各国药典关于HPLC色谱条件允许调整范围
色谱分析允许偏离的限度(流速、柱温、进样量等)
在色谱分析领域中，允许实验室出于提高检测性能与效率的需要，对标准方法或官方方法中规定的仪器操作条件进行调整，但不能超出一定的规定。
超出一定的调整都视为方法变动。
1、HPLC流动相的pH值流动相制备过程中，水溶性缓冲液pH值可在标准规定值的±0.2pH单位范围内调整。
2、HPLC缓冲液中盐的浓度流动相制备过程中，如果pH值变化满足要求，则水溶性缓冲液中盐浓度可在±10%范围内调整。
3、HPLC流动相中各组分的比例流动相中组分的增减可以达到该组分在组成中所占比例的30%以上。
流动相中占较高比例的组分，调整的绝对量应在±10%范围内变动。
流动相中占较低比例的组分，调整的绝对量应在±2%范围内变动。
调整后，任何组分的最终含量都不能被降为零。
4、HPLC紫外-可见光检测器的波长HPLC紫外－可见光检测器的波长不允许偏离方法中的指定值。
但可使用仪器制造商规定的程序或其他验证程序验证检测器的波长，其误差应小于±3nm5、色谱柱柱长GC/HPLC柱长最大可调整值为±70%6、色谱柱内径HPLC色谱柱内径，最大可调整值为±25%;对于GC色谱柱内径，最大可调整值为±50%7、流速GC/HPLC最大可调整值为±25%8、进样量对于GC和HPLC，进样量可减少至精密度和检出限可接受限值。
只要不对诸如基线、峰形、分辨率、线性度和保留时间等因素产生不良影响，进样量可增加至标准指定进样体积的两倍。
9、HPLC粒度最大可调整值为±50%10、HPLC柱温最大可调整值为±10%11、GC柱箱温度最大可调整值为±10%12、GC毛细管壁厚最大可调整范围为－50%～100%13、GC程序升温允许可调整温度为10%。
对于需维持的特定温度或从一个温度改变至另一温度，允许调整的最大限度为±20%以上方偏离的限度的依据，参照：美国FDA《实验室质量管理手册》。
2020版《中国药典》通则0512 HPLC 如何优化色谱方法
2020版《中国药典》通则0512 HPLC 如何优化色谱方法随着超高效液相技术（小粒径色谱柱的应用）的发展，药典在适应新技术的使用，指导企业如何去优化方法，达到缩短分析时间、节省流动相的目的。
今天，我们一起来分析在保持与现有方法相似的分离效果的前提下，如何选择合适的色谱柱和相应的色谱参数。
一、2020版药典与2015版药典0512参数调整对比表1：2020版药典与2015版药典0512参数调整对比（其余参数，如流动相比例、缓冲盐浓度、柱温、pH等改变，本文不涉及，此处不细说）上表1中A/B/C三项，扩充了色谱柱的选择范围，而D/E/F则针对具体的每一个参数调整提供计算方式。
下面，我们用具体的案例进行推导。
二、案例推导1、改变柱长L和粒径dp假设当前一个色谱方法为：目标：保持分离度R基本不变，缩短分析时间和流动相。
过程：根据公式1：其中，k为保留因子，α为选择因子。
当色谱柱固定相、流动相的组成及比例、柱温不变，则α和k不变。
因此，分离度R仅与理论塔板数N相关。
而N∝L/dp（正比），只要保持L/dp基本不变，则R基本不变。
当前色谱柱Column1的L1/dp1=250/5=50，所以需要从当前市场上常用的色谱柱中选择L/dp≈50的色谱柱，例如柱长为100mm，粒径dp为1.8μm的色谱柱，则L2/dp2=100/1.8=56，与当前色谱柱Column1的L1/dp1基本一致（比Column1的L1/dp1值50变化+12%，在药典规定的-25%~+50%范围内。
有一定程度的增加，但有利于分离度R）。
注：此处粒径1.8μm是全多孔填料，产生的柱压比较高，因此，可选择表面多孔填料，例如2.7μm粒径的表面多孔填料色谱柱，因为其特殊的填料技术，实际的硅胶粒径仍只有约1.8μm（如下图1）。
图1：全多孔填料和表面多孔填料示意图。
各国药典允许调整范围
各国药典允许调整范围Adjusting Ph. Eur. Methods欧洲药典调整范围1. Mobile phase pH: ± 0.2 units• pH of 7.6 can be adjusted from 7.4 – 7.8流动相pH：0.2单位例如：pH为7.6可以调整为7.4-7.82. Concentration of salts in buffer: ± 10 %• 20 mM Potassium phosphate can be 18 – 22 mM, as long as proper pH is maintained as above2.缓冲盐浓度：正负10%20mM磷酸钾可以调整到18-22mM，pH的可调整范围如上。
