用清除有机自由基DPPH法评价茶叶多糖的抗氧化活性
DPPH自由基清除与普用自由基清除实验（水溶液）-实验流程图-操作..
DPPH·自由基清除法(修改版)李熙灿（广州中医药大学中药学院, 2019.6）【原理】1,1-二苯基-2-苦基肼基自由基, 1,1-Diphenyl-2-picrylhydrazyl radical, 简称为DPPH·自由基。
由于分子中存在大π键，所以，该自由基能稳定存在。
且在519nm处，有最大吸收波长。
当DPPH·自由基被清除时，其在519nm处的吸光度（A519nm），会相应地减少。
因此，通过检测A519nm值，可以判断DPPH·是否被清除。
如果某个样品能清除DPPH·，就具有一定的自由基清除活性（或称“抗氧化活性”）。
【操作图解】【计算公式】【说明】1. 样品溶液的浓度，也是可以调整的。
不过，为了方便实验，宜配高浓度（如3mg/mL）。
2. 操作图解中的用量，都是可以调整的，需要自行摸索。
3. 当样品溶液的加入量为0 μL 时，所测得的A值即为A0。
4. 实验最好做三个平行样，以减少误差。
【实例】二氢杨梅素的DPPH清除实验的结果二氢杨梅素样品：浓度：0.1mg/ml 溶剂：95%乙醇数据整理：二氢杨梅素原始数据：水溶液中“普用”自由基清除的实验操作图2019.6 【参考文献】Xican Li. 2-Phenyl-4,4,5,5-tetramethylimidazoline-1-oxyl 3-oxide (PT IO•) Radical-scavenging: A New and Simple Antioxidant. Journal of Agricultural & Food Chemistry. 2017, 65, 6288−6297.【简介】“普用”自由基，原名是PTIO自由基。
它是一种能溶于水的自由基，所以，可以在水溶液中进行自由基的清除实验。
这比DPPH自由基清除实验更合理；因为DPPH自由基清除只能是有机溶剂（如乙醇、甲醇）中进行。
用清除有机自由基DPPH法评价植物抗氧化能力 (2)
研究简报用清除有机自由基DPPH法评价植物抗氧化能力3彭长连 陈少薇 林植芳 林桂珠(中国科学院华南植物研究所,广州510650)摘要 几种抗氧化剂的浓度与其清除1,12二苯基苦基苯肼(DPPH)能力呈显著的线性相关.不同抗氧化剂清除DPPH能力差异明显.抗坏血酸与DPPH反应的灵敏性高于其抑制肾上腺素氧化的能力.用DPPH法和亚油酸氧化法同时测定了生长在不同光强下植物叶片抗氧化能力的变化,两种方法所得结论相一致.结果表明清除有机自由基法是一种快速、简便、灵敏的评估植物抗氧化能力的可行方法.关键词 1,12二苯基苦基苯肼(DPPH),植物,抗氧化能力,自由基学科分类号 Q946 生物的抗氧化能力与其抗病性、抗逆性及延缓衰老密切相关.因而从天然植物中寻找有效的抗氧化剂应用于医药、食品、保健品、饮料、化妆品等之中,或从氧化与抗氧化代谢的平衡来探讨生物对变化环境条件的适应性机理,都是当前的研究热点之一. 迄今用于评价植物抗氧化能力的方法虽已有诸如硫氰酸盐(thiocyanate)法[1]、硫代巴比妥酸(TBA)法[2]、ORAC法(automated oxygen radical absorbance capacity assay)[3]等.但这些方法或者手续相当繁琐费时,或者所需试剂或大型仪器的费用昂贵,尚缺乏一种灵敏、简单易行的有效方法.1, 12二苯基苦基苯肼(1,12Diphenyl222picryl2 hydrazyl,DPPH)是一种稳定的有机自由基,通过检测生物试剂对DPPH自由基的清除能力可以表示其抗氧化性的强弱.然而对自由基信号的直接检测需要使用顺磁共振仪而使其难以普及.近年来,国外已有人初步利用DPPH溶液的紫红色吸光度变化作为清除自由基能力的分光光度测定[4,5],但对其准确性、灵敏度和可行性尚未有系统的探讨.本文旨在研究DPPH分光光度法用以评价植物抗氧化能力的可行性,为抗氧化剂的筛选和抗氧化胁迫机理的研究提供新的方法和依据.1 材料与方法111 仪器和试剂 紫外可见分光光度计(Beckman DU27),二苯基苦基苯肼(1,12diphenyl222picrylhydrazyl,DPPH),肾上腺素,硫代巴比妥酸(TBA),亚油酸,外源抗氧化剂抗坏血酸(AsA)、 皮素(QCT)、还原型谷胱甘肽(GSH)、丁基羟基甲苯(BHT),为Sigma公司产品,α2生育酚(α2TP)为Merck公司产品.自由基捕获剂1,22二羟基苯23,52二磺酸钠(Tiron),甲醇,乙醇为国产产品.112 植物材料 试验植物为广东省鼎湖山常绿阔叶林中的乔木黧蒴(Castanopsis f issa)和林下灌木九节(Psycot ria rubra).盆栽幼苗生长于本所试验地的自然光强(100%光)和遮阴降低光强为自然光的36%和16%条件下.012g叶片用50%乙醇浸提,研磨和离心(5000×g,15min),定容至10ml. 113 有机自由基(DPPH)消除能力的测定 参考Larrauri和Y okozawa等[4,5]的方法进行修改.利用DPPH溶液的特征紫红色团的吸收峰,以分光光度法测定加抗氧化剂或植物提取液后A525吸收的下降表示其对有机自由基消除能力.反应体积2ml,DPPH溶于少量甲醇后,以50%乙醇配制为120μmol/L.植物提取液稀释10倍,反应时加011ml稀释的提取液及119ml DPPH.室温下静置20min后测吸光度变化.样品对DPPH 的清除百分比=12[(A-B)/A0]×100%,这里A0为未加样的DPPH(119ml DPPH+011ml 50%乙醇)的吸光度,A为样品与DPPH反应后的吸光度,B为样品的空白(样品011ml+119ml 3中国科学院广州分院及广东省科学院测试基金和中国科学院“九五”重点基金(KZ9522J12105)联合资助. Tel:(020)877056262405,E2mail:pengchl@ 收稿日期:1999211220,修回日期:200020420250%乙醇)的吸光度.然后用公式:[(清除率×反应加入的DPPH 量)/样品质量(μg )]求得单位质量的外源抗氧化剂或植物样品对DPPH 的实际清除量.114 抑制亚油酸氧化能力的测定 最终浓度为0138mmol/L 的亚油酸加0133mmol/L H 2O 2加速氧化,在有或无植物提取液下置于室温放置5h ,不时摇动,随后用硫代巴比妥酸(TBA )法测定所产生的丙二醛(MDA )[6].用抑制MDA 形成的百分数表示抗氧化能力.115 抑制肾上腺素氧化 参照翁元凯等的方法[7],以碱性连二亚硫酸钠产生O ・2,用不同浓度的AsA 抑制O ・2对肾上腺素的氧化,480nm (肾上腺素红的特征吸收峰)检测吸收的下降.2 结果与讨论211 DPPH 的吸收光谱 有机自由基DPPH 溶液有两个特征吸收峰330nm 和525nm ,加入抗氧化剂抗坏血酸(AsA )和 皮素(QCT )后两个吸收峰皆降低(图1),但525nm 吸收的降低较显著,故选用可见光525nm 的吸收来表示DPPH 含量的变化,这与Larrauri 等[4]报道DPPH 吸收峰在517nm 有点差异.图1 DPPH 的吸收光谱212 抗氧化剂浓度与其清除DPPH 的关系 没食子酸(GIP )、 皮素(QCT )、还原型谷胱甘肽(GSH )和α2生育酚(α2TP )是植物体内常见的抗氧化剂,BHT 是人工合成的常用食品抗氧化剂,Tiron 则是人工合成的自由基捕获剂.图2可见这几种抗氧化剂的浓度皆与DPPH 的光吸收呈显著的线性负相关(图2),相关系数r 除BHT 为018977(图2b )外,其余都在019670～019935之间.抗氧化剂浓度越高,清除DPPH 的能力越大.结果说明无论是植物的内源抗氧化剂还是人工合成的抗氧化剂,其抗氧化性都可用DPPH 法作定量评价.