高效液相色谱法测定金银花提取物中绿原酸的含量_刘磊
高效液相色谱法测定金银花含片中绿原酸含量
高效液相色谱法测定金银花含片中绿原酸含量摘要提供色谱柱为Spherigel C18色谱柱（200mm×4.6mm，5μm）、流动相为乙腈-1.0%醋酸水、检测波长327nm等色谱条件，建立了高效液相色谱法测定金银花含片中绿原酸含量的方法。
在该色谱条件下，绿原酸的含量在1.56~25μg/mL范围内线性关系良好，相关系数r=0.999 2，加样回收率为99.7%，RSD为2.63%（n=5），最低检出限为0.05μg/mL。
结果表明，该方法操作简单，分离度好，适用于金银花含片中绿原酸含量的测定。
关键词高效液相色谱法（HPLC）；绿原酸；金银花含片金银花（Flos lonicerae）为忍冬科（Caprifoaceae）忍冬属（Lonicera）植物[1]。
金银花的活性成分之一为绿原酸（结构式见图1）。
绿原酸为咖啡酰奎尼酸衍生物，由奎尼酸和咖啡酸缩合而成，易溶于甲醇、乙醇、丙酮等极性溶剂，微溶于乙酸乙酯，难溶于三氯甲烷、乙醚、苯等亲脂性溶剂，是一种重要的生理活性物质。
绿原酸为抗菌消炎的主要成分，对金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌、痢疾球菌、伤寒杆菌、肺炎球菌有显著的抑制作用；有抗病毒、升高白细胞、保肝利胆、抗肿瘤、降血压、降血脂、清除自由基等作用；与人体血小板凝集和凝血因子的生成有关，还具有抗生育作用及对免疫系统的调节作用[2]。
本文采用高效液相色谱法，对金银花含片中绿原酸的含量进行测定，以期提高金银花含片质量标准可控性，为进一步完善其质量标准提供试验依据。
1仪器与试药1.1仪器DionexAT330（美国）高效液相色谱仪：由P680四元泵、UVD170U紫外检测器和AT330恒温箱组成；KQ 3200 B型超声波清洗仪（昆山市超声仪器有限公司生产）。
1.2材料与试剂金银花含片（河北省某厂生产）；绿原酸标准品（购自中国药品生物制品检定所）；甲醇、丙酮、无水乙醇、磷酸均为分析纯、乙腈为色谱纯，二次蒸馏水。
高效液相色谱法测定金银花提取物中绿原酸的含量
高效液相色谱法测定金银花提取物中绿原酸的含量【摘要】目的建立金银花提取物中绿原酸含量的HPLC测定方法。
方法国产C18柱（4.6 mm×250 mm，7 μm）;流动相为乙腈：0.4%磷酸（12∶88）；检测波长为327 nm；流速1 ml・min-1；进样量10 μl；柱温25℃。
结果绿原酸在0.071 6～0.644 4 μg范围内线性关系良好，r=0.999 6；平均回收率99.99%，RSD=1.61%（n=6）。
结论该方法简便、快速、准确，可用于金银花提取物的含量测定及质量控制。
【关键词】金银花提取物；绿原酸；高效液相色谱法AbstractObjectiveTo establish a method for the determination of Chlorogenic acid in the extract of Flos Lonicerae.MethodsThe chromatographic conditions were as follows: C18 chromatographic column (4.6 mm×250 mm，7 μm)，a mobile phase of acetonitrile and 0.4%H3PO4(12:88)，the detection wavelength at 327 nm and the flow rate being 1 ml・min-1. ResultsA linearity of Chlorogenic acid in the extract was obtained in the range of 0.071 6～0.644 4 μg r=0.999 6(n=6).The average recovery was 99.99% and RSD=1.61%(n=6). ConclusionThis method is easy，sensitive and accurate for the determination of Chlorogenic acid in the extract of Flos Lonicerae.Key wordsChlorogenic acid; HPLC; Determination金银花Flos Lonicerae又名忍冬、双花，为临床常用中药，具有清热解毒、凉散风热之功效，主治痈肿疔疮、喉痹、丹毒、热毒血痢、风热感冒、温病发热等［1］。
高效液相色谱蒸发光散射检测法测定金银花中绿原酸和木犀草苷的含量
高效液相色谱-蒸发光散射检测法测定金银花中绿原酸和木犀草苷的含量【摘要】目的建立高效液相色谱-蒸发光散射检测（HPLC-ELSD）法测定金银花中绿原酸及木犀草苷的方法。
方法采用Chromasil C18色谱柱(4.6 mm×250 mm，5.0μm)为色谱柱，用乙腈(A)-0.5%冰醋酸(B) 为流动相梯度洗脱，以蒸发光散射检测器检测绿原酸和木犀草苷。
梯度程序为：0 min(A：10%，B：90%)→16 min(A：25%，B：75%)→22 min(A：50%，B：50%)；流速1.0 ml・min-1；检测器漂移管温度110℃ ，载气流速3.0 ml・min-1。
结果绿原酸及木犀草苷的回归方程分别为：lgA=1.34lgm + 4.360，r=0.999 5；lgA =1.653lgm + 5.327，r=0.999 6。
线性范围分别为5.0～45 μg和0.4～3.6 μg；平均回收率分别为99.94%(RSD=1.43%，n=5)和100.85%(RSD=1.78%，n=5)。
结论该方法操作简便、结果准确，专属性强，分离效果和重现性好，可有效缩短总分析时间。
为较全面控制金银花药材的质量控制提供了简便可靠的方法。
【关键词】金银花绿原酸木犀草苷高效液相色谱-蒸发光散射检测器含量测定Abstract:ObjectiveTo develop a method for determination of chlorogenic acid(ChA) and galuteolin(Gal) in Flos LoniceraeJaponicae.MethodsAn HPLC equipped with ELSD method was applied to quantify chlorogenic acid and galuteolin．The analytical column was Chromasil C18(4.6 mm×250 mm，5.0μm)with the temperature of 30℃. The chromatogram for the ChA and Gal was developed on a gradient phase. Two solution were acetonitrile(A) and 0.5 % acetic acid solution and the gradient mode was as follows：0 min(A：10%，B：90%)→16min(A:25%，B:75%)→22 min(A：50%，B：50%). The flow rate was 1.0 ml・min-1．The temperature of drift tube was set at 110℃ and the flow rate of gas maintained at 3.0 ml・min-1．ResultsThe calibration curves of ChA and Gal were linear in the range of 5.0～45 μg and 0.4～3.6 μg，and the average recoveries were 99.94%(RSD was1.43%) and 100.85%(RSD was 1.78%) respectively．ConclusionThe method is accurate，specific，and can shorten the total analytical time of Flos Lonicerae Japonicae．Key words:Flos Lonicerae Japonicae； Chlorogenic acid；Galuteolin； HPLC-ELSD； Determination金银花为忍冬科植物忍冬Lonicera japonica Thunb.，红腺忍冬L. hypoglauca Miq.，山银花L. confusa DC.，或毛花柱忍冬L. dasystyla Rehd.的干燥花蕾或带初开的花［1］。
金银花中绿原酸和木犀草苷的同时提取及测定研究
金银花中绿原酸和木犀草苷的同时提取及测定研究王海侠;汪玮鑫;时维静;郜尽【摘要】Objective： To optimalize the extracting conditions of chlorogenic acid and galuteolin from Flos lonicerae, and develop one method for the content determination of chlorogenic acid and galuteohn. Methods： Through designing a L9 （34） orthogonal test to screen the best extracting parameters and extract chlorogenic acid and galuteolin in Flos lonicerae of the five different production regions under the condition. Then a HPLC method was dopted to determine the content of those samples. Results： Orthogonal experiment demonstrated that the best extracting conditions included solution of 35mL 50% ethanol and extracting time of one hour at 70~C. HPLC method： the mobile phase was 0.5% acetic acid and methanol, gradient elution separation,and detect at wave- length 350nm. A good linearity of chlorogenic acid and galuteolin was within the range of 0.2 - 1.6 ug and 0.2 -2.2 ug respectively, and the linear equations was y = 1 x 106x - 806 7 and y = 4 x 106x - 119 017, with regression coefficient 0. 999 9 and 0. 999 7. The precision, reproducibility, recovery of the method were all proved perfect. The four content of the chlorogenic acid and galuteolin of the five different production regions are higher than the required standard of Chinese Pharmacopoeia.%目的：优化金银花样品中绿原酸和木犀草苷提取工艺，并建立两者含量同时测定的方法。
高效液相色谱法测定银翘解毒颗粒中绿原酸含量
高效液相色谱法测定银翘解毒颗粒中绿原酸含量冯兵;钱妍【摘要】Objective To determine the content of chlorogenic acid in Yinqiaojiedu Particles hy HPLC. Methods The analytical column was Kromasil KR100 - 5C ( 250 mm × 4. 6 mm, 5 μm), mobile phase was acetonitrile - 0. 4％phosphoric acid ( 11 ∶ 89). column temperature was 25 ℃ , the detection wavelength was 327 nm. Results The chlorogenic acid concentration was linear within the range of 0. 064 5 -0. 516 0 μg( r = 1. 000 0), the average recovery rate was 100. 87％ , RSD = 1. 98％ ( n =7). Conclusion This method is simple, quick and accurate, and can be used for quality control of Yinqiaojiedu Particles.%目的建立测定银翘解毒颗粒绿原酸含量的高效液相色谱法.方法色谱柱为Kromasil KR100-5C柱(250mm×4.6mm,5 μm),流动相为乙腈-0.4%磷酸溶液(11∶89),柱温25℃,检测波长327 nm.结果绿原酸的检测进样量在0.064 5～0.516 0μg范围内与峰面积呈良好的线性关系(r=1.000 0),平均加样回收率为100.87%,RSD=1.98%(n=7).结论所用方法简单、快捷准确,可作为银翘解毒颗粒的质量控制方法.【期刊名称】《中国药业》【年(卷),期】2011(020)011【总页数】2页(P19-20)【关键词】高效液相色谱法;银翘解毒颗粒;绿原酸;含量测定【作者】冯兵;钱妍【作者单位】重庆市急救医疗中心药剂科,重庆,400014;重庆医科大学第二附属医院药剂科,重庆,400010【正文语种】中文【中图分类】R284.1;R286.0银翘解毒颗粒由金银花、连翘、牛蒡子等9味中药组方，具有疏风解表、清热解毒的功效，用于治疗风热感冒、发热头痛、咳嗽、口干、咽喉疼痛，临床疗效良好[1]。
高效液相色谱法测定银黄注射液中绿原酸的含量
高效液相色谱法测定银黄注射液中绿原酸的含量
税丕先;田吉
【期刊名称】《中国药业》
【年(卷),期】2004(13)8
【摘要】目的:改进银黄注射液中绿原酸的含量测定方法.方法:采用高效液相色谱法(HPLC法)测定绿原酸含量,以甲醇-0.2%醋酸(60:40)为流动相,检测波长为326 nm.结果:平均回收率为97.14%,RSD为1.32%(n=6).结论:高效液相色谱法操作简便、准确、重现性好,可作为银黄注射液质量控制方法.