3. Ratio of components in mobile phase: ± 30 %The amount(s) of the minor component(s) can be modified by ± 30 % relative or ±2 % absolute. However a change in any component cannot exceed ± 10 % absolute. • 60:40 Acetonitrile/Water could be adjusted to ± 12 % water (= 30 % of 40),but this exceeds the ±10 % maximum absolute change. Therefore the amount of water can range from 30 % to 50 % in this case.3.流动相组分的比率：正负30%较少的组分能改变相对比率正负30%或绝对比率正负2%。
气相色谱参数调整范围药典
气相色谱参数调整范围在各国药典中通常有明确的规定，以确保分析结果的准确性和重现性。
这些参数包括但不限于：
1. 固定相粒径：对于填充柱，固定相颗粒的最大减小量通常不超过50%，不允许增大。
2. 膜厚：对于毛细管柱，膜厚可以在-50%到+100%的范围内调节，但需确保符合规定的要求。
3. 色谱柱长度：色谱柱长度可以±70%范围内调节，这取决于具体的实验要求和所用仪器的限制。
4. 色谱柱内径：色谱柱内径允许的调整范围没有明确说明，这可能因为不同应用和仪器对内径的要求不同。
5. 流动相pH值和浓度：例如，欧洲药典（EP）中规定，对于使用缓冲盐作为流动相的情况，pH值可在规定范围内的±0.2以内进行微调，且20mM磷酸钾可调整至18-22mM，只要最终pH值符合要求即可。
请注意，以上信息基于我之前记住的知识库内容，具体细节可能会随着各国药典更新而发生变化。
[医学]欧洲药典HPLC规定
![[医学]欧洲药典HPLC规定](https://img.taocdn.com/s3/m/cc93c4777375a417866f8ffa.png)
对仪器的一般要求和色谱条件
3.缓冲盐浓度：±10%，例如：20mM磷酸钾可 以在18-22mM范围内，只要pH值符合要求就行
4.流速：±50%，例如：1mL/min流速可以在 0.5至1.5mL/min范围内变化
对仪器的一般要求和色谱条件
改变柱尺寸时，允许改变流速
固定相类型不得改变；粒径最大可以减 小50％，不得增加。
固定相类型不得改变；粒径不得改变。
长度可以改变±70％；内径可以改变 ±25％。
±10℃。
不得改变
长度可以改变±70％；内径可以改变±25 ％。
±5℃
不得改变
如果色谱峰的检测和重复性符合要求， 如果色谱峰的检测和重复性合适，进样量
进行有关物质检查时，定量限（以信噪比为10计算）应 小于或等于忽略限。
系统适用性试验
进行原料药的含量测定时，采用对照品溶液进样数次，按下式计算最 大允许相对标准偏差（Ｓｒ（％）ｍａｘ）：
式中，Ｋ为常数0.349，从表达式
推导得出 表示Ｂ=1.0时，６次进样后获得的百分相对标准偏差。Ｂ为药典正文中各个品 种含量限度的上限与100%之差。ｎ为对照品溶液的重复进样次数（３<=ｎ<= ６）。Ｔ90%,ｎ－１为当自由度为ｎ－１,概率水平为90%,（双侧）时的ｔ检验值。 除另有规定外，最大允许相对标准偏差不得超过下表相应的数值。
因此，这个条件下，水的比例只能在30%至50%之间进行 过了±10%的限制。因此，这个条件
调整。
下，水的比例只能在30%至50%之间进
行调整。
紫外可见检测器检测波长 不允许调整
不可改变
色谱柱长度 色谱柱内径
各国药典关于HPLC色谱条件允许调整范围
欧洲药典EP
流动相PH值 缓冲盐浓度 ±0.2，pH7.6可以在 7.4-7.8之间调整 ±10%，20mM磷酸钾可以 在18-22mM范围内，只要 pH值符合要求就行 ±30%，最小组成的比例 可以调整30%，但是，任 何组成的比例的改变不 能超过±10%.60:40乙腈 /水，水的比例可以调整 ±12%（=40*30%），但 是这超过了±10%的限制 。因此，这个条件下， 水的比例只能在30%至 50%之间进行调整。 不允许调整 ±70%，150*4.6mm规格 的色谱柱，柱长可以改 变±105mm ±25%，150*4.6mm规格 的色谱柱，内径可以改 变±1.15mm
中国药典CHP2010
未明确 未明确 ±30%，最小组成的比例可 以调整30%，但是，任何组 成的比例的改变不能超过 ±10%.60:40乙腈/水，水 的比例可以调整±12% （=40*30%），但是这超过 了±10%的限制。因此，这 个条件下，水的比例只能 在30%至50%之间进行调整 。 不可改变
流动相组成比例
紫外可见检测器检测波长 色谱柱长度
色谱柱内径粒径Βιβλιοθήκη 流速 进样体积 柱温 梯度洗脱