图2 几种抗氧化剂与DPPH 吸收峰(A 525)下降的关系(a )■———■:QCT ,y 1=-010872x +110543,r =019904;●———●:GIA ,y 2=-012485x +110843,r =019935;(b )■———■:BHT ,y 3=-010245x +019008,r =018977;●———●:GSH ,y 4=-010149x +110715,r =019918;(C )■———■:α2TP ,y 5=-010233x +018558,r =019788;●———●:Tiron ,y 6=-010212x +017586,r =019670.213 不同抗氧化剂清除DPPH 能力的比较 表1看出计算降低DPPH 吸收50%时抗氧化剂的浓度(IC 50值)或每微克抗氧化剂实际清除DPPH 的数量皆表明,没食子酸的清除能力最强,皮素次之,而GSH 、α2TP 和两种人工合成的抗氧化剂BHT 及Tiron 则较低.这与Cao 等[8]利用ORAC 法的测定指出一些类黄酮比ASA 、α2TP 和GSH 有更强的抗氧化活性结果相一致.表1 几种抗氧化剂清除DPPH 自由基能力的变化抗氧化剂 IC 50(DPPH 吸收降低50%时抗氧化剂的量) ρ/μg c /μmol ・L -1DPPH 清除量/g ・g -1GIP2111612324122QCT 516791317170AsA 8141261535107BHT 13190351132183GSH 34136621121130α2TP 19150221631119Tiron16180381121187214 抗坏血酸清除DPPH 与抑制肾上腺素氧化的比较 抑制肾上腺素氧化也常用作测定抗氧化能力的一种方法.图3比较了肾上腺素法与DPPH 法用于评价抗坏血酸(AsA )抗氧化能力的灵敏度.结果看出AsA 含量与DPPH 吸收之间的斜率为-010638,相关系数为019986(图3b ),而AsA 含量与抑制肾上腺素氧化之间的斜率为-010011,相关系数为019775(图3a ).即DPPH 法的直线斜率和与AsA 含量的相关性皆大于肾上腺素法,表明其更为灵敏与准确.此外,肾上腺素法需在碱性条件下反应,其活性氧(O ・2)源也需通过化学反应产生,而DPPH 法则可直接检测DPPH 自由基的变化.图3 抗坏血酸抑制肾上腺素氧化(a)和清除DPPH (b)的比较(a )y 1=-010011x +011619,r =019775;(b )y 2=-010638x +110962,r =019986.215 DPPH 法和亚油酸氧化法测定植物叶片抗氧化能力的比较 亚油酸氧化法也是测定植物抗氧化能力的常用方法.用它和DPPH 法比较生长在不同光强下森林植物黧蒴和九节叶片的抗氧化能力(图4),可以看出两种方法的结果基本一致.随生长光强的增加,两种植物抗氧化能力都提高.自然光照下九节叶片的抗氧化能力大于黧蒴,而且光强对九节抗氧化能力的影响较黧蒴大,显示前者对光强的敏感性较高.由此结果进一步表证了DPPH 法研究植物抗氧化能力与植物种类及外界环境因子之间关系的可行性.图4 生长在不同光强下的植物提取物清除DPPH (a)和抑制亚油酸自动氧化(b)的变化□:黧蒴;■:九节. 综上所述,应用DPPH 法来评价外源抗氧化剂和植物抗氧化能力是一种快速(反应时间仅需20min左右)、简便(操作简单,且用一般的分光光度计即可测定)、灵敏(只需要少量的植物样品)、直接(抗氧化剂直接作用于DPPH自由基,测定DPPH吸收的变化,而其他许多方法都是间接测定氧化产物的减少)可行的方法.参 考 文 献1 Osawa T,Namiki M A.Novel type of antioxidant isolated from leaf wax of Eucalypt us leaves.Agric Biol Chem,1981,45(3): 735～7392 Ottolenghi A.Interaction of ascorbic acid and mitochondrial lipides.Arch Biochem Biophys,1959,79:355～3633 Cao G,Alessio H M,Culter R G.Oxygen2radical absorbance capacity assay for antioxidants.Free Radical Biol Med,1993,14(3):303～3114 Larrauri J A,Sanchez2Moreno C,Saura2Calixto F.Effect of temperature on the free radical scavenging capacity of extracts from red and white grape pomace peels.J Agric Food Chem,1998,46(7):2694～26975 Y okozawa T,Dong E,Natagawa T,et al.In vit ro and i n vivo studies on the radical2scavenging activity of tea.J Agric Food Chem,1998,46(6):2143～21506 林植芳,李双顺,林桂珠,等.水稻叶片衰老与超氧歧化酶、脂质过氧化的关系,植物学报,1984,26(6):605～615Lin Z F,Li S S,Lin G Z,et al.Acta Bot Sin,1984,26(6): 605～6157 翁元凯,黄 山,翁念宇.用碱性连二硫酸钠水溶液产生超氧阴离子自由基,生物化学与生物物理进展,1989,16(3): 209Wong Y K,Huang S,Wong L Y.Prog Biochem Biophys,1989, 16(3):2098 Cao G,Sofic E,Prior R L.Antioxidant capacity of tea and common vegetables.J Agric Food Chem,1996,44(11):3426～3431Detection of Antioxidative C apacity in Plants by Scavenging Organic Free R adical DPPH.PEN G Chang2Lian,CHEN Shao2Wei,L IN Zhi2Fang,L IN Gui2Zhu(South Chi na Instit ute of Botany,The Chi nese A cademy of Sciences,Guangz hou510650, China).Abstract A very significant linear relationship was found between the capacity of scavenging DPPH free radical and concentrations of six antioxidants(r= 01898～01994)determined by spectrophotometry. There was an obvious difference in the capacity of scavenging DPPH free radical among different antioxidants.Both scavenging DPPH and inhibiting the oxidation of adrenalin were closely related with the concentration of ascorbic acid.The change of DPPH levels is more sensitive than that of adrenalin in the presence of ascorbate.The antioxidative