【总页数】1页(P39)
【作者】税丕先;田吉
【作者单位】泸州医学院药学院,四川,泸州,646000;泸州医学院药学院,四川,泸州,646000
【正文语种】中文
【中图分类】R284.1
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徐妮娜;周庆颂
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高效液相色谱法测定双黄连栓中金银花的绿原酸含量
高效液相色谱法测定双黄连栓中金银花的绿原酸含量刘频健1,陈剑1,王哓一2 (1.江西九江学院基础医学院,江西九江332000;2.江西天一药业有限公司,江西南昌330029)摘要 [目的]建立双黄连栓中绿原酸含量的HP LC测定方法。
[方法]色谱柱为D iamonsil C185μm(250mm×4.6mm)色谱柱,流动相为甲醇–水–冰醋酸–三乙胺(15.0∶85.0∶1.0∶0.3),检测波长为324n m,流速为1.2m l/m in,进样量为20μl,柱温25℃,在该条件下测定双黄连栓中金银花的绿原酸含量。
[结果]试验条件下,绿原酸在0.2～0.6μg范围内线性关系良好,r=0.9987;样品在5h内稳定;平均回收率99.6%,RSD=0.8%(n=6)。
[结论]该方法简便、快速、准确,可用于双黄连栓的含量测定及质量控制。
关键词 双黄连栓;绿原酸;高效液相色谱法中图分类号 Q6577+2 文献标识码 A 文章编号 0517-6611(2009)24-11547-02Chlorogen i c Ac id Contents of Honeysuckle i n Shuanghuangli a n Suppository D eterm i ned by HP LCL I U P i n2ji a n et al (Basic Medical College,Jiangxi Jiujiang University,Jiujiang,Jiangxi332000)Abstract [Objective]T o establish a method f or the deter m ination of Chlorogenic acid content in Shuanghuanglian suppository.[Method]Thechromat ographic colu mn was D iamonsil C185μm(250mm×4.6mm),The mobile phase was methanol2water2glacial acetic acid2triethyl2 am ine(15.0∶85.0∶1.0∶0.3),the detection wave length at324n m and the flow rate was1.2m l/m in.[Result]Chl or ogenic acid had a good re2 lationship in the range of0.2～0.6μg,r=0.9987.The average recovery was99.6%and RSD=0.8%(n=6).[Conclusion]This method is easy,sensitive and accurate f or the content deter m inati on of Shuanghuanglian suppository and quality contr ol.Key words Shuanghuanglian supposit ory;Chlor ogenic acid;HP LC 双黄连栓具有清热解毒,轻宣风热的疗效,用于外感风热、发热、咳嗽、咽痛、上呼吸道感染及肺炎等症状的治疗。
高效液相色谱法测定复方金银花颗粒中绿原酸含量
高效液相色谱法测定复方金银花颗粒中绿原酸含量胡生俊;徐岳鑫;董赛文;张雪峰【摘要】目的建立测定复方金银花颗粒中绿原酸含量的高效液相色谱法.方法采用Agilent Tc-C-s色谱柱(150mm ×4.6mm,5μm),流动相为乙腈-0.4%磷酸溶液(13:87),检测波长327 nm,流速1.0 mL/min,柱温25℃.结果绿原酸进样量在0.2～10μg范围内与峰面积线性关系良好.平均回收率为98.71%,RSD为0.84%(n=9).结论高效液相色谱法简便、快速、准确,可用于复方金银花颗粒中绿原酸的含量测定.【期刊名称】《中国药业》【年(卷),期】2011(020)003【总页数】1页(P23-23)【关键词】复方金银花颗粒;绿原酸;高效液相色谱法;含量测定【作者】胡生俊;徐岳鑫;董赛文;张雪峰【作者单位】江苏省宿迁市药品检验所,江苏,宿迁,223800;江苏省宿迁市药品检验所,江苏,宿迁,223800;江苏省宿迁市药品检验所,江苏,宿迁,223800;江苏省宿迁市药品检验所,江苏,宿迁,223800【正文语种】中文【中图分类】R284.1;R286.0复方金银花颗粒是临床上常用的感冒、喉痹类非处方药，由金银花、连翘、黄芩3味药制成，具清热解毒、凉血消肿功效。
绿原酸是金银花的主要有效成分，具有广谱抗菌、抗病毒、抗肿瘤、增强免疫及解热抗炎、利胆、保肝、降脂、抗生育、止血、抗溃疡等多种药理作用[1]。
现行检验标准中只有金银花主要成分绿原酸的化学鉴别方法[2]，不但专属性差，且无法控制其含量，笔者采用高效液相色谱法测定复方金银花颗粒中绿原酸的含量，以更好地控制药物质量，现报道如下。
1 仪器与试药Agilent 1100型高效液相色谱仪(美国安捷伦);AUW 120 D型电子天平(日本岛津);SK 8200 LH型超声仪(上海科导超声仪器有限公司)。
复方金银花颗粒(市售品);绿原酸对照品(中国药品生物制品检定所，批号为110753－200413);乙腈为色谱醇，水为重蒸水，其他试剂为分析醇。
HPLC法测定金银花中绿原酸含量研究
一、 材料与方法
( 一) 材料与试剂
Ａｉｇｅｔｎｔｌｌ００ 型高相液相色谱仪ꎬｍｅｔｔｌｅｒ ｔｏｌｅｄｏ 电子天平ꎬ
高速粉碎机以及数控超声波清洗仪器ꎮ
中国食品药品检定研究院生产的绿原酸ꎬ类别为化学对
照品( 百分含量为 ９８.６％ ) ꎬ批号为 １１０７５３－２０１８１７ꎻ湖北九洲
康达生物科技有限公司生产的金银花( 批号:２０１７０１０８ꎬ批号
较好ꎮ
７. 回收率试验分析
准确称取 ６ 份 １.０ｇ 的金银花ꎬ然后加入已知量的对照
品ꎬ根据 １.２.３ 方法完成供试品配制ꎬ通过 １.２.１ 条件完成测
定ꎬ计算总体回收率ꎬ加样回收率 ９９.９１％ ꎬＲＳＤ 值 １.３０ꎮ
８. 样品含量测定
选择三种生产批次金银花粉末ꎬ称量 １０.０ｇꎬ根据 １. ２. ３
１５μｌꎮ 结果:线性回归方程 Ｙ ＝ ２.６３５×１０６Ｘ－０.７６２×１０６( ｒ ＝ ０.９９９２) ꎬ线性关系良好范围:质量浓度 ４.５７ ~ ３６.６０μｇ / ｍＬꎬ加样回收率
９９.９１％ ꎬ稳定性相对标准偏差( ＲＳＤ) 值 １.３０ꎮ 结论:ＨＰＬＣ 法可用于金银花中绿原酸含量测定ꎬ且操作简单ꎬ重复性操作稳定性
同步测定ꎮ
综上所述ꎬＨＰＬＣ 法可用于金银花中绿原酸含量测定ꎬ且
操作简单ꎬ重复性操作稳定性好ꎬ能够为中药金银花的质量
管理提供依据ꎮ
参考文献:
原酸含量测定ꎬ依据重复性试验与稳定试验分析证实了测定
方法具有可靠的稳定性与重复性ꎮ 最终测定结果显示不同
批次金银花在绿原酸含量方面略有差异ꎬ这与范婉思等学者
文献研究结论相符ꎮ
董珊等指出 ＨＰＬＣ 法能够同时测定金银花等样品中 ６
金银花中绿原酸的提取及含量测定
经验交流96 2015年19期金银花中绿原酸的提取及含量测定陆美斐1张立康21.浙江大学医学院附属儿童医院，浙江杭州 3100032.温州医科大学第一临床医学院，浙江温州 325035摘要：目的：提取纯化金银花中的绿原酸，并进行含量测定。
