急性毒性实验内容
潮州消毒剂毒理实验方法
潮州消毒剂毒理实验方法一、实验目的本实验旨在评估潮州消毒剂的毒理学性质，包括急性毒性、皮肤刺激、眼刺激、致突变性等方面的测试，为该消毒剂的安全使用提供科学依据。
二、实验材料1. 潮州消毒剂样品2. 实验动物：小鼠、大鼠、豚鼠等（根据实验需求选择）3. 实验设备：生理盐水、注射器、皮肤刺激试验装置、眼刺激试验装置等三、实验方法1. 急性毒性试验（1）按照消毒剂使用说明，配置不同浓度的潮州消毒剂溶液。
（2）选取健康成年实验动物，按照体重随机分为若干组。
（3）通过腹腔注射或口服给药途径，给予不同浓度的潮州消毒剂溶液。
（4）观察并记录动物的中毒表现和死亡情况，计算半数致死量（LD50）和最小致死量（MLD）。
2. 皮肤刺激试验（1）选取健康成年实验动物，随机分为对照组和试验组。
（2）在动物背部皮肤上涂抹生理盐水和潮州消毒剂样品。
（3）观察并记录皮肤刺激反应，如红斑、水肿、糜烂等。
（4）根据刺激反应的严重程度和发生率，评估潮州消毒剂的皮肤刺激性质。
3. 眼刺激试验（1）选取健康成年实验动物，随机分为对照组和试验组。
（2）将潮州消毒剂样品滴入动物的眼结膜囊内。
（3）观察并记录动物的眼部刺激反应，如结膜水肿、充血、糜烂等。
（4）根据刺激反应的严重程度和发生率，评估潮州消毒剂的眼刺激性质。
4. 致突变性试验（1）选取经过基因突变筛选的实验动物品系。
（2）按照消毒剂使用说明，配置不同浓度的潮州消毒剂溶液。
（3）通过灌胃、腹腔注射等途径给予实验动物不同浓度的潮州消毒剂溶液。
（4）观察并记录动物的生育情况、存活率、突变率等指标。
急性毒性试验
试验步骤和操作要点
1
试验设计
2
确定试验物质的给药途径、剂量和
暴露时间，合理设计试验组和对照
组，以确保试验数据的可比性。
3
数据分析
4
收集和整理试验数据，进行统计分 析和结果解读，评估化学物质的毒
性潜力和危害等级。
试验准备
准备动物和试验物质，并遵守试验 室安全和伦理规定，保证试验过程 的准确性和可靠性。
试验操作
按照设定的方案进行实验操作，严 格控制剂量和暴露时间，记录动物 的毒性反应和不良效应。
试验结果的解读和评价标准
急性毒性试验结果一般以LD50值为指标进行解读，在国际上有一系列评价标准，用于评估化学物 质的毒性程度和危害等级。
试验的局限性和改进方向
1 动物模型的局限性 2 测试方法的改进
动物模型不能完全代 表人类生物反应，因 此在试验结果的解读 和评估时需要谨慎考 虑。
急性毒性试验
急性毒性试验是一种评价化学物质对生物体的短期毒性潜力的试验方法，通 过暴露一定剂量的物质给实验动物，观察其对动物的毒性反应以及产生的不 良效学物质对生物体的毒性程度及其可能产生的危害， 为了规范评估过程，国际上制定了一系列的试验方法和评价标准。
常用的试验方法和原理
需要进一步发展和改 进更精准、准确的试 验方法，以提高试验 结果的预测性和可比 性。
3 替代和替补模型
发展替代和替补模型， 例如体外细胞实验和 计算机模拟，以减少 对动物实验的依赖。
试验的应用领域和意义
急性毒性试验在化学品安全评估、药物研发、环境保护等领域具有重要意义， 为保障人类健康和环境安全提供科学依据。
LD50试验 通过确定半数致死剂量（LD50）来评估化学物质的毒性，以毫克/ 千克体重作为单位。 急性口服毒性试验 通过将一定剂量的物质通过口服给予 动物，观察其对动物的毒性反应，用于评估化学物质的毒害程度。 急性皮肤 毒性试验 通过将一定剂量的物质涂抹于动物皮肤上，观察皮肤反应和毒性症 状，用于评估化学物质的皮肤刺激和毒害作用。
急性毒性实验内容
实验动物的标记
方法一：
6
按右前肢、右肋、右后肢、颈部、背中、尾根、左
前肢、左肋、左后肢，顺序编号为1～9号，不染色 为10号。在动物相同部位涂染另一种颜色染料表示 十位，两种颜色可编1～99号。 方法二：
以头部为1号，顺时针方向依次从右耳、右前肢、右
后肢、颈部、背中、尾根、左耳、左前肢、左后肢 染色，分别为2～10号。
同一品系的实验动物、用相同染毒条件所得 到的LD50值相同或相似，但其毒作用带或致 死剂量范围却有明显的不同，表明化学物的 实际毒性存在差异。
急性毒性试验不等于LD50测定
可用少量动物测定ALD，并进行临床观 察、化验检查和病理学检查 当口服剂量大于5g/kg或注射剂量大于 2g/kg时，不产生急性毒性或死亡，则不 必准确的测定LD50
20只小鼠按随机区组设计分组表
随机分配到各组的动物
剂量选择及分组
剂量选择
广泛查阅文献资料，估计毒性中值
预试，求出待测化学物0 %~100 %或
10 %~90 %的大致致死剂量范围 设计正式试验的剂量和分组
剂量分组
i＝lgLD100-lgLD0/n-1 或i＝lgLD90-lgLD10/n-1 n：设计的剂量组数
实验动物分组
目的：减少个体差异对实验结果的影响；
原则：按统计学原则随机分组，使非处理
因素最大限度地保持一致，提高每组实验
动物间的均衡性。 常用方法：完全随机和随机区组
完全随机设计
将实验动物编号，从随机数字表上任意横 行或纵行的任意数字开始，顺序取下数字， 标于每个动物号下，然后用计划组数去除 随机数字，所得余数即为所属组别。如将 ２０只动物分为４组，从随机数字表的第 １１行开始，顺序取２０个数字，用４除 的余数即为组别。
急性毒性实验
实验要求：试验前,受试动物要先在实验室内饲养2～3天，以观察其活动是否正常，去除有病的或畸形的。
