高效液相色谱法定性定量分析讲解
【精品课件】高效液相色谱定性定量分析方法
定量分析基本要求
• 要有纯物质做标准 • 被定量组分峰要与其他组分达到基线分离 • 符合定性参数要求 • 选择合适定量方法
定量分析基本公式
• 在某些限定条件下，被测组分的浓度与检测器的 响应值成正比的关系。（蒸发光散射检测器浓度 与峰面积不成线性，分别取对数后呈线性。）
两谱联用技术
1 如果标准物质缺乏或难以获得；或由于结构、理 化性质相似，很多物质具有十分接近，甚至相同 的保留值，则保留值定性准确度存在疑问。
2 可以运用红外光谱、紫外光谱、核磁共振光谱和 质谱对化合物进行定性，目前两用技术有： HPLC-紫外光谱，HPLC-红外光谱，HPLC-MS, HPLC-NMR等。
高效液相色谱定性定量分析方法
色谱分析的目的：
对未知组分进行定性分析 对已知组分进行定量分析
根据色谱图上某个色谱峰的保留时间和该色谱峰 在检测器上的响应信号强度，对该谱峰进行初步定性 定量分析。
液相色谱定性分析 液相色谱定量分析 影响定量分析的因素
色谱峰的定性鉴别：
通过保留值（通常指保留时间）进行定性 需要制定保留时间误差范围
• 相关系数—用来表示线性关系的好坏程度；
• 相关系数越接近1，说明线性关系越好；
• 绘制标准工作曲线时一般选取3-6个不同浓度 的标准样品，相关系数起码应在0.95以上。
如达不到要求，可பைடு நூலகம்存在以下原因：
1 所选浓度范围使检测器的响应值超出了该检测器
2
响应值的线性范围；
2 实验数据的精密度太差，过于分散。
3 无论何种原因，都应重新绘制标准工作曲线 。
高效液相色谱法
答：气相温度对于样品的气化程度影响很大,一般来说温度越高,气化越快,通过色谱柱时间也越短,气相单一物质分析一般用恒温,多种物质分析时,通过改变柱温能够很好的对样品进行分离,节省了分析时间,这时往往用梯度升温。
3、若标准曲线用咖啡因浓度对峰高作图，能给出准确结果吗？与本实验的标准曲线相比何者优越？为什么？
答：能，浓度对峰面积更优越。因为有些峰不完全对称，用它作标准曲线误差较大。
4、在样品干过滤时，为什么要弃去前过滤液？这样做会不会影响实验结果？为什么？
答： 干过滤主要是保持溶液浓度不变而采取的一种过滤方法，前液中可能有一些滤纸或滤膜上的杂质存在，为了保持溶液浓度不变，所以要将前液去掉。干过滤为分离掉溶液中的固体并且不改变溶液浓度而采取的一种方法。为保持溶液浓度不变。前段滤液要弃去，并且滤纸漏斗盛接的烧杯都要干的。这样做不会影响实验结果。
液相并不是都是室温,一般来说,温度对于反相色谱分析影响不大,所以用反相柱分析时,一般用室温,不配备柱温箱,但是很多正相色谱分析时对于温度要求比较严格,比如说配位体交换色谱法时,温度的影响还是很大的。
5、测饮料试液：可乐，茶叶，速溶咖啡。
6、10μL平头微量注射器。
四、实验内容
1、标准贮备液配制质量浓度分别为20、40、80、160μg·mL-1的标准系列溶液。（1mL，2mL，4mL，8mL稀释为50mL）
2、谱仪器条件：
泵的流速：1.0mL/min；检测波长：275nm；进样量：4μL；柱温：室温。
定量测定咖啡因的传统分析方法是采用萃取分光光度法。用反相高效液相色谱法将饮料中的咖啡因与其它组分（如：单宁酸、咖啡酸、蔗糖等）分离后，将已配制的浓度不同的咖啡因标准溶液进入色谱系统。如流动相流速和泵的压力在整个实验过程中是恒定的，测定它们在色谱图上的保留时间tR和峰面积A后，可直接用tR定性，用峰面积A作为定量测定的参数，采用工作曲线法（即外标法）测定饮料中的咖啡因含量。
高效液相色谱法3
2.内标法 内标法分为 工作曲线法 内标一点法 内标二点法 内标对比法 校正因子法 在HPLC中最常用内标对比法。 选择内标物的三个条件(纯、样品中不含有、保留时 间接近)，在HPLC中的要求与GC完全一致。一般可选择 一个化学结构与待测物质相似、物理性质相近的纯物质作 为内标物，加到待测样品溶液中，经过样品前处理后进样。 使用内标法可抵消因仪器稳定性差、进样量不够准确等原 因带来的实验误差。
(一) 多环芳烃的分析 一 多环芳烃的分析(图21－18) 多环芳烃的分析，可用反相或吸附色谱法分析。反 相色谱法用ODS柱，用乙腈−水或甲醇−水为流动相。但用 甲醇−水时，保留时间较长，因此多采用梯度洗脱。多环 芳烃也可用硅胶(YWG等)柱，以不含水的正己烷为流动相， 也能获得较好的分离效果，但需注意溶解样品的溶剂应与 流动相的性质相近。许多多环芳烃是致癌物质，其含量监 测在食品分析与环境保护监测中都有实用意义。