方法：采用大孔吸附树脂，对金银花提取物中的绿原酸进行分离纯化，采用高效液相色谱法对金银花中绿原酸进行含量测定。
结果金银花中绿原酸的平均含量为4.31 %，纯化物中绿原酸的平均含量达16.26 %，绿原酸在0.56～2.32 μg/mL范围内线性关系良好，平均回收率为99.8 %。
结论：运用大孔树脂分离纯化绿原酸，简单易行；采用高效液相色谱法对金银花中绿原酸进行含量测定方法精确，重复性好。
关键词：金银花；绿原酸；提取；含量测定中图分类号：R284 文献标识码：A 文章编号：1671-5837（2015）19-0096-01金银花是临床应用十分广泛的一种中药材，其具有凉散风热、清热解毒之功效，也是民间的常用药物。
金银花的主要药物成分包括黄酮化合物、双花醇、异绿原酸、绿原酸、芳樟醇等，其在病毒感染、细菌感染、肿瘤疾病方面，均具有较高的药用价值，同时也对生殖系统、血液系统、消化系统疾病具有一定的疗效。
金银花含有的绿原酸在纯度、含量方面均较高，绿原酸也是衡量金银花质量高低的一个重要标准。
绿原酸具有广泛的用途，不仅作医用，还用作食品保鲜剂，以及化妆品的抗衰老剂。
因此，从植物中提取分离绿原酸具有重要的意义。
本文采用大孔吸附树脂，对金银花提取物中的绿原酸进行分离纯化，采用高效液相色谱法对金银花中绿原酸进行含量测定。
1 仪器与方法1.1 仪器与试药德国Heidolph LABOROTA4000型旋转蒸发仪，德国Heidolph RH-KT/C型磁力搅拌器，HITACHI L-2130型高效液相色谱仪，Kromasil C18色谱柱，Diamonsil ODS-C18，LD4-2型低速离心机；干燥金银花（购于本市药房），绿原酸对照品（中国药品生物制品检定所），D001大孔树脂（上海树脂厂），乙腈为色谱纯，甲醇、乙酸、盐酸、乙醇均为国产分析纯；水为双蒸水。
金银花中绿原酸的分离与测定新方法
金银花中绿原酸的分离与测定新方法蔡霄英刘永乐（长沙电力学院食品生物工程系长沙〃410015）摘要：对湖南益阳县黄蜂山所采金银花进行了提取、分离及组分鉴定，解决了绿原酸易分解的问题，得到纯度较高的绿原酸。
关键词：金银花；绿原酸；分解中图分类号：TS201.4 文献标识码：A 文章编号：1005-9989（2003）05-0104-03Separation and identify of the chlorogenicacid in Lonicera japonica thunbCAI Xiao-ying LIU Yong-le(Changsha University of Electric Power,Changsha,410015)Abstract: Carry thr ough separ ation, pur ification and identify. Chlorogenic acid w as isolated from lonicer a japonica thunb. It is collected from vespidhill in yiyang country, hunan prov ince.The problems of oxygenation and disassembly of chlorogenic acid is solved.Key words: lonicera japonica thunb; chlorogenic acid; disassembly0 前言金银花又名忍冬花、银花、双花、茶叶花等，为忍冬科植物忍冬(lonicera japonica tumb) 的花蕾。
金银花中含有绿原酸、异绿原酸、肌醇、黄酮、皂素及多酚类物质等，具有抗菌、抗病毒、消除体内有毒物质、降血压、改善机体免疫功能等多种保健作用。
我国对金银花这一清热解毒中药的研究处于世界领先地位。
我国作为金银花产地，从原料着手，在金银花炮制、有效成分分析、含量测定等方面都有了一定研究。
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㊀基金项目:辽宁省自然科学基金项目(Ｎｏ.２０２０－ＢＳ－１６３)ꎻ辽宁省卫计委中医药项目(Ｎｏ.２０２１０５０６)㊀作者简介:任天航ꎬ男ꎬ研究方向:中药炮制ꎬＥ－ｍａｉｌ:１４１２９７２３６９＠ｑｑ.ｃｏｍ㊀通信作者:刘蓬蓬ꎬ男ꎬ博士研究生ꎬ研究方向:中药炮制ꎬＴｅｌ:０４１１－８５８９０１３５ꎬＥ－ｍａｉｌ:ｌｉｕｐｅｎｇｐｅｎｇ０４１１＠１６３.ｃｏｍＵＰＬＣ－ＱＱＱ－ＭＳ/ＭＳ同时测定金银花饮片中核苷类成分的含量任天航ꎬ周正园ꎬ聂紫璇ꎬ王君月ꎬ廉婧ꎬ刘蓬蓬ꎬ史辑(辽宁中医药大学药学院ꎬ国家中医药管理局中药炮制原理解析重点实验室ꎬ辽宁省中药炮制工程技术研究中心ꎬ辽宁大连１１６６００)摘要:目的㊀建立超高效液相色谱－三重四极杆串联质谱(ＵＰＬＣ－ＱＱＱ－ＭＳ/ＭＳ)法比较研究金银花的水提液中核苷类成分的含量ꎮ方法㊀采用ＷａｔｅｒｓＢＥＨＣ１８(２.１ｍｍˑ５０ｍｍꎬ１.７μｍ)色谱柱ꎬ以乙腈(Ａ)－０.１％甲酸水(Ｂ)为流动相梯度洗脱ꎬ流速０.４ｍＬ ｍｉｎ－１ꎬ柱温３０ħꎬ进样量３μＬꎬ电喷雾离子源(ＥＳＩ)ꎬ正离子多反应监测模式(ＭＲＭ)对金银花的水煎液中核苷类成分的含量进行测定ꎮ结果㊀金银花中共检测出尿嘧啶㊁鸟嘌呤㊁黄嘌呤㊁β－胸苷㊁尿苷㊁２ᶄ－脱氧腺苷㊁２ᶄ－脱氧鸟苷㊁肌苷㊁鸟苷㊁胸腺嘧啶㊁腺苷㊁环磷酸鸟苷等１２种核苷类成分ꎬ其中鸟苷和尿苷的含量较高ꎬ胸腺嘧啶㊁腺苷㊁环磷酸鸟苷的含量由于过低而未展示ꎬ其余９种核苷类成分在测定质量浓度范围内线性关系良好(ｒȡ０.９９９０)ꎬ方法精密度㊁重复性和稳定性的ＲＳＤ值均小于３.０％ꎬ平均加样回收率在９９.４％~１０２.１％ꎬＲＳＤ在１.７％~２.７％ꎮ结论㊀该方法准确㊁可靠ꎬ适用于同时测定金银花饮片中核苷类成分的含量ꎬ可用于金银花饮片的质量控制ꎮ关键词:金银花ꎻ核苷ꎻ超高效液相色谱－三重四极杆串联质谱ꎻ含量测定中图分类号:Ｒ９２７.２㊀文献标识码:Ａ㊀文章编号:２０９５－５３７５(２０２２)０４－０２２５－００５ｄｏｉ:１０.１３５０６/ｊ.ｃｎｋｉ.ｊｐｒ.２０２２.０４.００４ＳｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｓｃｏｎｔｅｎｔｓｉｎｈｏｎｅｙｓｕｃｋｌｅｄｅｃｏｃｔｉｏｎｐｉｅｃｅｓｂｙＵＰＬＣ－ＱＱＱ－ＭＳ/ＭＳＲＥＮＴｉａｎｈａｎｇꎬＺＨＯＵＺｈｅｎｇｙｕａｎꎬＮＩＥＺｉｘｕａｎꎬＷＡＮＧＪｕｎｙｕｅꎬＬＩＡＮＪｉｎｇꎬＬＩＵＰｅｎｇｐｅｎｇꎬＳＨＩＪｉ(ＣｈｉｎｅｓｅＭａｔｅｒｉａＭｅｄｉａＰｒｏｃｅｓｓｉｎｇＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇＣｅｎｔｅｒｏｆＬｉａｏｎｉｎｇＰｒｏｖｉｎｃｅꎬＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＰｒｏｃｅｓｓｉｎｇＴｈｅｏｒｙＡｎａｌｙｓｉｓꎬＮａｔｉｏｎａｌＡｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎｏｆＴＣＭꎬＳｃｈｏｏｌｏｆＰｈａｒｍａｃｙꎬＬｉａｏｎｉｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＴｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅꎬＤａｌｉａｎ１１６６００ꎬＣｈｉｎａ)Ａｂｓｔｒａｃｔ:Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ㊀ＴｏｅｓｔａｂｌｉｓｈａｎＵＰＬＣ－ＱＱＱ－ＭＳ/ＭＳｍｅｔｈｏｄｔｏｃｏｍｐａｒｅｔｈｅｃｏｎｔｅｎｔｓｏｆｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｓｉｎｔｈｅｄｅ￣ｃｏｃｔｉｏｎｏｆｈｏｎｅｙｓｕｃｋｌｅ.