ability in leaves extracts of two woody plants grown under different light intensities was measured by either scavenging DPPH or inhibiting the oxidation of linoleic acid.The same conclusion was drawn through these two assays.It is suggested that scavenging DPPH free radical is a rapid,simple,sensitive and practical assay for the evaluation of antioxidative capacity in plants.K ey w ords 1,12diphenyl222picrylhydrazyl(DPPH), plant,antioxidative capacity,free radical中国生物化学与分子生物学会简讯 由中国生物化学与分子生物学会承办的第十五届亚洲大洋洲生物化学家和分子生物学家联合会(FAOBMB)学术会议于10月21日至24日在北京举行。
茶树抗氧化物质的分离与鉴定
茶树抗氧化物质的分离与鉴定茶是人们喜爱的饮品之一，除去其独特的口感和香气，茶也因其富含抗氧化物质而备受人们关注。
抗氧化物质可防止细胞因氧化而受到损伤，包括许多生物活性物质，如茶多酚和儿茶素等。
在茶叶中，茶多酚和儿茶素含量较高，因此这些化学物质受科研工作者的重点研究。
本文将探讨茶树抗氧化物质的分离与鉴定。
一、茶叶中的抗氧化物质茶叶中包含多种抗氧化物质，其中茶多酚和儿茶素是最重要的两种。
茶多酚是一种生物活性的多酚类化合物，分别为儿茶素、儿茶素三醇和黄酮醇三类。
茶多酚的生物活性广泛，包括抗氧化、抗炎症、抑制肿瘤等功效。
儿茶素是茶多酚中占比最高的化合物，其所含的3,4-二羟基苯基结构决定了它的生物活性。
儿茶素三醇是儿茶素最活性的形式，具有强效的抗氧化、抗炎症和抗癌活性。
黄酮醇是一类具有强大抗氧化活性的树脂酸衍生物。
二、茶树抗氧化物质的分离茶树抗氧化物质的分离需要先进行提取。
传统方法是使用醇类溶剂将茶叶中的化合物提取出来，但这种方法存在提取率低、残留醇类物质污染等问题。
因此，新的分离方法不断涌现。
一种应用绿色化学的方法是超临界流体（Supercritical fluid, SCF）提取。
超临界流体是介于气态和液态之间的一种状态，相较于传统有机溶剂，超临界CO2提取有许多优点，如受控性高、提取效率高、无毒害、易于回收等。
因此，超临界CO2提取越来越受到茶叶提取领域的关注，但其成本较高。
分离方法包括高效液相色谱、气相色谱、毛细管电泳、毒性液相色谱等。
高效液相色谱（High performance liquid chromatography, HPLC）通常用于儿茶素的分离，分离效果与灵敏度较高。
毒性液相色谱（Toxicity Liquid Chromatography, TLC）则可用于茶多酚的分离。
各种分离方法具有其独特的优点和限制，应综合考虑选择适合的方法。
三、茶树抗氧化物质的鉴定茶树抗氧化物质的鉴定包括结构分析和生物活性评价两个方面。
DPPH和FRAP法测定41种中草药抗氧化活性
实验室研究与探索
RESEARCH AND EXPLORATION IN LABORATORY
Vol． 30 No． 6 Jun． 2011
DPPH 和 FRAP 法测定 41 种中草药抗氧化活性
陈玉霞， 刘建华， 林 峰， 杜向党
（ 河南农业大学 牧医工程学院，河南 郑州 450002）
0引言
人体产生的自由基及其诱导的氧化反应与多种疾 病密切相关，并可加速人体衰老，抗氧剂能有效清除自 由基，延缓人体衰老和预防疾病。目前，在医疗和食品 领域使用较多的是合成抗氧剂，而实验动物研究表明， 合成抗氧剂，如 BHT、BHA 对生物体有潜在的毒副作 用，加上人们日益追求环保，因此，近年来寻找天然、安
（ 3） 抗氧化活性的测定［1］。 ① 总抗氧化能力的测定（ FRAP 值测定） 。取各 供试品溶液，适当稀释后移液器取 100 μL，加入 FRAP 工作液 3 mL，混匀反应 20 min，于 593 nm 处读取吸光 度。以 FeSO4 为标准物质绘制标准曲线（ 见图 1） ，求 得回归方程为 Y = 0． 007X － 0． 019，相关系数为 R2 = 0． 994，样品的抗氧化能力以 FRAP 值表示： 1 FRAP单 位 = 1 mmol / L FeSO4 ，即 样 品 的 抗 氧 化 能 力 相 当 于 FeSO4 的 mmol / L 数。
中草药 白花蛇舌草
苍术 黑豆 茺蔚子 益母草 川芎 徐长卿 杜仲 黑芝麻 牛膝 龙葵 人参 黄芪 山药 葛根 生地 青黛 薏苡仁 韭子 大蒜
DPPH / % 15． 11 ± 3． 75 10． 77 ± 2． 29 9． 31 ± 0． 22 9． 13 ± 3． 67 9． 13 ± 1． 09 8． 47 ± 4． 31 7． 96 ± 3． 79 7． 85 ± 1． 55 7． 64 ± 1． 64 7． 55 ± 1． 75 7． 04 ± 3． 07 6． 89 ± 1． 65 6． 27 ± 3． 88 6． 56 ± 0． 05 6． 07 ± 3． 47 5． 71 ± 0． 60 5． 61 ± 2． 75 5． 20 ± 0． 10 4． 69 ± 0． 41 2． 75 ± 0． 98
采用DPPH法测定26种植物的抗氧化活性
( 1) 取植物提取液 1 mL 及浓度为 015 mm o l/mL 的 DPPH 溶液 0125 mL 先后加入同一具塞试管中, 摇 匀, 在黑暗中 37e 放置 20 m in, 以甲醇为空白在 514 nm 测定其吸光度 A i。
( 2) 取 0125 mL 015 mm o l/mL 的 DPPH 溶液与 1 mL 甲醇混合, 摇匀, 在黑暗中 37e 放置 20 m in, 以甲 醇为空白在 514 nm 测定其吸光度 A o。
212 植物抗氧化活性的复筛 对地瑜、甘草、赤芍、鸡血藤、白芍、虎杖、草豆蔻、
锁阳、山茱萸、女贞子、何首乌、仙茅 12种植物醇提液 进行浓度稀 释至 1m g /mL, 分别测 定其 对抗氧 化活 性。结果见表 2。
表 2 12种植物的抗氧化活性
植物
赤芍 地瑜 鸡血藤 虎杖 锁阳 白芍
醇提物平均 抑制率 /%
水提物的 制备: 称取植物 0105 g, 粉 碎后加 25 mL 去离子水, 沸水浴煎煮 1 h, 倾出上清液后重复提 取一次, 合并 2次煎煮的上清液, 将其浓缩至 10 mL, 得水提物药液浓度为 5m g / mL。
醇提物的 制备: 称取植物 0105 g, 粉 碎后加 10 mL 体积分数 95% 乙醇, 50e 超 声振荡提取 30 m in, 得上清液, 并定容至 10 mL, 得醇提 物浓度为 5 m g / mL。
天然产物抗氧化活性的筛选方法及应用
天然产物抗氧化活性的筛选方法及应用
一、筛选方法
1、DPPH自由基清除试验：DPPH自由基清除试验是用来检
测天然产物的抗氧化活性的一种常用方法，它可以测量天然产物抗氧化活性的强弱。
该方法的原理是利用天然产物中的抗氧化剂将DPPH自由基进行清除，从而检测天然产物的抗氧化
活性。
2、FRAP试验：FRAP试验也是一种检测天然产物抗氧化活性的常用方法，它可以测量天然产物抗氧化活性的强弱。
该方法的原理是利用天然产物中的抗氧化剂将Fe3+还原为Fe2+，从
而检测天然产物的抗氧化活性。
3、ABTS自由基清除试验：ABTS自由基清除试验也是一种
检测天然产物抗氧化活性的常用方法，它可以测量天然产物抗氧化活性的强弱。
该方法的原理是利用天然产物中的抗氧化剂将ABTS自由基进行清除，从而检测天然产物的抗氧化活性。
