Lgr5和CD44在肠息肉和结直肠癌中的表达及意义

羊抗小鼠ＣＤ４４单克隆抗体为ＢＤ公司产品。ＡＢＣ免疫
组陋揽、ＮｏｖａＲｅｄ、ＶＩＰ显色剂为Ｖｅｃｔｏｒｌａｂ公司产品。
１．３
ＨＥ和免疫组化染色方法
管状腺瘤陛息肉癌变几率高，而炎ｆ生及增生｜生息肉基本
不癌变也没有明确的原因。因此，从细胞和分子生物学 水平上研究肠息肉发生规律及原因，对于肠息肉相关肿 瘤的早期诊断与寻找新的治疗方法和新的靶点具有非 常重要的意义。 近年来，越来越多的研究证实，在大肠癌肿瘤细胞 中可能存在着少量具有干细胞样特性的肿瘤干细胞
ｍｏｌ／Ｌ
枸橼酸缓冲液（ｐＨ＝６．０）中，微波炉热修复１０ ｍｉｎ，自然
冷却后用流水冲洗。０．３％双氧水去内源ｌ生过氧化物酶
后，０．２５％Ｔｒｉｔｏｎ ｘ．１００室温破膜１０ ｍｉｎ，ＴＢＳ冲洗３
（ＣＳＣ）ｂ］，而这些ＣＳＣ的存在是造成肿瘤耐药｜生和恶性
增殖的最主要的原因。对于ＣＳＣ的起源目前尚不明 了。但已有研究证实，肠道中正常存在的干细胞功能紊 乱，如自我更新、克隆增殖、分化和凋亡失去平衡陆］，不但 与肠息肉和直肠结肠癌的发生有直接或者间接的关系， 而且很有可能是肿瘤干细胞的最早起源。目前，通过表 面特异性标志，可以对直肠结肠癌肿瘤干细胞进行分离 纯化，这些肿瘤干细胞的标志有ＣＤ４４、ＣＤｌ３３、ＥｐＣＡＭ 等ｎ］。其中，ＣＤ４４作为一种粘附分子，可以通过跨膜糖 蛋白的方式介导细胞间或细胞与基质问的相互作用，在 细胞的粘附、血管的形成和肿瘤的浸润和增殖中发挥重 要作用陋。９］。除此之外，ｗｎｔ信号通路作为正常肠道干细 胞增殖和肿瘤发生发展相关的重要信号通路，其靶基因 富含亮氨酸重复序列Ｇ一蛋白偶联受体５（Ｌｇｒ５），一个７ 次跨膜蛋白，不但被证实在小肠和结肠隐窝基底柱状上 皮细胞及胃粘膜腺体颈部细胞中特异性表达，表现出特
万方数据
ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｊ－ｓｍｕ．ｃｏｍ
Ｊ ｓｏｕｔｈ Ｍｅｄ
Ｕｎｉ、‘２０１３，３３（７）：９７２—９７６
・９７３・
左右，一般需要１０年左右时间，尤其是腺瘤性息肉，腺 瘤愈大，癌变率愈高，大于２ ｃｍ的腺瘤眭息肉发生癌变 的几率高达５０％［４］。目前关于大肠息肉发生癌变的具 体机制尚不清楚。此外，为何临床上发现绒毛状腺瘤较
ＣＤ４４ ａｎｄ Ｌｇｒ５ ｗｅｒｅ Ｐｏｓｉｔｉｖｅｌｙ ｃｏｒｒｅｌａｔｅｄ ｗｉｍ ｔｈｅ ｐｒｏ铲ｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ ｐｏｌｙＰ ｔｕｍｏｒｉｇｅｎｅｓｉｓ（，ｓ＝０．６９３７７，Ｐ＜０．０００１；ｒｓ－ ０．８１６３７，Ｐ＜０．０００１）．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ Ｌｇｒ５ ａｎｄ ＣＤ４４ ａｒｅ ｈｉ２ｍｙ ｅ×ｐｒｅｓｓｅｄ ｉｎ ｃ０１０ｒｅｃｔａｌ ｃａｎｃｅｒ ｔｉｓｓｕｅｓ ｉｎ ｃｌｏｓｅ ｃｏｒｒｅｌａｔ！ｉｏｎ埘ｍ ｔｈｅ ｄｉｎｉｃａｌ ａｎｄ ｐａｍｏｌｏ西ｃａｌ ｆｅａｔｕｒｅｓ．Ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｐｒｏｆｉｌｅｓ ｏｆ
ｈｖｐｅｒｐｌａｓ石ｃ ｔｉｓｓｕｅｓ（Ｐ妁．Ｏ∞．Ｔｈｅ ｅＸｐｒｅｓｓｉｏｎ ｒａｔｅ ｏｆ Ｌｚｒ５ ｗａｓ ８６．８４％ｉｎ ｈｌｂｕｌａｒ ａｄｅｎｏｍａ跚ｄ ９３．９４％