Ｍｅｔｈｏｄｓ㊀ＷａｔｅｒｓＢＥＨＣ１８ｃｏｌｕｍｎ(２.１ｍｍˑ５０ｍｍꎬ１.７μｍ)ｗｉｔｈｇｒａｄｉｅｎｔｅｌｕｔｉｏｎｏｆａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅ(Ａ)－０.１％ｆｏｒｍｉｃａｃｉｄｉｎｗａｔｅｒ(Ｂ)ｗｅｒｅａｄｏｐｔｅｄ.Ｔｈｅｆｌｏｗｒａｔｅｗａｓ０.４ｍＬ ｍｉｎ－１.Ｔｈｅｃｏｌｕｍｎｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅｗａｓ３０ħ.Ｔｈｅｉｎｊｅｃｔｉｏｎｖｏｌｕｍｅｗａｓ３μＬ.Ｔｈｅｃｏｎｔｅｎｔｏｆｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｓｉｎｔｈｅｄｅｃｏｃｔｉｏｎｏｆｈｏｎｅｙｓｕｃｋｌｅｗａｓｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄｂｙｐｏｓｉｔｉｖｅｅｌｅｃｔｒｏｓ￣ｐｒａｙｉｏｎｉｚａｔｉｏｎｍｏｄｅａｎｄｍｕｌｔｉｐｌｅｒｅａｃｔｉｏｎｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇ(ＭＲＭ).Ｒｅｓｕｌｔｓ㊀１２ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｃｏｍｐｏｕｎｄｓｓｕｃｈａｓｔｈｅｕｒａｃｉｌꎬｇｕａ￣ｎｉｎｅꎬｘａｎｔｈｉｎｅꎬｂｅｔａ－ｔｈｙｍｉｄｉｎｅꎬｕｒｉｄｉｎｅꎬ２ᶄ－ｄｅｏｘｙａｄｅｎｏｓｉｎｅꎬ２ᶄ－ｄｅｏｘｙｇｕａｎｏｓｉｎｅꎬｉｎｏｓｉｎｅꎬｇｕａｎｏｓｉｎｅꎬｔｈｙｍｉｎｅꎬａｄｅｎｏｓｉｎｅꎬｃｙｃｌｉｃｇｕａｎｏｓｉｎｅｍｏｎｏｐｈｏｓｐｈａｔｅｗｅｒｅｄｅｔｅｃｔｅｄｉｎｈｏｎｅｙｓｕｃｋｌｅꎬａｍｏｎｇｔｈｅｍｔｈｅｃｏｎｔｅｎｔｏｆｇｕａｎｏｓｉｎｅａｎｄｕｒｉｄｉｎｅａｒｅｈｉｇｈｅｒ.Ｄｕｅｔｏｔｈｅｌｏｗｃｏｎｔｅｎｔｏｆｔｈｙｍｉｎｅꎬａｄｅｎｏｓｉｎｅꎬａｎｄｃｙｃｌｉｃｇｕａｎｏｓｉｎｅｍｏｎｏｐｈｏｓｐｈａｔｅｗｅｒｅｎｏｔｔｏｓｈｏｗ.Ｔｈｅｏｔｈｅｒ９ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｓｓｈｏｗｅｄｇｏｏｄｌｉｎｅａｒｉｔｙ(ｒȡ０.９９９０)ꎬａｎｄｔｈｅＲＳＤｏｆｔｈｅｐｒｅｃｉｓｉｏｎꎬｒｅｐｅａｔａｂｉｌｉｔｙꎬａｎｄｓｔａｂｉｌｉｔｙｔｅｓｔｓｗｅｒｅｌｅｓｓｔｈａｎ３.０％.Ｔｈｅａｖｅｒａｇｅｒｅｃｏｖｅｒｙｒａｔｅｓｗｅｒｅａｔ９９.４％~１０２.１％ꎬａｎｄＲＳＤｗｅｒｅａｔ１.７％~２.７％.Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ㊀Ｔｈｉｓｍｅｔｈｏｄｗａｓａｃｃｕｒａｔｅꎬｒｅ￣ｌｉａｂｌｅａｎｄｓｕｉｔａｂｌｅｆｏｒｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｓｃｏｎｔｅｎｔｓꎬａｎｄｃａｎｂｅｕｓｅｄｆｏｒｑｕａｌｉｔｙｃｏｎｔｒｏｌｏｆｈｏｎｅｙｓｕｃｋｌｅｄｅｃｏｃｔｉｏｎｐｉｅｃｅｓ.Ｋｅｙｗｏｒｄｓ:ＨｏｎｅｙｓｕｃｋｌｅꎻＮｕｃｌｅｏｓｉｄｅｓꎻＵＰＬＣ－ＱＱＱ－ＭＳ/ＭＳꎻＤｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ㊀㊀金银花为忍冬科植物忍冬(ＬｏｎｉｃｅｒａｊａｐｏｎｉｃａＴｈｕｎｂ.)的干燥花蕾或带初开的花ꎬ夏初花开放前采收ꎬ干燥ꎬ具有清热解毒㊁疏散风热之功效ꎬ可用于痈肿疔疮㊁热毒血痢㊁风热感冒等症的治疗[１]ꎮ金银花主要分布于我国山东㊁河南等地ꎬ药理学研究发现ꎬ金银花具有抗炎㊁抗病毒㊁抗氧化㊁保肝等药效作用ꎬ其主要含有的化学成分包括黄酮类㊁皂苷类㊁环烯醚萜类㊁挥发油等[２－３]ꎮ而有关金银花中核苷类成分的研究近年来报道较少ꎬ核苷类成分是维持生命活动的重要活性物质ꎬ经药效学研究发现ꎬ具有抗病毒㊁抗肿瘤㊁抗血小板聚集等多种功效[４－６]ꎮ王芳等[７]首次从金银花中分离鸟苷㊁５－甲氧基尿嘧啶等核苷类成分ꎬ此后有关金银花核苷类成分报道较少ꎬ故本研究将采用超高效液相色谱－三重四极杆串联质谱(ＵＰＬＣ－ＱＱＱ－ＭＳ/ＭＳ)技术ꎬ建立同时测定金银花饮片水提液中核苷类成分含量的方法ꎬ并比较研究不同道地产地金银花饮片水提液中核苷类成分含量的差异ꎬ为金银花饮片的生产加工和提高质量评价标准提供参考依据ꎮ１㊀仪器与试药１.１㊀仪器㊀ＡＣＱＵＩＴＹＨ－ＣＬＡＳＳ型ＵＰＬＣ仪(包括二极管阵列检测器㊁二元高压泵㊁在线脱气装置㊁自动进样器㊁柱温箱ꎬ数据采集与处理采用ＭａｓｓＬｎｘ软件)和ＸＥＶＯＴＱＤ型ＭＳ仪均购自美国Ｗａｔｅｒｓ公司ꎻＭｅｔｔｌｅｒＡＥ２４０型十万分之一分析天平(瑞士Ｍｅｔｔｌｅｒ公司)ꎻＤＨＦ－２００型手提式高速万能打粉机(温岭市林大机械有限公司)ꎻＦＡ１００４Ｂ型电子天平(上海精密科学仪器有限公司)ꎻＫＱ－２５０ＤＢ型数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)ꎻＭｉｌｌｉ－Ｑ纯水仪(美国Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ公司)ꎮ１.２㊀试药㊀金银花饮片５批购自河南㊁河北㊁山东㊁安徽等地ꎻ对照品尿嘧啶㊁鸟嘌呤㊁黄嘌呤㊁β－胸苷㊁尿苷㊁２ᶄ－脱氧腺苷㊁２ᶄ－脱氧鸟苷㊁肌苷㊁鸟苷(成都德思特生物技术有限公司ꎬ批号:ＤＳＴＤＮ００９２０１㊁ＤＳＴ２０１００９－０４６㊁ＤＳＴ２０１０２５－１９５㊁ＤＳＴ２０１１０３－０９３㊁ＤＳＴＤＮ００３４０１㊁ＤＳＴ２００９２２－１４３㊁ＤＳＴＤＪ０１０９０１㊁ＤＳＴ２０１０２９－０２９㊁ＤＳＴ２０１０２９－０２９ꎬ纯度均不低于９８％)ꎻ乙腈㊁甲酸为质谱纯ꎬ水为超纯水ꎬ其他试剂均为分析纯ꎮ２㊀方法与结果２.１㊀分析条件[８－９]２.１.１㊀色谱条件㊀ＷａｔｅｒｓＢＥＨＣ１８(２.１ｍｍˑ５０ｍｍꎬ１.７μｍ)色谱柱ꎻ流动相:乙腈(Ａ)－０.１％甲酸水(Ｂ)ꎬ梯度洗脱(０~３ｍｉｎꎬ２０％Ｂң２５％Ｂꎻ３~５ｍｉｎꎬ２５％Ｂң４５％Ｂꎻ５~６ｍｉｎꎬ４５％Ｂң６０％Ｂꎻ６~６.５ｍｉｎꎬ６０％Ｂң２０％Ｂꎻ６.５~１０ｍｉｎꎬ２０％Ｂ)ꎻ流速:０.４ｍＬ ｍｉｎ－１ꎻ柱温:３０ħꎻ进样量:３μＬꎮ２.１.２㊀质谱条件㊀采用电喷雾离子源(ＥＳＩ)ꎬ正离子多反应检测(ＭＲＭ)模式ꎮ毛细管电压:３.０ｋＶꎻ离子源温度１５０ħꎻ脱溶剂气Ｎ２ꎬ脱溶剂气流量１０００Ｌ ｈ－１ꎻ脱溶剂温度:５００ħꎮ９种核苷成在ＭＲＭ模式下的色谱保留时间和具体质谱参数见表１ꎬ全扫描质谱图见图１~９ꎬＭＲＭ离子色谱图见图１０~１８ꎮ表１㊀优化的质谱条件参数化合物保留时间ｔＲ/ｍｉｎ母离子(ｍ/ｚ)子离子(ｍ/ｚ)锥孔电压/Ｖ碰撞能量/ｅＶ尿嘧啶０.９８１１３.０３－３４３８鸟嘌呤２.０８１５２.０５－４２４０黄嘌呤１.２９１５３.０４１０９.９７３６５２β－胸苷０.９２２４３.０９１２７.０９１３８尿苷１.２３２４５.０７１１３.０４１８１０２ᶄ－脱氧腺苷１.５０２５２.１０１３６.１２２４１５２ᶄ－脱氧鸟苷１.６０２６８.１０１５２.１２１７１２肌苷１.４８２６９.０８１３７.１１１６１０鸟苷１.９３２８４.０９１５２.１１４０１４图１㊀尿嘧啶质谱图图２㊀鸟嘌呤质谱图图３㊀黄嘌呤质谱图图４㊀β－胸苷质谱图图５㊀尿苷质谱图图６㊀２ᶄ－脱氧腺苷质谱图图７㊀２ᶄ－脱氧鸟苷质谱图图８㊀肌苷质谱图图９㊀鸟苷质谱图图１０㊀尿嘧啶ＭＲＭ离子色谱图图１１㊀鸟嘌呤ＭＲＭ离子色谱图图１２㊀黄嘌呤ＭＲＭ离子色谱图图１３㊀β－胸苷ＭＲＭ离子色谱图图１４㊀尿苷ＭＲＭ离子色谱图图１５㊀２ᶄ－脱氧腺苷ＭＲＭ离子色谱图图１６㊀２ᶄ－脱氧鸟苷ＭＲＭ离子色谱图图１７㊀肌苷ＭＲＭ离子色谱图图１８㊀鸟苷ＭＲＭ离子色谱图２.