二、应用
1、食品抗氧化剂：天然产物的抗氧化活性可以用来制备食品
抗氧化剂，以延缓食品的氧化变质，延长食品的保质期。
2、医药抗氧化剂：天然产物的抗氧化活性可以用来制备医药
抗氧化剂，以防止药物氧化变质，延长药物的保质期。
3、保健品抗氧化剂：天然产物的抗氧化活性可以用来制备保
健品抗氧化剂，以防止保健品氧化变质，延长保健品的保质期。
多糖抗氧化活性研究
多糖抗氧化活性研究引言：近年来，抗氧化活性成为了食品、保健品和医药领域研究关注的焦点之一、氧化过程会导致细胞膜的损伤、DNA的断裂及功能性蛋白质的氧化，进而导致各种疾病的发生。
因此，发现和开发具有抗氧化活性的天然产物成为了研究者们的目标之一多糖作为一种具有广泛生物活性的天然产物，在抗氧化活性方面表现出了巨大的潜力。
多糖具有特殊的结构和化学性质，因此被认为是一种重要的天然抗氧化剂。
材料与方法：在本次研究中，我们从植物中提取了多糖，并对其抗氧化活性进行了评估。
提取多糖的方法是首先将植物切碎，然后使用特定溶剂进行提取。
提取得到的多糖溶液经过浓缩和干燥，最终得到多糖粉末。
抗氧化活性的评估主要采用了自由基清除能力和铁离子螯合能力这两种方法。
自由基清除能力的测定使用了DPPH（2,2-二苯基-1-苦基肼）自由基清除实验，原理是通过测定多糖对自由基DPPH的清除能力来评估其抗氧化活性。
铁离子螯合能力的测定使用了FER（铁离子还原力）方法，通过观察多糖对Fe3+的还原能力来评估其抗氧化活性。
结果与讨论：我们发现，提取得到的多糖具有较强的抗氧化活性。
在DPPH自由基清除实验中，多糖对DPPH的清除率在100μg/mL浓度下达到了80%以上。
在铁离子还原力实验中，多糖对Fe3+的还原能力也较强，对不同浓度的Fe3+产生了不同程度的还原作用。
多糖的抗氧化活性可能与其特殊的结构和化学性质有关。
多糖中富含的羟基、羟乙基和酚羟基等官能团可以与自由基发生反应，抑制自由基的活性。
此外，多糖还具有一定的金属螯合能力，可以与金属离子发生配位反应，从而减少金属离子对氧自由基的促进作用。
结论：本研究表明，从植物中提取得到的多糖具有较强的抗氧化活性。
多糖可能通过清除自由基和螯合金属离子等机制发挥其抗氧化活性。
多糖的抗氧化活性为其在食品、保健品和医药领域的应用提供了新的理论基础。
然而，还有许多方面需要进一步研究。
首先，需要进一步探究多糖的抗氧化活性与其结构和化学性质之间的关系。
DPPH法评价抗氧化活性研究进展
DPPH法评价抗氧化活性研究进展一、本文概述随着人们对健康生活的追求和对疾病预防的重视，抗氧化剂的研究和应用逐渐成为科学研究的热点。
DPPH（1,1-二苯基-2-三硝基苯肼）法作为一种简便、快速、高效的抗氧化活性评价方法，在抗氧化剂筛选、食品营养评价、药物研发等领域得到了广泛应用。
本文旨在综述DPPH法在评价抗氧化活性方面的研究进展，包括其基本原理、实验操作、影响因素以及应用实例等方面，以期为该领域的研究者提供全面的参考和借鉴。
通过本文的阐述，读者可以深入了解DPPH法的优势与局限性，进一步推动抗氧化活性评价方法的优化与创新。
二、DPPH法的基本原理DPPH（1,1-二苯基-2-三硝基苯肼）法是一种常用的体外抗氧化活性评价方法，其基本原理基于DPPH自由基的稳定性和颜色变化。
DPPH 自由基是一种紫色的有机自由基，其溶液在517nm处具有强吸收峰。
当抗氧化物质存在时，它们可以通过提供氢原子或电子来与DPPH自由基发生反应，从而使其颜色由紫色变为黄色，最大吸收峰也随之降低。
这种颜色变化与DPPH自由基被清除的程度成正比，因此可以通过测定反应前后溶液吸光度的变化来评价抗氧化物质的活性。
DPPH法具有操作简便、快速、灵敏度高和重现性好等优点，因此在抗氧化活性评价中被广泛应用。
DPPH自由基是一种脂溶性的自由基，可以模拟生物体内多种自由基的反应，因此DPPH法也具有一定的生理意义。
然而，需要注意的是，DPPH法仅是一种体外评价方法，其结果并不能完全代表抗氧化物质在生物体内的实际抗氧化效果。
因此，在评价抗氧化物质的活性时，还需要结合其他方法进行综合分析。
以上内容仅为简要介绍，如需更深入了解DPPH法的基本原理和应用，建议查阅相关文献或咨询专业人士。
三、DPPH法在抗氧化活性评价中的应用DPPH法作为一种简便、快速、灵敏且可重复性强的方法，已被广泛应用于抗氧化活性的评价中。
该方法基于DPPH自由基的稳定性和其在可见光区具有的特征吸收峰，通过测定待测物与DPPH自由基反应后吸光度的变化，可以推算出待测物的抗氧化活性。
普洱茶发酵样中Teadenol A 的纯化鉴定与体外抗氧化活性研究
ABSTRACT
【 Objective 】 A compound which content was increasing during the fermentation of pu-erh tea was detected in our previous work. In this work, the compound was purified and identified, and .in-vitro anti-oxidation activity was studied, as well as. 【 Method 】 This compound was purified through extraction using 80% methanol, vacuum concentration, column chromatography, and extraction with acetonitrile. This compound was detected using high performance liquid chromatography and identified by mass spectrometry and nuclear magnetic resonance analysis. The in-vitro anti-oxidation activity was studied through DPPH radical scavenging assay, total antioxidant capacity (T-AOC) assay, superoxide anion radical scavenging ability assay and hydroxyl radical inhibition assay. 【Results】 TLC showed that this compound was a signal spot, and HPLC showed that the peak area of the purified compound was 99.94%. Mass spectrometry assays showed the molecular weight was 276.0638, and molecular formula was C14H12O6. This compound was identified as teadenol A, which was identified by Japanese researchers in tea samples fermented by Aspergillus niger. The assays of in-vitro anti-oxidation activity revealed IC50 of DPPH scavenging activity and superoxide anion radical scavenging ability were 64.8μg/mLand 3.335mg/mL, respectivelythe. The total antioxidant capacity and the ability to inhibit the hydroxyl radical (▪ OH) capacity of 0.1 mg were 17.6 U/ ml and 12U/mL, respectively.【Conclusion】Teadenol A with hypolipidemic and antioxidant activity was purified and identified from the fermented pu-erh tea samples. This provided noval knowledge for chemical composition and health benefits of Yunnan pu-erh tea. Keywords : tea ; fermentation ; teadenol; activity
