高效液相色谱法测定单糖组成

薄层色谱和高效液相色谱用于矮地茶多糖的单糖组成分析

薄层色谱和高效液相色谱用于矮地茶多糖的单糖组成分析目的分析矮地茶多糖中的单糖组成及摩尔比值。

方法采用硫酸水解多糖，1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮柱前衍生化高效液相色谱法和薄层色谱法同时分析矮地茶多糖的单糖组成和摩尔比，Agilent TC-C18色谱柱，流动相：乙腈-pH 为7.0的磷酸缓冲液（20∶80，0.1%），检测波长：250 nm，流速：1 mL/min；柱温：25℃。

结果薄层色谱法和高效液相色谱法结果皆表明矮地茶多糖由葡萄糖（Glu）和半乳糖（Gal）组成，高效液相色谱法显示矮地茶多糖中Glu和Gal 的摩尔比值约为1∶2.36。

结论薄层色谱法可用于矮地茶多糖的单糖组成的快速鉴别，方法快速、准确；高效液相色谱法可用于矮地茶多糖中单糖组成的鉴别和摩尔比值测量，方法简单、灵敏、分离效率高。

[Abstract] Objective To analyze the monosaccharide composition and the molar ratio of Ardisia japonica Polysaccharide （AJP）. Methods Sulfuric acid was used to hydrolyze AJP. Pre-column 1-Phenyl-3-methyl-5-pyrazalone （PMP）derivation HPLC and TLC method were developed to determine the monosaccharide compositions and the molar ratio of AJP. The mobile phase was acetonitrile-pH 7.0 phosphate buffer （20∶80，0.1%）with Agilent TC-C18 column. The detection wavelength was 250 nm，the flow rate was 1 mL/min，and the column temperature was 25 ℃. Results The results of TLC and HPLC analysis showed that AJP were consisted of glucose （Glu）and galactose （Gal）. Meanwhile，HPLC analysis showed that the molar ratio of AJP was 1∶2.36. Conclusion TLC which is fast and accurate，can be used for the rapid identification the monosaccharide composition in AJP. HPLC which is simple，sensitive and high separation efficiency，can be used for the quantitative analysis of the monosaccharide composition in AJP.[Key words] Ardisia Japonica；Polysaccharide；HPLC；TLC；Monosaccharide Composition矮地茶是紫金牛科植物Ardisia japonica（Thumb.）Blume的干燥全草，收錄于《中国药典》2015年版[1]，具有止咳平喘、清利湿热、活血化瘀的功效。

柱前衍生化高效液相色谱法分析当归多糖的单糖组成

图 3 当归多糖经 TFA 水解的时间对各组成单糖的测定影响
F ig. 3 The e ffects of com ponent m onosacchar ides o f A ngelica polysaccha rides fo r different trifluoacetic ac id ( T FA ) hydro lysis tim e 1. 葡萄糖醛酸 ( glu cu ron ic acid) ; 2. 甘露糖 ( m annose) ; 3. 鼠李糖 ( rhamn ose); 4. 半乳糖醛酸 ( ga laduron ic acid ) ; 5. 半乳糖 ( galactose); 6. 葡萄糖 ( g lucose) ; 7. 阿拉伯糖 ( arabonose) 。
3 结果与讨论
3. 1 单糖对照品 PM P衍生物的 HPLC 分离为实现当归多糖各组成单糖的高效分离, 本实验对当归多糖可能包含的 G lc、A ra、M an、G al、Rha、
Xyl、G lcUA、GalUA 及内标 Fuc等 9种标准单糖 PMP 衍生物的高效液相色谱分离条件进行了优化。结果表明, 磷酸缓冲液 ( KH2 PO4-N aOH ) 的 pH 6. 9, 时间梯度为 0→ 10→ 30 m in 和相应浓度梯度为 0→ 8% → 20% 溶剂 B的梯度洗脱模式是分离此 9种单糖衍生物的较理想色谱分离条件。
1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮 ( PM P) 柱前衍生化 H PLC 测定单糖含量的方法经过了不断地发展和完善 [ 3~ 7] , 并成功地用于毛细管电泳分析。 PMP 是还原性糖的最好衍生化试剂之一, 如 PM P 衍生物不易裂解, 分析时不产生异构峰, 且在 250 nm 处有强烈的紫外吸收。本研究采用 PMP 衍生化方法, 用常规的紫外检测器和 C18烷基键合柱, 建立适于当归多糖单糖组成测定的 HPLC 新方法, 达到灵敏、快速、准确、方便和可在线大批量分析的目标。

柱前衍生化高效液相色谱法分析多糖中的单糖组成

柱前衍生化高效液相色谱法分析多糖中的单糖组成马定远　陈　君　李　萍3胡卓逸(中国药科大学生药药用植物教研室,南京210038)(中国药科大学生化研究室,南京210009)摘　要　报道了多糖中单糖组成的柱前衍生化高效液相色谱测定方法。

采用反向高效液相色谱250nm 紫外检测和使用梯度洗脱,6种还原单糖的12苯基232甲基252吡唑啉酮衍生实现了良好的分离并具有良好的峰形。

对单糖组成的定量测定进行了方法学考察,建立了单糖组成分析的数据分析方法,并用所建立方法对一个多糖中的单糖组成进行了分析,获得良好的重复性。

关键词　单糖,多糖,衍生化,高效液相色谱　2001207204收稿;2002201209接受1　引言单糖的组成分析是糖分析中的一项重要内容。

已有的糖组成分析方法以气相色谱法和高效液相色谱法为主。

由于单糖分子的多样性,关于糖的分析方法仍在不断发展。

12苯基232甲基252吡唑啉酮(PMP )衍生化方法自运用以来,得到不断完善1～3。

Strydom 运用此法对中性、酸性和碱性醛糖进行了分析,可以使15种单糖得到很好的分离2。

本文首先建立了6种常见单糖(包括一种酸性糖)的分离模式,通过内标法对3种中性单糖的定量进行了方法学考察,并应用所建立的方法对多糖中的单糖进行了组成分析,为此法的更好运用提供了依据。

2　实验部分2.1　仪器与试剂HP1100型高效液相色谱系统,包括G 1312A 二元泵,G 1315A DAD 检测器,HP ChemStation 色谱工作站(Hewlett 2Packard )。

衍生化试剂12苯基232甲基252吡唑啉酮(PMP ,上海化学试剂采购供应站试剂厂),甲醇重结晶两次。

色谱用乙睛(T edia )、三氟乙酸(CP 级,上海化学试剂公司)。

单糖对照品:葡萄糖(G lc ,上海化学试剂公司)、甘露糖(Man ,Sigma 公司)、半乳糖(G al ,Sigma 公司)、鼠李糖(Rham 公司)、葡萄糖醛酸(G lcUA )和木糖(Xyl )(上海化学试剂二厂产品)。