２㊀溶液的制备２.２.１㊀对照品溶液的制备㊀精密称取尿嘧啶㊁鸟嘌呤㊁黄嘌呤㊁β－胸苷㊁尿苷㊁２ᶄ－脱氧腺苷㊁２ᶄ－脱氧鸟苷㊁肌苷㊁鸟苷的对照品适量ꎬ分别置于１０ｍＬ量瓶中ꎬ鸟嘌呤加入０.１ｍｏｌ Ｌ－１盐酸溶液ꎬ黄嘌呤加入０.１％氢氧化钾溶液ꎬ其他对照品加入超纯水溶解ꎬ室温定容ꎬ均配制成单一对照品溶液ꎬ４ħ冰箱储存备用ꎮ２.２.２㊀样品溶液的制备㊀取样品０.５ｇꎬ精密称定ꎬ置于具塞锥形瓶中ꎬ精密加入超纯水２０ｍＬꎬ称量ꎬ密封冷藏过夜ꎬ超声提取(２５０Ｗꎬ４０ｋＨｚ)６０ｍｉｎꎬ放冷至室温ꎬ用超纯水补足减失的量ꎬ离心ꎬ取上清液用０.２２μｍ微孔滤膜滤过ꎬ即得供试品溶液ꎬ置于冰箱４ħ储存备用[１０－１１]ꎮ２.３㊀方法学考察２.３.１㊀线性关系考察㊀精密吸取 ２.２.１ 项下对照品储备液适量ꎬ逐级稀释得到５个不同浓度的系列对照品溶液ꎬ在 ２.１.１ 和 ２.１.２ 项下条件进样分析ꎬ以对照品的质量浓度Ｘ(μｇ ｍＬ－１)为横坐标ꎬ以相应的峰面积Ｙ为纵坐标ꎬ进行线性回归ꎬ回归方程㊁相关系数和线性范围见表２ꎻ分别以各成分标准品的信噪比(Ｓ/Ｎ)等于３和１０时所对应的浓度定为检测限(ＬＯＤ)和定量限(ＬＯＱ)ꎬ结果见表２ꎮ２.３.２㊀精密度试验㊀精密吸取 ２.２.１ 项下对照品储备液适量混合ꎬ按 ２.１.１ 和 ２.１.２ 项下条件进样分析ꎬ连续进样６次ꎮ结果显示ꎬ尿嘧啶㊁鸟嘌呤㊁黄嘌呤㊁β－胸苷㊁尿苷㊁２ᶄ－脱氧腺苷㊁２ᶄ－脱氧鸟苷㊁肌苷㊁鸟苷峰面积的ＲＳＤ值分别为１.１％㊁１.３％㊁１.１％㊁１.５％㊁１.２％㊁１.９％㊁１.４％㊁１.２％㊁１.５％ꎬ表明该仪器精密度良好ꎮ２.３.３㊀重复性试验㊀精密称取同一批金银花样品６份ꎬ按 ２.２.２ 项下方法制备供试品溶液ꎬ然后按 ２.１.１ 和 ２.１.２ 项下条件进行分析并计算各成分的质量分数ꎮ结果显示ꎬ尿嘧啶㊁鸟嘌呤㊁黄嘌呤㊁β－胸苷㊁尿苷㊁２ᶄ－脱氧腺苷㊁２ᶄ－脱氧鸟苷㊁肌苷㊁鸟苷峰质量分数的ＲＳＤ值分别为２.１％㊁１.８％㊁１.６％㊁２.５％㊁２.２％㊁１.９％㊁２.４％㊁１.８％㊁２.１％ꎬ表明该方法重复性良好ꎮ２.３.４㊀稳定性试验㊀精密吸取同一份金银花的样品溶液ꎬ按 ２.１.１ 和 ２.１.２ 项下条件ꎬ分别于０㊁４㊁８㊁１０㊁１２㊁２４ｈ进样测定ꎬ测得尿嘧啶㊁鸟嘌呤㊁黄嘌呤㊁β－胸苷㊁尿苷㊁２ᶄ－脱氧腺苷㊁２ᶄ－脱氧鸟苷㊁肌苷㊁鸟苷质量分数的ＲＳＤ值分别为１.２％㊁１.１％㊁１.４％㊁１.２％㊁１.５％㊁０.９％㊁１.３％㊁１.１％㊁１.６％ꎬ表明供试品溶液在２４ｈ内稳定性良好ꎮ２.３.５㊀加样回收率试验㊀精密称定同一批已知含量的金银花样品６份ꎬ加入适量各对照品溶液ꎬ按 ２.２.２ 项下方法制备供试品溶液ꎬ然后按 ２.１.１ 和 ２.１.２ 项下条件进行测定ꎬ记录各成分的峰面积并计算加样回收率ꎮ结果显示ꎬ尿嘧啶㊁鸟嘌呤㊁黄嘌呤㊁β－胸苷㊁尿苷㊁２ᶄ－脱氧腺苷㊁２ᶄ－脱氧鸟苷㊁肌苷㊁鸟苷的平均加样回收率分别为１００.５％㊁１０２.１％㊁９９.４％㊁１０１.２％㊁１００.５％㊁９９.９％㊁１００.３％㊁１０２.１％㊁９９.６％ꎬＲＳＤ值分别为１.７％㊁１.９％㊁２.４％㊁２.２％㊁２.５％㊁２.５％㊁２.７％㊁２.１％㊁２.６％ꎮ表２㊀线性方程㊁线性范围㊁相关系数㊁ＬＯＤ和ＬＯＱ化合物回归方程ｒ线性范围/μｇ ｍＬ－１ＬＯＤ/ｎｇ ｍＬ－１ＬＯＱ/ｎｇ ｍＬ－１尿嘧啶Ｙ＝１１８４９６０１.９９４２Ｘ＋１００.９４６８０.９９９４０.０２~０.４３３.６５１２.１７鸟嘌呤Ｙ＝８３９２８１４.９８３９Ｘ－１５９.３１８７０.９９９１０.０２~０.３９１０.４９３４.９２黄嘌呤Ｙ＝２８５２５１８９.５６９０Ｘ－３４０.０９３７０.９９９００.０３~０.５３８.０７２６.７４β－胸苷Ｙ＝２２２２１８９０.７６２４Ｘ＋１０５５.２７８７０.９９９００.０６~２.５７７.７１２５.３１尿苷Ｙ＝１９３６５２７５.３５２０＋２２３２０.７２８６０.９９９１０.１８~３５.５０１０.６６３５.５４２ᶄ－脱氧腺苷Ｙ＝１１５４６４７３３.１５６０Ｘ＋４７.６５１４０.９９９７０.０１~０.２７２.５７８.８６２ᶄ－脱氧鸟苷Ｙ＝４６２５８７８６.７７０３Ｘ－２３.８３４３０.９９９８０.０６~２.４３５.３３１７.６９肌苷Ｙ＝６２１９５４１０.０３３７Ｘ－２２４.８９２７０.９９９５０.０２~０.４９７.１７２３.２１鸟苷Ｙ＝３００８５７３.９５２０Ｘ＋７０１１.９５６８０.９９９８０.２６~２６２.０００.５８２.０６２.４㊀样品测定㊀准确称取５批样品ꎬ按 ２.２.２ 项下方法制备供试样品溶液ꎬ按 ２.１.１ 和 ２.１.２ 项下条件测定ꎬ总离子流图见图１９ꎬ结果见表３ꎮ图１９㊀河南新乡样品总离子流图表３㊀５批样品中９种核苷成分含量(μｇ ｇ－１ꎬｎ＝３)化合物河南新乡河南封丘山东临沂安徽亳州河北保定尿嘧啶２.３１２.３１１.２１２.０３０.８０鸟嘌呤１４.５３１３.５６１１.８２１０.８２１２.１１黄嘌呤５.１０８.７３３.２３２.７０２.７９β－胸苷５.８２４.７９４.３２４.０７３.３７尿苷６８２.３２７５２.２５６１５.５６６７６.１１８１７.１８２ᶄ－脱氧腺苷０.４９０.８２０.４４０.４４０.５１２ᶄ－脱氧鸟苷１９.１６２３.６８１８.３７１７.４２２０.０５肌苷７.９５７.０４８.６７７.８８７.６３鸟苷８３６０.３２８６８４.４５７５２０.２２７７２８.３９９９３７.６２３ 讨论本试验结果表明ꎬ金银花水提液中的核苷类成分主要为尿嘧啶㊁鸟嘌呤㊁黄嘌呤㊁β－胸苷㊁尿苷㊁２ᶄ－脱氧腺苷㊁２ᶄ－脱氧鸟苷㊁肌苷㊁鸟苷等ꎬ尤以鸟苷和尿苷含量较高ꎮ此外ꎬ金银花水提液中尚含有胸腺嘧啶㊁腺苷㊁环磷酸鸟苷等ꎬ但上述３种成分的含量远低于检测的线性范围ꎬ故未做结果展示ꎮ本研究收集了５批金银花样品ꎬ由结果可见不同区域产的金银花中核苷类成分的含量未见显著差异ꎬ表明河南㊁河北㊁山东㊁安徽等道地产地产的金银花质量较稳定ꎮ并建立了ＵＰＬＣ－ＱＱＱ－ＭＳ/ＭＳ同时测定金银花饮片水提液中核苷类成分含量的方法ꎮ该方法简单㊁快速㊁准确㊁可靠ꎬ可用于金银花的品质鉴定和质量控制ꎮ同时ꎬ亦可为金银花的进一步合理利用与产品开发提供理论支撑ꎮ参考文献:[１]㊀国家药典委员会.中华人民共和国药典２０２０年版(一部)[Ｓ].北京:中国医药科技出版社ꎬ２０２０.[２]吴娇ꎬ王聪ꎬ于海川.金银花中的化学成分及其药理作用研究进展[Ｊ].中国实验方剂学杂志ꎬ２０１９ꎬ２５(４):２２５－２３４.[３]刘玉峰ꎬ李鲁盼ꎬ马海燕ꎬ等.金银花化学成分及药理作用的研究进展[Ｊ].辽宁大学学报(自然科学版)ꎬ２０１８ꎬ４５(３):２５５－２６２.[４]黎海灵ꎬ黄艳萍ꎬ周游ꎬ等.鸡桑㊁华桑和桑的根皮中７种核苷类成分的含量测定[Ｊ].食品工业科技ꎬ２０２１ꎬ４２(１９):２９８－３０６.[５]邓雨果ꎬ黄子健.核苷类似物治疗宫颈人乳头瘤病毒感染的疗效[Ｊ].广州医药ꎬ２０２１ꎬ５２(２):１１－１６. 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高效液相色谱法同时对金银花中5种有效成分的含量测定