(1)内标对比法： 这种方法不需知校正因子又具有内标法的定量准确 度与进样量无关的特点，方法简便实用。在药物分析中分 析结果(含量)常用标示量％表示:
( Ai / As )样品 (ms )样品 W 标示量% = × × ×100% ( Ai / As )对照 (ms )对照 m
(21.13)
式中(ms)样品与(ms)对照分别是内标物在试样溶液及对照溶液 中的量，W为平均片重(或丸重等)，m是取样量，其它符 号的含义同GC章。若试样溶液与对照溶液中加人内标物 的量相等，所称取的样品重与平均片重相同，则上式的后 二项均等于1。
A的标示量％=(178024／202694)÷(154856／171222)×100％=97.l％ P的标示量％=(820968／202694) ÷(692272／171222)×100％=100.l％ C的标示量％=(407792／202694) ÷(372221／171222)×100％=92.5％
高效液相色谱定量分析分析实验
高效液相色谱定量分析实验一、实验目的⑴进一步熟悉HPLC仪器的基本构造及工作原理，熟悉HPLC的基本操作；⑵了解色谱定量操作的主要方法以及各自特点；⑶学习未知样品中甲苯的定量分析方法。
二、实验原理⑴校正因子：（1）绝对校正因子；（2）相对校正因子。
⑵常见的色谱定量分析方法主要有：（1）归一化法。
特点：简单、方便、准确，但要求所有组分必须全部出峰。
（2）内标法。
特点：使用相对校正因子定量，结果准确，但操作繁琐，由于需要增加内标物，增大分离的难度。
（3）标准曲线法（外标法）。
简单、方便，由于采用绝对校正因子定量，结果受到操作技术因素以及具体色谱条件影响较大。
（4）内标标准曲线法。
三、仪器与试剂LC-1000型高效液相色谱仪、甲醇(色谱纯)、二次去离子水、甲苯、系列甲苯标准溶液、平头微量注射器（100 l）、待测溶液四、LC-1000型高效液相色谱仪操作步骤⑴流动相的预处理用甲醇和二次去离子水配成500 mL (V/V=90:10)的甲醇溶液，用0.45μm 有机滤膜过滤，超声波清洗器脱气10～20 min，装入流动相贮液瓶。
⑵高效液相色谱仪操作（1）依次打开高压输液泵、紫外检测器电源开关（2）打开色谱N2000在线工作站，选择通道，建立运行方法。
（3）打开三通阀(逆时针半圈)，按“Purge”排除流路中的气泡。
排气完毕后，按“Stop”键，停泵，关闭三通阀。
按“Flow”设置流速1.0 mL/min，“Enter”确认。
（4）按“设定”键，检测波长254 nm。
按“↓”键，输入“1”，开启氘灯。
（5）按“Run”键，启动输液泵。
（6）检查基线，零点校正，待基线稳定后，用平头微量注射器取试液20 μL，将进样阀柄置于“Load”位置时注入样品，转动阀柄至“Inject”位置，同时点击软件“采集数据”。
注意！平头微量注射器用甲醇清洗3次后，再用试液清洗3次，避免气泡。
（7）待所有色谱峰流出完毕后，按“停止采集”键，保存数据并在N2000离线工作站处理数据，记录组分的峰面积。
高效液相色谱技术
高效液相色谱技术
高效液相色谱(HPLC)技术是一种用于分离、纯化、定性和定量分析溶液中化合物的技术。
它是在液相色谱技术基础上发展起来的，具有分离能力强、分辨率高、灵敏度高、分析速度快等优点。
HPLC技术的核心是色谱柱和溶液泵。
色谱柱是分离样品的重要部分，根据不同的分离目标可以选择不同类型的柱子，例如反相柱、离子交换柱、大小分子排阻柱等。
溶液泵用于将样品溶液以一定的流速推动通过色谱柱，保持流动相的恒定。
高效液相色谱技术主要包括以下几个步骤：
1. 样品预处理：将待分析样品进行处理，如提取、浓缩、溶解等，以便于后续的分析。
2. 进样：将样品注入到进样装置中，通过自动或手动控制，精确地给定进样体积。
3. 分离：在色谱柱中根据样品分离目标的性质和柱上固定相的特性，通过流动相的带动将样品分离。
4. 检测：利用检测器检测样品的浓度或质量，并将信号转化为电信号输出。
5. 数据处理：通过对检测器输出信号的处理和计算，得到对样品的定性和定量分析结果。
高效液相色谱技术在许多领域得到广泛应用，如药学、环境监测、食品安全等。
它能够对样品中的化合物进行高效、灵敏、准确的分离和分析，为科研和工业生产提供了强有力的工具。
定性分析：用高效液相色谱法确定未知样中的成分
四．
实验步骤：