茶叶冲泡中茶多酚溶出及其对DPPH自由基的清除
茶叶冲泡中茶多酚溶出及其对DPPH自由基的清除
魏雪;张清安;黎梅雨
【期刊名称】《食品研究与开发》
【年(卷),期】2016(037)006
【摘要】以紫阳富硒茶为材料，研究冲泡温度、料液比、冲泡时间、冲泡次数和冲泡水质等5个因素对茶叶中茶多酚的溶出及茶汤清除DPPH自由基的能力的影响。
结果表明：各因素对茶多酚的溶出及茶汤清除DPPH自由基的能力均有一定程度的影响。
茶多酚的溶出量与茶汤清除DPPH自由基能力的相关性分析表明，二者之间并不呈现紧密相关性（0.0208~0.6534），也即茶汤的抗氧化能力并不完全由茶多酚贡献。
【总页数】5页(P1-5)
【作者】魏雪;张清安;黎梅雨
【作者单位】陕西师范大学食品工程与营养科学学院，陕西西安710119;陕西师范大学食品工程与营养科学学院，陕西西安710119; 陕西省果蔬深加工技术研究中心，陕西西安710119;陕西师范大学食品工程与营养科学学院，陕西西安710119
【正文语种】中文
【相关文献】
1.茶叶黑色素的理化性质及其清除DPPH自由基的研究 [J], 赵静;黄光荣;蒋家新
2.用清除有机自由基DPPH法评价茶叶多糖的抗氧化活性 [J], 聂少平;谢明勇;罗珍
3.探讨茶叶冲泡后铅的溶出情况 [J], 张争凯;王科磊
4.传统冲泡工艺对茶叶中茶多酚溶出的影响研究 [J], 张昊阳;王元秀
5.油茶叶乙醇提取物清除DPPH自由基作用的研究 [J], 李姣娟;黄克瀛;龚建良;马伟
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DPPH法评价抗氧化活性研究进展
DPPH法评价抗氧化活性研究进展韦献雅;殷丽琴;钟成;章明海;牛应泽【期刊名称】《食品科学》【年(卷),期】2014(035)009【摘要】植物化合物或植物提取物的抗氧化活性的体外评价是研究功能因子的一个重要方面.1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)法常用于评价化合物或植物提取物的抗氧化活性,但由于没有一个标准化的方法,因而不同实验的结果难于相互比较.本文从DPPH法的原理、测定方法、检测波长、DPPH初浓度、反应时间、清除率计算公式、结果表达、评价指标等几个方面对DPPH法做归纳总结,分析几种外界因素对DPPH法的影响,有助于研究者提高认识,从而准确的开展研究工作.【总页数】6页(P317-322)【作者】韦献雅;殷丽琴;钟成;章明海;牛应泽【作者单位】四川农业大学油菜研究中心,四川成都 611130;四川农业大学油菜研究中心,四川成都 611130;四川农业大学玉米研究所,四川成都 611130;四川农业大学油菜研究中心,四川成都 611130;四川农业大学油菜研究中心,四川成都 611130【正文语种】中文【中图分类】TS207.3【相关文献】1.细胞抗氧化活性方法在食物抗氧化活性评价中的研究进展 [J], 夏春燕;郭晓晖;李富华;陈龙;赵国华;明建2.用清除有机自由基DPPH法评价茶叶多糖的抗氧化活性 [J], 聂少平;谢明勇;罗珍3.常见生物模型抗氧化活性评价方法的研究进展 [J], 张泽生;卢亚莉;高云峰;吴天宸;王笑仪4.天然产物抗氧化活性评价方法研究进展 [J], 张雪;苗婷婷;陆炯;汤同中;张耀堂;张春平;段静雨5.DPPH法评价大黄提取物的抗氧化活性 [J], 闫海燕因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
青砖茶清除DPPH·能力及其多酚和黄酮含量研究
青砖茶清除DPPH能力及其多酚和黄酮含量研究杨新河;吕帮玉;黄明军;斯琴朝克图;毛清黎;刘仲华【期刊名称】《食品研究与开发》【年(卷),期】2016(037)023【摘要】采用DPPH自由基（DPPH·）清除法测定了18个青砖茶样品的抗氧化活性，并按照GB/T 8313-2008《茶叶中茶多酚和儿茶素类含量的检测方法》方法和亚硝酸钠-硝酸铝比色法分别测定它们的多酚和黄酮含量。
结果表明：18个青砖茶水提取物均能清除DPPH·，具有抗氧化活性，它们的浓度（0.05 mg/mL～0.30 mg/mL）与DPPH·清除率之间具有良好的线性关系，二者的相关系数介于0.9742～0.9945，且清除DPPH·的IC50最大值为0.2586 mg/mL，最小值为0.1144 mg/mL；多酚和黄酮含量的最高值分别为3.57%和3.84%，最低值分别为2.06%和1.01%；青砖茶清除DPPH·的IC50与多酚和黄酮含量的相关系数分别为0.684和0.715。
【总页数】5页(P1-4,5)【作者】杨新河;吕帮玉;黄明军;斯琴朝克图;毛清黎;刘仲华【作者单位】湖北工程学院生命科学技术学院，湖北孝感432000; 湖北省植物功能成分利用工程技术研究中心，湖北孝感432000; 特色果蔬质量安全控制湖北省重点实验室，湖北孝感432000;湖北工程学院生命科学技术学院，湖北孝感432000; 湖北省植物功能成分利用工程技术研究中心，湖北孝感432000;湖北工程学院生命科学技术学院，湖北孝感432000; 湖北省植物功能成分利用工程技术研究中心，湖北孝感432000; 湖北大学生命科学学院，湖北武汉430062;湖北工程学院生命科学技术学院，湖北孝感432000; 湖北省植物功能成分利用工程技术研究中心，湖北孝感432000;湖北工程学院生命科学技术学院，湖北孝感432000; 湖北省植物功能成分利用工程技术研究中心，湖北孝感432000;湖北工程学院生命科学技术学院，湖北孝感432000; 湖北省植物功能成分利用工程技术研究中心，湖北孝感432000【正文语种】中文【相关文献】1.板栗果皮多酚提取工艺优化及DPPH自由基清除能力研究 [J], 臧延青;李执坤;冯艳钰;张超;刘嘉旭2.老陈醋生产过程中总多酚、总黄酮含量及清除DPPH自由基能力的分析 [J], 陈树俊;苏静;刘诚;张海英;衡玉玮;刘亚斌3.花生红衣多酚的乙醇提取及清除DPPH自由基能力的研究 [J], 吴克刚;袁林;柴向华;孙敏甜;黄惠贤4.响应面法优化超声波辅助北苍术多酚提取工艺及其DPPH自由基清除能力研究[J], 陈克克;强毅5.响应面法优化红茶茶多酚清除DPPH能力的研究 [J], 唐淯桓;梁青;邹佳佳;丁新;丁立孝因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
用清除有机自由基DPPH法评价茶叶多糖的抗氧化活性
１，１－二苯基苦基苯肼（１，１－ｄｉｐｈｅｎｙｌ－２－ｐｉｃｒｙｌｈｙｄｒａｚｙｌ， Ｄ Ｐ Ｐ Ｈ ） 是一种稳定的有机自由基，其溶液具有特征的紫 红色团吸收峰，当存在自由基清除剂时，由于与其单 电子配对而使其吸收逐渐消失，其褪色程度与其所接受 的电子数成定量关系，因而可用分光法进行定量分析，