高效液相色谱法测定木糖结晶母液中单糖

ｍｏｎｏｓａｃｃｈａｉｒｄｅｓｗｅｒｅｓｅｐａｒａｔｅｄｂｙｔｈｅｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅｃｏｌｕｍｎｕｓｉｎｇａｎＶ（ａｅｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅ）：Ｖ（ｗａｔｅｒ）＝７０：３０ａｔａｌｆｏｗｒａｔｅｆｏ１．０ｍＬ・ｍｉｎ一，
Ｆｅｂ．２０１３
２月
文章编号：１００２ — ２０９０（２０１３）０１ — ００４１ — ０４
高效液相色谱法测定木糖结晶母液中单糖
孙蕊，贾鹏禹，靳革。崔新宇
（１．黑龙江八一农垦大学动物科技学院，大庆１６３３１９；２．黑龙江八一农垦大学黑龙江省农产品加工工程技术研究中心；
ＳｕｎＲｕｉ，ＪｉａＰｅｎｇｙｕ２，ＪｉｎＧｅ３，ＣｕｉＸｉｎｙｕ３
（１．ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＡｎｉｍａｌＳｃｉｅｎｃｅ＆ＶｅｔｅｉｒｎａｒｙＭｅｄｉｃｉｎｅ，ＨｅｉｌｏｎｇｊｉａｎｇＢａｙｉＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌｕｎｉｖｅｓｒｉｔｙ．Ｄａｑｉｎｇ１６３３１９；
ｗａｓｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄｂｙＨＰＬＣ．Ｔｈｅｓａｍｐｌｅｗａｓｐｒｅｔｒｅａｔｅｄｂｙｓｏｌｉｄｐｈａｓｅｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ（ＳＰＥ）ｗｉｔｈＥＮＶＩ－Ｃａｒｂ（Ｓｕｐｅｌｃｏ）．Ｔｈｅ

柱前衍生化高效液相色谱法分析9种多糖中的单糖组成

柱前衍生化高效液相色谱法分析9种多糖中的单糖组成王媛媛;张晖;杨俊松;宗智慧【摘要】Objective To establish a precolumnderivatization procedure with 1-phenyl-3-methyl-5-pyrazolone ( PMP )-high performance liquid chromatography ( HPLC ) method for the determination of the monosaccharide composition of nine polysaccharides.Methods The nine polysaccharides were hydrolyzed, derivatized by PMP and analyzed by HPLC with the Inertsil ODS-SP C18 column(260mm ×4.6mm,5μm).The mobile phase was the 20%triethylamine-buffer solution withKH2PO4(pH=6.9),and the flow rate was 1.0 ml/min.The UV absorbance was detected at a wavelength of 254 nm,and the injection volume was 10μl with the column temperature 30℃.Results The method was successful in the separation of the mixture monosac-charide standards.The calibration line of each monosaccharide had a good relationship.And the precision, stability and reproducibility were also good.The nine polysaccharides were composed of different monosac-charide and the contents had some difference.Conclusion The method was accurate and stable for the deter-mination of the monosaccharide composition and content of nine polysaccharides.%目的：建立1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮（ PMP）柱前衍生化-高效液相色谱法（ HPLC）对甘草多糖等9种多糖的单糖组成成分进行分析。

枸杞多糖组成及含量测定方法的改进

枸杞多糖组成及含量测定方法的改进1. 方法原理该研究旨在改进枸杞多糖组成及含量的测定方法。

将枸杞多糖进行水解衍生化处理，然后利用气相色谱法（GC）和高效液相色谱法（HPLC）测定单糖组成。

通过分析单糖组成结果，可以判断枸杞多糖的真伪。

在此基础上，根据各单糖组成物质的量比，配制单糖混合溶液，并使用苯酚硫酸比色法绘制标准曲线，从而建立枸杞多糖含量的测定方法。

通过该方法测定的枸杞多糖含量为30，而仅以葡萄糖作为标准溶液，使用硫酸苯酚法绘制标准曲线时，枸杞多糖含量仅为14。

这种改进的方法可以更准确地测定枸杞多糖的含量，并区分真伪枸杞多糖。

2. 实验材料和仪器枸杞样本：选用宁夏枸杞（Lycium barbarum L.）为实验材料，购买自当地市场，经鉴定为优质品种。

试剂：包括但不限于葡萄糖、硫酸、苯酚、盐酸、乙醇等，均为分析纯。

高效液相色谱仪（HPLC）：配备示差折光检测器，用于枸杞多糖的定性和定量分析。

多糖纯化：通过Sevage法去除蛋白质，然后用透析法去除小分子杂质。

多糖含量测定：采用改进的苯酚硫酸法，通过紫外可见分光光度计测定多糖含量。

这个段落详细列出了实验所需的材料和仪器，并简要介绍了实验方法，为后续实验结果的准确性和可靠性提供了基础。

3. 实验步骤本实验选用宁夏枸杞（Lycium barbarum L.）为原料。

将枸杞样品在40下烘干至恒重，粉碎后过80目筛。

准确称取0g枸杞粉末，置于圆底烧瓶中。

采用改进的超声波辅助水提法提取枸杞多糖。

将枸杞粉末加入100mL去离子水中，在功率为200W、频率为40kHz的超声波辅助下提取30分钟。

提取完成后，离心（4000 rpm, 10 min）取上清液，残渣重复提取两次，合并上清液。

在上清液中加入Sevage试剂（三氯甲烷正丁醇 51，vv），剧烈振荡后静置分层，重复此步骤至无蛋白层出现，收集上清液。

将上清液减压浓缩至原体积的15，加入4倍体积的无水乙醇，置于4冰箱中醇沉过夜。

高效液相色谱_蒸发光散射检测法同时测定单糖_双糖及低聚果糖

1.3.3 样品溶液配制精确称取 3 份样品，用超纯水定容，超声 2mi n，
0 . 4 5μm 滤膜过滤，备用。
1.4 标准曲线绘制取配制好的系列标准溶液稀释至不同浓度，按 1.2
节的色谱条件分别进样，以峰面积的自然对数为纵坐标 ( y ) ，以进样量的自然对数为横坐标( x ) ，进行线性回归计算，得标准曲线回归方程。 1.5 方法学考察
在 1.2 节的色谱条件下，将配制好的系列标准溶液分别进样并计算，得标准曲线回归方程和最小检出限，见表 1。
表１标准曲线、线性范围及检出限 Table 1 Linear regression equations, linear ranges and detection
limits of glucose, fructose, sucrose, GF2, GF3, and GF4
由于单、双糖、低聚糖类物质没有紫外吸收，对其含量测定通常采用高效液相色谱 - 示差折光检测器 (HPLC-RID)的方法和纸层析色谱分析法。目前的报道[8-11] 中，多以示差检测器测定，但此方法灵敏度低，系统平衡时间长，对工作环境要求苛刻，要求恒温、恒流速、且无法采用梯度洗脱。蒸发光散射检测器( E L S D ) 作为新一代通用型质量检测器，它对有质量的物质都能进行检测，而不需其分子结构中具有发光基团。这在一定程度上弥补了其他 HPLC 检测器的不足，特别是检测无电子和分子吸收光谱信号的化合物时，显示出一定的优越性。其原理是将样品与流动相的混合物通过喷射
the carrying gas was air. Under the above conditions, all glucose, fructose, sucrose, GF2, GF3 and GF4 could be well separated, and the spiked recoveries were 97.62% – 99.55% with a RSD less than 3% (n = 5). This method is accurate, rapid, simple and