1． 流动相的准备： 80%甲醇+20%的纯水或去 离子水,制备前，先调节水(用酸或缓冲盐)PH=3.5， 进入系统色谱前，用超声波发生器或水泵脱气。 2． 苯，甲苯的标准溶液：取2毫升的苯，1毫 升甲苯的标准液，与已经配置好的流动相混溶，不 得有分层或沉淀，脱气后备用。
3． 打开仪器，启动泵，打开检测器，同 时设定方法（设置泵的流速为4ml/min， 柱温为室温（20度左右），停止时间为5 min，当流动相通过色谱柱约5-10min， 记录仪上基线稳定后，仪器自检完毕）。
7． 将进样阀从装载转向进样位，同时按进样按扭， 工作站开始记录并出图12，清洗针管，待用。
8． 基线稳定后，取未知样25微升，进样，出色谱 图13。
五．
数据分析
1． 在标准样品色谱图中标注苯和甲苯保留时间To或保留距离Vo。
2． 根据的保留时间，找到并标出未 知样色谱图中的苯、甲苯的色谱峰。
2、清洗进样器： 将进样器扳至Load的位置，用专用的注射 器装约10ml适当溶剂冲洗进样器。 当使用缓冲溶液时，要用水冲洗进样口， 同时扳动进样阀数次，每次数毫升。
3、退出化学工作站，及其它窗口，关闭 计算机（用shut down）。 4、关掉Agilent 1100电源开关。
六．
问题讨论
1、解释用本实验中反相柱进行定性、定量分 析的理论基础。
2、在本实验中，用保留时间To来确定未知样 的组分，准确吗？为什么？
3、哪些条件会影响浓度测定值的准确性？ 4.、为什么流动相和样品要进行脱气，否 则会产生什么影响？
注意: 关机前，用过缓冲盐溶液必须先用100% 的水冲洗系统（打开排液阀，调流速为 5ml/min，冲洗约5 min，然后调流速为 1ml/min，待流速降下来后，关闭排液阀， 再冲洗冲洗约20 min）； 然后用甲醇同法清洗20min，然后关泵。 注意：此方法适用于反相色谱柱，而正相 色谱柱应用适当的溶剂冲洗。
液相色谱法定量分析与案例分享
液相色谱法定量分析与案例分享
定量分析是在定性分析的基础上，需要纯物质作为标准样品。
液相色谱的定量是相对的定量方法，即：由已知的标准样品推算出被测样品的量。
液相色谱法定量的依据
被测组分的量(W)与响应值(A)（峰高或峰面积）成正比,W=f×A。
定量校正因子(f)：是定量计算公式的比例常数，其物理意义时单位响应值（峰面积）所代表的被测组分的量。
由已知标准样品的量和其响应值可以求得定量校正因子。
测定未知组分的响应值，通过定量校正因子即可求得该组分的量。
定量分析常用术语：
样品（sample）：含有带测物，供色谱分析的溶液。
分为标样和未知样。
标样（standard）：浓度已知的纯品。
未知样（unknow）：浓度待测的混合物。
样品量（sampleweight）：待测样品的原始称样量。
稀释度（dilution）：未知样的稀释倍数。
组分（componance）：欲做定量分析的色谱峰，即含量未知的被测物。
组分的量（amount）：被测物质的含量（或浓度）。
积分（integerity）：由计算机对色谱峰进行的峰面积测量的计算过程。
校正曲线（calibrationcurve）：组分含量对响应值的线性曲线，由已知量的标准物建立，用于测定待测物的未知含量。
常用的定量方法
1外标法
标准曲线法，分为外标法和内标法。
外标法在液相色谱中用的最多。
内标法准确但是麻烦，在标准方法中用的最多。
高效液相色谱-电化学法_概述及解释说明
高效液相色谱-电化学法概述及解释说明1. 引言1.1 概述高效液相色谱-电化学法（简称HPLC-EC）是一种常用的分析技术，利用高效液相色谱技术和电化学检测原理相结合，实现对样品中化合物的分离和定量分析。
此方法具有灵敏度高、选择性好、重复性好等优点，因而在环境科学、生物医药和食品安全等领域得到广泛应用。
1.2 文章结构本文共分五个部分进行阐述。
引言部分是对整篇文章的概述，介绍了HPLC-EC 技术的背景和研究意义。
第二部分将对HPLC技术和电化学法以及它们之间的结合进行简要介绍。
接下来一节将详细讨论HPLC-EC的实验原理与分析过程。
第四部分将探讨HPLC-EC在环境污染物、生物医药和食品安全领域中的应用案例。
最后一节是总结与展望，回顾整篇文章所提到的内容，并展望该技术在未来发展中可能取得的进展。
1.3 目的本文旨在全面介绍高效液相色谱-电化学法的相关知识，深入探讨其原理及其在环境科学、生物医药和食品安全领域的应用。
通过文章阐述，读者可以对HPLC-EC技术有一个全面的了解，并且了解到该技术在不同领域的实际应用和发展趋势。