ｐ０１ｖｐｓ，ｂｏｍ ｃｏｍｐａｒａｂｌｅ ｗｉｍ ｍａｔ ｉｎ ｃｏｌｏｎ ｃａｎｃｅｒ（ｊ）＞０．０５）．Ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ ａｎａｌｖｓｉｓ ｉｎｄｉｃａｔｅｄ ｍａｔ ｍｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ
癌组织中的表达高达９５．６５％（２２／２３），显著高于正常粘膜（无表达）和炎性增生息肉１６．１２％（Ｐ＜Ｏ．０５），而在管状腺瘤和绒毛状腺 瘤中表达分别为８６．８４％（３３／３８）和９３．９４％（３１／３３），与大肠癌相比，两两差异不具有统计学意义（Ｐ＞Ｏ．０５）。相关性分析结果显
示，ｃＤ４４、Ｌｇｒ５的表达强度与肠息肉癌变进展均呈正相关（萨Ｏ．６９３７７，Ｐ＜ｏ．０００１；萨０．８１６３７，Ｐ＜Ｏ．０００１）。结论Ｌ蓼５和ｃＤ４４在 大肠癌癌组织中高表达，它们的高表达与临床和病理的特征具有显著相关陛；Ｌ铲５和ｃＤ４４的表达是区别大肠癌癌组织与正常
Ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＣＤ４４ ｉｎ ｃｏｌｏｎ
ｃａｎｃｅｒ
Ｈｓｓｕｅ
９５．６５％，ｓｉ咖ｆｉｃａｎＵｙ ｈｉ擘出ｅｒ ｔ１１ａｎ ｍａｔ ｉｎ
Ｖｉｌｌｏｕｓ
ｍｕｃｏｓａ（５％），ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒ）ｒ ｈｙＰｅｒＰｌａｓｔｉｃ ｐｏｌｙＰｓ（２２．５８％），ｔｕｂｕｌａｒ ａｄｅｎｏｍａｔｏｕｓ ｐｏｌｙＰｓ（５５．２６％）ａｎｄ
Ｌｇｒ５
ａｎｄ
ＣＤ４４
ｉｎ
ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ
ｔｙｐｅｓ ｏｆ ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ ｐｏｌｙｐｓ ａｎｄ山ｅｉｒ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｓｉ铲ｌｉｆｉｃａｎｃｅ ｉｎ ｐｒｅｄｉｃｔｉｎｇ ｔｕｍｏｒｉｇｅｎｅｓｉｓ．ＭｅｔｌＩｏｄｓ Ａ ｔｏｔａｌ ｏｆ １４５ ｃａｓｅｓ ｏｆ ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ ｐｏｌｖｐｓ，ａｄｅｎｏｍａｓ ａｎｄ ｃａｎｃｅｒ ｔｉｓｓｕｅｓ ｗｅｒｅ ｏｂｔａｉｎｅｄ ｂｖ ｃｏｌｏ《、ｏｓｃｏｐｙ ｂｉｏｐｓｙ．Ｉｒｒｕ弧ｕｎｏｈｉｓ七ｏｄｈｅｍｉｓｔｒｙ ｗａｓ
ｃａｎｃｅｒ
ＨＤ，ｚ删口竹３，Ｖ忧Ｎ胁＂１，ＱＪＮ，ｉｎ忍“矿ＭＮＧ
Ｓｈ“１，Ｄｎ，，ｎＨＮＧ‘地竹向ｎ矿，ＰＥＪ Ｘ“ｅｆ口０２，ＷＵ ＢＰ押１，Ⅱｎ１，ＬＩＮＧＨＵ Ｅ九日砌托矿 Ｄ印疗ｒｆ班Ｐｎｆ ｏ厂Ｇ丑ｓ￡ｒ钾Ｈｆ已ｒｏ！ｏ鹏Ｄ幻ｉｓｉｏ”ｏ厂ＳＤ“胁Ｂ“ｉｆｄｉ玎一，ＧⅡｓｆ加ｉｎｆ已ｓｆ抽ｎ２ ＥＨｄｏｓｃｏ琊Ｒｏｏｍ，Ｈ已ｎｎｈ ＣⅡ把Ｃ跚把，，Ｄ印口ｒｆ＂ｌｅｎｆ ｏ厂 Ｇ口ｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏ魁，．Ｇｅｎｅ，ｍ Ｈ０印ｉｔ畦ｏｆ ＰＬＡ．Ｂｅｉ｛ｉｎＲ １００８５３，ｃｈ｛ｎ坼２ｓｔｅｍ Ｃｅｎ嬲ａ ＲｅＲｅｎｅ，ｑｔｉｏｎ Ｍｅ出ｃｉｎｅ Ｌ；露ｂ，Ｂｅｉ｛ｉｎｇ ｌｎｓｔｔｔｕｔｅ ｏｆ