试验期间，对照组动物的死亡率应低于 5%。
试验容器是用无毒的玻璃、聚乙烯、搪瓷等材料制成的，形状可为椭圆形或柱形。
为了便于比较，试验时环境因素要恒定。
例如稀释水要无毒，要预先脱氯，溶解氧要超过5ppm，pH值在6.5～8.5之间，水温对温水鱼为25℃，对冷水鱼为15℃，保持水质恒定。
静水试验每天至少换一次试验溶液，每克体重的鱼平均要有2升的水。
急性毒性试验期间一般不喂食，从致毒开始就观察记录动物中毒表现，生理、生化变化和死亡情况，并将观察结果在半对数坐标纸上用直线内插法求出动物的LC50。
实验前的准备：仪器的消毒，鱼苗的暂养，自来水曝气两天以去除水体中的氯气。
1实验材料乌元鲤、市售敌百虫、自来水、塑料盆、分析天平，计算纸、计算器、直尺、1000mL 和2000mL容量瓶、移液管、温度计、标签纸、pH试纸。
2实验方法（静水生物毒性测试法）2.1 实验母液的配制用分析天平各称取1.00g 的敌百虫，分别以水溶解后定至1000mL，即得浓度为1000mg/L的敌百虫试验母液。
2.2 试验药液浓度的确定2.2.1试验药液的浓度范围确定分成n 个等对数浓度 C1、C2、C3、……CN。
一般 n≥5，多取单数。
2.2.2等对数浓度的计算首先对C1和CN取对数，得lgC1对数值。
根据（lgCn-lgC1）/（n-1）求得C1和CN之间的等对数间距△c。
C2=10（lgC1+△c）C3=10（lgC2+△c）其他类推。
用计算器在计算纸计算出结果。
2.3 试验还必须设1个对照组每种药物取（n+1）×3个塑料盘，按前面计算得的浓度要求配制各种药物的各个浓度（每个浓度设3个重复），并粘好标签。
2.3.1配制试验药液先计出各个浓度所需的母液的量，再用移液管按计算结果将母液移到盆中加水至 10L （看鱼苗的体重）即可。
急性毒性试验
试验目的：急性毒性试验是在24小时内给药1次或2次（间隔6-8小时），观察动物接受过量的受试药物所产生的急性中毒反应，为多次反复给药的毒性试验设计剂量、分析毒性作用的主要靶器官、分析人体过量时可能出现的毒性反应、I期临床的剂量选择和观察指标的设计提供参考信息等。
一、啮齿类动物单次给药的毒性试验（一）试验条件1.动物品系：常用健康的小鼠、大鼠。
选用其他动物应说明原因。
年龄一般为7-9周龄。
同批试验中，小鼠或大鼠的初始体重不应超过或低于所用动物平均体重的20%.实验前至少驯养观察1周，记录动物的行为活动、饮食、体重及精神状况。
2.饲养管理：动物饲料应符合动物的营养标准。
若用自己配制的饲料，应提供配方及营养成分含量的检测报告；若是购买的饲料，应注明生产单位。
应写明动物饲养室内环境因素的控制情况。
3.受试药物：应注明受试药物的名称、批号、来源、纯度、保存条件及配制方法。
（二）试验方法：由于受试药物的化学结构、活性成分的含量、药理、毒理学特点各异，毒性也不同，有的很难观察到毒性反应，实验者可根据受试药物的特点，由下列几种实验方法中选择一种进行急性毒性试验。
1.伴随测定半数致死量（LD50）的急性毒性试验方法。
2.最大耐受剂量（MTD）试验方法：最大耐受剂量，是引起动物出现明显的中毒反应而不产生死亡的剂量。
3.最大受试药物量试验方法：在合理的浓度及合理的容量条件下，用最大的剂量给予实验动物，观察动物的反应。
4.单次口服固定剂量方法（Fixed-dose procedure）。
选择5、50、500和2000mg/kg四个固定剂量。
实验动物首选大鼠，给药前禁食6-12小时，给受试药物后再禁食3-4小时。
如无资料证明雄性动物对受药试物更敏感，首先用雌性动物进行预试。
根据受试药物的有关资料，由上述四个剂量中选择一个作初始剂量，若无有关资料作参考，可用500mg/kg作初始剂量进行预试，如无毒性反应，则用2000mg/kg 进行预试，此剂量如无死亡发生即可结束预试。
急性毒性试验
Sx50=0.0307 logLD50及其95%可信限 =0.6329±1.96×0.0307=0.6329±0.0602 小鼠的经口LD50为4.29g/kg，其95%可信范围 为3.74~4.93g/kg
急性毒性评价
外源化学物相对毒性分级标准
急性毒性分级（WHO）
鱼类急性毒性分级
LD50的局限性
急性毒性试验方法
一、急性毒性
急性毒性指人或动物一次或24 h
之内多次接触外源化学物后，在短
期内所发生的毒性效应，包括致死 效应。
一次：指瞬间给实验动物染毒，如经
口、经静脉注射染毒。
24 h之内多次：指外源化学物毒性过 低，需给予动物较大剂量。
急性毒性效应出现的快慢和毒性反应的强 度与外源化学物的性质和染毒剂量的大小 有关。
20只动物的完全随机分配
完全随机分配后各组所属动物号
20只动物完全随机分配的结果
20只动物的完全随机分配
动物编号 随即数字 除4后余数 1 54 2 2 83 3 3 80 0 4 53 1 5 90 2 6 75 3 7 53 1 8 78 2 9 93 1 10 47 3 11 72 0 12 09 1 13 54 2 14 66 2 15 95 3 16 44 0 17 68 0 18 67 3 19 67 3 20 86 2
由急性毒性试验可得到两类毒性参数
上限参数 是以死亡为终点的毒性，包 括绝对致死量、半数致死量、最小致 死量、最大耐受量等；
下限参数 是以非致死性急性毒作用 为终点的毒性，包括急性阈剂量和无 作用剂量等。