高效液相色谱法同时对金银花中5种有效成分的含量测定孟晓岩;丁勇【摘要】Objective To simultaneously determine the contents of five active components in Lonicera japoni ca Thunb by HPLC method. Methods The separation of five ingredients was achieved on a Agilent Eclipse XDB-C18 column( 250 mm ×4. 6 mm,5 μm )with gradient elution using solvents of acetonitrile and 0. 4% phosphoric acid,the flow rate was 1. 0 mL/min. The detective wave length was at 350 nm,and the inpouring volume was 10 μL. Results The recovery rate was in the range of 97. 5% ~ 100. 2% ,and the compounds showed good linearity( rS=0. 999 3 )in a detection range. Conclusion The method is simple, sensitive, accurate and reproducible, it can be used to control the quality of Lonicera japonica Thunb.%目的建立HPLC法同时测定金银花中5种有效成分的含量.方法采用Agilent Eclipse XDB-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),以乙腈-0.4%的磷酸水溶液进行线性梯度洗脱,流速:1.0 mL/min,检测波长:350 nm,进样量:10μL.结果绿原酸、咖啡酸、芦丁、木犀草苷、槲皮素5个化合物在测定的范围内均表现出良好的线性关系(r≥0.999 3),回收率为97.5%～100.2%.结论该方法操作简便,分离效果好,灵敏度高,重复性好,为较全面控制金银花药材的质量提供了一种可靠的方法.【期刊名称】《实用药物与临床》【年(卷),期】2012(015)002【总页数】3页(P93-94,114)【关键词】高效液相色谱法;绿原酸;咖啡酸;芦丁;木犀草苷;槲皮素;梯度洗脱【作者】孟晓岩;丁勇【作者单位】沈阳永大制药有限公司,沈阳110027;中国医科大学药分药化教研室,沈阳110001【正文语种】中文1 仪器与方法1.1 实验仪器 Agilent-1100液相色谱仪(美国安捷伦公司，Agilent-1100系列四元泵，VWD检测器，Agilent Chemstation色谱工作站);XK96-A型快速混匀器(姜堰市新康医疗器械有限公司);DT-500型电子天平(常熟市衡器厂);AE200型电子分析天平(METTLER TOLEDO公司);SK7200H型超声波清洗仪(昆山市超声仪器有限公司);0.45 μm过滤膜(国药集团化学试剂有限公司)。
高效液相色谱法测定银栀口服液中绿原酸的含量
高效液相色谱法测定银栀口服液中绿原酸的含量李翔;刘皈阳;马建丽;周亮;高磊【摘要】目的建立测定银栀口服液中绿原酸含量的高效液相色谱方法.方法采用Agilent Eclipse XDB-C18(4.6 mm×150 mm,5 μm)色谱柱,流动相为甲醇-0.5%冰醋酸溶液(20:80),流速:1.0 mL/min,检测波长:327 nm,柱温:30 ℃,进样量:10 μL.结果绿原酸浓度在2.184~109.2 μg/mL范围内与峰面积线性关系良好,平均回收率为98.65%,RSD为1.48%(n=6).结论本方法操作简便,结果准确,专属性强,灵敏度高,可用于银栀口服液中绿原酸的含量测定.%Objective To establish an HPLC method for determination of chlorogenic acid in yinzhi oral solution. Methods The Agilent Eclipse XDB-C18( 4. 6 mm x 150 mm, 5 μm )wa s used, the mobile phase consisted of methanol-0. 5% acetic acid( 20: 80 ),the flow rate was 1. 0 mL/min,the detection wavelength was 327 nm,the column temperature was 30 ℃ ,the inject volume was 10 jjlL. Results A good linear correlation of chlorogenic acid was observed within the range of 2. 184 ~ 109. 2 μg/mL. The average recovery rate was 98. 65% with RSD of 1. 48% ( n = 6 ). Conclusion The method is rapid,simple and accurate,it can be used for the determination of chlorogenic acid in yinzhi oral solution.【期刊名称】《实用药物与临床》【年(卷),期】2013(016)001【总页数】2页(P47-48)【关键词】银栀口服液;绿原酸;高效液相色谱法;含量测定【作者】李翔;刘皈阳;马建丽;周亮;高磊【作者单位】解放军总医院第一附属医院药剂药理科,北京,100048;解放军总医院第一附属医院药剂药理科,北京,100048;解放军总医院第一附属医院药剂药理科,北京,100048;解放军总医院第一附属医院药剂药理科,北京,100048;解放军总医院第一附属医院药剂药理科,北京,100048【正文语种】中文银栀口服液来自民间验方银栀汤，由金银花、连翘、栀子、薄荷、牛蒡子、桔梗、甘草等多味中药组成，具有辛凉解表、清热肃肺的功能，主治外感风热。
高效液相色谱法测定金银花中4种有机酸含量
高效液相色谱法测定金银花中4种有机酸含量王建寰;张霞【摘要】目的建立高效液相色谱法(RP- HPLC)同时测定金银花中原儿茶酸、绿原酸、咖啡酸、阿魏酸含量的方法.方法采用高效液相色谱法,Agilent TC-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5 μm),0.1%磷酸溶液和乙腈采用梯度洗脱,检测波长280 nm,流速1.0 mL·min-1.结果金银花40%甲醇提取物中的杂质对4种成分的测定无干扰,4组分在各自的线性范围内:原儿茶酸0.252～6.30 μg·mL-1、绿原酸4.51～112.8 μg·mL-1、咖啡酸0.133～3.32 μg·mL-1、阿魏酸0.112～2.80 μg·mL-1内均呈良好的线性关系(r＞0.999),平均加样回收率、精密度、重现性和稳定性均符合有关规定.结论高效液相色谱法测定金银花操作简便,结果准确,为该类药材的入药及资源利用提供了依据.【期刊名称】《宁夏医科大学学报》【年(卷),期】2013(035)003【总页数】3页(P350-352)【关键词】金银花;高效液相色谱法;有机酸【作者】王建寰;张霞【作者单位】宁夏医科大学药学院、宁夏回药现代化工程技术研究中心,银川,750004【正文语种】中文【中图分类】R931金银花(Flos Lonicerae)又名银花、双花、忍冬，性味甘寒，有清热解毒、凉散风热等功效，在临床上主要用于痈肿疔疮、喉痹、丹毒、热毒血痢、风热感冒、温病发热［1］。
常以干燥花蕾或初花入药［2］，是临床常用中药。
金银花含黄酮类、有机酸、肌醇、皂甙及鞣质等［3］，有机酸及挥发油是金银花的主要有效成分。
绿原酸常常作为金银花质量控制的指标成分，但还不能全面反映金银花的内在质量，天然产物的功效通常不是靠单一成分的作用，而是多类型的组分结合，同时起作用才有诸多功效。
为了较全面反映金银花的质量，本研究建立了用微波提取、高效液相色谱法同时测定金银花中4种有机酸:原儿茶酸、绿原酸、咖啡酸和阿魏酸含量的方法。
金银花中绿原酸超声提取工艺的优化