2. 高效液相色谱-电化学法概述：2.1 高效液相色谱技术简介高效液相色谱(HPLC)是一种广泛应用于分析化学领域的分离技术。
它基于物质在溶剂流动下通过固定相的不同速率进行分离，可用于分析和检测各种化合物。
HPLC技术具有分离效果好、选择性强、重复性好等特点，因此被广泛应用于环境、生物医药和食品安全等领域的样品分析中。
2.2 电化学法简介电化学法是利用电极与溶液中存在的化学反应产生的电流或电势来检测或测定物质的一种方法。
根据所使用的电极类型和测量参数，常见的电化学方法包括极谱法、电化学滴定法、恒定电位法等。
这些方法可以实现对不同种类和浓度范围内的物质进行快速准确的检测和分析。
2.3 结合应用优势高效液相色谱-电化学法(HPLC-EC)是将HPLC技术与电化学方法相结合而形成的一种分析技术。
高效液相色谱仪的定性、定量分析(未知样品中苯甲酸含量的测定)
一. 实验目的：
1. 学习高效液相色谱法的测定原理； 2.掌握高效液相色谱仪（HP1100）的定性、定量 分析方法。
二。实验原理： 高效液相色谱法是重要的色谱方法，是在经典液相色谱法 和气相色谱的基础上发展起来的，（经典液相色谱法使用粗粒 多孔固定相，装填在大口径、长玻璃管柱内，流动相仅靠重力 流经色谱柱，溶质在固定相的传质、扩散速度极其缓慢，柱入 口压力低，仅有低的柱效，分析时间长；气相色谱原理类似， 流动相为气体，只能分离小分子量、低沸点的有机化合物，配 合程序升温可分析高沸点的有机化合物。）弥补了经典液相色 谱法和气相色谱的缺点。它使用了多孔微粒固定相，装填在小 口径短的不锈钢柱内，流动相通过高压输液泵进入高压的色谱 柱，溶质在其中的传质、扩散速度大大加快，从而在短时间内 获得高的分离能力。可分析低分子量、低沸点的有机化合物， 更多适用于分析中、高分子量、高沸点及热稳定性差的有机化 合物。
4．进样阀从装载转向进样位，同时按进样按扭，工作站 开始记录并出图11。 5．苯甲酸的色谱峰出完后，按照4-5步骤连续操作四次， 获得从最低浓度到最高浓度的标准试液的五张色谱图，分 别为11，12，13，14，15（15为流动相进样，设浓度为0 mg/ml）。 6．按照4-5步骤取25微升的未知样品，进样，出谱图W1。
四．实验步骤：（ESTD法） 1． 标准储备液的配置：准确量取0.144克苯甲酸钠试剂 ， 用 纯 水 或 去 离 子 水 溶 解 ， 定 容 到 100 毫 升 ， 浓 度 为 1.44mg/ml. 分别取此标准液5 ml，2.5 ml，1 ml, 0.5 ml稀 释为10 ml，则浓度分别为0.72 mg/ml，0.36 mg/ml，0.144 mg/ml，0.072 mg/ml。 2． 打开计算机，开仪器，稳定后，打开桌面的ONLINE 工作站。 设定方法：设置泵的流速为1ml/min，柱温为室温（ 40度左右），停止时间为4min，流动相比例（甲醇：水 =60；40），当流动相通过色谱柱约5-10min，记录仪上基 线稳定后，开始进样。 3． 进样：进样阀放在装载的位置上，用注射器取25微升 浓度最低的标准样（比进样阀上的定量环多5-10微升以上 ），注入进样阀中。
高效液相色谱法的原理
高效液相色谱法的原理高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography, HPLC）是一种在液相中进行分离和分析化合物的技术。
它是一种高效、灵敏、准确的分析方法，广泛应用于化学、生物化学、环境监测、药物分析等领域。
高效液相色谱法的原理主要包括样品的注射、色谱柱的分离、检测器的检测和数据处理等步骤。
首先，样品通过注射器被注入到色谱柱中。
色谱柱是高效液相色谱法的核心部件，它通常由填料和固定相组成。
填料是一种多孔的固体材料，具有大量的表面积，用于吸附和分离样品中的化合物。
固定相是填料表面的化学物质，它与待分离的化合物发生相互作用，使化合物在填料中发生分离。
样品在色谱柱中被分离成不同的组分，这是高效液相色谱法的第一步。
接下来，分离后的化合物通过色谱柱被逐一洗脱出来，并进入检测器进行检测。
常用的检测器包括紫外-可见光谱检测器、荧光检测器、电化学检测器等。
这些检测器可以根据化合物的特性，如吸收、荧光、电化学活性等，对化合物进行定量或定性分析。
检测器检测到的信号将被转化成电信号，并传输到数据处理系统中进行处理和分析。
最后，数据处理系统对检测到的信号进行处理和分析，得到色谱图谱和化合物的峰面积。