用小动物试验可求出外源化学物对一种或几种 实验动物的急性LD50或LC50; 用 大 动 物 试 验 可 求 出 近 似 致 死 剂 量 （approximate lethal dose, ALD）; 根据LD50 （LC50 ）值可进行急性毒性分级，以 初步评价外源化学物对机体急性毒性大小和急 性毒作用的强度。
急性经口毒性实验
等容量稀释法
D：设计的染毒剂量， mg/kg V：动物给药量（相同单位体重体积）均为
10ml/kg X：各组需配制的受试物溶液的浓度（mg/ml）
，
D X
V
如：第一组染毒剂量D=51.2mg/kg，动物按 V= 10ml/kg体重给药，配制的受试物浓度为 X=51.2mg/10ml
小鼠染毒剂量= V ml ×各组的受试物浓度（mg/10ml)
（四）灌胃方法：
小鼠灌胃法：左手拇指和食指捏住小鼠头部两耳后 皮肤，无名指或小指将尾部紧压在手上，使小鼠腹 部向上，尽量使其体位垂直，注意使动物的上消化 道固定成一直线。右手持连着灌胃导针的注射器， 将灌胃针由动物口腔侧插入，避牙齿，沿咽后壁缓 缓滑人食管。若遇阻力，可轻轻上下滑动探索，一 旦感觉阻力消失，即深人至胃部，一般进针深度小 鼠2.5～4cm，随后将受试物溶液注入。如遇动 物挣扎，应停止进针或将针拔出，千万不能强行插 入，以免穿破食管，甚至误入气管，导致动物立即 死亡。小鼠一次灌胃体积为10-20ml/kg
依次类推：五个组所需配制的受试物浓度分别为
第一组：51.2mg/10ml 第二组： 64mg/10ml 第三组： 80mg/10ml 第四组： 100mg/10ml 第五组： 125mg/10ml
各剂量组小鼠灌胃容量计算:
小鼠灌胃容量V ml=体重（g）×10ml/1000g
各剂量组小鼠染毒剂量:
（2）植物神经系统：瞳孔扩大或缩小、流涎或流泪； （3）呼吸系统：鼻孔流液、鼻翼煽动、血性分泌物、呼
吸深缓、呼吸过速、仰头呼吸、； （4）泌尿生殖系统：会阴部污秽、有分泌物、阴道或乳
急性毒性实验报告
急性毒性实验报告急性毒性实验报告引言：急性毒性实验是一种常见的实验方法，用于评估化学物质对生物体的毒性程度。
本实验旨在通过对小白鼠进行急性毒性实验，了解某种化学物质的毒性效应，并为人类的健康和环境保护提供参考。
实验设计：本次实验选取了20只健康的小白鼠，分为4组，每组5只。
实验组分别接受不同剂量的化学物质A的处理，对照组接受生理盐水处理。
实验过程中，观察小白鼠的行为、食欲、呼吸等生理指标的变化，并记录下来。
实验持续时间为24小时。
实验结果：在实验过程中，我们观察到以下现象和结果：1. 实验组小白鼠在接受化学物质A处理后，出现了明显的行为异常。
它们表现出活动减少、食欲下降、毛发无光泽等症状。
与对照组相比，实验组小白鼠的行为异常更加明显。
2. 呼吸方面，实验组小白鼠的呼吸频率明显增加，呼吸深度减小。
这表明化学物质A对呼吸系统产生了一定的影响。
3. 实验组小白鼠的体温有所下降，尤其是接受高剂量处理的小白鼠。
这可能是由于化学物质A对体温调节系统的干扰导致的。
4. 实验组小白鼠的心率明显加快，而对照组小白鼠的心率变化不大。
这表明化学物质A对心血管系统产生了一定的影响。
5. 实验组小白鼠的精神状态明显受到影响，它们表现出迟钝、无精打采的状态。
这可能是化学物质A对中枢神经系统的影响所致。
讨论与分析：根据实验结果，我们可以得出以下结论：1. 化学物质A对小白鼠的急性毒性效应明显。
其表现为行为异常、呼吸系统受损、体温下降、心率加快以及精神状态受到影响等。
2. 小白鼠对化学物质A的毒性反应与剂量呈正相关关系。
高剂量处理的小白鼠表现出更明显的毒性效应。
3. 化学物质A可能对呼吸、体温调节、心血管和中枢神经系统产生了不同程度的毒性影响。
结论：本次急性毒性实验结果表明，化学物质A具有一定的毒性效应。
在人类的健康和环境保护方面，需要对其进行进一步的研究和评估。
同时，我们也应该加强对化学物质的监管，确保其在使用和处理过程中不对人类和环境造成危害。
急性毒性试验-LD50的测定
急性毒性试验-LD50的测定急性毒性试验是一种通过给实验动物注射、灌胃或其他途径给予高剂量试验物质来评估其致死或严重的毒性反应的试验。
LD50是一种常用的急性毒性指标，表示半数实验动物在接受单位剂量试验物质后死亡的剂量。
本文将介绍LD50的测定方法和其应用。
一、LD50的测定方法1. 实验动物的选择LD50实验通常使用小鼠、大鼠、兔子和狗等动物进行。
选用实验动物需要秉持道德原则，并考虑到动物的生物学特征、毒物代谢能力等方面的因素。
例如，小鼠和大鼠体型较小、代谢能力较低，适合于测定具有代谢性毒性的化合物的LD50；兔子和狗体型较大，代谢能力较强，适合于测定纯化、非代谢性毒性的化合物的LD50。
2. 给药途径和剂量选择通常使用口服、皮下注射、静脉注射等给药途径。
对于口服试验，需要注意试验物质的水溶性和毒性，对于毒性高的化合物，通常使用灌胃的方式。
实验的剂量需要考虑到实验动物体型、种类、代谢能力等因素，并进行逐步递增以确定LD50。
3. 实验计划设计实验计划设计需要考虑到试验物质的毒性、剂量效应关系和死亡率等因素。
一般采用正反两次递增的方法，进行急性毒性试验评估。
根据试验物质的毒性情况和实验者的安全考虑，同时采取风险预警措施。
4. 数据处理和计算完成实验后，需要统计每个剂量组的死亡率和死亡时间。
按照统计学原理，可以根据实验数据计算出LD50值。