金银花中绿原酸超声提取工艺的优化赵惠茹;路荣荣;靖会;刘少静;徐小静;闫鱼青【摘要】建立高效液相色谱测定金银花中w(绿原酸)的方法,考察φ(乙醇)、m(药材)∶V(提取溶剂)(以下简称“料液比”)和提取时间对绿原酸提取率的影响,采用正交实验方法优化提取条件.结果表明,在Agilent HC-C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),V(乙腈)∶V(磷酸)=15∶85[ρ(磷酸)=0.1 g/mL]为流动相,流速为1.0 mL/min,检测波长为327 nm的色谱条件下,正交实验筛选出绿原酸超声提取的最佳工艺参数为采用料液比35 g/mL,提取溶剂φ(乙醇)=60％,超声(200W,40 kHz)时间30 min.优化的提取工艺操作稳定,结果准确,重复性好.【期刊名称】《化工科技》【年(卷),期】2018(026)006【总页数】5页(P22-26)【关键词】金银花;绿原酸;正交设计;提取工艺【作者】赵惠茹;路荣荣;靖会;刘少静;徐小静;闫鱼青【作者单位】西安医学院药学院,陕西西安710021;西安医学院药学院,陕西西安710021;西安医学院药学院,陕西西安710021;西安医学院药学院,陕西西安710021;西安医学院药学院,陕西西安710021;西安医学院药学院,陕西西安710021【正文语种】中文【中图分类】R284.2金银花为忍冬科植物忍冬(Lonicera japonica Thunb.)干燥的花蕾或者初开的花。
研究表明，金银花含有挥发油、有机酸、黄酮类、三萜皂苷和微量元素等成分[1-3]，具有广谱抗菌、抗炎及解热作用[4-5]。
作为有机酸主要成分的绿原酸，具有抗菌、抗病毒、保肝利胆、抗肿瘤、降血压及兴奋中枢神经系统等多种药理作用[6-7]，因此绿原酸常被作为金银花质量控制的指标之一[8-11]。
从金银花中提取绿原酸常用回流提取法、超声波提取法、微波提取法、酶解醇提法等[12-15]，其中超声提取法提取时间短、提取效率高，但是应用超声提取结合HPLC对金银花中绿原酸含量测定的研究较少，并且研究不够全面。
高效液相色谱法测定中药金银花中绿原酸成分的含量
高效液相色谱法测定中药金银花中绿原酸成分的含量
江国荣;潘雪莲;刘少文;何玲玲
【期刊名称】《临床合理用药杂志》
【年(卷),期】2019()10
【摘要】目的利用高效液相色谱法(HPLC)测定金银花中药中有效成分绿原酸的含量。
方法色谱柱:Agilent ZORBAX RH C_(18)(50 mm×2.1 mm,1.8μm),流动相为乙腈:0.5%冰醋酸缓冲溶液=20∶80,检测波长为326 nm,柱温为30℃,进样量为10μl。
结果金银花中绿原酸的线性回归方程为:Y=2.637×107X-
0.764×105(r=0.9997),绿原酸质量浓度在0.0432～0.217 mg/ml范围内线性关系良好。
平均加样回收率为99.89%,稳定性相对标准偏差(RSD)值为1.32。
结论中药金银花中绿原酸成分采用HPLC测定,该方法的操作更为简单,重复性好,色谱仪器的精密度高,从而为中药金银花的质量控制提供科学检测方法。
【总页数】2页(P122-123)
【作者】江国荣;潘雪莲;刘少文;何玲玲
【作者单位】广东省佛山市第一人民医院/中山大学附属佛山医院药剂科;广东省佛山市中医院药剂科
【正文语种】中文
【中图分类】R284.1;O657.72
【相关文献】
1.高效液相色谱法测定金银花中绿原酸的含量
2.采用高效液相色谱法测定金银花中绿原酸含量方法探讨
3.测定皮炎合剂的金银花中绿原酸含量的高效液相色谱法实验研究
4.高效液相色谱法测定金银花中绿原酸和木犀草苷的含量
5.采用高效液相色谱法测定金银花中绿原酸含量方法探讨
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测定皮炎合剂的金银花中绿原酸含量的高效液相色谱法实验研究
测定皮炎合剂的金银花中绿原酸含量的高效液相色谱法实验研
究
张作军
【期刊名称】《北方药学》
【年(卷),期】2017(014)001
【摘要】目的:采用高效液相色谱法(HPLC)测定皮炎合剂的金银花中绿原酸含量.方法:本研究应用HPLC方法测定,采用的色谱柱为Spherigel C18色谱柱
(200mm×4.6mm,5μm),以水:乙腈:甲醇:冰醋酸=96:6:11:2为流动相、以327nm 为检测波长,建立高效液相色谱法测定皮炎合剂的金银花中绿原酸含量的方法.结果:此色谱条件下,测定出皮炎合剂的金银花中绿原酸的含量在线性范围为0.2~2.0μg 之间具有良好的线性关系(r=0.9996),绿原酸回收率可达96.88%,RSD为
0.89%(n=5).结论:测定皮炎合剂的金银花中绿原酸含量的高效液相色谱法操作简单,分离度好,测定结果准确,精密度、重现性及稳定性均良好,适用于皮炎合剂的金银花中绿原酸含量的测定.
【总页数】2页(P5-6)
【作者】张作军
【作者单位】南京中医药大学连云港附属医院连云港 222000
【正文语种】中文
【中图分类】R286.0
【相关文献】
1.采用高效液相色谱法测定金银花中绿原酸含量方法探讨
2.采用高效液相色谱法测定金银花中绿原酸含量方法探讨
3.金银花中绿原酸含量测定方法的不确定度评定
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5.高效液相及紫外分光光度法测定金银花中绿原酸和异绿原酸含量方法学比较
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10批金银花有效成分的高效液相色谱测定
10批金银花有效成分的高效液相色谱测定
刘莹;赵雅芬;朴美憬;李焕荣;傅业全;李佳;王建舫
【期刊名称】《北京农学院学报》
【年(卷),期】2023(38)1
【摘要】【目的】用高效液相色谱建立金银花中有效成分含量的检测方法。
【方法】采用梯度洗脱方法,对金银花75%甲醇提取液中绿原酸、新绿原酸、隐绿原酸、异绿原酸A、异绿原酸B、异绿原酸C、芦丁和木犀草苷8种成分的含量进行研究。
【结果】8种成分在各自范围内线性关系均良好(R^(2)>0.9990);平均回收率为98.98%~102.84%(n=6);相对标准偏差为0.90%~4.11%。
10批金银花样品均表
现为绿原酸含量最高,含量为26.93~31.90 mg/g,且8种成分含量的RSD均符合
标准。
【结论】该方法简单稳定,适合金银花中有效成分的定量测定。
【总页数】6页(P109-114)
【作者】刘莹;赵雅芬;朴美憬;李焕荣;傅业全;李佳;王建舫
【作者单位】北京农学院兽医学(中医药)北京市重点实验室/动物类国家级实验教
学示范中心
【正文语种】中文
【中图分类】S851.4
【相关文献】
1.高效液相色谱-质谱法同时测定川芎提取液中7种有效成分
2.高效液相色谱-质谱法同时测定清热解毒口服液中的5种有效成分
3.应用高效液相色谱-二极管阵列检
测器-蒸发光散射检测器联用技术同时测定清开灵注射液中的五类有效成分4.高效液相色谱测定金银花中科罗索酸的含量5.超高效液相色谱-串联质谱同时测定盐碱胁迫金银花中3种内源激素
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关键词 :金银花提取物 ; 绿原酸 ; 高效液相色谱法
中图分类号 :R284.2 文献标识码 :A 文章编号 :1008-0805(2008)10-2416-02
DeterminationofChlorogenicAcidintheExtractofFlosLoniceraebyHPLC
LIULei, HEZai'an, YU Zi-chuan, LIUChao-ying, LIUYan-wen＊
minationofChlorogenicacidintheextractofFlosLonicerae.