高效液相色谱法测定龙眼肉多糖的单糖组成

Ｄｌｓｃｈａｉｅ，ｒｌｎｇｎｏｖａｃｒｄｓＡｉｕｓＬｏａｌ
龙眼又名桂圆，智，益属无患子科龙眼属植物果实，我国南方特产水果，是广西特产。龙眼肉是是亦
Байду номын сангаас
文献标识码：Ａ
Ａｂｔａｔｓｒｃ：ＴｈｍｏｏａｃｒｄｅｏｐｓｔｏｏｐｌｓｃｈｒｄｅｆｏｅｎｓｃｈａｉｃｍｏｉｉｎｆｏｙａｃａｉｓｒｍＡｒｌＬｏａｗａｉｕｓｌｎｇｎｓＡｎａｙｅ．ｅｐｌｓｃｈａｉｅｓｅｔａｔｄｂｏｓｉｅｔｒｐｒｃｐｔｔｄｂｌｏｏ，ｎｄｌｚｄＴｈｏｙａｃｒｄｓｗａｘｒｃｅｙｈｔｄｉｔｌｄｗａｅ，ｅｉｉａｅｙａｃｈｌａｌｆｒｄｏｍｅｍｏｓｃｈｒｄｄｓｎｏａｃａｉｅｅｂｙＴＦＡｈｒｙａｉｎ．ｅｙｄｏｙｓｔｒａｔｄｙｄｄｚｔｏＴｈｈｒｌａｅｅｃｅｗｉｈ－ｅｙ一一ｔ１ｐｈｎｌ３ｍｅｈｌ５ｐｙａｏｏｅ（ｔｙ一一ｒｚｌｎＰＭＰ）ｔｒｄｃｈｅＰＭＰｒｖｔｖｓｔａｒｎｌｚｄｂｏｐｏｕｅｔｄｅｉａｉｅｈｔｗｅｅａａｙｅｙＨＰＬＣ．ＴｈｅＰｏｙａｃｒｄｓｒｍＡｒｌｕＬｏａｗａｃｍｐｉｅｍａｌｓｃｈａｉｅｆｏｉｓｌｎｇｎｓｏｒｓｄｎｎｏｅ，ｒｍｎｓｓｈａｏｅ，ｇ１ｃｕｏｉａｃａａｔｒｎｃｉｄ，

PMP柱前衍生化HPLC法测定地参多糖的单糖组成

PMP柱前衍生化HPLC法测定地参多糖的单糖组成一、本文概述Overview of this article本文旨在介绍一种采用PMP（1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮）柱前衍生化结合高效液相色谱法（HPLC）测定地参多糖中单糖组成的方法。

地参作为一种具有丰富营养价值和药用价值的植物，其多糖成分具有显著的生物活性，如抗氧化、抗炎、抗肿瘤等作用。

因此，对地参多糖中单糖组成的准确分析对于揭示其生物活性机制、优化提取工艺以及质量控制具有重要意义。

This article aims to introduce a method for determining the monosaccharide composition in ginseng polysaccharides using PMP (1-phenyl-3-methyl-5-pyrazolone) pre column derivatization combined with high-performance liquid chromatography (HPLC). As a plant with rich nutritional and medicinal value, the polysaccharide components of ground ginseng have significant biological activities, such as antioxidant, anti-inflammatory, and anti-tumor effects. Therefore, accurate analysis of monosaccharide composition inginseng polysaccharides is of great significance for revealing their biological activity mechanisms, optimizing extraction processes, and quality control.PMP柱前衍生化是一种常用的单糖衍生化方法，通过与单糖上的羟基反应，将单糖转化为具有紫外吸收特性的衍生物，从而便于HPLC 检测。

高效液相色谱法测定糖苷类表面活性剂产品中糖类物质的含量

高效液相色谱法测定糖苷类表面活性剂产品中糖类物质的含量张军;杨秀全;周媛;孙永强;李运玲【摘要】建立了同时测定糖苷类表面活性剂产品中单糖和多糖含量的高效液相色谱法.采用Zorbax Eclipse Plus C18色谱柱(4.6 mm×100 mm,3.5μm)分离,甲醇-水梯度洗脱,流速1.0 mL/min,蒸发光散射检测器检测.用葡萄糖和麦芽三糖为对照品,外标两点法同时测定糖苷产品中单糖和多糖的含量.结果表明,单糖和多糖的检出限分别约为1.5和2.0μg/L,回收率分别为100.4%和99.1%.与既有方法相比,此方法可以同时分析产品中残留原料糖和副产物多糖的含量,且在分析非还原性单糖方面具有独特优势.%A HPLC method for simultaneous determination of contents of monose and polysaccharides in glucoside-based surfactant products was established. The method adopts evaporative light-scattering detector and Zorbax Eclipse Plus C18 column (4. 6 mm × 100 mm,3. 5μm)with methanol and water as the mobile phase at a rate of 1. 0 mL/min. The contents of saccharides were calculated by external standard two-point method using glucose and maltotriose as control samples. Results show that the detection limit of monose and polysaccharides is 1. 5 and 2.0 μg/L respectively while the recovery is 100. 4% and 99. 1% res pectively. As comparing with the conventional methods,this method displays unique superiority in determination of non -reducing monose and the residual glucose from raw material for preparation of glucoside-based surfactants as well as the by-products polysaccharides can be determined simultaneously.【期刊名称】《日用化学工业》【年(卷),期】2017(047)004【总页数】5页(P232-236)【关键词】糖基表面活性剂;单糖;多糖;高效液相色谱法【作者】张军;杨秀全;周媛;孙永强;李运玲【作者单位】中国日用化学工业研究院,山西太原 030001;中国日用化学工业研究院,山西太原 030001;中国日用化学工业研究院,山西太原 030001;中国日用化学工业研究院,山西太原 030001;中国日用化学工业研究院,山西太原 030001【正文语种】中文【中图分类】TQ423.2糖苷类表面活性剂以其安全绿色、生物相容性好的特性为人们所熟知，这类产品以葡萄糖作为亲水基团，主要生产原料都来自于可再生资源，是真正源自天然的绿色安全的新型表面活性剂品种，主要用于餐具洗涤剂、洗手液等密切接触人体的日化产品中，同时也是婴幼儿洗浴产品的首选原料之一，是21世纪以来真正称得上“世界级”的表面活性剂品种。

高效液相色谱法测定木糖母液及发酵液中单糖含量

高效液相色谱法测定木糖母液及发酵液中单糖含量孙蕊;王学群;李朝阳;李洪飞;贾鹏禹【摘要】建立了木糖母液及其酵母发酵液中葡萄糖和半乳糖含量的高效液相色谱测定方法.测定方法基于铅配位体交换色谱分离模式,色谱分离柱采用Sepax Carbomix Pb-NP5(300×7.8 mm ID,5μm,8％交联度)色谱柱,柱温75℃;流动相采用超纯水(100％),泵速0.55 mL· min-1;示差折光检测器温度30℃;木糖母液样品采用固相萃取脱色前处理,母液的发酵液样品采用乙腈沉淀蛋白前处理.在最终的方法条件下,葡萄糖和半乳糖组分在25 min内完成基线分离,在0.2～10.0 mg·mL-1浓度范围内呈现良好的线性关系,方法检测限分别为0.124 mg· mL-1和0.115 mg·mL-1.仪器系统简单,方法重现性好,结果准确.【期刊名称】《黑龙江八一农垦大学学报》【年(卷),期】2016(028)003【总页数】4页(P78-81)【关键词】葡萄糖;半乳糖;木糖母液;发酵液;高效液相色谱法【作者】孙蕊;王学群;李朝阳;李洪飞;贾鹏禹【作者单位】黑龙江八一农垦大学,大庆163319;黑龙江八一农垦大学,大庆163319;黑龙江八一农垦大学,大庆163319;黑龙江八一农垦大学,大庆163319;黑龙江八一农垦大学,大庆163319【正文语种】中文【中图分类】O657.72木糖由酸水解玉米芯等天然半纤维素经净化、结晶等工艺制成，一般用做加氢生产木糖醇的初级产品。