LD50值表示使用单位剂量试验物质对半数实验动物致死的剂量。
该值越小，试验物质的毒性越高。
二、LD50的应用LD50值可以作为急性毒性评估的定量指标，用于比较不同化合物的毒性。
在化学品、药品等领域里进行LD50测定可以帮助人们更好地预测和评估一些原料与产品的安全性，以便于过程优化和产品开发，同时为相关政策制定提供科学依据。
LD50值的应用最为广泛的领域是毒性测试和安全性评估。
在毒理学和环境毒理学领域里，常用LD50为评估的标准；在某些国家的法律法规中，也要求企业对使用的化学品或产品进行毒性测试，以保证工人和消费者的安全。
第十三章急性毒性试验
2020/7/1
任立群
33
（一）实验动物
3.体重与年龄
同一批实验中，动物的年龄、体重应尽可能一致。
《动药物物的研初始究体技重术变指异导要求原不则超》过规平定均：体重的±20%。 幼验年 原如动则果物上一选受般用试较年物成轻拟年的用动成于物年对动儿毒物童物。或敏可感能，用急性于毒儿性童试，
建议必要啮齿时类采动用物幼的年年动龄一物般进为行7试~9验周。龄，
对人可能致死的估计量
g/kg体重
﹤0.05
g/60kg体重
0.1
0.05~
3
0.5~
30
5~
250
﹥15
﹥1000
在临床，药物有毒药、剧药、普通药之分，有人认为 可参考药物的LD50值加毒以、划剧分药。的划分
毒药 剧药 普通药
口服 ﹤30 ﹤300 ﹥300
小鼠LD50（mg/kg体重） 皮下注射 静脉或腹腔注射
(mg/kg)
(x)
(只)
(只)
（%） （Y）
(mg/kg)
2020/7/1
任立群
15
二、急性毒性评价的基本要求
各国药政部门对急性毒性试验的基本要求有所不同。
各国对急性毒性试验的基本要求
FDA 日本 美国 英国 前西德 欧共体 前苏联 WHO 瑞士
动物 3-4 2 3 2 2
2
2
3
2
种类
给药 1 3 3 2 2
2020/7/1
任立群
41
（二）剂量水平的选择
剂量水平的选择应是以测定 LD50 及剂量—反应 曲线的斜率为目的。
2020/7/1
任立群
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（一）实验动物
急性毒性试验
三、给药方法
(一)动物禁食
动物购入后应在实验室观察1星期，口服给药前，为减少吸收差异和大容量 给药造成胃急性扩张，小鼠和大鼠至少应停食4 -6h，要求一夜停食(不停水)， 投药后再停食3-4h。
(二)给药途径
中药新药除临床给药途径外，—、二类新药还希望其他给药途径，水溶性 药
物应同时采用静脉给药途径，其他如油剂，混悬剂之类可采用皮下给药途径。 腹腔汁射在人体极少用，中药粗制剂成分复杂，动物毒性试验中也尽可能少 用，以避免腹腔刺激性的干扰。
(一)观察指标
不能把求得致死剂量看作是急性毒性实验的唯一要求。发现毒性症状及毒性反应 的靶器官同样是急毒实验非常重要的目的。给药前后应观察体重、进食、进水的状 况，密切观察异常毒性症状，特别是给药后的一、二日。以后1日至少观察1次，观 察7 日观察症状包括①行动：不安定、多动、发声；②神经系统反应：举尾、振颤、 痉挛、运动失调、姿态异常；③自主神经系统反应：眼球突出、流涎、流汨、排尿、 下泻、竖毛、皮肤变色、呼吸；④死亡。应每日记录体重、毒性反应和死亡情况， 濒死动物应单独饲养，死后及时解削进行肉眼观察和病理组织学观察。试验结束存 活动物也进行解剖，如有病变进行组织学观察。
(二}致死剂量计算
可用Bliss点斜法、简化机率法、改进寇氏序贯法等计算最小致死量或半数致死量。 Bliss法严谨精确，缺点是计算非常繁复。但近代有计算机软件，汁算方法可推荐 Bliss法。各种方法原则基本相同，如：①剂量刘数值应为等差，即剂量应按等比级 数排列；②各组动物数应相等；③死亡率应在50％上下基本对称分布等。但各种方 法还各有特殊设计要求，如有的要求Dm和Dn必须为100％和0％死亡率等，可参考有 关专著，此处不赘述。如受试物毒性低，测不出LD50，可求得最大给药量。
急性毒性试验
动物编号
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
动物体重(g)
按体重排序 随机数字
பைடு நூலகம்
19
3 D
21 18 22
4 A 2 E 7
21 17 22 24 21 24
5 C 1 B 8 9. 6 10
3、受试物剂量选择
对于一种新的化学物质，剂量选择可参照同系
物的毒性或文献资料加以估计，先用少量动物以
组距较大的一系列剂量进行预实验，找出粗略的
急性毒性试验
－LD50 的测定
急性毒性试验
确定受试物的半数致死剂量（LD50）、观察 受试物所致的急性中毒症状及其毒性作用特点， 为进一步的毒性试验提供重要的参考依据。 急性毒性试验的染毒方式可有多种，包括经 口、经呼吸道、经皮及注射染毒方式等。
经口急性毒性试验（LD50）
试验目的
学习急性毒性试验的实验设计原则 熟练掌握经口灌胃染毒操作技术 掌握LD50计算方法和急性毒性分级标准 试验内容
2 3
105
58.3 32.4
2.0212
1.7657 1.5105
4
5
18.0
10.0
1.2553
1
5、灌胃操作
将动物固定成垂直体位，腹部面向操作者，使动物的上消
化道固定成一直线
6、毒性作用/中毒症状和动物死亡情况观察