色谱图谱是根据化合物在色谱柱中的保留时间和检测器的信号强度绘制的图形，可以直观地显示出化合物的分离情况。
峰面积则可以用来计算化合物的浓度或纯度，实现对样品的定量分析。
总的来说，高效液相色谱法的原理是基于化合物在色谱柱中的分离和检测，通过样品的注射、色谱柱的分离、检测器的检测和数据处理等步骤，实现对化合物的分析和定量。
这种方法具有分离效率高、分析速度快、灵敏度高、准确性好等优点，因此在科学研究和工业生产中得到了广泛的应用。
高效液相色谱测定原理
高效液相色谱测定原理
高效液相色谱（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）是一种常用的分析方法，它基于样品在液相中的分配
行为以及在固定相上的吸附和解吸行为。
它能够对样品中的物质进行分离、定量和定性分析。
高效液相色谱的原理如下：
1. 选择性分离：高效液相色谱中，样品混合物被注入装有固定相（柱填充物）的色谱柱中。
不同物质在柱填充物上的吸附和解吸速度不同，因此可以通过调整流动相的组成、温度和流速等参数来实现对样品中物质的选择性分离。
2. 吸附-解吸过程：在高效液相色谱中，样品溶解于流动相中，与固定相表面发生相互作用。
这个过程涉及吸附和解吸，吸附过程发生在固定相表面，解吸过程发生在固定相表面和流动相中物质的分配行为。
通过控制流动相的性质和柱填充物的特性，可以实现对不同物质的选择性吸附和解吸。
3. 柱填充物：高效液相色谱柱的填充物通常是多孔性固体颗粒，如硅胶或石英。
填充物的选择与样品的性质和分离的目的有关。
柱填充物的粒径、孔径和表面性质将影响色谱分离的效果。
4. 检测器：高效液相色谱的结果通过检测器进行检测和记录。
常见的检测器包括紫外可见光检测器、荧光检测器、电化学检测器等，根据待分析物的性质和浓度选择适当的检测器。
总之，高效液相色谱是利用样品在液相中的分配和在固定相上的吸附解吸过程进行分离和定量分析的方法。
通过调整柱填充物、流动相和检测器等参数，可以实现对样品中不同物质的选择性分离和定量测定。
药学专业中药学的定性与定量分析方法探讨
药学专业中药学的定性与定量分析方法探讨药学专业中的中药学是研究中药的性质、成分、功效和应用的学科。
在中药学研究中，定性与定量分析是非常重要的方法。
本文将探讨药学专业中药学的定性与定量分析方法，以及其在中药研究中的应用。
一、定性分析方法定性分析是通过观察和比较样品的性质、形态、色泽等特征，来确定其成分和性质的方法。
在中药学中，定性分析常用于鉴别中药材的真伪和质量。
以下是几种常见的定性分析方法：1. 宏观鉴别法：通过观察中药材的外观特征，如形状、大小、颜色等，来判断其真伪和质量。
例如，黄芩的外观应为黄色，若发现颜色异常，则可能为假冒品。
2. 显微镜鉴别法：利用显微镜观察中药材的细胞结构和组织特征，来鉴别其真伪和质量。
例如，黄连的表皮细胞应有明显的蓝色细胞壁，若观察到细胞壁缺失或变形，则可能为假冒品。
3. 化学试剂鉴别法：通过与特定化学试剂的反应，来鉴别中药材的成分和性质。
例如，用碘液滴在地黄片上，若出现紫色或蓝色反应，则说明含有甾体类化合物。
二、定量分析方法定量分析是通过测定样品中特定成分的含量，来确定其质量和功效的方法。
在中药学中，定量分析常用于评估中药制剂的含量和药效。
以下是几种常见的定量分析方法：1. 薄层色谱法：将样品溶解后，在薄层色谱板上进行分离，然后用特定显色剂显色，并通过比色法测定色斑的强度，来计算样品中目标成分的含量。
2. 高效液相色谱法：将样品溶解后，通过高效液相色谱仪进行分离，然后根据峰面积或峰高来计算样品中目标成分的含量。
该方法具有灵敏度高、分离效果好的优点。
3. 气相色谱法：将样品挥发后，通过气相色谱仪进行分离，然后根据峰面积或峰高来计算样品中目标成分的含量。
该方法适用于挥发性物质的定量分析。
三、定性与定量分析方法的应用定性与定量分析方法在中药学研究中有着广泛的应用。
定性分析方法可以用于鉴别中药材的真伪和质量，确保中药材的安全有效；定量分析方法可以用于评估中药制剂的含量和药效，指导中药的合理使用。
仪器分析高效液相色谱法
仪器分析高效液相色谱法高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography，简称HPLC）是目前广泛应用于仪器分析领域的一种重要分析方法。
它通过利用柱子中流动的流动相和样品的物理化学性质的相互作用，使样品组分在柱子中发生分离，再通过检测器对各组分进行定量或定性分析。