木糖企业在制得结晶木糖的同时，离心分流出大量木糖结晶后残液（木糖母液），以往母液被廉价出售用于生产焦糖色素［1，6］。

近年来，模拟移动床（SMB）色谱分离成为木糖母液中单糖高效回收利用的重要技术［2-5］，该技术手段不但可得到高纯木糖，同时可得到高纯、高附加值的阿拉伯糖，现已实现技术转化并达到规模化生产。

PMP柱前衍生高效液相色谱法-终版

糖组成分析（PMP-HPLC）混合单糖标准品的准备：称取各单糖标准品（L-Fuc；L-Rha；L-Ara；L-Xyl；D-Man；D-Gal；D-Glc；D-GalA；D-GlcA）溶于去离子水中，配成1mg/ml以待分析。

多糖的水解称取2-4mg多糖样品于鸡心瓶（10ml）中，加入1ml H2O预溶，再加入1ml 4M的TFA，橡皮膏封闭瓶口，置110℃烘箱中水解（中性多糖水解2h，酸性多糖水解4h）；冷却至室温后，加甲醇多次（4次）除去多余的TFA至无酸味；水解的多糖样品复溶于200μLH2O。

单糖的PMP衍生化取50μL多糖水解液或50μL混合单糖标准品溶液于2ml EP管中，分别与50μL的0.6mol/L 的NaOH溶液充分混合，加入100μL 0.5mol/L的PMP（0.2613g/3ml）甲醇溶液，塞紧塞子封紧后，漩涡振荡仪混匀；在70℃水浴中反应100min，取出冷却至室温。

加入100μL 0.3 mol/L 的HCl中和，再加700μl去离子水以及1ml氯仿萃取，漩涡振荡，静置1-2h。

吸取上层水相900μl，再加入900μl的氯仿萃取一次，静置1h，再去上层水相800μl，再加入800μl 的氯仿萃取一次，或用低速离心代替静置处理。

用带有0.22μm微孔滤膜的注射器过滤后，装入液相瓶中待HPLC进样分析。

HPLC分析糖组成Agilent 1260高效液相色谱系统色谱柱：ZORBAX Eclipse XDB-C18，250mm×4.6mm, 5μm；流动相：Buffer A: 15%乙腈+85%磷酸盐缓冲液Buffer B: 40%乙腈+60%磷酸盐缓冲液磷酸盐缓冲液：0.05M 磷酸二氢钾缓冲液（pH 6.7）KH2PO4 13.6g及NaOH 1.8g溶液2L水中；乙腈（HPLC级）；时间（min）Buffer A Buffer B0 100 010 90 1030 80 2035 80 2045 80 2045.01 100 055 100 0柱温：20℃；紫外检测波长：254nm；流速：1ml/min；进样体积：20μl。

柱前衍生化一高效液相色谱法分析木糖结晶母液的单糖组成

为６９时间梯度为０ｌ— ２ — ３ｉ相应浓度．，一０００ｍｎ和梯度为０８ — ％一ｌ％一１％时溶剂Ｂ的梯度洗脱５５模式是分离此８种单糖衍生物的较理想色谱分离条件，单糖标准品的色谱分离图和木糖结晶母液的色谱分离图分别如图１所示。
可以看出，８个组分的平均回收率为９．％～８４
５０．ｌ００
．
１．５０
２．００
２５０
１．０１０％
表３８种单糖组分的回收率（５ｎ＝）
ｔａｉ／ｒｎ
孟海波，：等柱前衍生化一高效液相色谱法分析木糖结晶母液的单糖组成
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柱前衍生化一高效液相色谱法分析木糖结晶母液的单糖组成
孟海波高绍丰张海燕孟汉卿
（济南圣泉唐和唐生物科技有限公司，济南２００５２４）
摘要
采用１苯基．．一３甲基－一５吡唑啉酮（ＭＰ柱前衍生化一反相高效液相色谱（Ｌ法建立了８种常见单糖Ｐ）ＨＰＣ）
稀释，匀，混然后用０４ｍ水性滤膜过滤，０Ｌ．５１
进样。
１４色谱条件．
色谱柱：ｙｍｅｙＣ８（．ｍ ×１０ｍ５Ｓｍｔ１柱４６ｍｒ５ｍ，
ｍ）美国Ｗａｒ公司；ｉｎｘＵｔＭａ００色谱，ｔｓｅＤｏｅｌｔ３０ｉｅ
量，单糖的浓度与相应的峰高呈良好的线性关系，关系数ｒ在０９９０９９范围内，法检出限为００２ｌ８种相．８７～．９４方．０

反相-高效液体色谱法测定三种常见细菌胞外多聚物中的单糖组分

反相-高效液体色谱法测定三种常见细菌胞外多聚物中的单糖组分李琼芳;张存凯;陈超;张文静【摘要】为研究细菌胞外多聚物（ Extracellular polymeric substances，EPS）的复杂组分及其对环境中矿物细颗粒的溶蚀、改性作用，本文选取了土壤常驻菌硅酸盐细菌、空气常见致病菌金黄色葡萄球菌和人体常见菌大肠杆菌为研究对象，采用反相高效液相色谱（RP - HPLC）快速定性定量检测了三种细菌胞外多糖中单糖成分的方法。

结果表明：8种单糖在检测条件下进行了很好的分离，硅酸盐细菌胞外多糖中单糖成分有甘露糖和葡萄糖醛酸；金黄色葡萄球菌胞外多糖中单糖成分有核糖、葡萄糖，且在其生长过程中会消耗甘露糖、葡萄糖醛酸和半乳糖；大肠杆菌胞外多糖中单糖成分有核糖和半乳糖，且在其生长过程中会消耗甘露糖、葡萄糖醛酸、葡萄糖和半乳糖；不同微生物胞外多糖组成和含量上均有较大差异。