以分光光度法测定加入不同浓度的抗氧化剂或待测样品 后的吸光度的分析法是一种筛选自由基清除剂的简便方 法，在国外有着广泛的应用［ ５ ， ６ ］ 。但未见文献报道将其 用于评价茶叶多糖清除自由基的能力。本文采用清除有 机自由基 １，１－ 二苯基苦基苯肼（ＤＰＰＨ）法研究了江西几个 不同产地、不同等级的茶叶多糖的抗氧化活性，同时 也对不同的茶叶多糖的提取方法所得到的茶叶多糖的抗 氧化活性进行了评价，其结果可为茶叶多糖天然抗氧化 产品的原料筛选、开发研究提供相关依据。
高抗氧化活性茶叶粗多糖提取工艺研究
高抗氧化活性茶叶粗多糖提取工艺研究杨军国;宋振硕;王丽丽;陈键;陈林【摘要】以安溪铁观音为原料,以产品得率、茶多糖含量和DPPH自由基清除率为评价指标,考察先70%醇提+后水提和先水提+后70%醇沉等2种提取方式对茶多糖特性的影响.结果表明,与先水提+后70%醇沉相比,采用先70%醇提+后水提制备的粗茶多糖得率低,而多糖含量及DPPH自由基清除率则极显著提高.进一步通过正交试验分析发现,料液比和温度对粗茶多糖的DPPH自由基清除率呈显著性影响,料液比对粗茶多糖含量呈显著性影响,乙醇浓度则呈显著性影响粗茶多糖产品得率.为获得高活性且含量高的粗茶多糖,最优化工艺参数为乙醇浓度60%、料液比1:10(g/mL)、提取温度90℃和提取时间20 min.%Anxi Tieguanyin was employed to assess the 2 extraction methods of pre-70%ethanol extracting+post-water extracting and pre-water extracting+post-70%ethanol precipitating via crude tea polysaccharide yield, crude tea polysac charide content and DPPH·scavenging. The results showed that crude tea polysaccha-rides by pre-70%ethanol extracting+post-water extracting had a lower yield, significantly higher content and more stronger DPPH·scavenging than pre-water extracting+post-70%ethanol precipitating. For the further study by orthogonal test, found that the influences were significantly exhibited by the ratio of solid to liquid and temperature for DPPH·scavenging, the ratio of solid to liquid for the content of crude tea polysaccharides and ethanol concentration for the yield of crude tea polysaccharides. The optimal extracting conditions ofcrude tea polysaccharides with high bioactivity were as follows:10 time liquid of solid, extracted at 90℃for 20 min with 60%ethanol.【期刊名称】《食品研究与开发》【年(卷),期】2017(038)006【总页数】5页(P60-64)【关键词】茶多糖;提取;DPPH自由基清除率【作者】杨军国;宋振硕;王丽丽;陈键;陈林【作者单位】福建省农业科学院茶叶研究所,福建福安355015;福建省农业科学院茶叶研究所,福建福安355015;福建省农业科学院茶叶研究所,福建福安355015;福建省农业科学院茶叶研究所,福建福安355015;福建省农业科学院茶叶研究所,福建福安355015【正文语种】中文茶多糖（Tea Polysaccharides，TPs）系茶叶中具有生物活性的复合多糖的简称，因其在抗氧化和降血糖方面的突出功效日益受到关注[1-2]，能清除包括1，1-二苯基苦基苯肼（1，1-diphenyl-2-picrylhydrazyl，DPPH在内的多种自由基[3-5]。
龙井茶叶多糖的再认识及其结合物的抗氧化活性研究
龙井茶叶多糖的再认识及其结合物的抗氧化活性研究曲伟;高燕;宋丽娟【摘要】对龙井茶叶多糖及其结合物的抗氧化和清除自由基活性开展研究.采用水提醇沉法提取龙井茶叶多糖,经除蛋白和纯化后得到精制多糖(LP),将LP在三氟乙酸条件下水解完全,经C18柱层析分离后得到水洗脱部分(LP-HCW)和甲醇洗脱部分(LP-HCM),利用1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)法和普鲁士蓝法测定LP、LP-HCM和LP-HCW的清除自由基和抗氧化能力.结果显示:LP、LP-HCM和LP-HCW的DPPH自由基清除率分别为38.49％,59.48％和24.81％;还原力指数分别为0.062,0.036和0.030.实验证明:龙井茶叶多糖及其结合物均有较强的药理作用,具有清除自由基和抗氧化活性.【期刊名称】《北京联合大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2017(031)002【总页数】4页(P44-47)【关键词】龙井茶叶;多糖;结合物;活性贡献【作者】曲伟;高燕;宋丽娟【作者单位】北京联合大学校医院,北京100101;北京联合大学校医院,北京100101;北京联合大学校医院,北京100101【正文语种】中文【中图分类】S571.1茶叶作为历史悠久的饮品，经研究其具有降血糖、降血脂、抗氧化、清除自由基、提高免疫力和抗肿瘤等活性。
[1-2]诸多研究表明：茶叶中的多种化学成分产生抗氧化和清除自由基活性，包括多酚类、氨基酸、儿茶素、多糖等[3-4]，关于茶叶多糖的抗氧化和清除自由基活性研究均是以不同方法处理的茶叶多糖作为活性测试对象[5-6]，多糖结合物对多糖活性贡献的研究至今未见报道。
多糖属于多羟基大分子物质，可与其他物质结合形成多糖复合物，结合物的活性会表现在多糖复合物的活性中，Chen Haixia等[7]在绿茶抗氧化活性的研究中称研究对象为多糖结合物(polysaccharide conjugate)。
王元凤等[8]通过实验证实茶多糖结合金属离子形成络合物后清除自由基的活性会发生变化，提示直接将除蛋白后并以多种常规方法精制的多糖作为研究对象考察多糖的抗氧化和清除自由基活性的结果并不能真实反映多糖本身及其结合物的活性，具有一定的局限性，有必要对多糖结合物进行研究，以对多糖有进一步的了解。
抗氧化活性测定方法的比较
抗氧化活性测定方法的比较(共3页)-本页仅作为预览文档封面，使用时请删除本页-抗氧化活性测定方法的比较人体衰老和多种疾病均与自由基有关，寻找天然抗氧化剂具有重要意义。
黄酮、多糖、多肽、酚类等生物活性成分均具有抗氧化活性，抗氧化活性的筛选方法可分为体外和体内2种测试体系。
体外：抗氧化活性可以用在特定条件下，样品对检测体系中自由基的清除能力、抗油脂过氧化能力及样品的还原能力、总抗氧化能力等来衡量和表征。
常用的方法有羟基自由基（·OH）清除能力法、1,1-二苯基苦基苯肼（DPPH法）、2,2-联氮基-双-(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二氨盐（ABTS法）、超氧阴离子自由基法（O2-·）、邻苯三酚自氧化法、β-胡萝卜素漂白法、硫代巴比妥酸法、铁离子还原能力测定（FRAP法）、总酚测定法、ORAC法等方法。
体内：主要有DNA氧化损伤法、蛋白质氧化损伤法、线粒体氧化损伤法。