仪器分析高效液相色谱法主要由流动相供给系统、进样器、柱子、检测器和数据处理系统等组成。
流动相供给系统通过恒压或恒流的方式将流动相送入进样器中，进样器将样品注入柱子中，柱子根据物理化学性质的差异，使不同组分发生分离，之后检测器检测进入检测器的各组分的浓度，并通过数据处理系统对数据进行分析和整理。
高效液相色谱法具有分离效率高、分离时间短、适用范围广等特点。
与传统的液相色谱法相比，高效液相色谱法的流动相的流速更高，柱子填充物颗粒更小，从而大大提高了分离效率。
同时，高效液相色谱法对样品的需求量较小，具有较好的分析灵敏度。
因此，高效液相色谱法被广泛应用于生物、环境、食品、药物、化工等领域的组分分析和质量控制。
在生物领域中，高效液相色谱法常用于生物样品中代谢产物和药物的分析。
通过绑定柱子、手性柱子以及使用不同的检测器，可以对复杂的生物样品中的不同组分进行准确的分析和定量测试。
例如，对尿液中的代谢产物进行分析可以帮助人们了解人体健康状态，对药物的残留物进行分析可以保证食品和水的安全等。
在环境领域中，高效液相色谱法常用于水质、大气和土壤等环境样品中有机污染物的分析。
通过连接各种不同相的柱子，可以对复杂的环境样品中的有机污染物进行有效的分离，使用紫外-可见光检测器或质谱检测器可以对分离后的各组分进行检测和定量。
在食品领域中，高效液相色谱法常用于食品中添加剂、农药残留物和食品中的有害物质的分析。
通过选择合适的柱子和检测器，可以对复杂的食品样品进行分离和检测，以保证食品的安全性和质量。
在药物领域中，高效液相色谱法常用于药品中活性成分和杂质的分析。
210988827_高效液相色谱串联质谱法测定水果、蔬菜中双胍辛胺的定性定量分析研究
分析检测高效液相色谱串联质谱法测定水果、蔬菜中双胍辛胺的定性定量分析研究尹丽丽（上海华测品标检测技术服务有限公司，上海 201112）摘 要：目的：建立水果和蔬菜中双胍辛胺的高效液相色谱串联质谱法的定性定量分析方法。
方法：样品经过正丁醇∶正己烷=1∶1混合溶液提取，再用酸化水净化。
以高效液相色谱质谱联用仪检测萃取液中的双胍辛胺的含量，采用HILIC-C18柱分离，在ESI正离子模式下，以质谱多反应监测，采用外标法进行定量分析。
结果：在10～500 ng·mL-1，双胍辛胺的线性良好，相关系数R＞0.995，检出限为0.002 0 mg·kg-1，定量限为0.011 mg·kg-1，双胍辛胺在3个浓度添加水平下，水果回收率在92.7%～108.9%，蔬菜回收率在96.2%～110.0%，水果相对标准偏差为1.15%～4.45%，蔬菜相对标准偏差为1.36%～2.15%。
结论：本研究建立的高效液相色谱串联质谱法测定双胍辛胺的方法准确、快速，能够满足水果、蔬菜中双胍辛胺的分析要求。
关键词：双胍辛胺；高效液相色谱串联质谱；水果；蔬菜Determination of Iminoctadine in Fruits and Vegetables by High Performance Liquid Chromatography-Tandem MassSpectrometryYIN Lili(Shanghai Huabiao Testing Technology Service Co., Ltd., Shanghai 201112, China) Abstract: Objective: A method was developed for the determination of iminoctadine of fruits and vegetables by high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry. Method: The sample was extracted with the solution of butyl alcohol and hexane (1∶1), and then cleaned-up by acidified water. Iminoctadine was determined by liquid chromatography mass spectrometer with a HILIC chromatographic column, analyzed in positive electronic spayionization (ESI+) mode with multiple reaction monitoring, and