该研究建立了用反相高效液相色谱快速测定细菌胞外多糖组分的方法。

%To identify the complex components of the bacterial extra - cellular polymeric substances(EPS) and their effects of corrosion and surface modified on the mineral fine particles,three common bacteria from soil, air and human body were chosen to be tested strains. They were silicatebacteria,Staphylococcus aureus and Esch-erichia coli. RP - HPLC method was applied to rapid determinate the monosaccharide components of bacterial EPS qualitatively and quantitatively. The results showed 8 monosaccharides were separated well under the detecting condition. The monosaccharides of silicate bacterial EPS included mannose and glucuronic acid,while Staphylo-coccus aureusˊs EPS included ribose andglucose and Escherichia coli EPS included ribose and galactose. The dif-ferent bacteria consumed different monosaccharides in its growth process. The results also showed that the EPS monosaccharide components of each bacteria appeared apparent difference. In this research a method with RP -HPLC was established to determine the monosaccharide components of bacterial EPS.【期刊名称】《绵阳师范学院学报》【年(卷),期】2016(035)005【总页数】6页(P55-59,64)【关键词】反相高效液体色谱;细菌;胞外多糖;单糖【作者】李琼芳;张存凯;陈超;张文静【作者单位】西南科技大学生命科学与工程学院，四川绵阳 621010;西南科技大学生命科学与工程学院，四川绵阳 621010;西南科技大学生命科学与工程学院，四川绵阳 621010;西南科技大学生命科学与工程学院，四川绵阳 621010【正文语种】中文【中图分类】O657.7;Q936细菌胞外聚合物( Extracellular polymeric substances, EPS)是指附着在细菌表面或围绕在细菌周围，水道、孔隙穿通其间，形成蘑菇状膜结构，用于自我保护和相互粘附的天然有机物[1]，其主要来源于微生物的新陈代谢、细胞自溶和从培养基质中吸附的有机物.EPS 广泛存在于细胞表面，具有表面吸附性强，生物絮凝性好，能稳定絮体结构，形成保护层抵御杀菌剂和有毒物质的危害，保持水分，富集营养物质等重要生理功能[2,3].国内外研究学者普遍认为EPS成分比较复杂，蒲晓芬等[4]对27种异养需氧菌EPS的组成进行研究，发现EPS主要由蛋白质和多糖组成，Liu等[5]和Sponza等[6]的研究表明，EPS中除了多糖和蛋白质外，还伴随有少量的腐殖酸、有机酸(糖醛酸)、脂类、氨基酸及核酸等物质.EPS是微生物在特定环境下产生的分子量>10 000 的高分子物质，其成分和含量与微生物的活性和功能特性有着密切联系.近几年来，由于细菌的EPS与微生物学、矿物表面化学以及矿物学溶解机制密切相关，涉及了整个生物氧化浸出界面过程，因而引起了生物冶金工作者的极大关注[7,8].微生物的胞外聚合物特性及组成研究日益引起广泛关注[9,10].本文为深入探讨EPS及其组分以深入了解微生物细胞在微生态环境中的作用与影响，用反相-高效液体色谱法对三种常见细菌胞外多糖中的单糖组分进行了分离和测定，并进行了比较，总结出测定细菌胞外单糖类物质成分的技术方法.1.1 实验材料1.1.1 供试菌株硅酸盐细菌(Bacillus mucitaginosus)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)和大肠杆菌(Escherichia coli)ATCC25922.B. mucitaginosus由中科院地球化学研究所连宾研究员提供[11-12]；E. coli ATCC25922购自卫生部临床检验中心；S.aureus由四川省绵阳四 0 四医院友情赠送.B. mucitaginosus采用无氮培养基[11]；E. coli和S.aureus采用普通牛肉膏蛋白胨培养基.1.1.2 主要试剂单糖标准溶液：分别称取20 mg甘露糖、核糖、鼠李糖、葡萄糖醛酸、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖和阿拉伯糖至烧杯，用超纯水溶解并定容至100 mL.配成浓度为200 mg/L 的混合标准溶液，4℃保存待用.其它试剂： NaCl、三氯乙酸、30% H2O2、95%乙醇、无水乙醇、乙醚、丙酮、1-苯基- 3-甲基- 5-吡唑啉酮(PMP)、三氟乙酸、三氯甲烷、乙腈、KH2PO4、NaOH.乙腈色谱纯，其他试剂均为分析纯.1.1.3 主要仪器电子分析天平、优普超纯水器、酸度计、全自动压力蒸汽灭菌锅、恒温振荡培养箱、冷冻高速离心机、透析袋(MW：8 000-14 000)、美国Agilent 1 260高效液相色谱仪.1.2 方法1.2.1 生长曲线的绘制实验采用比浊法测定细菌浓度.菌种测生长曲线前需先对其活化培养，以获得高活性的纯菌液，即挑取1～2环菌体于盛有20 mL的液体培养基中，分别置于120r/min、29℃(硅酸盐细菌)和150 r/min、37℃(金黄色葡萄球菌和大肠杆菌)的恒温培养箱中振荡培养60 h和14 h，此时的细菌具有很高的生长活性.再以2.5%(V/V)接种量接种于盛有液体培养基的三角瓶中，以无菌培养基作空白对照，其中硅酸盐细菌每6 h取样测定菌液浊度，共培养120 h，金黄色葡萄球菌和大肠杆菌每2 h取样测定菌液浊度，共培养24 h，以上步骤均重复3次，取平均值，绘制菌体的生长曲线.1.2.2 单糖待测液的制备a. 胞外多糖的提取：按文献方法[13-16]分别挑取2环菌体至装有60 mL灭菌培养基的三角瓶(200 mL)中进行活化培养，其中硅酸盐细菌置于29 ℃、120 r/min 的恒温振荡培养箱培养60 h，S.aureus和E.coli置于37 ℃、150 r/min的恒温振荡培养箱培养14 h，作母液备用.以2.5% (V/V)接种量分别接种硅酸盐细菌、金黄色葡萄球菌和大肠杆菌至600 mL相应液体培养基中，硅酸盐细菌于29 ℃、120 r/min的恒温振荡培养箱培养至稳定期，金黄色葡萄球菌和大肠杆菌于37 ℃、150 r/min的恒温振荡培养箱培养至稳定期，4℃、10 000 r/min下低温冷冻离心15 min，收集上清液，菌体加入适量的超纯水再次离心，取上清液，合并，于80 ℃水浴锅中浓缩至原体积的1/2时，10 000 r/min低温冷冻离心15 min，收集上清液，同上，继续浓缩至100 mL时，加入3倍体积的95%乙醇(进行醇沉多糖)，4 ℃静止12h后，10 000 r/min低温冷冻离心15 min，收集沉淀，沉淀依次用无水乙醇、乙醚及丙酮洗涤，10000 r/min低温冷冻离心15 min收集沉淀，冷冻、干燥后即为粗多糖.将粗多糖于热水中溶解后，加入多糖溶液体积10%的10%三氯乙酸溶液脱蛋白，搅拌30 min，4 ℃静置15 min，10 000 r/min低温冷冻离心15 min收集上清液，80 ℃水浴锅中浓缩至一定体积，调pH=8.0，加入30% H2O2进行氧化脱色(45℃保温1 h)，用透析袋除去H2O2及有机溶剂和小分子杂质后，浓缩至一定体积，加95%乙醇(调含醇量为80%)4 ℃静置，过夜，10 000r/min低温冷冻离心15 min收集沉淀，沉淀依次用无水乙醇、乙醚及丙酮洗涤，10 000 r/min低温冷冻离心15 min收集沉淀，冷冻、干燥后即为除蛋白后的精制多糖.b. 