不允许调整 ±70%，150*4.6mm规格的色 可适当调整 谱柱，柱长可以改变± 105mm ±25%，150*4.6mm规格的色 可适当调整 谱柱，内径可以改变± 1.15mm 可以适当调整；一般 3~10um，粒径更小（约 可以降至50%，10um的粒 可以降至50%，10um的粒径 2um）可用。孔径：分子量 径可以调整为5um 可以调整为5um 小于2000，孔径在150A以 下；分子量大于2000，孔 径300A。 ±50%，1mL/min流速可 ±50%，1mL/min流速可以在 可以适当调整 以在0.5至1.5mL/min范 0.5至1.5mL/min范围内变化 围内变化 只要精密度和检测限可 只要精密度和检测限可以达 可以适当调整 以达到要求就可以减少 到要求就可以减少 10%，最大不超过60℃ 10% 一起系统过大的滞留体 积会明显改变分离度， 保留时间和相对保留时 间
高效液相色谱法测定范围
高效液相色谱法测定范围
高效液相色谱法（HPLC）是一种常用的分析技术，广泛应用
于各个领域。
其测定范围取决于所选用的色谱柱、检测器和分析方法。
在理论上，HPLC可以用来分析各种有机物、无机离子和生物
大分子等。
具体的测定范围通常由以下几个方面决定：
1. 柱选择：HPLC柱是HPLC分析中的关键部分，根据不同的
分析需求，可以选择使用不同类型的柱。
常用的柱包括反相柱、离子交换柱、大小排阻柱等。
根据不同的化合物特性和物理性质，选择适当的柱可以扩大测定范围。
2. 检测器选择：HPLC常用的检测器包括紫外检测器、荧光检
测器、电化学检测器等。
不同的检测器对不同类型的分析物具有不同的灵敏度和选择性，因此可以根据分析物的特性选择合适的检测器。
3. 分析方法优化：通过优化色谱条件，如流动相组成、流速、柱温等，可以提高分析方法的灵敏度和选择性，从而扩大测定范围。
总的来说，HPLC的测定范围较广，可以用于分析各种化合物
和物质。
在具体应用时，需要根据具体的分析需求选择合适的色谱柱、检测器和优化分析方法，以达到最佳的分析结果。
药典液相色谱条件调整范围举例说明
各国药典液相色谱条件调整范围在采用药典方法对药品进行检测时，难免需要对药典中的方法进行调整，以达到更好的分离检测效果。
好多朋友并不能准确清晰了解能不能调、怎么调？下面就这个问题进行了说明，主要是以药典的液相色谱条件中流动相调整为例，其他部分如色谱柱、温度、进样量等可自行参考药典相关部分。
首先，能不能对药典液相色谱条件进行调整？答案当然是可以，但是要遵循一定的调整要求，超出该范围的就需要进行再验证。
调整范围是多少？不同的药典有不同的要求，下面以中国药典2015版、欧洲药典8.0版和美国药典USP36版为例进行说明。
1. 中国药典中国药典-0521高效液相法对此进行了说明，调整流动相组分比例时：当小比例组分的百分比例X小于等于33%时，允许改变范围为0.7 X～1.3 X ;当X大于33%时，允许改变范围为X-10%～X + 10%。
都是中文，这里就不在举例说明了，见下面附图。
2. 欧洲药典欧洲药典-2.2.46 Chromatographic separation techniques对此进行了说明，以等度洗脱为例，调整流动相组分比例时：小比例组分的调整范围是“相对30%或绝对2%”，取其大。
举个栗子：对于一个10%的组分，相对30%的调整范围是7%-13%，绝对2%的调整范围是8%-12%，因此适用相对30%的调整范围。
对于一个5%的组分，相对30%的调整范围是3.5%-6.5%，绝对2%的调整范围是3%-7%，因此适用绝对2%的调整范围。
3. 美国药典美国药典-<621> Chromatography部分对此进行了说明，调整流动相组分比例时：小比例组分（≤50%）的调整范围是“相对30%或绝对10%”，就不再举栗进行细节说明了，感兴趣的朋友可以参阅以下部分：。
各国药典色谱法-概述说明以及解释
各国药典色谱法-概述说明以及解释1.引言1.1 概述概述色谱法是一种有效的分离和分析化学物质的方法。
在药学领域，药典中对药物的色谱法进行了详细的规定和说明。
不同国家的药典中对色谱法的要求和标准有所不同，这是由于各个国家在药物研发和生产方面的不同需求和特点所决定的。
本文将综合介绍各国药典中关于色谱法的规定和标准。
首先，我们将对各国药典进行整体概述，包括其出版机构、发布周期和权威性等方面的内容。
然后，我们将详细分析各国药典中对色谱法的要求，涵盖色谱技术、仪器设备要求、样品准备和柱填充剂等方面的内容。
另外，我们还将比较各国药典中对于色谱法方法验证、方法开发和方法转移的规定，探讨其异同点和实际应用。
本文的目的是为读者提供一个全面了解各国药典中色谱法的情况的视角，帮助读者更好地理解和运用色谱法进行药物分析。
同时，通过对各国药典的比较研究，我们也可以发现不同国家在药物分析方面的研究重点和发展趋势，为我国药物分析领域的发展提供借鉴和参考。
在接下来的章节中，我们将详细讨论各国药典中关于色谱法的规定和标准，并对其进行分析和总结。
通过对各国药典的比较研究，我们将为读者呈现一个全面、系统的各国药典色谱法的景象，希望能够为广大药学工作者提供有益的参考和指导。