quantified by the external standart method. Result: The calibration curves were linear with the correlation coefficients over 0.995 in the range of 10～500 ng·mL-1 for iminoctadine. The limits of detection were 0.002 0 mg·kg-1. The limits of quantification were 0.011 mg·kg-1. The mean recoveries of iminoctadine at three spiked levels were in the range from 92.7% to 108.9% of fruits and 96.2%～110.0% of vegetables, with the relative standard deviations were in the range from 1.15%～4.45% of fruits and 1.36%～2.15% of vegetables. Conclusion: Determination of iminoctadine in fruits and vegetables by high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry was established in this study which was accurate and rapid, suitable for analysis of iminoctadine in fruits and vegetables.Keywords: iminoctadine; high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry; fruits; vegetables双胍辛胺是一种广谱性杀真菌剂，对某些病原真菌有很高的生长抑制活性，其作用方式是抑制病菌类脂的生物合成，是触杀和预防性杀菌剂，对大多数由子囊菌和半知菌引起的真菌病害有很好的效果[1]。
高效液相色谱法定性定量分析
高效液相色谱法测定萘乙酸的含量一、实验目的1、学习高效液相色谱仪的操作。
2、了解高效液相色谱法测定萘乙酸的基本原理。
3、掌握高效液相色谱法进行定性及定量分析的基本方法。
二、实验原理将已配制的浓度不同的萘乙酸标准溶液进入色谱系统。
如流动相流速和泵的压力在整个实验过程中是恒定的，测定它们在色谱图上的保留时间t R和峰高A后，可直接用t R定性，用峰面积A作为定量测定的参数，采用工作曲线法（即外标法）测定未知浓度萘乙酸的含量。
三、仪器和试剂1、Agilent 1100高效液相色谱仪。
2、色谱柱：Zorbax C8，5µm，250×4.6mm，20μL定样环。
3、流动相：H2O和CH3OH4、萘乙酸标准溶液：精密称取萘乙酸标准品制成浓度(mg/L)分别为0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、2、5、8、10、15、20 mg/L的对照品溶液，放入冰箱备用。
5、未知物萘乙酸6、平头微量注射器。
四、实验步骤1、开机(1) 检查流动相、废液瓶和色谱柱；(2) 打开打印机和计算机的电源；(3) 自上而下打开个组件电源，Bootp Server里显示有信号时（有六行字符）；(4) 打开工作站。
2、编辑方法(1) 选择“Method”菜单，然后“EDIT METHOD”依屏幕提示进入以下设定：(a）泵对话框：设定泵的流速：1.0mL/min；H2O和CH3OH线性梯度洗脱：H2O 0 min：10%；1 min：20%；3 min：30%；4 min：30%；(b）检测器对话框：设定波长337 nm。
(2) 单击“Method”菜单，选中“Save Method As…”，输入方法名，单击OK。
(3) 从“Run Control”菜单中选择“Sample Info…”选项，输入操作者名称，在“Data file”中选择“Manual”或“Prefix”。
(4) 单击Ok，等仪器Ready，基线平稳。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
谢谢大家!!!