多糖水解：准确称取20 mg 多糖样品于安培瓶中，加入4 mol/L的三氟乙酸溶液2 mL，漩涡混匀后用酒精喷灯封管，置于120 ℃烘箱中水解2 h，水解完毕后取出至室温冷却，加入4 mol/L的NaOH溶液2 mL，并调pH至中性，待衍生化.1.2.3 标准曲线的确定将上述2.1.2中准备好的单糖混合标准溶液依次稀释，得到浓度分别为100、50、25、5、2.5 mg/L的混合标准溶液，待衍生.1.2.4 单糖衍生化分别移取单糖混合标准溶液和多糖水解液各200 μL于离心管，加入0.3 mol/L NaOH溶液200 μL，漩涡混匀后加入0.5 mol /L PMP甲醇溶液200 μL，盖好塞子，置于70 ℃烘箱中反应100 min，反应完毕后取出至室温放置10 min，加入0.3 mol/L HCl溶液200 μL中和至pH=6，混匀后加入三氯甲烷2 mL，充分涡旋后静置、分层，丢弃三氯甲烷层(下层液)，重复萃取3次，将得到的水相用0.45 μm滤膜过滤后供HPLC进样分析.1.2.5 色谱条件美国Agilent 1 260高效液相色谱仪，ZORBAX Eclispe XDB-C18柱(4.6×150 mm，5 μm)；柱温35℃；流动相为pH=6.8、浓度为0.05 mol/L的磷酸盐-乙腈(体积比85:15)缓冲液；流速为1.0 mL/min；检测波长250 nm；进样量10 μL.2.1 生长曲线三种细菌的生长曲线如图1所示：由图1可知，硅酸盐细菌0～20 h为迟缓期，此后进入对数期，60 h进入稳定期.金黄色葡萄球菌 2 h进入对数期，14 h左右开始进入稳定期，大肠杆菌也是2 h 进入对数期，6 h左右进入稳定期，因此，确定硅酸盐细菌稳定期培养时间为60 h，金黄色葡萄球菌稳定期培养时间为14 h，大肠杆菌稳定期培养时间为14 h. 2.2 混合标准单糖的分离单糖标准色谱图如图2所示，实验所选8种单糖均得到了很好的分离，每种单糖都有较明显的峰.对色谱图进行分析，由表1可知，单糖浓度与峰面积呈现较好的线性关系，线性相关系数均大于0.99.2.3 细菌胞外多糖中单糖组分的分析对比标准曲线，对三株细菌稳定期胞外单糖进行了色谱分析.部分结果如图2所示.在图谱中每种单糖都有较为明显的峰，与标准曲线对照可以清晰地分辨出已知单糖.由于培养基成分中也含有糖类，故实验中也同时测定了牛肉膏蛋白胨培养基的单糖成分，如图3.最终多糖成分分析结果总结于表2.由表2可知，硅酸盐细菌胞外多糖中单糖组分为甘露糖和葡萄糖醛酸，金黄色葡萄球菌和大肠杆菌胞外多糖中单糖组分和含量出现了负值，是由于牛肉膏蛋白胨培养基中成分复杂，对此进行单糖成分分析时，发现培养基中含有单糖组分甘露糖、核糖、葡萄糖醛酸、葡萄糖和半乳糖，因此金黄色葡萄球菌和大肠杆菌胞外单糖组分和含量为其HPLC图谱上显示的单糖减去对照组中的单糖含量.单糖组分负值说明此两种细菌在生长过程中需要消耗单糖，而金黄色葡萄球菌和大肠杆菌中单糖的负值含量不同，表明此两种细菌需要的营养成分不同.金黄色葡萄球菌稳定期胞外单糖包括核糖和葡萄糖，大肠杆菌稳定期胞外单糖包括核糖和半乳糖醛酸，甘露糖、核糖和葡萄糖醛酸含量较多.环境中微生物能产生大量的胞外多聚物(EPS)，并利用EPS与外界直接接触进行各种物质交换及对环境变化做出相应反应，这些功能与EPS上的各种有机成分密切相关.为了解微生物与环境的相互响应，对于EPS的化学组成和结构则应进行深入研究.本实验利用反相-高校液相色谱对三种常见细菌的胞外单糖类进行了测定，并建立了有效的实验技术体系.本研究可以得出以下结论：不同细菌EPS中的单糖种类和含量均不相同.硅酸盐细菌胞外多糖中单糖成分有甘露糖和葡萄糖醛酸；金黄色葡萄球菌胞外多糖中单糖成分有核糖、葡萄糖，且在其生长过程中会消耗甘露糖、葡萄糖醛酸和半乳糖；大肠杆菌胞外多糖中单糖成分有核糖和半乳糖，且在其生长过程中会消耗甘露糖、葡萄糖醛酸、葡萄糖和半乳糖.【相关文献】[1] 倪丙杰,徐得潜,刘绍根,等.污泥性质的重要影响物质-胞外聚合物(EPS)[J].环境科学与技术,2006,29(3):108-110.[2] Ledin M.Accumulation of metals by microorganisms-processes and importance forsoil systems[J].Earth.Sci.Rev.,2000,51:1-31.[3] Andrews S C,Robinson A K,et al.Bacterial ironhomeostasis[J].Fems.Microbiol.Rev.,2003,27:215-237.[4] 蒲晓芬,胡涛,周学东，等.生物膜胞外聚合物的研究[J].国外医学:口腔医学分册,2005,32(5):339-341.[5] Liu H,Fang H P.Characterization of electrostatic binding sites of extracellular polymers by linear programming analysis of titration data[J].BiotechnolBioeng,2002,80:806-811.[6] Sponza D T.Extracellular polymer substances and physicochemical properties of flocs in steady and unsteady-state activated sludge systems[J].Process Biochem,2002,37:983-989.[7] Watling H R.The Bioleaching of Sulfide Minerals with Emphasis on Copper Sulphides-A Review[J].Hydrometallurgy,2006,84(1-2):81-108.[8] Sand W,Gehrke T.Extracellular Polymeric Substances MediateBioleaching/Biocorrosion Via Interfacical Processes Involving Iorn(Ⅲ) Ions and Acidophilic Bacteria[J].Research in Microbiology,2006,157(1):49-56.[9] Frolund B,Palmgren R,Keiding K,et al.Extraction of extracellular polymers from activated sludge using a cation exchang resin[J].Water Science andTechnology,1996,30(8):1749-1758.[10] Liu H,Fang H.Extraction of extracellular polymeric substances (EPS) ofsludge[J].Journal of Biotechnology,2002,95:249-256.[11] 连宾.硅酸盐细菌GY92对伊利石的释钾作用[J].矿物学报,1998,18(2):234-237.[12] 连宾，陈骏，傅平秋．微生物影响硅酸盐矿物风化作用的模拟试验[J].高校地质学报,2005，11(2):181-186.[13] 张蕾,赵春燕,祁丹，等.胶质芽孢杆菌(Bacillusmuilaginosus)胞外多糖的分离纯化[J].沈阳农业大学学报,2006,37 (5):779-781.[14] 王丽华,李元瑞,陈懿.姬松茸多糖脱蛋白方法的研究[J].食品科技,2003(1):18-26.[15] 刘晓杰,焦连庆,杨利民.蜜环菌多糖的分离纯化及PMP衍生化HPLC分析[J].中国药师,2012,15(4):448-451.[16] Hasim K,Serkan S,Ahmet C,et al.HPLC determination of organic acids, sugars, phenolic compositions and antioxidant capacity of orange juice and orange wine made from a Turkish cv.SKozan[J].Microchemical Journal,2009,91:187-192.。