1.2 文章结构文章结构部分的内容可以参考以下例子进行撰写：文章结构：本文主要分为引言、正文和结论三个部分。
引言部分概述了本文的主要内容和目的，介绍了各国药典色谱法的研究背景和重要性。
正文部分主要分为两个部分，第一部分介绍了各国药典的概念和作用，第二部分重点介绍了色谱法在药典中的应用和发展。
结论部分总结了各国药典色谱法的研究现状，展望了未来的发展方向。
引言部分的概述：引言部分将介绍各国药典色谱法的研究背景和重要性。
首先，药典是各个国家用来规范药品质量标准的重要参考资料，对保障人们的用药安全具有重要意义。
其次，色谱法作为一种常用的分析方法，在药典中被广泛应用。
其准确性、灵敏度和可靠性被广泛认可。
各国药典关于HPLC色谱条件允许调整范围
美国药典USP
中国药典CHP2010
流动相组成比例ຫໍສະໝຸດ 紫外可见检测器检测波长 色谱柱长度
色谱柱内径
粒径
流速 进样体积 柱温 梯度洗脱
±0.2，pH7.6可以在7.4未明确 7.8之间调整 ±10%，20mM磷酸钾可以在 18-22mM范围内，只要pH值 未明确 符合要求就行 ±30%，最小组成的比例 ±30%，最小组成的比例可 可以调整30%，但是，任 以调整30%，但是，任何组 何组成的比例的改变不能 成的比例的改变不能超过± 超过±10%.60:40乙腈/ 10%.60:40乙腈/水，水的比 水，水的比例可以调整± 例可以调整±12% 12%（=40*30%），但是这 （=40*30%），但是这超过 超过了±10%的限制。因 了±10%的限制。因此，这 此，这个条件下，水的比 个条件下，水的比例只能在 例只能在30%至50%之间进 30%至50%之间进行调整。 行调整。 不允许调整 不可改变 ±70%，150*4.6mm规格的色 可适当调整 谱柱，柱长可以改变± 105mm ±25%，150*4.6mm规格的色 可适当调整 谱柱，内径可以改变± 1.15mm 可以适当调整；一般 3~10um，粒径更小（约 可以降至50%，10um的粒 可以降至50%，10um的粒径 2um）可用。孔径：分子 径可以调整为5um 可以调整为5um 量小于2000，孔径在150A 以下；分子量大于2000， 孔径300A。 ±50%，1mL/min流速可 ±50%，1mL/min流速可以在 可以适当调整 以在0.5至1.5mL/min范 0.5至1.5mL/min范围内变化 围内变化 只要精密度和检测限可 只要精密度和检测限可以达 可以适当调整 以达到要求就可以减少 到要求就可以减少 10%，最大不超过60℃ 10% 一起系统过大的滞留体 积会明显改变分离度， 保留时间和相对保留时 间
中国药典与英美药典对高效液相色谱法的叙述对比
高效液相色谱法中国药典（2005年版附录VD）高效液相色谱法系采用高压输液泵将规定的流动相泵入装有填充剂的色谱柱进行分离测定的色谱方法。
注入的供试品，由流动相带人柱内，各成分在柱内被分离，并依次进入检测器，由记录仪、积分仪或数据处理系统记录色谱信号。
1 对仪器的一般要求所用的仪器为高效液相色谱仪。
仪器应定期检定并符合有关规定。
（1）色谱柱最常用的色谱柱填充剂为化学键合硅胶。
反相色谱系统使用非极性填充剂，以十八烷基硅烷键合硅胶最为常用，辛基硅烷键合硅胶和其他类型的硅烷键合硅胶（如氰基硅烷键合相和氨基硅烷键合相等）也有使用。
正相色谱系统使用极性填充剂，常用的填充剂有硅胶等。
离子交换填充剂用于离子交换色谱；凝胶或高分子多孔微球等填充剂用于分子排阻色谱等；手性键合填充剂用于对映异构体的拆分分析。
填充剂的性能（如载体的形状、粒径、孔径、表面积、键合基团的表面覆盖度、含碳量和键合类型等）以及色谱柱的填充，直接影响待测物的保留行为和分离效果。
孔径在15nm以下的填料适合于分析分子量小于2000的化合物，分子量大于2000的化合物则应选择孔径在30nm以上的填料。
以硅胶为载体的一般键合固定相填充剂适用pH2-8的流动相。
当pH大于8时，可使载体硅胶溶解，当pH小于2时，与硅胶相连的化学键合相易水解脱落。
当色谱系统中需使用pH大于8的流动相时，应选用耐碱的填充剂，如采用高纯硅胶为载体并具有高表面覆盖度的键合硅胶、包覆聚合物填充剂、有机-无机杂化填充剂或非硅胶填充剂等，当需使用pH小于2的流动相时，应选用耐酸的填充剂，如具有大体积侧链能产生空间位阻保护作用的二异丙基或二异丁基取代十八烷基硅烷键合硅胶、有机-无机杂化填充剂等。
（2）检测器最常用的检测器为紫外检测UV，其他常见的检测器有二极管阵列检测器（DAD）、荧光检测器、示差折光检测器、蒸发光散射检测器、电化学检测器和质谱检测器等。
紫外、二极管阵列、荧光、电化学检测器为选择性检测器，其响应值不仅与待测溶液的浓度有关，还与化合物的结构有关；示差折光检测器和蒸发光散射检测器为通用型检测器，对所有的化合物均有响应；蒸发光散射检测器对结构类似的化合物，其响应值几乎仅与待测物的质量有关；二极管阵列检测器可以同时记录待测物在规定波长范围内的吸收光谱，故可用于待测物的光谱鉴定和色谱峰的纯度检查。