其中DPPH法和ABTS法操作较简单便捷，不需要特殊的检测设备，只在需固定时间下记下其紫外分光光度测量值后计算其自由基清除率，缺点是不同物质具有组成和结构的差异，与 DPPH·、ABTS+·的反应速率不同，反应到达平衡的时间不同，将反应时间固定在某一值时，可能对抗氧化剂的抗氧化性评价带来错误的判断，且DPPH自由基会和其他自由基发生反应。
邻苯三酚自氧化法缺点是检测波长、缓冲液的组成及ｐＨ值、邻苯三酚浓度等关键测定条件存在着较大差异。
β-胡萝卜素漂白法的缺点是β-胡萝卜素本身有抗氧化活性，对样品活性的测定结果有影响。
FRAP法主要用于食品业，优点是简单易操作、可以重复，缺点是无法测定硫醇化合物的还原能力。
ORAC法是国际上通用的评价食品氧化的标准方法，缺点是仪器成分较复杂，检测成本较高。
目前普遍使用的体外抗氧化活性指标一般都采用分光光度法，使用分光光度计测量各种颜色成分含量的变化。
分光光度法操作较简单、便捷，不需要特殊的检测设备，只在需固定时间下记下其紫外-可见分光光度测量值后计算其活性大小，具有成本低、效率高、样品量少等优点。
抗坏血酸清除DPPH自由基的作用机理
517 nm wavelength. Herein, the radical scavenging mechanisms of ascorbic acid on DPPH radicals were investigated by UV-Vis
spectrometric, electrochemical and mass spectrometric determinations. It was found that DPPH existed in two different forms,
O2N · NN
O2N
O2N
+e－, +H + NO2
H NN
NO2
Antioxidant
O2N
DPPH 自由基
DPPH2
图 1 抗 氧 化 剂 递 电 子 、 递 质 子 与 DPPH 自 由 基 生 成 DPPH2 的 反应式
Fig.1 Reaction equation in which electron and proton are transferred from antioxidant to DPPH to form DPPH2
图 2 抗 坏 血 酸 和 DPPH 混 合 溶 液 的 UV-Vis 吸 收 光 谱 Fig.2 UV-Vis spectrum of aqueous ascorbic acid solution and its
mixture with DPPH ethanol solution
由图 2 可知，抗坏血酸因其羰基与 C2 和 C3 间的不 饱合键的共轭作用在 282nm 波长处可观察到羰基的较强 的 R 吸收带，而 DPPH 在 200～250nm 波长范围内可观 察到较强的因苯环共轭导致的 k 带、E 带和 B 带相重叠 的末端吸收带，同时在 323nm 波长处出现 DPPH 自由基 单电子的 n →π* 跃迁导致的吸收带和在 517nm 波长处 出现，可能是由于 DPPH 中的 3 个苯环通过氮 - 氮双键 共轭引起的π→π* 跃迁引起的可见区的吸收带。从以 上紫外光谱分析可推知，DPPH 在乙醇溶液中不仅是以 自由基形态存在，还有可能存在 DPPH 自由基与空气中 的氧作用后生成的高度共轭结构的正离子形态 DPPH+ 导 致其在可见光区具有强烈的吸收光谱，其结构见图 3。
基于DPPH法的茶叶儿茶素类抗氧化谱效关系研究
基于DPPH法的茶叶儿茶素类抗氧化谱效关系研究作者：林清霞王丽丽杨军国宋振硕陈林来源：《福建农业学报》2020年第02期摘要：[目的]研究茶葉儿茶素HPLC指纹图谱与其自由基清除活性的关系。
[方法]采用70%甲醇对绿茶、白茶、闽北乌龙、闽南乌龙、红茶5类共25批次样本进行提取;以福林酚法测定总酚含量;以1.1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH）法研究自由基清除活性;同时通过高效液相色谱法（HPLC）获取指纹图谱数据并对所获取的指纹图谱数据进行主成分分析;采用偏最小二乘回归分析研究HPLC指纹图谱与DPPH清除活性的谱效关系，结合皮尔逊（Pearson）相关性分析对偏最小二乘回归模型进行验证。
[结果]获取25批次样本的HPLC指纹图谱，确定了8个儿茶素类化合物，成功构建了偏最小二乘回归方程，其决定系数R2=0.9009.结果表明表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）、表没食子儿茶素（EGC）、表儿茶素没食子酸酯（ECG）与DPPH清除力相关性最强，均呈极显著正相关;没食子酸（GA）与DPPH清除力呈负相关。
Pearson相关性分析结果与偏最小二乘回归模型结果基本一致。
[结论]本研究通过HPLC指纹图谱信息可预测抗氧化活性。
关键词：儿茶素;抗氧化;高效液相色谱（HPLC）;谱效关系中图分类号：TS272文献标志码：A 文章编号：1008-0384（2020）02-4210-070 引言（研究意义）谱效关系是中医药研究人员提出的一种全新的思维方式，即采用高效液相色谱（High performance uquid chromatography，HPLC）、近红外光谱（Near infrared spectrometry，NIR）、核磁共振（Nuclear magnetic resonance，NMR）、气质/液质联用（Gas chromatography/Liquid chromatography-Mass spectrometry，GC/LC-MS）等先进分析技术获得样品的化学指纹图谱，也就是“谱”：同时采用传统分析方法获得这些样品的活性数据，也就是“效”：将所得到的两组数据通过合适的化学计量学和统计学方法进行数据挖掘和处理，从而建立指纹图谱与药效之间的关系模型。
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也对不 同的茶叶多糖 的提取 方法所得到的茶叶多糖的抗 氧化活性进行了评价 ，其结果可为茶叶多糖天然执氧化 产 品的原料筛选 、 开发研究提 供相 关依据 。
１ 材料 与方法
Ｉ 材 料 和试 剂 ． Ｉ
茶叶原料 采 自江 西分宜 、婺源 、上犹 等地 的绿茶
１ 茶叶多糖 的提取精制 ＿ ３ 称取一定量茶叶，加入 ２ 倍量蒸馏水在 ５ ℃水浴巾 ０ ０ 搅拌提取 ２ ，双层滤布过滤，滤渣再加入 １ ｈ ０倍量蒸馏
水在 ５ ℃水浴 中搅 拌提 取 １ ，双 层滤 布过 滤 ，合并 两次 ０ ｈ
２ Ｄ Ｐ ． １ Ｐ Ｈ的吸收光谱
滤液，离心分离（ ８ ０／ ｎ ５ ｉ） ４０ ｒ ｍｉ ，１ ｒ ｎ ，真空浓缩（０ ａ ５ ℃，
不 同产地 、不 同等级 的茶 叶多糖 的抗氧化 活性 ， 同时
强人体非特异性免疫功能等方面也有明显的功效【 】 同 ｌ Ｉ 时 也有研 究表 明，茶叶多 糖具有抗氧 化作用 ，如邓俊 林等［ ３ 】 从前庆沱茶中分离出的茶叶多糖被发现对小白鼠红 细胞内 Ｓ Ｄ 的活性有明显增强作用 ：陈海霞等【从湖北 Ｏ ４ １ 宣恩县的富硒 茶叶中提取出来的多糖被发现在 Ｄ 脱氧核 一 糖 ． 体系中对羟 自由基有清除作用 。 铁 １１ 二苯基苦基苯肼（。 ｄｐ ｅ ｙ．一ｉ ｙｈ ｄａｙ． ，． １１ ｉｈ ｎ １ ｐｃ ｌｙｒｚ１ 一 ２ ｒ Ｄ Ｐ 是一种稳定的有机 自由基 ，其溶液具有特征 的紫 Ｐ Ｈ） 红色 团吸收峰 ，当存在 自由基清 除剂时 ，由于与其单 电予配对而使其吸收逐渐消失，其褪色程度与其所接受 的 电子数成定量关系，网而可用分光法进行定量分析 ，
Ａ为样品与 Ｄ Ｐ Ｐ Ｈ反应后的吸光度 ，Ｂ为样品的空白ｒ 样
品 ０１ ＋ ． ０ 的 乙醇） ． ｍｌ１ ｍｌ ％ ９ ５ 的吸 光度 ，每 一样 品平 行测
Ｓ ３０ Ｙ ２０型超声波清洗器 上海声源超声波仪器设备有限
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三 次 ，取 其 平 均 值 。 ２ 结果与分析