高效液相色谱法测定食品中的单糖_双糖

高效液相色谱法测定食品中的单糖、双糖刘玉峰１，李　黎１，李　东１，王　晶２，方　向２，吴方迪２（１．北京市营养源研究所分析室，北京１０００６９；２．国家标准物质研究中心，北京１０００１３）摘要：　本文建立了高效液相色谱法定量测定食品中的单糖、双糖，确定的色谱条件如下：Ｗａｔｅｒｓ　ＮＨ２　氨基色谱柱（２５０ｍｍ×４．６ｍｍ），乙腈：水　８５：１５（Ｖ／Ｖ）为流动相，流速１．０ｍｌ／ｍｉｎ，示差折光检测器，４０℃柱温，进样量１０μｌ，外标法定量。

该方法的精密度ＲＳＤ＜５％，回收率大于９７％。

在此色谱条件下２０ｍｉｎ内完成了单糖、双糖的分离，结果比较理想。

研究表明此新建方法准确而快速，并能适用于多数食品中单糖、双糖的测定。

关键词：高效液相色谱；单糖、双糖；食品Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｍｏｎｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅ　ａｎｄ　Ｄｉｓａｃｃｈａｒｉｄｅ　ｉｎ　Ｆｏｏｄｓ　ｂｙ　ＨＰＬＣ　ＭｅｔｈｏｄＬＩＵ　Ｙｕ－ｆｅｎｇ１，ＬＩ　Ｌｉ１，ＬＩ　Ｄｏｎｇ１，ＷＡＮＧ　Ｊｉｎｇ２，ＦＡＮＧ　Ｘｉａｎｇ２，ＷＵ　Ｆａｎｇ－ｄｉ２（１．Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ，　Ｂｅｉｊｉｎｇ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ　ｆｏｒ　Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎａｌ　Ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ，　Ｂｅｉｊｉｎｇ１０００６９，　Ｃｈｉｎａ；２．Ｎａｔｉｏｎａｌ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　Ｃｅｎｔｅｒ　ｆｏｒ　Ｓｔａｎｄａｒｄ　Ｓｕｂｓｔａｎｃｅｓ，　Ｂｅｉｊｉｎｇ１０００１３，　Ｃｈｉｎａ）Ａｂｓｔｒａｃｔ　：ＨＰＬＣ　ｍｅｔｈｏｄ　ｗａｓ　ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ　ｔｏ　ｄｅｔｅｒｍｉｎｅ　ｔｈｅ　ｍｏｎｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅ　ａｎｄ　ｄｉｓａｃｃｈａｒｉｄｅ　ｉｎ　ｆｏｏｄｓ．　Ｔｈｅ　ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｉｃｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ　ａｒｅ　ａｓ　ｂｅｌｏｗｓ：　Ｗａｔｅｒｓ　ａｍｉｎｏ　ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｉｃ　ｃｏｌｕｍｎ　ｗｉｔｈｒｅｆｒａｃｔｉｖｅ　ｉｎｄｅｘ　ｄｅｔｅｃｔｏｒ，　ｅｌｕｔｉｏｎ　ｉｎｆｌｕｅｎｔ　ｍｅｔｈａｎｅ：ｗａｔｅｒ（Ｖ／Ｖ）８５：１５，　ｆｌｏｗ　ｒａｔｅ　１．０ｍｌ／ｍｉｎ　ａｎｄ　ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ　ｖｏｌｕｍｅ　１０μｌ．　Ｔｈｅ　ｒｅｐｅａｔａｂｉｌｉｔｙ　ｒｅｌａｔｉｖｅ　ｓｔａｎｄａｒｄ　ｄｅｖｉａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｉｓ　ｍｅｔｈｏｄ　ｉｓ　ｂｅｌｏｗ５％　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｒｅｃｏｖｅｒｙ　ｉｓ　ｏｖｅｒ　９７％．　Ａ　ｓａｔｉｓｆｓａｃｆｏｒｙ　ｒｅｓｕｌｔ　ｉｓ　ｏｂｔａｉｎｅｄ　ｕｎｄｅｒ　ｔｈｅｓｅ　ｏｐｔｉｍｕｍ　ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ，　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｗｈｏｌｅ　ｓｅｐａｒａｔｉｏｎｃａｎ　ｂｅ　ｆｉｎｉｓｈｅｄ　ｗｉｔｈ　ｉｎ　２０ｍｉｎ．　Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ　ｔｈｉｓ　ｎｅｗ　ＨＰＬＣ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｍｅｔｈｏｄ　ｉｓ　ｂｏｔｈ　ｃｏｒｒｅｃｔ　ａｎｄ　ｆａｓｔ　ｅｎｏｕｇｈ　ｔｏ　ｂｅｕｓｅｄ　ｉｎ　ｍｏｓｔ　ｋｉｎｄｓ　ｏｆ　ｆｏｏｄｓ　ｃｏｎｔａｉｎｅｄ　ｍｏｎｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅ　ａｎｄ　ｄｉｓａｃｃｈａｒｉｄｅ．Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：ＨＰＬＣ；ｍｏｎｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅ　ａｎｄ　ｄｉｓａｃｃｈａｒｉｄｅ；ｆｏｏｄｓ中图分类号：Ｏ６５２．６３文献标识码：Ａ文章编号：１００２－６６３０（２００７）０３－０２９３－０４收稿日期：２００５－１２－１６作者简介：刘玉峰（１９７２－），女，助理研究员，硕士，主要从事食品营养成分分析检测的研究。

液相色谱测定单糖与二糖和低聚半乳糖的方法研究

科技资讯2017 NO.20SCIENCE & TECHNOLOGY INFORMATION工业技术108科技资讯 SCIENCE & TECHNOLOGY INFORMATION由于人体肠道内不具备分解消化低聚半乳糖的酶系统, 因而低聚半乳糖在体内不能被胃酸和胃酶降解, 故不能被消化吸收, 而是直接进入小肠内被有益菌尤其是双歧杆菌利用, 对人体发挥独特的生理功能,因此被定义为“益生元”,它能有效促进体内双歧杆菌的生长繁殖,改善脂质代谢,促进钙的吸收和维生素的合成,具有分解致癌物质、提高人体免疫力等功能。

1 实验部分1.1 仪器与材料仪器:高效液相色谱仪(美国安捷伦科技有限公司);电子天平AR3130(奥豪斯仪器(上海)有限公司);液相色谱柱分别为Zorbax Carbohydrate(4.6×150 mm,美国安捷伦科技有限公司)、氨基柱Aichrom-NH2(4.6×250 mm,美国Abel工业有限公司)和Sugar Pak Ι(4×300 mm,美国Waters公司)。

材料:葡萄糖、乳糖由美国sigam公司提供,低聚半乳糖(其中含半乳三糖、四糖和五塘)由烟台华海生物制品有限提供。

1.2 实验方法1.2.1 色谱柱的选择各种糖组分的含量分析采用高效液相色谱法。

色谱系统为美国安捷伦公司提供的Agilent 1200,色谱柱分别为Zorbax Car-bohydrate(4.6×150 mm,美国安捷伦公司)、氨基柱Aichrom-NH2(4.6×250 mm,美国Abel工业有限公司)和Sugar Pak Ι(4×300 mm,美国Waters公司)。