定性分析
常用的液相色谱定性方法有： 1. 利用已知标准样品定性 利用标淮样品对未知化合物定性是最常 用的液相色谱定性方法。由于每一种化合物 在特定的色谱条件下（流动相组成、色谱柱 、桂温等相同），其保留值具有特征性，因 此可以利用保留值进行定性。
2．利用检测器的选择性定性 同一种检测器对不同种类的化合物的响
紫外检测器是液相色谱中使用最广泛的一种检测器 。全波长扫描紫外检测器可以根据被检测化合物的紫外 光谱图提供一些有价值的定性信息。
传统的方法是在色谱图上某组分的色谱出现极大值 即最高浓度时，通过停泵等手段，使组分在检测池中滞 留，然后对检测池中的组分进行全波长扫描，得到该组 分的紫外—可见光谱图；再取可能的标准样品按同样方 法处理。对比两者光谱图即能鉴别出该组分与标准样品 是否相同。对于某些有特殊紫外谱图的化合物，也可以 通过对照标准谱图的方法来识别化合物。
固定相的种类：
1. 硅胶 2. 氧化铝 3. 聚合物 固定相的选择：（+++表示好，++表示一般，+表示差
）
流动相：
一个理想的流动相溶剂应具有低粘度、 与检测其兼容性好、易于得到纯品和低毒性 的特征。
选择流动相要考虑的因素：
1.流动相应不改变填料的任何性质； 2.纯度； 3.必须与检测其匹配； 4.粘度要低； 5.对样品的溶解度要适宜； 6.样品易于回收。
泵应具有的性质： 1. 流量稳定； 2. 流量范围宽； 3. 输出压力高； 4. 液缸容积小； 5. 密封性能好，耐腐蚀。
操作时的注意事项：
1. 防止任何固体微粒进入泵； 2. 流动相不含有任何腐蚀性物质； 3. 工作时要注意溶剂瓶中的溶剂用完； 4. 泵的工作压力不能大于规定的最大压力； 5. 流动相要先进行脱气，防止产生气泡。
高效液相色谱法（HPLC） 及定性定量分析
提纲
一﹑HPLC系统简介 二﹑HPLC中的固定相和流动相 三﹑应用范围 四﹑定量定性分析
一、HPLC系统
HPLC系统
记录 及处
泵器
柱
器
理
HPLC示意图
输液泵
输液泵： 输液泵是HPLC系统中的重要部件之一，
泵的性能好坏直接影响到整个系统的质量和 分析结果的可靠性。
进样器
进样器： 目前采用较多的是六通
进样阀和自动进样器。 对进样装置的要求：
密封性好，死体积小， 重复性好，保证中心进样， 进样时对色谱系统的压力、 流量影响小。 进样方式可分为：
隔膜进样、停流进样、阀进 样、自动进样。目前应用做多的 是阀进样和自动进样。
色谱柱
色谱柱的要求：
柱效高、选择性好，分析 速度快等。市售的用于HPLC的 各种微粒填料好多孔硅胶以及以 硅胶为基质的键合相、氧化铝、 有机聚合物微球(包括离子交换 树脂)、多孔碳等，其粒度一般 为3，5，7，10μm等，柱效理 论值可达5～16万/米。对于一 般的分析只需5000塔板数的柱 效;对于同系物分析，只要500 即可;对于较难的分离物质对则 可采用高达2万的柱子，因此一 般10～30CM左右的柱长就能 满足复杂混合物分析的需要。
HPLC的固定相和流动相
固定相：即所说的基质或者单体，可以 是陶瓷的无机物基质，也可以是有机聚合物 基质。无机物基质主要是硅胶和氧化铝，在 溶剂中不容易膨胀，有机聚合物基质主要是 交联苯乙烯-二乙烯苯、聚甲基丙烯酸酯。有 机聚合物刚性小、易被压缩，溶剂或溶质容 易渗入有机基质中，导致填料颗粒膨胀，结 果减少传质，最终使柱效降低。
检测器
检测器是HPLC系统的三大关键部 件之一，作用是把洗脱液中的组分的量 转化为电信号。HPLC的检测器要求是 灵敏度高，噪音低，线性范围宽，重复 性好，适用范围广等特点。
数据记录及处理
目前对于数据记录及处理所采用的是计 算机，计算机的广泛应用使得HPLC操作更 加迅速，简便，准确，精密和自动化，现在 已经可以在互联网上远程处理数据，目前计 算机在HPLC上的用途主要由： 1. 采集处理和分析数据； 2. 控制仪器； 3. 色谱系统优化和专家系统。
应值是不同的，而不同的检测器对同一种化 合物的响应也是不同的。所以当某一被测化 合物同时被两种或两种以上检测器检测时， 两个或几个检测器对被测化合物的检测灵敏 度比值是与被测化合物的性质密切相关的， 可以用来对被测化合物进行定性分析，这就 是双检测器定件体系的基本原理。
3．利用紫外检测器全波长扫描功能定性
定量分析
1.归一化法 归一化法要求所有组分都能分离并有响
应。由于液相色谱所用检测器为选择性检测 器，对很多组分没有响应，因此液相色谱法 较少使则归一化法。 2.外标法
外标法是以待测组分纯品配制标准试样 和待测试样同时作色谱分析来进行比较而定 量的，可分为标准曲线法和直接比较法。
3.内标法
内标法是比较精确的一种定量方法。它 是将已知量的参比物（内标物）加到已知量 的试样中．那么试样中参比物的浓度为已知 ；在进行色谱测定之后，待测组分峰面积和 参比物峰面积之比应该等于待测组分的质量 与参比物质量之比，求出待测组分的质量， 进而求出待测组分的含量。
应用范围
高效液相色谱法适于分析高沸点不易挥 发的、受热不稳定易分解的、分子量大、不 同极性的有机化合物；生物活性物质和多种 天然产物；合成的和天然的高分子化合物等 。它们涉及石油化工产品、食品、合成药物 、生物化工产品及环境污染物等，约占全部 有机化合物的80％。其余20％的有机化合 物，包括永久性气体，易挥发低沸点及中等 分子量的化合物，只能用气相色谱法进行分 析。