放线菌形态及结构的观察

放线菌形态及结构的观察
姓名：贾晓霖
学号：201000140032
班级：生科10.1
同组人员：李江湲程子修洪钧烨
摘要：配制高氏I号培养基用来培养青色链霉菌和弗式链霉菌，本实验运用插片法观察放线菌的形态，初步地了解放线菌的基本结构和形态。

更直观的了解，基内菌丝、气生菌丝以及气生菌丝分化而成的孢子丝以及孢子。

关键词：青色链霉菌（Streptomyces glaucus）、弗氏链霉菌（Streptomyces microflavus）、高氏I号培养基、插片法
前言：放线菌（actinomycetes）是指能形成分枝丝状体或菌丝体的一类革兰氏阳性细菌。

广泛存在于自然界中，土壤中最多，主要以孢子繁殖，至今发现的共有五六十属，它与人类的关系极为密切，根据1978年的统计，在当时已发现的5128种抗生素中，有3165种为各种放线菌所产生，链霉菌属又占放线菌中的首位（占放线菌产生的抗生素中的87.5％）；有的放线菌还可用于生产维生素、酶制剂等；少数会引起人类、动物、植物的疾病。

链霉菌属是放线菌中种类最多、分布最广、形态特征最典型的类群，其孢子丝的形态多样，而且性状较稳定，是对它们进行分类、鉴定的重要指示。

因此学习如何培养和观察它们不仅对科学研究有很大的意义，对实际生活应用也有很大的帮助。

本实验采用合成培养基进行培养，采用插片法取菌观察，不仅可观察到放线菌自然生长状态下的特征，而且便于观察不同生长期的放线菌形态，除此之外还可以采用玻璃纸法、印片法进行观察。

链霉菌属（Streptomyces）共约1，000多种，它们具有发育良好的菌丝体，也是实验中选取它们观察的重要原因。

一、实验目的
1.1学会正确的配置高氏I号培养基
1.2运用插片法观察放线菌的形态，初步地了解放线菌的基本结构和形态
二、实验材料
1、菌种：青色链霉菌(Streptomyces glaucus)，弗氏链霉菌(S. glaucus).
2、试剂：高式I号培养基200ml、二甲苯、香柏油
3、仪器和其他用具：三角烧瓶，烧杯，量筒，玻璃棒，天平，分析天平，牛角匙，高压蒸气灭菌锅，pH 试纸，棉塞，牛皮纸，记号笔，载玻片，盖玻片（3包 10个/包），培养皿（1包 10个/包），移液管，接种环，镊子2把
三、实验方法
一、高氏I号培养基的制备
1、称量和溶解。

2、按配方先称取可溶性溶粉、放入小烧杯中，并用少量冷水将淀粉尽量溶解，再加入沸水中，继续加热，使可溶性淀粉完全溶解。

3、称取其他各成分依次溶解。

由于条件限制，对于微量成分FeSO4·7H2O，直接用分析天平称量，加入即可。

4、待所有药品完全溶解后，补充水分到所需的总体积，进行pH 调节到7.2～7.4。

5、制平板培养基。

6、材料灭菌。

将所配溶液装在三角烧瓶中并加棉塞，棉塞外包一层牛皮纸，并用麻绳捆好，用记号笔标记组号。

取十个培养基，用牛皮纸包好，用记号笔标记大小面。

同理盖玻片也用牛皮纸包好，再在盖玻片上加盖一层牛皮纸纸，用牛皮纸包好后，用记号笔标记，镊子也包好一起灭菌。

将上述物品放入密封的加压灭菌锅中进行高压蒸汽灭菌121℃、20分钟。

7、在无菌操作箱中的酒精灯旁，将三角烧杯中高氏I号培养基液分装到6个培养皿中，平放凝固。

二、插片法进行链霉菌的观察
1、接种无菌操作分别由青色链霉菌和弗氏链霉菌试管培养集中挑去菌种在高氏I号培养基平板上密集划线接种，并贴上标签。

2、插片无菌操作用镊子将灭菌的盖玻片以约45°角插入平板琼脂并与接种线垂直，每个培养基在不同的位置插入三个盖玻片。

3、培养将平板倒置，于28℃培养。

（如果担心玻片插得不够牢靠，也可以正面培养）
4、镜检用镊子小心取出盖玻片，用纸擦干净一面，有菌面朝上放在载玻片上，通过显微镜直接用低倍镜和高倍镜镜检观察，并记录观察现象。

