实验2-小鼠精子畸形试验-20121025

在某些化学毒物、特别是可引起生殖细胞遗 传性损伤的化学毒物作用下，睾丸产生的畸 形精子数量大增。因此可用检测雄性动物接 触化学毒物后精子畸形率的高低,来反映该 化学毒物的生殖毒性和对生殖细胞的潜在的 致突变性。

化学毒物引起精子畸形的机制尚未完全清 楚。一般认为，常染色体上的基因控制精 子畸形，Y-性连锁基因控制畸形精子的表 现。某些特异的染色体重排，如性、常染 色体易位，是化学毒物诱发哺乳动物畸形 率增高的主要机制。
制
颈椎脱臼 处死小鼠 取双侧 附睾
片
3ml磷酸盐 剪碎附睾 缓冲液
擦镜纸 过滤
取悬液滴于 玻片上推片
甲醇固定5 分钟
伊红染色30分钟
（五）阅片

首先在低倍镜下选择背景清晰、精子分布 均匀、重叠较少的区域，然后在高倍镜下 观察结构完整的500个精子，计数其中畸 形的精子数。
五、结果分析与评价

精子畸形有可能影响生殖。因此，当 受检物引起精子畸形率增高，即使不 一定是化合物诱发生殖细胞突变的结 果，但也表明受试物直接或间接损害 精子，从而可能影响生殖。
mouse
human
三、实验材料剂
1. 实验动物 体重25~35g小鼠。 2. 实验器材 眼科手术剪、眼科镊子、玻璃平皿、 显微镜、纱布、吸管、漏斗、小烧 杯、计数器等 3. 试剂 磷酸盐缓冲液、甲源自文库、伊红染液

精子畸形形态观察 无钩、香蕉形、无定形、双头、 胖头、 折尾、双尾 计算精子畸形的发生率（头部重叠或全部 重叠的精子、无尾精子不进行计数）。


注意鉴别制片过程中人为造成的精子损伤。
正常精子
胖头精子
双头精子
双尾精子
双尾精子
双尾精子
香蕉形精子
人类精子
Thanks!
四、操作步骤
（一）动物选择 （二）剂量与分组 （三）染毒与采样 （四）制片 （五）阅片
（四）制片
颈椎脱臼法处死小鼠，剪开腹腔，分离并摘取 双侧附睾，将附睾放入盛有约3ml磷酸盐缓冲液或 生理盐水的小平皿中，以眼科剪将附睾剪成小 块，用吸管将悬浮液轻轻吹打5～6次，静置3～ 5min，用四层擦镜纸滤除组织碎片，吸取此精子 悬液滴于清洁载玻片上，均匀推片，待玻片晾干 后用甲醇固定5min，干燥后（此时也可镜检观察 精子形态）再用1%的伊红醇溶液染色1～2h（或 30min），流水冲洗，晾干后镜检。
一、目的

精子畸形试验是检测受试化学毒物 能否破坏哺乳动物精子正常形态的 实验方法 通过该实验，学习和掌握小鼠精子 畸形试验的原理和步骤

二、原理

精子畸形是指精子的形状异常和异常精 子数量的增多; 生殖系统对化学毒物的作用十分敏感, 在其它系统还未出现毒性反应之前，生 殖系统可能已出现损害作用;