如果没有特别说明,则色谱条件为:G1362A 示差折光检测器,流速1.0 mL/min,进样量20 μL,柱温25 ℃,前面两种柱子采用乙腈与水的混合液为流动相,调整流动相组成使其达到最佳分离效果;Sugar PakⅠ的流动相为双蒸蒸馏水。

苎麻水解液中单糖类组分的柱前衍生-高效液相色谱法检测

苎麻水解液中单糖类组分的柱前衍生-高效液相色谱法检测冯湘沅;成莉凤;段盛文;谭志坚;郑科;刘正初【摘要】为加速苎麻纤维的合理开发和应用,建立了一套苎麻单糖类组成的分析方法.利用三氟乙酸水解苎麻,1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮柱前衍生水解产物,采用C18色谱分析柱和紫外检测器检测苎麻水解产物中的单糖类组成.结果表明:苎麻水解率可达90％,水解产物包括葡萄糖、鼠李糖、半乳糖醛酸、甘露糖、半乳糖、木糖等已知组分及少量未知组分,其中葡萄糖为主要组分,占已知单糖类总量的83.86％～86.54％;各单糖类组分的标准曲线线性相关系数为0.9996 ～0.9999,精密度均在2.02％以下,加样回收率为96.53％～102.76％.该方法能满足仪器检测要求,适用于分析苎麻水解产物中的单糖类组分.【期刊名称】《纺织学报》【年(卷),期】2015(036)012【总页数】4页(P16-19)【关键词】柱前衍生-高效液相色谱法;苎麻水解液;苎麻纤维;单糖类组成【作者】冯湘沅;成莉凤;段盛文;谭志坚;郑科;刘正初【作者单位】中国农业科学院麻类研究所,湖南长沙410205;中国农业科学院麻类研究所,湖南长沙410205;中国农业科学院麻类研究所,湖南长沙410205;中国农业科学院麻类研究所,湖南长沙410205;中国农业科学院麻类研究所,湖南长沙410205;中国农业科学院麻类研究所,湖南长沙410205【正文语种】中文【中图分类】TQ340.7;TQ340.4苎麻纤维是我国的重要纺织原料［1］，其纤维化学成分主要为纤维素，同时含有半纤维素、果胶、木质素等伴生物，这些物质在适当条件水解后，变成甘露糖、鼠李糖、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、木糖等单糖类组分，而各单糖类组分含量是最重要的基础数据之一［2－3］。

目前，对苎麻组成成分的分析方法仅限于单一法［4－5］，本文结合柱前衍生技术，探讨了高效液相色谱法快速、准确地分离、鉴定与检测苎麻水解产物中的单糖类组分及含量［6－8］，旨在为苎麻等草本植物纤维综合开发利用研究［9］提供科学参考。

柱前衍生化高效液相色谱法测定当归酸性多糖单糖组成的新方法

柱前衍生化高效液相色谱法测定当归酸性多糖单糖组成的新方法李卫燕;李萍;曹蔚【摘要】首次建立柱前衍生化高效液相色谱法分析当归酸性多糖中糖醛酸、氨基糖和中性糖的方法.D-甘露糖、D-葡萄糖胺、L-鼠李糖、D-半乳糖胺、D-葡萄糖醛酸、D-半乳糖醛酸、D-葡萄糖、D-半乳糖、L-阿拉伯糖和D-岩藻糖等10种单糖经柱前衍生化法处理后作为标准品.色谱条件:Hypersil BDS C18色谱柱(4.6 mm i.d.×250 mm,5μm),流动相由乙酸铵水溶液(100 nmol/L,pH =5.0)、乙腈和四氢呋喃以81:17:2的体积比组成,流动相流速1.0 mL/min,检测波长250 nm,柱温25℃.实验结果表明,当归酸性总多糖是由D-甘露糖、D-葡萄糖胺、L-鼠李糖、D-半乳糖胺、D-葡萄糖醛酸、D-半乳糖醛酸和D-葡萄糖以1.5:14.1:1.7:1.6:2.0:2.3:1.0的摩尔比例组成.【期刊名称】《科学技术与工程》【年(卷),期】2015(015)010【总页数】4页(P151-154)【关键词】当归;多糖;高效液相色谱;柱前衍生化;单糖【作者】李卫燕;李萍;曹蔚【作者单位】第四军医大学药学系天然药物学教研室,西安710032;第四军医大学药学系天然药物学教研室,西安710032;第四军医大学药学系天然药物学教研室,西安710032【正文语种】中文【中图分类】R284.2中药当归是伞形科植物当归Angelicasinensis(Oliv.) Diels的干燥根，主产于甘肃岷县，为常用中药，具有补血活血、调经止痛、润肠通便的功效。

近十几年来，经过国内外学者的研究，发现多糖是当归的主要成分之一[1]。

药理学研究表明，当归多糖具有抗血栓及改善血液流变、保护心血管系统、抑菌、抗肿瘤、保护肺部组织细胞、利胆保肝、补血等生物活性[2]。

多糖的单糖组成分析是控制多糖质量和分析多糖结构的重要环节。

法测定黄芪多糖中单的糖组成及摩尔比

HPLC-ELSD 法测定黄芪多糖中单的糖组成及摩尔比陈卫平陈琴鸣刘斌（丽水市食品药品检验所，浙江丽水323000）摘要目的：用HPLC-ELSD测定黄芪中多糖单糖组成及摩尔比测定。

方法：采用Agilent XDB-C18柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)，柱温25 ℃；流动相为乙腈-水（80：20），流速0.8 mL·min-1；漂移管温度83.5 ℃，载气（N2）流速2.2L·min-1。

结果：鼠李糖（Rha ）Y=1.3583x+5.2624, r = 0.9992, 线性范围：0.1634～1.634μg、阿拉伯糖（Ara）Y=1.2533x+3.9617, r = 0.9992 线性范围：0.3818～3.8176μg、木糖（Xyl ）Y=1.3051x+5.7616 r = 0.9994 线性范围：0.1681～1.681μg、甘露糖（Man）Y=1.1817x+4.8772 r = 0.9918 线性范围：0.1604～1.604μg、半乳糖（Gal）Y=1.2622x+4.9182 r = 0.9952 线性范围：0.1634～1.634μg、葡萄糖（Glc）Y=1.3181x+7.4172 r = 0.9994 线性范围：0.1604～1.604μg、葡萄糖醛酸（Glc A）Y=1.2661X+0.2196 r = 0.9967 线性范围：11.64～116.4μg各个范围内呈良好的线性关系, 摩尔比Glu A :Rha: Ara: Gal: Glc 25.4∶0.03∶0.07∶0.08∶1。

结论：本方法灵敏、简便、准确。

关键词：HPLC-ELSD；黄芪多糖；单糖组成；摩尔比；鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、半乳糖、葡萄糖、葡萄糖醛酸黄芪为豆科植物膜荚黄芪[Astragalus membranaceus(Fisch.) Bge.]或蒙古黄芪[Astragalus membranaceus (Fisch.)Bge. var. mongholicus(Bge.)Hsiao] ，具补中益气、升阳固表、托毒生肌、利水退肿之功[1]。