液块状物和肠道纤毛丢失。