美国及欧洲药典系统适应性要求
系统适应性——美国药典系统适应性是气相和液相色谱分析方法的重要组成部分，用于证明色谱系统的分离度和重现性能满足样品的分析要求。
测试基于这样的原理：仪器、电路、方法和样品组成一个整体系统，我们可以对这个系统进行测试评估。
影响色谱系统的因素包括：●流动相的组成、离子强度、温度和pH值●柱子大小、流速、柱温和压力●固定相特点，包括填料类型，载体形状、粒径、孔径、表面积等。
●常用固定相为反相硅胶，以十八碳烷基健合硅胶最常用，其它经过化学修饰的硅胶也有使用。
分离度R s是理论塔板数n的函数（也叫柱效），α是分离因子，k是容量因子（所有符号的意义见前文“色谱定义和说明”部分）。
在规定的色谱条件下，n表示洗脱物中相邻化合物的分离程度，可作为衡量色谱系统柱效能的指标，但是不如直接测试的结果可靠。
峰的尖锐程度部分反映柱效，这个参数对检查微量物质至关重要。
标准品或者标准溶液需要重复进样以确保精密度。
除非个论中有规定, 系统适用性五针的数据的相对标准偏差不超过2.0%, 如果超过2.0%的话, 需要进样六针。
在含量测定中，如果纯品含量100%，则相对标准偏差没有最大值限制，这个值可根据多次进样对照溶液来计算：%RSD=KB/t90%，n-1K为常数0.349，由公式k=(0.6/)×(t90%,5/)计算得来，表示B=1.0时六次进样的相对标准偏差。
B是个案中规定的上限。
n是对照溶液的进样次数（3≤n≤6），t90%,n-1是自由度为n-1、置信水平为90%，双侧检验时的t 值。
除非另有规定，RSD不能超过下表中的值。
此规定不适用于相关物质检测。
Relative Standard Deviation Requirents对称因子AS，用于衡量峰的对称性，完全对称时值为1。
拖尾越严重，AS的值越大（见图4）。
偶尔也会有值小于1的情况。
如果对称因子与1的差值越大，则积分的精密度越差。
信噪比（S/N）是系统适应性的一个重要参数，计算公式如下（图5）：S/N = 2H/hH是峰高，即峰最高点到基线的距离；h 是噪音最大值和最小值之间的差值。
中国、美国、欧洲药典对HPLC方法的规定
中国、美国、欧洲药典对HPLC方法的规定所谓药典方法，顾名思义，药典专论所收载的方法，但是否每个人都知道，药典方法考虑到各个实验室的差异，有一定的可调范围。
下面我们具体的来探讨一下这个问题吧!一、中国药典2015规定0512高效液相色谱法规定如下：品种正文项下规定的条件除填充剂种类、流动相组分、检测器类型不得改变外，其余如色谱柱内径与长度、填充剂粒径、流动相流速、流动相组分比例、柱温、进样量、检测器灵敏度等，均可适当改变，以达到系统适用性试验的要求。
调整流动相组分比例时，当小比例组分的百分比例X 小于33%时，允许改变范围为0.7X 〜1.3X ; 当X大于33%时，允许改变范围为X —10%〜X+ 10%。
由上文可知，中国药典专论方法除填充剂种类、流动相组分（比例调整在规定范围内）、检测器类型不得改变外，其他条件改变了，还是认为是药典方法。
但中国药典没有规定方法确认之说，所以，即使是中国药典方法，也是应该按分析方法验证的相关规定进行全套的方法验证。
二、美国药典41规定USP41 <621> CHROMATOGRAPHY 规定如下：为符合系统适用性的要求而调整的操作条件是允许的，除非专论项下另有规定，下面为所列的最大的可调范围，这些调整需要额外的确认数据。
为确认新条件对方法的适用性，评估调整对相关分析性能特征存在的潜在影响。
多条件的调整，将对系统性能产生累积影响，实施前需仔细考虑。
1、pH of mobile phase(HPLC): 流动性缓冲液的pH:±0.2 units，适用梯度及等度。
2、Concentration of salts in buffer (HPLC): ±10%（pH允许情况下），适用梯度及等度。
3、Ratio of componentsin mobile phase (HPLC):流动相中组分（≤50%）可以在此比例上再调节±30%，且任一组分比例的调节不应超过±10%（相对于总的流动相），含三组分的流动相的调节可以分组分进行，含双组分的流动相的调节可在最小的组分进行，双组份和三组分的调节实例如下：双组分：例如流动相50:50，其中一组分50%的30%是15%，但是它超过了占总体比例±10%的规定，所以这个流动相比例的调节范围应以±10%为限，可以在不超过40:60~60:40的范围之间调节。
药品分析检验结果,误差可接受的限度范围