关键词 ：１１ 二苯摹 苦基苯肼 （ Ｐ ；茶叶多糖 ：抗氧 化 ，一 ＤＰ Ｈ）
Ａｎｉｘｄ ｔ ｅ ｔ ｉ ｖ ｌａｉｎＳ ｕ ｙｏ ｅ ｏｙ ａ ｃ ａｉｅ ｙＳ ａ ｅ ｇｎ Ｐ ｔ ｉａｉ ｉ ｔ Ｅ ａｕ ｔ ｔｄ ｎＴ ａ ｌｓｃ ｈ ｒ ｃ ｖ ｎ ｉｇＤＰ Ｈ ｏ ｖ Ａｃ ｖ ｙ ｏ Ｐ ｄｂ
ＮＩ ｈ ｏ ｐ ｎ Ｅ Ｓ ａ —ｉ ｇ， ＸＩ Ｍ ｉ ｇ ｙ ｎ 木 ＬＵＯ ｅ Ｅ ｎ — ｏ ｇ ， Ｚｈ ｎ
（ ｅ ａ ｏａ ｒ ｆ ｏ ｄＳ ｉ ｃ ｆ ｎｓ ｙｏ ｄ ｃ ｔ ｎ Ｎａ ｃ ａ ｇＵｎｖ ｒｉ ， ｎｈ ｎ Ｋ ｙＬ ｂ ｒｔ ｙｏ ｏ ｃｅ ｅｏ ｉ ｒ ｆ ｕ ａ ｏ ， ｎｈ ｎ ｉｅｓ ｙ Ｎａ ｃ ａ ｇ ｏ Ｆ ｎ Ｍｉ ｔ Ｅ ｉ ｔ
基苯肼（ Ｐ 有机 自由基能力 的方法进 行评价 。结果表 明，不 同产地 、品种 以及不 同提取 方法所得的茶 叶多糖清 ＤＰ Ｈ） 除 ＤＰ Ｈ有机 自由基 的能力有较为 明显的不 同，而 同 一产地不 等级茶叶 中的茶叶 多糖清除 Ｄ Ｐ Ｐ Ｐ Ｈ有 机 自由基 的能 力 差别 不 明显 。
液中，迅速混匀，室温下静置 １ ｍｉ ｎ后测吸光度变化 。 ０
样品对 Ｄ Ｐ Ｐ Ｈ的清除率 ： （ ） ｏ ｌ【 Ｂ ／ 】×１０ Ａ Ａ ０ ％，这里 Ａ ｏ
为未 加样 的 Ｄ Ｐ （． Ｐ Ｈ ０１ ｌ ０ 乙醇） Ｐ Ｈ １ ｍｌ Ｐ ＋ ． ％ ９ Ｄ ｍ５ 的吸光度 ，
图１
Ｆｇ１ ｉ．
波长（ｍ） ｎ ＤＰ Ｈ的吸收 光谱 Ｐ
理： １在室温下搅拌浸提 ｌ ； ２５ ℃水浴加热搅拌浸提 （） ｈ （）０ ｌ ；３７ ￣水浴加热搅拌浸提 ｌ ；４９ ￣水浴加热搅拌 ｈ （）０Ｃ ｈ （）０Ｃ 浸提 ｌ； ５１０Ｃ ｈ （）０ ＂水浴加热搅拌浸提 １ ；６在火力为 １０ ｈ （） ０ 的微波 炉中微波辐射提取 ６ 后 再在室温下搅拌浸提 ５ Ｓ
ｅ ｔａｔ ｎ ｔｅａ ｔ ｘｄ ｔ ｅａ ｔ ｉｅ ｆｅ ｏｙ ａ ｃ ａｉｅ ｏ ｖ ｒ ｕ ａ ｄｄｆｅｅ ｔ ｘｒ ｃｉｎｐｏ ｅ ｓｓ ｒ ｅｅｍｉｅ ． ｘｒｃｉ ． ｉ ｉ ａ ｖ ｃｉ ｔ ｓ ｔａｐ ｌｓｃｈ ｒ ｓｒ ｍ ａｉ ｓ ｅｓａ ｉ ｒｎ ｔａｔ ｒｃ ｓｅ ｅｄ ｔｒ ｎ ｄ ｏ ｈ ｎ ｏ ｉ ｖｉ ｏ ｄ ｆ ｏ ｔ ｎ ｅ ｏ ｗｅ Ｔ ｅｒｓ ｌ ｈ ｗｅ ｈａ ｔｅ ａｅｒｍａｋ ｂｅｅ ｅ ｔｏ ｒｇｏ ， ｒｅ ｎ ｄｅ ｔａ ｔ ｎｐ ｏ ｅｓｏ ｈｅｃ ｐ ｃｔ ｆ ｃ ｖ ｎ ｉｇＤＰ Ｈ ｈ ｅｕｔ ｓ ｏ ｄｔ ｔ ｒ ｒ ｅ ｓ ｈ ｅ ｒ ａ ｌ ｆ ｃ ｆ ｉｎ ｂ ｄａ ｓ ｅ ｅ ｘｒｃｉ ｒ ｃ ｓ ｎｔ ａ ａｉ ｏ ｙｏ ｓａ ｅ ｇｎ Ｐ
中图分类 号：Ｒ ５ ． １１ ２
文献标识码：Ａ
文章编 号：１０ ． ３（０６ ３ ０４ ３ ０２６ ０２０） ． ３ ． ６ ００ ０
茶叶是一种被人们广泛接受的饮品， 自古就享有养 生之誉 。现代药理研究发现 ，茶叶中多糖具有降血糖、
降血 脂 、降血压及 减慢心 率、耐缺氧 等作用 ，在 抗凝 血 、防血栓形成 、保护血 相、增加 冠状动脉 流量和增
真空干燥（５ ４ ℃，真空度 ０ ９ ＭＰ ） ． ５ ａ至恒重，即得精制茶 ０ 叶 多糖 ， 备 用 。
槲 ６ ０
箍 ｏ ４
重２ ：
抗坏 血酸 溶液浓 度（ ｍ） ｍｇ
１ 有机 自由基（ Ｐ Ｈ） ． ５ Ｄ Ｐ 清除能力的测定
１ ． 有 机 自由基 （ Ｐ Ｈ 的吸 收光 谱 的测 定 ．１ ５ Ｄ Ｐ ） ＤＰ Ｐ Ｈ溶于少量 的 甲苯后 ，以 ５ ％ 乙醇配成 ０ ｇ ０ ．／ １ Ｌ溶
Ａｂ ｏ ｐｉｎｓ ｅ ｔｕｍ ｆＤＰＰＨ ｓ ｒｔｏ ｐ ｃ ｒ ｏ
Байду номын сангаас
从图 １ 可以看 出，有机 自由基 Ｄ Ｐ Ｐ Ｈ溶液有两个特
征吸收峰 ３ ０ ｍ和 ５ ５ ｍ，加入常用食品抗氧化剂抗坏 ３ｎ ２ｎ
３ ｍｉ ；７超声（３ Ｈ ，ｌＯ 振荡 １ 。将上述条件下 ０ ｎ （） ３ ｋ ｚ Ｏ Ｗ） ｈ 的提取物分别取出后用双层滤布挤压过滤，滤液离心分
５ｒ ｎ ０／ ，真宁度 ００ ５ ａ，Ｓｖ ｇ 试剂（ ｍｉ ． ＭＰ ） ｅ ａ ｅ ９ 氯仿： 正丁醇 ４ １ 除蛋 白，反复进 行三次至无蛋 白层，然后用流动 ：）
＝
自来水透析 ４ ｈ ８ ，蒸馏水透析 ２ ｈ ４ ，透析液中加入无水 乙醇使 乙醇浓度达 ７ ％，于 ４ ０ ℃冰箱中醇沉过夜 ，再离
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３ ２０Ｉ ｆ Ｎ ．３ ４ Ｄ６ ．７ ｏ０ ２’
※基
用清除有机 自由基 ＤＰ Ｈ 法评价茶叶多糖的 Ｐ 抗氧化活性
聂少平 ，谢 明勇 木 ，罗 珍 （ 南昌大学 食品科学教育部重点实验室，江西 南昌 ３０４） ３０ ７
摘 要 ：采用不同方法从不 产地 、不 同等级和 品种的茶叶 中提取茶 叶多糖 ，其抗氧化 活性 用清除 １ ． ， 二苯基苦 １
ｐｃ ｌｙｒｚ ｌ Ｐ ｆ ｅ ａ ｃ ，ｎ ｅ ｖｌａ ｄｕ ｉｗ ｓ ｘ ｒｓｅ ｅｅｕｖ ｌ ｔｏ ｃｎｒｔ ｎｏ ｃｒｉａｉ． ｆ ｒ ｉｒ ｈ ｄａｙ（ Ｈ） ｅ ｄ ａ ａｄｔ ａ ｔ ｎｔ ａ ｐｅｓｄ ｓ ｉａ ｎ ｎｅｔ ｉ ｆ ｓｏｂｃ ｃ Ａ ｔ ｙ ＤＰ ｒ ｒｉ ｌ ｈ ｅ ｕｅ ｅ ａｔ ｑ ｈ ｅ ｃ ａｏ ａ ｄ ｅ
作 者简 介 ：聂少平 （ ９ ８ ） １ ７ ． ，男 ，博士 生 ，研 究 方向为 食品化 学 与营养 学
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荩
公 司；其 它试剂 为 国产 分析 纯 。
１ 仪 器 ． ２
２便 ： ０ ｊ ０ ｆ Ⅳ： ０ ２ ∞
１ ． 精制茶叶多糖对有机 自由基（ Ｐ Ｈ 清除能力的测 ．２ ５ ＤＰ ）
以分光光度法 测定加入不同浓度 的抗氧化剂或待测样 品
后的吸光度的分析法是一种筛选 自由基清除剂的简便方 法，在国外有着广泛 的应用 Ｉ６ ５１ １。但未 见文献报道将其 用 于评价茶叶多糖清除 自由基 的能力。本文采用清除有 机 自由基 １ｌ ， 二苯基苦基苯肼（ Ｐ Ｈ 法研究了江西几个 Ｄ Ｐ ）
和 红 茶 ；抗坏 血 酸 美 国 Ｓｇ 公 司 ；１１ 二 苯基 苦基 ｉｍａ ，．
苯肼（， ｄｐ ｅｙ－．ｉ ｙｈ ｄａｙ，Ｄ Ｐ ） 美国 Ｓｇ ａ １ 一ｉ ｎ ｌ ｐｃ ｌｙｒｚｌ Ｐ Ｈ １ ｈ ２ ｒ ｉｍ
基 会项 目：国家 自然 科学基金 资助项 目（０ ６ ０ ５ ２４ ２ ０ ）
含 量 的变 化 。 ２ 抗坏血酸浓度与清除 ＤＰ Ｈ的关系 ． ２ Ｐ
１０ ０ ｏ
反复进行三次至无蛋白层，然后用流动 自来水透析 ４ ｈ ８，
蒸馏水透析 ２ ｈ ４ ，透析液中加入无水 乙醇使乙醇浓度达
７ ％，于 ４ ０ ℃冰箱中醇沉过夜，再离心分离（ ８ ０／ ｎ ４ ０ ｒｍｉ ， １ ｍｉ ） ５ ｎ ，沉淀依次用无水乙醇 、丙酮 、乙醚各洗两次，
定
扫描型紫外可见分光光度计（ ５０ Ｃ 天美科学 ｕｖ ８０Ｐ ）
取 ０１ 不 同的精制茶叶多糖溶液加入 ５ Ｐ Ｈ溶 ． ｍｌ ｍｌ Ｐ Ｄ
仪器有限公司： Ｖ ０ ０ Ｕ ２ ０ 紫外分光光度计 上海尤尼柯仪
器有限公司；Ｄ ．２ 型电热恒温水浴锅 上海精宏实验 Ｋ ￥４ 设备有限公司：Ｔ Ｌ ５ Ｄ ．Ａ离心沉淀机 上海安亭分析仪 器有限责任公司： Ｅ５ 旋转蒸发仪 上海亚荣生化有限 Ｒ ，２ 公司；ＷＤ７ ０ Ｔ １ ． ０ Ａ Ｌ ７ ３电脑型烧烤微波炉 Ｇａａ ｚ ｌｎ ：
心分 离（ ８ ０／ ｉ ， １ｍｉ） ４ ０ ｒ ｎ ５ ｎ ，沉 淀依 次用 无水 乙醇 、丙 ａ ｒ