KeywordsChlorogenicacid; HPLC; Determination
金银花 FlosLonicerae又名忍冬 、双花 , 为临床常用中药 , 具 有清热解毒 、凉散风热之功 效 , 主 治痈肿 疔疮 、喉 痹 、丹毒 、热毒 血痢 、风热感冒 、温 病发 热等 [ 1] 。 在 中成 药中 , 金 银花 或以 细粉 直接入药 , 或以提取物的形式 入药 , 但大 部分制 剂以后者 的形式
摘要 :目的 建立金银花提取物中绿原酸含量的 HPLC测定方法 。 方法 国产 C18柱 (4.6 mm×250 mm, 7 μm);流动相 为
乙腈 :0.4%磷酸 (12∶ 88);检测 波长为 327 nm;流速 1 ml· min-1 ;进 样量 10 μl;柱温 25℃。 结 果 绿 原酸在 0.071 6 ～ 0.644 4 μg范围内线性关系良 好 , r=0.999 6;平均回收 率 99.99%, RSD=1.61%(n=6)。 结论 该方法简便 、快速 、准确 , 可用于金银花提取物的 含量测定及质量控制 。
1 仪器与试药 Agilent1100 series高 效 液 相 色 谱 仪 (G1322A排 气 阀 ,
G1311A泵 , G1316A柱 温 箱 , G1314A紫外 检 测 器 ), chemistation 色谱工 作站 , KromasilC18色谱柱 , 超声 提取器 (KQ3200DE型数 控 超声仪 昆山市超声仪器有限 公司 );绿原 酸对 照品 (中国 药品 生
综上所述 , 党参 多糖 能够 降低 四氧 嘧啶 致糖 尿 病小 鼠的 血 糖 , 同时能在一定程度上改 善胰岛 素抵抗 , 提高 机体胰 岛素 的敏 感性 , 但其作用机制尚需进一步的研究 。
参考文献 :
[ 1] 杨 明 , 王本祥 .人参多糖降血糖和肝糖元的作用 [ J] .中 国药理学 报 , 1990, 11(6):520.
[ 2 ] 金智生 , 李娟娥 , 张东 鹏 .红芪多 糖改善模 型大鼠 胰岛素 抵抗的 实 验研究 [ J] .中医药通报 , 2007, 6(1):60.
[ 3 ] 徐梓辉 , 黄文权 .薏苡仁多糖对实验性 2型糖尿 病大鼠胰岛素 抵抗 的影响 [ J] .中国糖尿病杂志 , 2002, 10(1):44.
[ 4 ] 刘丽萍 , 洪 浩 , 王钦茂 , 等 .丹皮多糖 -2b降血糖作用的实验研究 [ J] .中国临床药理学与治疗学 , 2002, 7(5):424.
[ 5 ] 李光伟 , 潘孝仁 .检测人群胰岛素敏感性的一项新指数 [ J] .中 华内 科杂志 , 1993, 32(10):655.
入药 , 但即 使以后者入 药 , 也 有两种形 式 , 一 是以全草直 接投料 , 煎煮入 药 , 即以煎煮液 (即药 材的提取液 )作为半成品 (中间 体 ); 另一种 是先提取有效部位 , 而后以 提取物 投料 , 即以提 取物作 为 中间体 (原料 )(刘 艳娥 《第 二军 医大 学硕 士学 位论 文 》)。 为 了 有效控 制金银花提取物 (中间体 )的内在 质量 , 本 实验参 考了 有 关文献 [ 2, 3] 及 2005版 《中国 药典 》 [ 4] 方法 , 采 用高 效液相 色谱 法 测定金 银花提取物中绿原酸含量 。
流速为 1 ml· min-1;检测波长 327 nm。
线方程 :Y =2 468.4X - 16.205, r=0.999 6。 结果表 明 , 绿原 酸
2.1.2 pH值 对 峰 形 的 影 响 绿 原 酸 属 于 有 机 酸 类 物 质 , 在 在 0.071 6 ～ 0.644 4 μg范围内与峰面 积呈良好的线性关系 。 结
2.1.1 色谱条件 色 谱柱 为国产 KromasilC18柱 (250 mm×4.6 液 2, 4, 6, 10, 14, 18μl, 分别注 入液 相色 谱仪 。 按 上述色 谱条 件 mm, 7 μm);柱温 25℃;流动相 为乙腈 -0.4% 磷酸 (12∶ 88); 测定峰 面积 。以 峰面积积分值 (A)对进样量 进行回归 , 得回归 曲
[ 9 ] 许爱霞 , 张振明 , 葛 斌 , 等 .党参多糖抗衰老作 用机制的实验 研究 [ J] .中国现代应用药学杂志 , 2006, 23(8):729.
[ 10] 李贵荣 , 杨胜圆 .党参多糖的提取及其对活性氧 自由基的清除 作用 [ J] .化学世界 , 2001, 7(8):421.
(KeyLaboratoryofResourceScienceandCompoundRecipeinChineseMedicineofMinistryofEducationHubei
CollegeofTCM, Wuhan430061, China)
AbstractObjectiveToestablish amethod forthedetermination ofChlorogenic acid in theextractofFlosLonicerae.
理论塔板数 (N)为 5 000以上 。 结果见图 1。
a-对照品 b-供试品 图 1 金银花提取物 HPLC图谱
2.2 对照品溶液的制备 精密称 取绿原酸 对照品 适量 , 置棕色 量瓶中 , 加 50%甲醇制成每毫升含 35.8μg的溶液 , 即得 。
图 2 绿原酸标准曲线 2.5 精密度实验 精 密吸取 对照品溶 液 10μl, 按 上述色 谱条 件 重复 进样 6次 , 记 录各组 绿原 酸峰面 积值 , 结 果平均 峰面 积为 : 840.5, RSD为 0.69%(n=6)。 2.6 稳定性实验 取同一供试品溶液 , 分别于 0, 2, 4, 6, 8 h进样 10μl, 测得绿 原酸的 平均峰 面积值 为 :680.24, RSD为 :0.38% (n =5), 表明供试品溶液在 8 h内稳定 。 2.7 重复性实验 取 同一批 号 (070204)样品 6份 , 按含 量测 定 方法测 定 , 结果绿原酸 平均含 量为 28.01%, RSD为 1.07%(n= 6)。 2.8 加样回 收率 实验 精密 称 取已 知 含量 的 金银 花 提 取物 6 份 , 分别精密添加绿原酸对照品适量 , 按供试品溶液的方法制备 , 测定 , 计算回收率 。 结果见表 1。
自制 ), 乙腈 , 磷酸均为分析纯 ;水为双蒸水 。
容量瓶 中 , 双蒸水 溶解 , 超声 2 min后 , 再 用双蒸 水定容 至刻度 ,
2 方法与结果 [ 5]
摇匀 , 过 0.45 μg微孔滤膜 , 取续 滤液即得 。
2.1 分析方法的建立 ——— 分离及检测条件的选择
2.4 线性范围的考察及其标准曲线的绘制 精密 吸取对照品 溶
[ 11] 孙 敏 , 刘 超 .糖皮质激素和胰岛素抵抗 [ J] .国外医学 · 内 分泌 学分册 , 2004, 24(8):186.
高效液相色谱法测定金银花提取物中绿原酸的含量
刘 磊 , 何再安 , 余子川 , 刘超英 , 刘焱文＊
(湖北中医学院 · 中药资源与中药复方省部共建教育部重点实验室 , 湖北 武汉 430061)
时珍国医国药 2008年第 19卷第 10期
LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH 2008 VOL.19 NO.10
糖转运子向细胞膜的 转位 , 使机体对外周葡萄糖的摄取和 利用都 降低 。 它对代谢物质的直接作用可 升高血糖 , 促进 脂解 , 升高血 浆游离脂肪酸和甘油 三酯等 , 抑制 葡萄糖 刺激的 胰岛素 释放 , 诱 导小鼠产生胰岛素抵抗 。 因此 , 对于糖皮质激素所诱导的 胰岛素 抵抗小鼠 , 可 以通过腹腔注射一定剂量的胰岛素后 , 观察其血糖 变化 , 观察小 鼠体内胰岛素对血糖代谢的能力 , 从而反映小鼠的 胰岛素敏感性 [ 11] 。
· 2416·
LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH 2008 VOL.19 NO.10
时珍 国医Hale Waihona Puke 药 2008年第 19卷第 10期
物制品鉴定所 , 批号 110753 -200212), 金银花提 取物 (本 实验室 2.3 供试品溶液的制备 精 密称取 本提 取物 10 mg, 置 100 ml
HPLC测定时易发生前沿或拖尾峰 , 流动 相加入 酸可以改 善这种 果见图 2。
现象 。 本实验比较了 水 、乙 酸 、磷 酸对峰 形的 影响 , 当选 用 0.4%
磷酸时 , 可得到较好的色谱峰形 。
2.1.3 色谱系统适应 性实验 在选 定条件 下 , 绿原酸和 样品中
其他组分可基线分离 , 绿原酸与其相邻色谱峰的分离度大 于 1.5,
27