药品分析检验结果,误差可接受的限度范围1、药品分析检验结果，误差可接受的限度范围1.1容量分析法最大允许相对偏差不得过0.3%；1.2重量法最大允许相对偏差不得过0.5%1.3一般仪器分析法最大允许相对偏差不得过2%1.4滴定液标定：标定、复标各3份最大允许相对偏差不得过0.1%，标定和复标平均值的相对偏差不得过0.1%1.5氮测定法最大允许相对偏差半微量法不得超过1%；常量法不得过0.5%；其中空白二份的极差不得大于0.05ml1.6氧瓶燃烧法最大允许相对偏差不得过0.5%1.7乙醇量测定法2次测定的标准偏差不得过±1.5%（n=3）1.8碘值、羟值、皂化值平行二份，相对偏差不得过0.3%，酸值、过氧化值是限度检查只做一份。
1.9高效液相色谱法含量测定平行二份，各进二针，其RSD不得过±1.5%1.10高效液相色谱法杂质检查：不加校正因子的主成分自身对照法中对照品溶液应能准确积分（n≥3）1.10.1 杂质含量＜0.5%，峰面积RSD＜10%1.10.2 杂质含量＜0.5%―2%，峰面积RSD＜5%1.10.3 杂质含量＜2%，峰面积RSD＜2%1.11紫外分光光度法含量测定，每份结果对平均值的偏差应在±0.5%以内（参考吸收系数规定）1.12原子吸收分光光度法含量测定，要求标准曲线做3个浓度每个测3次，供试品平行2份每个测3次1.13气相色谱法两份对照品进样4次，其校正因子的平均标准偏差不得过2.0% 1.14旋光度测定两份供试品读数极差应在0.02度以内1.15高氯酸滴定1.15.1原料药：相对偏差不得过0.2%1.15.2制剂：提取蒸干后用高氯酸测定相对偏差不得过0.5%；如操作更复杂者可适当放宽至1.0%1.16溶剂残留（GC）在满足以下适用性的情况下，样品可处理一份，进样3针取平均值计算。
1.16.1内标法：对照品连续进样5次，其待测物与内标峰面积之比的RSD应不得过5%1.16.2外标法：对照品5针峰面积的RSD应不得过10%1.17费休氏法测水分：3次标定结果相对偏差不得过1.0%，样品的相对偏差不得过0.5%1.18干燥失重在1%及以下者做一份，在1%以上者做二份，相对偏差不得过2.0% 1.19炽灼残渣在1%及以下者做一份，在1%以上者做二份，相对偏差不得过3.0% 1.20比重瓶法测定相对密度：称准至mg位即可；1.21高效液相色谱法、气相色谱法的保留时间的RSD应不大于1.0%。
药典液相色谱方法的调整
05版药典的系统适用性要求
4,拖尾因子:
----影响因素: * 与理论塔板数相关的因素: 色谱柱选择,流动相,进样量,积分参数等 * 与检测品种与方法相关 * 峰高法定量分析:0.95~1.05
HPLC方法参数调整
用规定的对照品对色谱系统进行试验,应符合要求. 如达不到要求,可对色谱分离条件做适当的调整. 不得改变:固定相种类,流动相组成,检测器种类. 可改变:色谱柱尺寸,牌号,填料粒度,流动相流 速,流动相各组成的比例,梯度洗脱时间长度,柱 温,进样量,检测器灵敏度等
常见的液相色谱参数的调整:其他参数
柱温:升高柱温有利于改变峰形和分离度,但要注意柱的最高耐 受力 进样量:在满足检测要求的前提下,尽量减少进样量 供试品溶剂:溶剂强度应等同或低于流动相洗脱强度 反相色谱中溶解样品的溶剂: * 甲醇并不是良溶剂 * 推荐溶剂 最好是流动相 梯度最好为起始流动相 尽可能有水溶液参与 如果不得不用有机溶剂溶解,尽可能使用小进样量或两步稀释
可用DAD,MSD确定杂质峰的数目 用空白试验排除干扰 * 空白溶剂进样(考虑进样溶剂的影响) * 运行空白梯度(考虑流动相溶剂质量的影响) 降低系统残留的影响 * 手动进样阀的清洗 * 自动进样器应采用洗针进样模式 考虑色谱分离方法的影响 * 分离度,进样量
影响检测器灵敏度的因素
检测器 * 流通池:体积大,灵敏度高 * 紫外灯能量 * 采样频率:大于15Hz时可准确描述峰 死体积 * 仪器连接管线应尽量减小柱外体积,避免色谱峰的扩散 * 运行空白梯度(考虑流动相溶剂质量的影响) 上样量 流动相:在低波长检测时,影响大
常见的液相色谱参数的调整:流动相
改变溶剂比例:根据色谱柱类型与状态 添加剂 扫尾剂:有机胺 缓冲溶液:10-50mM;从20mM开始,越少越好 离子对试剂:平衡时间长,易在色谱柱中保留 缓冲液pH 酸含量 缓冲液的缓冲容量:pKa+-1 对方法耐用性的影响
美国及欧洲药典系统适应性要求
系统适应性——美国药典系统适应性是气相和液相色谱分析方法的重要组成部分，用于证明色谱系统的分离度和重现性能满足样品的分析要求。
测试基于这样的原理：仪器、电路、方法和样品组成一个整体系统，我们可以对这个系统进行测试评估。
影响色谱系统的因素包括：●流动相的组成、离子强度、温度和pH值●柱子大小、流速、柱温和压力●固定相特点，包括填料类型，载体形状、粒径、孔径、表面积等。
●常用固定相为反相硅胶，以十八碳烷基健合硅胶最常用，其它经过化学修饰的硅胶也有使用。
分离度R s是理论塔板数n的函数（也叫柱效），α是分离因子，k是容量因子（所有符号的意义见前文“色谱定义和说明”部分）。
在规定的色谱条件下，n表示洗脱物中相邻化合物的分离程度，可作为衡量色谱系统柱效能的指标，但是不如直接测试的结果可靠。
峰的尖锐程度部分反映柱效，这个参数对检查微量物质至关重要。