高剂量组动物的死亡常很快发生，染毒后应即刻密切观 察。观察和记录中毒症状及出现的时间，死亡数量和时间及 死亡前的特征。按照实验结果，填写急性毒性实验记录表。 中毒的症状观察：兴奋、流涎、肌震颤、抽搐、管状尾、 呼吸减慢、呼吸困难、四肢无力、站立不稳、大小便失禁、 大剂量侧卧以致死亡。
急性毒性实验
1 实验设备
2 实验环境
实验设备包括动物饲养箱、 注射器、生物安全柜等。
实验室应具备良好的通风 条件和必要的安全防护措 施。
3 实验操作
实验应按照标准操作程序 进行，确保结果的准确性 和可靠性。
实验结果分析
剂量-反应关系
分析不同剂量下实验对象的反 应情况，确定毒性的剂量响应 关系。
死亡率分析
计算不同剂量下实验对象的死 亡率，评估物质的致死能力。
实验流程
1
试验前
确定实验目标和方法，准备实验材料和设备。
2
试验进行
按照指定剂量和时间给予实验对象物质，并记录相关数据。
3
试验后
分析实验结果，评估物质的毒性程度。
实验对象和数量
动物实验对象
常用的动物实验对象包括小ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ、大鼠、兔子等。
细胞实验对象
细胞实验对象常用的细胞系包括人类细胞系和 动物细胞系。
实验条件
急性毒性实验
了解急性毒性实验的概述、流程、实验对象和数量、实验条件、实验结果分 析以及实验局限性。最后给出结论和建议。
实验概述
1 定义
急性毒性实验用于评估物 质在给定剂量和时间内对 生物体的毒性。
2 重要性
确定物质的毒性程度对安 全评估和风险控制至关重 要。
3 法规要求
许多国家和地区要求进行 急性毒性实验以确保产品 的安全性。
症状分析
观察实验对象的各种症状，了 解物质对生物体的影响。
实验局限性
1 动物模型的局限性
动物模型不一定能完全反映人体的生理和病理过程。
2 剂量和时间的局限性
实验中使用的剂量和时间可能与实际情况存在差异。
3 伦理道德的局限性
毒理学 实验二、急性经口毒性试验
LD50测定方法 霍恩（Horn)法（剂量递增法） ——查表 改进寇氏法(karber’s method) 几率单位法
13
改进寇氏法(karber’s method) 基本要求：
每个染毒剂量组的实验动物数量相同； 各剂量组组距呈等比级数； 死亡率呈正态分布； 最低剂量组死亡率<20%，最高剂量组死亡率>80%。
实验二、经口急性毒性试验
1
急性毒性的概念
急性毒性（acute toxicity）是指实验动物一次或 24h内多次接触一定剂量外源化学物后在短期内所产生的健 康损害作用及致死效应。
观察指标包括一般行为和外观改变、大体形态变化 以及死亡效应。
2
（二）急性毒性试验的目的
1.求出致死剂量及其他急性毒性参数，并根据 LD50对急性毒性进行分级。 2.观察中毒表现、毒作用强度和死亡情况，初步 评价毒物的毒效应特征。 3.为后续的毒性试验提供接触剂量和观察指标选 择的依据。 4.为毒理学机制研究提供线索。
i——相邻两剂量组之对数剂量差值； Xk——最大剂量的对数值； p——死亡率； q——存活率（q = 1－p）； ∑p——各剂量组死亡率总和； m —— lgLD50； n——每组动物数。
最后求反对 数得LD50及 可信区间
22
表6-3 我国农药的急性毒性分级
级别
经口LD50
经皮LD50
吸入LC50
18
19
表1. 急性毒性实验原始记录
受试物名称： 动物物种品系： 染毒途径：
受试物性状： 动物来源： 室温：
受试物来源：
组别 剂量 动物 性 体重 染毒量 染毒 体征及 死亡 体重 (mg/kg) 编号 别 (g) (ml) 时间 出现时间 时间 记录(g)
急性毒性实验实验报告
急性毒性实验实验报告引言毒性实验是评估化学物质对人体的危害性的重要手段之一。
急性毒性实验是其中一种常用的实验方法，通过观察和记录实验动物在暴露于高浓度物质后的反应和症状，来评估物质的毒性程度。
本实验旨在研究某种未知化学物质的急性毒性，为了保证实验结果的准确性和可靠性，我们采取了一系列的步骤和措施。
实验材料和设备•未知化学物质样品•实验动物（例如：小鼠）•毒性评估表格•天平•注射器•实验室用具（例如：试管、容器等）实验步骤1.实验前准备–根据实验需求，选择合适的实验动物进行实验。
确保动物的品种纯正、健康，并符合实验要求。
–准备实验动物的舒适住所，提供充足的饲料和水。
–对实验器材进行消毒处理，确保实验环境的清洁。
2.分组与标记–将实验动物分为不同的实验组和对照组，标记清楚以避免混淆。
–对照组不接触未知化学物质，用于对比分析实验组的数据结果。
3.化学物质注射–使用天平准确称取一定剂量的未知化学物质。
–使用注射器将化学物质注射到实验动物体内，注意注射剂量的准确性。
4.观察和记录–在注射化学物质后的不同时间点进行观察，记录实验动物的症状和行为变化。
–包括但不限于：呼吸变化、心跳变化、体温变化、运动能力降低等。
–使用毒性评估表格进行记录，确保数据的完整性和一致性。
5.实验结束与数据处理–实验时间结束后，停止对动物的处理。
–统计和整理实验动物的观察数据，计算各个实验组的平均值和变异程度。
–进行数据分析和结果展示，判断未知化学物质的急性毒性程度。
结果与讨论根据我们的实验数据，我们得到了未知化学物质的急性毒性程度评估结果。
根据观察和记录的症状和行为变化，我们可以得出以下结论：1.实验组动物在注射未知化学物质后出现了明显的生理和行为异常变化，如呼吸困难、心率增加、体温升高等。