3.结果分析
一、结果
1、显微镜下链霉菌的形态特征图
弗式链霉菌（10×40倍）
青色链霉菌（10×40倍）
手绘区域
弗氏链霉菌青色链霉菌
2、放线菌的菌落特征
1、青色链霉菌：孢子丝螺旋状，孢子卵圆形、长圆形，表面光滑。

2、弗氏链霉菌：孢子丝直，孢子卵圆形、长圆形、柱形，表面光滑。

二、实验结果分析
1、由图-1和图-2，放线菌呈分枝丝状，分支较多交错在一起，由基内菌丝、气生菌丝和孢子丝三部分组成，基内菌丝为透明，有较多的分枝；气生菌丝较暗。

两种菌丝在不同的焦平面上，可以调节细准焦螺旋分别进行观察。

2、由菌落特征，放线菌的细胞有基内菌丝和气生菌丝的分化，气生菌丝到成熟时又会分化成孢子丝并产生成串的干粉状孢子，这些气生菌丝或孢子丝伸展在空气中，菌丝间一般都不存在毛细管水。

这就使放线菌获得其特有的与细菌不同的菌落特征：干燥、不透明，表面呈紧密的丝绒状，菌落和培养基的连接紧密，难以挑取菌落。

3、从恒温箱拿出培养的链霉菌时，有一个平板上几乎什么也没有长，分析原因可能是接种时，接种环还未冷却的时候，就去取种，导致接种的菌因为温度过高而死亡，所以才导致没有菌落。

四、实验总结
1、接种时划线要密，插片时要有一定的角度且与划线相垂直，这样较容易是菌丝长在盖玻片上；实验
操作过程中，尤其是镜检时不要碰到载玻片上的菌丝，否则会污染镜头并且破坏了放线菌的自然生长状态。

2、镜检时，宜用略暗光线；先用低倍镜找到适当视野，再换高倍镜观察。

3、镜检时，菌面应该朝上，不然，菌体会被压扁，不好观察。

4、实验过程尽量不要完全打开培养皿，防止吸入链霉菌的孢子。

5、链霉菌的孢子特征：孢子的形状多样，有球状、椭圆状、杆状、圆柱状、瓜子状、梭状和半月状等。

孢子的颜色十分丰富，且与其表面的纹饰有关。

孢子表面的纹饰在电子显微镜下清晰可见，除表面光滑者外，还有褶皱状、疣状、刺状、发状和鳞片状。

刺又有粗细、大小、长短和疏密之分。

目前发现，凡直或波曲的孢子丝，都产生表面光滑的孢子（尚未发现带刺或毛发状的），若孢子丝为螺旋状的，则其孢子表面会因种而异，有光滑、刺状或毛发状的。

五、思考题
1、镜检时如何区分放线菌基内菌丝、气生菌丝及孢子丝？
答：基内菌丝比较亮，气生菌丝比较黑，孢子丝为气生菌丝成熟后形成的产生孢子的结构。

2、青色链霉菌和弗式链霉菌的孢子丝有何区别？
答：青色链霉菌的孢子丝是螺旋形，弗式链霉菌是直的。

6.参考文献
【1】沈萍、陈向东《微生物学实验》高等教育出版社第四版P18～20 P70～73 P241【2】沈萍、陈向东《微生物学》高等教育出版社第二版 P372～374。