标准品或者标准溶液需要重复进样以确保精密度。
除非个论中有规定, 系统适用性五针的数据的相对标准偏差不超过2.0%, 如果超过2.0%的话, 需要进样六针。
在含量测定中，如果纯品含量100%，则相对标准偏差没有最大值限制，这个值可根据多次进样对照溶液来计算：%RSD=KB/t90%，n-1K为常数0.349，由公式k=(0.6/)×(t90%,5/)计算得来，表示B=1.0时六次进样的相对标准偏差。
B是个案中规定的上限。
n是对照溶液的进样次数（3≤n≤6），t90%,n-1是自由度为n-1、置信水平为90%，双侧检验时的t 值。
除非另有规定，RSD不能超过下表中的值。
此规定不适用于相关物质检测。
Relative Standard Deviation Requirents对称因子AS，用于衡量峰的对称性，完全对称时值为1。
拖尾越严重，AS的值越大（见图4）。
偶尔也会有值小于1的情况。
如果对称因子与1的差值越大，则积分的精密度越差。
信噪比（S/N）是系统适应性的一个重要参数，计算公式如下（图5）：S/N = 2H/hH是峰高，即峰最高点到基线的距离；h 是噪音最大值和最小值之间的差值。
2020版中国药典通则0512HPLC如何优化色谱方法
2020版《中国药典》通则0512 HPLC如何优化色谱方法随着超高效液相技术（小粒径色谱柱的应用）的发展，药典在适应新技术的使用，指导企业如何去优化方法，达到缩短分析时间、节省流动相的目的。
今天，我们一起来分析在保持与现有方法相似的分离效果的前提下，如何选择合适的色谱柱和相应的色谱参数。
一、2020版药典与2015版药典0512参数调整对比表（其余参数，如流动相比例、缓冲盐浓度、柱温、pH等改变，本文不涉及，此处不细说）上表1中A/B/C三项，扩充了色谱柱的选择范围，而D/E/F则针对具体的每一个参数调整提供计算方式。
下面，我们用具体的案例进行推导。
二、案例推导1、改变柱长L和粒径dp假设当前一个色谱方法为：目标：保持分离度R基本不变，缩短分析时间和流动相。
过程：根据公式1 :越k分寓度4 -------------- 汇------------ x---------------4 n H1其中，k为保留因子，a为选择因子。
当色谱柱固定相、流动相的组成及比例、柱温不变，则a和k不变。
因此，分离度R仅与理论塔板数N相关。
而NaL/dp （正比），只要保持L/dp基本不变，则R基本不变。
当前色谱柱Columnl的L1/dp1=250/5 = 50，所以需要从当前市场上常用的色谱柱中选择L/dp*50的色谱柱例如柱长为100mm粒径dp为1.8pm的色谱柱则匕川,=100/1.8=56与当前色谱柱Columnl 的L1/dp1基本一致（比Columnl的L1/dp1值50变化+12%，在药典规定的-25%~ + 50%范围内。
有一定程度的增加，但有利于分离度R）。
注：此处粒径1.8pm是全多孔填料，产生的柱压比较高，因此，可选择表面多孔填料，例如2.7pm粒径的表面多孔填料色谱柱，因为其特殊的填料技术，实际的硅胶粒径仍只有约1.8pm（如下图1）。
图1 :全多孔填料和表面多孔填料示意图(a)为全多孔填料，粒径为5pm ；(b )为表面多孔填料，规格为2.7pm，但实际的硅胶粒径约为1.8pm。
药典规定色谱报告信息
药典规定色谱报告信息引言药典是药品质量控制的基本依据之一，其中关于色谱法的规定尤为重要。
色谱法是一种常用的分析方法，用于确定药品中的成分和杂质。
药典中对色谱法的要求非常严格，包括样品准备、色谱条件、数据分析等方面。
本文将详细介绍药典中关于色谱报告信息的规定。
色谱报告信息的格式根据药典的规定，色谱报告信息应按照一定的格式进行填写。
下面是一个典型的色谱报告信息的示例：## 实验条件- 色谱柱: C18(100 mm x 4.6 mm x 5 μm)- 流动相: 甲醇/水（55:45，体积比）- 流速: 1 mL/min- 注射量: 10 μL- 柱温: 30°C## 色谱图## 数据分析在上述色谱条件下，药品中的成分A和成分B的保留时间分别为8.5 min和9.2 m in。
峰形对称度良好，分离度达到要求。
峰面积比可以用于定量分析。
## 结论根据色谱图和数据分析，可以判定药品中的成分A和成分B符合规定要求。
该药品通过了色谱检验。
实验条件色谱报告信息的第一部分是实验条件。
实验条件包括色谱柱的类型和规格、流动相的组分和比例、流速、注射量和柱温等信息。
这些信息对于结果的准确性和可重复性非常重要。
色谱图色谱报告信息的第二部分是色谱图。
色谱图是色谱分析的主要结果展示方式，通过色谱图可以直观地观察药品中的成分和杂质的峰形、峰高和峰面积等信息。
同时，色谱图也是判断分离度和对称度是否达到要求的依据。
数据分析色谱报告信息的第三部分是数据分析。
数据分析内容包括药品中的成分的保留时间、峰形对称度的评估、分离度的判断以及定量分析等。