2.对照组动物在相同条件下未出现上述异常变化，说明这些变化与未知化学物质的注射有关。
3.根据实验结果，我们可以初步判断未知化学物质具有较高的急性毒性程度。
急性毒性实验
急性毒性实验急性毒性实验是一种基于实验动物进行的可靠、可控的毒性检测方法，主要用于评估一种化学物质在短期接触下对生物体的毒性作用。
以下是急性毒性实验的详细介绍。
一、实验目的1. 评估化学物质的急性毒性作用。
2. 确定一定剂量的化学物质对特定实验动物的最大耐受剂量。
3. 为长期和亚急性毒性实验提供基础数据。
二、实验动物和分组1. 实验动物通常为小鼠、大鼠、兔等。
2. 根据需要确定不同的剂量组，每组一定数量的实验动物。
3. 为了比较不同实验物质的毒性作用，应设置对照组。
三、实验流程1. 预实验：由实验动物的发育期、性别、年龄、体重等因素评估剂量的大小。
2. 实验前麻醉：给实验动物注射一定的麻醉剂，减轻实验操作对实验动物造成的压力与伤害。
3. 实验操作：将事先测定好的化学物质按照设定的剂量进行注射、灌入或其他途径的给药，实验时间尽量控制在24小时内，保持实验环境稳定，记录实验动物对化学物质的反应。
4. 实验后观察：通过观察实验动物的症状、行为、体重、死亡率等指标评估化学物质的毒性作用。
5. 实验结束：根据实验数据计算化学物质的急性毒性指标，判定化学物质是否符合的相应毒性标准。
四、实验准则与安全注意事项1. 操作前应了解细节操作规范及化学物质对实验动物的毒性作用情况。
2. 操作过程中要保持操作环境的清洁整洁，注意安全防护，防止事故的发生。
3. 操作结束后，实验动物应得到合适的处置和善后。
4. 实验需要考虑3R（Reduce, Refine and Replace）原则，减少实验动物数量和痛苦，降低实验道德伦理压力。
五、结论2. 急性毒性实验是毒性检测领域中最常见的实验方法之一，是评估化学物质的毒性作用水平不可或缺的方法。
3. 在实验过程中，实验者应始终注意实验安全，防止事故的发生，以确保实验的科学性和可靠性。
急性毒性试验
三、近似致死量试验 国外近年来有采用少量动物进行近似致死量测定的方法。其中有的类似 LD50的预试验或霍恩氏法。每组用3—4只动物，设多组，详细观察并汜 录动物毒性反应井进行血液学，血液生化以及病理组织学观察。有的采用
剂量递增法即—只动物一个剂量以几何级数递增，根据前个剂量的反应，
决定下—个剂量。或采用剂量累积法，同一批动物间隔一定时间、剂量由 小到大给药，观察毒性反应，同时结合血药浓度的测定，确定动物的急性 毒性反应、靶器官、中毒或致死剂量、毒性反应时的血药浓度。剂量递增 法类似于LD50测定的阶梯法(或称序贯法、上下法)，适用小动物而且毒性 反应出现快的试验，10—20只动物即可测定。剂量累积法则适用大动物， 利用大约6只合格动物即可进行急性毒性试验的全面观察。另外，国外还
第一节
一、动物 (一)动物种
急性毒性试验方法的有关问题
动物种(或系)的差异是动物急性毒性差异的主要原因，药酶则是毒性种差
的重要原因之一。为推测新药对人的急性毒性，某些发达国家动物急性毒性 试验要求包含非啮齿类动物(除家兔外)在内的两种动物，我国对此未作出明 确规定。由于中药已在临床长期使用，一般认为，如尤特殊情况，使用一种 动物已基本上达到急性毒性试验的目的。目前虽常用的实验动物是小鼠或大 鼠。但在某些特殊情况下，例如受试物中已知含有强烈胃肠刺激物，就还应 再采用非啮齿类大动物进行实验，否则，即使毒性较大(如巴豆)也并不能引
正式试验：在预试验Dn和Dm剂量范围内按等比设三个以上剂量组，其组间 剂量的比值，一般在1；0．6至1：0．9范围内。购入动物试验前应驯化1星 期，随机或按体重分组，每组10只以上，雌雄各半，分别编号，给药前应禁 食(不禁水)过夜。各给药组和溶剂对照组按体重给药后，试验当日应多次观
急性毒性试验
急性毒性实验
取健康小鼠24只，雌雄各半，禁食24h后，生药于次日灌胃给予痛风颗粒颗粒混悬液0.78ml(16.30g／kg，相当生药量86.88g／kg)，观察小鼠活动、饮食、呼吸等情况，然后连续观察15天，纪录7天内的动物死亡数及毒性反应。
结果：灌胃后，小鼠活动减少，约1小时左右逐渐缓解，7天内24只小鼠无一只死亡及明显中毒反应。
计算过程：
常温下配的痛风颗粒最高浓度为0.417g/ml(16.30g／kg，相当生药量86.88g／kg)，颗粒密度4.73g/ml。
20g小鼠胃内容积0.78ml。
按动物表面积比率换算等效剂量换算（20g小鼠：70Kg成人=381.9:1）
按最高浓度4.73g/ml（相当生药剂量22.23g/ml）及小鼠最大灌胃容量0.78ml计算：
小鼠最大给药剂量：4.73*0.78/0.02=207.87g/kg；
按动物表面积比率换算等效剂量换算，折算70Kg成人最大给药量：207.87*0.02*387.9=1612.66g/70kg，相当生药剂量7579.5g/70Kg。
成人每日口服痛风颗粒生药剂量30g/70kg，小鼠一次口服痛风颗粒为成人每日临床常用量的253倍：7579.5/30=253倍
小鼠一次口服痛风颗粒的最大耐受量为86.88g／kg，此为成人每日临床常用量的253倍，结果表明该药口服给药临床常用量使用安全。
急性毒性试验
实验一急性毒性试验(Acute Cytotoxicity Test)一、实验目的：了解生物材料急性毒性的含义，掌握急性毒性试验的基本方法。