这些数据分析结果对于判断药品的质量和纯度是否符合规定要求至关重要。
结论色谱报告信息的最后部分是结论。
根据实验条件、色谱图和数据分析的结果，可以判断药品中的成分和杂质是否符合药典的规定要求。
结论一般包括通过了色谱检验或者未通过色谱检验等。
结束语药典对于色谱报告信息的规定是为了保证药品质量的准确性和可靠性，同时也是为了提高不同实验室之间的结果可比性。
色谱分析允许偏离的限度(流速、柱温、进样量等)
在色谱分析领域中，允许实验室出于提高检测性能与效率的需要，对标准方法或官方方法中规定的仪器操作条件进行调整，但不能超出一定的规定。
超出一定的调整都视为方法变动。
1、HPLC流动相的pH值流动相制备过程中，水溶性缓冲液pH值可在标准规定值的±0.2pH单位范围内调整。
2、HPLC缓冲液中盐的浓度流动相制备过程中，如果pH值变化满足要求，则水溶性缓冲液中盐浓度可在±10%范围内调整。
3、HPLC流动相中各组分的比例流动相中组分的增减可以达到该组分在组成中所占比例的30%以上。
流动相中占较高比例的组分，调整的绝对量应在±10%范围内变动。
流动相中占较低比例的组分，调整的绝对量应在±2%范围内变动。
调整后，任何组分的最终含量都不能被降为零。
4、HPLC紫外-可见光检测器的波长HPLC紫外－可见光检测器的波长不允许偏离方法中的指定值。
但可使用仪器制造商规定的程序或其他验证程序验证检测器的波长，其误差应小于±3nm5、色谱柱柱长GC/HPLC柱长最大可调整值为±70%6、色谱柱内径HPLC色谱柱内径，最大可调整值为±25%;对于GC色谱柱内径，最大可调整值为±50%7、流速GC/HPLC最大可调整值为±25%8、进样量对于GC和HPLC，进样量可减少至精密度和检出限可接受限值。
只要不对诸如基线、峰形、分辨率、线性度和保留时间等因素产生不良影响，进样量可增加至标准指定进样体积的两倍。
9、HPLC粒度最大可调整值为±50%10、HPLC柱温最大可调整值为±10%11、GC柱箱温度最大可调整值为±10%12、GC毛细管壁厚最大可调整范围为－50%～100%13、GC程序升温允许可调整温度为10%。
对于需维持的特定温度或从一个温度改变至另一温度，允许调整的最大限度为±20%以上方偏离的限度的依据，参照：美国FDA《实验室质量管理手册》。
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欧洲药典EP
流动相PH值 缓冲盐浓度 ±0.2，pH7.6可以在 7.4-7.8之间调整 ±10%，20mM磷酸钾可以 在18-22mM范围内，只要 pH值符合要求就行 ±30%，最小组成的比例 可以调整30%，但是，任 何组成的比例的改变不 能超过±10%.60:40乙腈 /水，水的比例可以调整 ±12%（=40*30%），但 是这超过了±10%的限制 。因此，这个条件下， 水的比例只能在30%至 50%之间进行调整。 不允许调整 ±70%，150*4.6mm规格 的色谱柱，柱长可以改 变±105mm ±25%，150*4.6mm规格 的色谱柱，内径可以改 变±1HP2010
流动相组成比例
紫外可见检测器检测波长 色谱柱长度
色谱柱内径
粒径
流速 进样体积 柱温 梯度洗脱
±0.2，pH7.6可以在7.4未明确 7.8之间调整 ±10%，20mM磷酸钾可以在 18-22mM范围内，只要pH值 未明确 符合要求就行 ±30%，最小组成的比例 ±30%，最小组成的比例可 可以调整30%，但是，任 以调整30%，但是，任何组 何组成的比例的改变不能 成的比例的改变不能超过± 超过±10%.60:40乙腈/ 10%.60:40乙腈/水，水的比 水，水的比例可以调整± 例可以调整±12% 12%（=40*30%），但是这 （=40*30%），但是这超过 超过了±10%的限制。因 了±10%的限制。因此，这 此，这个条件下，水的比 个条件下，水的比例只能在 例只能在30%至50%之间进 30%至50%之间进行调整。 行调整。 不允许调整 不可改变 ±70%，150*4.6mm规格的色 可适当调整 谱柱，柱长可以改变± 105mm ±25%，150*4.6mm规格的色 可适当调整 谱柱，内径可以改变± 1.15mm 可以适当调整；一般 3~10um，粒径更小（约 可以降至50%，10um的粒 可以降至50%，10um的粒径 2um）可用。孔径：分子 径可以调整为5um 可以调整为5um 量小于2000，孔径在150A 以下；分子量大于2000， 孔径300A。 ±50%，1mL/min流速可 ±50%，1mL/min流速可以在 可以适当调整 以在0.5至1.5mL/min范 0.5至1.5mL/min范围内变化 围内变化 只要精密度和检测限可 只要精密度和检测限可以达 可以适当调整 以达到要求就可以减少 到要求就可以减少 10%，最大不超过60℃ 10% 一起系统过大的滞留体 积会明显改变分离度， 保留时间和相对保留时 间