二、实验原理：医学上通常指的急性毒性试验是对药物而言的，并以半数致死量（median lethal dose, LD50）来衡量药物急性毒性的大小。
所谓LD50是指某一药物使试验动物总体死亡一半的剂量，由于LD50是剂量反应曲线上最敏感的一点，而且有易测、准确和重复性好的优点，以此作为药物使用的安全指标。
但对于生物材料而言，它与药物在体内的反应机理不同，大多数生物材料不能计算LD50，所以在试验过程中，通过对实验动物进行动物静脉或腹腔注射试验材料或其浸提液来观察实验动物体重在24、48和72h的变化、运动、呼吸状态以及死亡情况作为评价的指标，判定某种生物材料的急性毒性作用。
三、实验对象：小鼠四、实验器材和药品：聚甲基丙烯酸羟乙酯（PHEMA），蒸馏水，生理盐水（0.9％），注射器（1ml），量筒（10ml），小烧杯（50、100ml），高压消毒器。
五、实验步骤：1．浸提液制备：按评价标准裁剪试样，选择适当浸提温度制备浸提液。
2．将10只体重在17～23g间的健康、未做过其他实验的小鼠随机分为实验组和对照组，每组5只。
3．将浸提液按每公斤小鼠体重注射50ml于实验组小鼠尾静脉（50ml/kg），用生理盐水按同样方法作空白对照。
4．记录试样表面积和使用浸提液的容量；记录注射后24h、48h、72h两组小鼠的体重，观察其各种生物学反应情况。
六、评价方法：2．结果判断标准：2．1 在72h观察期内，注射材料浸提液的动物反应不大于对照组动物，则认为该材料符合急性毒性试验要求。
2．2在72h观察期内，注射材料浸提液动物中有2只以上出现轻度毒性症状或仅1只动物出现明显毒性症状死亡，或实验组5只动物的体重均下降，即使无其他中毒症状都要进行重复试验。
2．3 重复试验的动物数量应加倍，即每组需10只小鼠。
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随机区组设计
将动物称重，按体重顺序依次排列编号，分成若 干个区组，每一区组的动物体重相近，每一区组 的动物数即为组数。再从随机数字表上任意抄下 随机数字，依次标在每个动物的编号下，如欲将 动物分为４组，则将每一区组动物编号下的随机 数字，按顺序分别用４、３、２、１除之，根据 余数大小将动物分入各组。
急性毒性试验方法
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1
一、急性毒性
急性毒性指人或动物一次或24 h 之内多次接触外源化学物后，在短
期内所发生的毒性效应，包括致死
效应。
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一次：指瞬间给实验动物染毒，如经 口、经静脉注射染毒。
24 h之内多次：指外源化学物毒性过 低，需给予动物较大剂量。
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3
急性毒性效应出现的快慢和毒性反应的强 度与外源化学物的性质和染毒剂量的大小 有关。
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20只动物的完全随机分配
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完全随机分配后各组所属动物号
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20只动物完全随机分配的结果
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20只动物的完全随机分配
动物编号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 随即数字 54 83 80 53 90 75 53 78 93 47 72 09 54 66 95 44 68 67 67 86 除4后余数 2 3 0 1 2 3 1 2 1 3 0 1 2 2 3 0 0 3 3 2 所属组别 二 三 四 一 二 三 一 二 一 三 四 一 二 二 三 四 四 三 三 二
急性半数致死量测定 半数耐受限量测定 7d喂养试验 其他：近似致死量试验、固定剂量法、
急性毒性分级法、阶梯法、金字塔法、 限量试验、急性系统毒性试验等。
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8
急性毒性试验设计
▪ 实验动物选择 ▪品种 ▪品系 ▪个体 性别 年龄 体重 生理病理状况
对外源化学物毒性反应与人近似； 原则 易于饲养管理，方便实验操作；
如：丙烯腈，过氧化二碳酸二环己酯
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4
急性毒性试验目的
了解外源化学物急性毒性的强度，求出LD50 了解外源化学物毒作用的性质、毒效应的特征
及可能的靶器官，初步评价外源化学物的危险 性。
探求外源化学物的剂量-反应（效应）关系， 为亚慢性毒性、蓄积毒性和慢性毒性及特殊毒
性试验染毒剂量的设计和观察指标的选择提供 参考。
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烙印法： 将铸铁号码加热后，在动物体表部位烧烙，以 破坏毛囊，留下印记。适用于大动物。
挂牌法： 用金属或塑料制成号牌，固定在动物的耳部或 系于其颈部。适用于较大动物。
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实验动物分组
目的：减少个体差异对实验结果的影响； 原则：按统计学原则随机分组，使非处理 因素最大限度地保持一致，提高每组实验 动物间的均衡性。
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6
用小动物试验可求出外源化学物对一种或几种
实验动物的急性LD50或LC50; 用大动物试验可求出近似致死剂量
（approximate lethal dose, ALD）;
根据LD50（LC50）值可进行急性毒性分级，以 初步评价外源化学物对机体急性毒性大小和急
性毒作用的强度。
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7
急性毒性试验项目
年龄：刚成年，未曾受孕、交配
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实验动物的标记
➢ 染色法 ➢ 耳缘孔口法 ➢ 烙印法 ➢ 挂牌法
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染色法
用不同颜色的染料涂擦于动物不同部位来 表示不同号码，适用于大鼠、小鼠和豚鼠。 常用染料： 3％～5％苦味酸酒精饱和液，呈黄色； 甲基紫酒精饱和液，呈紫色； 0.5％中性红或品红溶液，呈红色等。
初步了解动物致死的原因，为研究毒作用的机
制提供线索，进而为制定中毒急救治疗措施提
供依据。
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5
由急性毒性试验可得到两类毒性参数
上限参数 是以死亡为终点的毒性，包 括绝对致死量、半数致死量、最小致 死量、最大耐受量等；
下限参数 是以非致死性急性毒作用 为终点的毒性，包括急性阈剂量和无 作用剂量等。
常用方法：完全随机和随机区组
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完全随机设计
将实验动物编号，从随机数字表上任意横 行或纵行的任意数字开始，顺序取下数字， 标于每个动物号下，然后用计划组数去除 随机数字，所得余数即为所属组别。如将 ２０只动物分为４组，从随机数字表的第 １１行开始，顺序取２０个数字，用４除 的余数即为组别。
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实验动物的标记
方法一：
6
按右前肢、右肋、右后肢、颈部、背中、尾根、左
前肢、左肋、左后肢，顺序编号为1～9号，不染色
为10号。在动物相同部位涂染另一种颜色染料表示
十位，两种颜色可编1～99号。
方法二：
以头部为1号，顺时针方向依次从右耳、右前肢、右
后肢、颈部、背中、尾根、左耳、左前肢、左后肢
易于获得，品系纯化，价格低廉。
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9
实验动物的年龄与体重的关系
动物
大鼠 小鼠 豚鼠 兔 犬 猫
成年年龄（周） 3 2 2 3~4 3~4 3~4
体重（克） 150 15 250 1.5kg 7~15kg 1kg
寿命（年） 2~3 2~3 6~8 4~9 15~20 10~12
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10
急性毒性试验的动物体重
大鼠 120～150ｇ
小鼠 18～22ｇ
豚鼠 200～250ｇ
家兔 2～2.5 kg
犬 10～15kg（成年）
变异范围不得超过所用动物平均体 重的10％。
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11
急性毒性试验的动物要求
动物数量：小动物4～6组，每组至 少10只；犬等大动物每组6只。
性别：雌雄各半，也有例外，如， 致畸试验的剂量准备，只作雌性动 物LD50。
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25
完全随机分配后各组所属动物号
组别
动物编号
一4 7 二1 5
9 12 8 13 20 14
三 2 6 10 15 18 19
四 3 11 16 17
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26
20只动物完全随机分配的结果
组别
动物编号
一 4 7 9 12 19
二1 三2
5 8 13 14 6 10 15 18
四 3 11 16 17 20
染色，分别为2～10号。
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15
精选文本
16
染色法
优点： 简单方便，不痛苦，无损伤。
缺点： 时间较长时，染色剂易褪色； 标记容易模糊不清。
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耳缘孔口法：
在耳缘先用针穿孔和用剪刀剪口，再用酒精墨 汁涂抹，使黑色渗入孔口，伤口愈合后不易脱 落，这种标号亦可标号１～９９。
适用于大、小鼠。