１．５统计学处理
采用ｓＡｓ９．２统计软件，等级资料采用非参数的秩 相关检验，计数资料采用Ｚ检验及Ｆｉｓｈｅｒ精确概率，采用 ＳｐｅａＨｎａｌｌ秩相关分析蛋白表达与病理级别间的相关 性，Ｐ＜０．０５为差异有统计学意义。
ｍｅａｎｓ ｄｅｔｅｃｔｉｎｇ ｏｆ廿Ｉｅ ｅｘＰｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ Ｌｇｒ ５ ｔｏｇｅｍｅｒ ｗｉｍ ＣＤ４４ ｉｓ ｉＩｎｐｏｒｔａｎｔ ａｎｄ ｎｅｃｅｓｓａｒｙ ｉｎ ｗｉｍ ｅａｒｌｙ ｓｔａ盔ｅ ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ ｄｉｓｅａｓｅｓ ｓｕｃｈ ａｓ ｐｏｌｙｐｓ ａｎｄ ｍｅｉｒ ｃａｎｃｅｒａｔｉｏｎ．
次，每次５ ｍｉｎ。依照Ｖｅｃｔｏｒ ＡＢＣ免疫组化试剂盒进行 染色，用ＮｏｖａＲｅｄ或ＶＩＰ显色剂显色，苏木紫复染，封 片，在显微镜下观察摄片。用ＰＢｓ代替一抗作阴性对 照，每组设置相应的阳性对照。
１．４结果判定
ＣＤ４４的表达以包膜呈红色或紫色为阳性染色， Ｌｇｒ５的表达以胞质呈红色或紫色为阳性染色。高倍镜 下（×４００）每张切片随机选择５个视野，进行视野内腺体 细胞计数，并计算阳性细胞所占比例。肿瘤细胞无着色 为（一）；＜２５％的细胞着色（＋）；２５％～５０％的细胞着色为 （＋＋）；＞５０％的细胞着色为（＋＋＋）。
（Ｐ＜０．０５）．１ｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ Ｌｇｒ５ ｉｎ ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ １６．１２％ｉｎ
ｉｎ ｖｉｌｌｏｕｓ
ｃａｎｃｅｒ
Ｐｏｌｙｐｓ（７５．７６％）
ｗａｓ ｕｐ ｔｏ ９５．６５％ｗｈｉｌｅ ｎｅｇａｔｉｖｅ ｉｎ
ｎｏｍａｌ
ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ Ｈｓｓｕｅ ａｎｄ ｗａｓ
ｉｎｎ锄ｍａｔｏｒｙ
ＨＥ染色检测中，首先将各种组织类型４“ｍ的石蜡 切片进行二甲苯脱蜡、酒精水合，用苏木素染核５ ｍｉｎ， 自来水冲洗，氨水泛蓝１ ｍｉｌｌ，自来水冲洗，用伊红染胞 浆３ ｍｉｎ，自来水冲洗，９５％｝酉精分化３０ ｓ，最后用二甲苯 透明１５～２０ ｍｉｎ后封片，在显微镜下观察摄片；免疫组 化检测，石蜡切片二甲苯脱蜡、酒精水合后，置０．０１
收稿日期：２０１３．０４—２４ 基金项目：国家自然科学基金（８１０７２９１３）
Ｓｕｐｐｏｒｔｅｄ ｂｙ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｎａｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ
和提高存活率具有非常重要的意义。肠息肉是一种肠
腔内黏膜表面的隆起病变，根据病理分型可分为增生ｌ生 炎陛息肉、管状腺瘤息肉及绒毛状腺瘤息肉。大量的研
Ｐａｔｌｌ０１０昏ｃａｌ
ｅｍｐｌｏｖｅｄ ｔｏ ｄｅｔｅｃｔ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ Ｌｇｒ５ ａｎｄ ＣＤ４４ ｔｏ ａｎａｌｙｚｅ ｍｅｉｒ ａｎｄ ｒｅｄ．ａｌ
ｃａｎｃｅ ｒ．Ｒｅｓｕｌｔｓ
ｒｅＩａｔｉｏｎ加ｐ
ｗａｓ
ｗｉｍ ｔｈｅ
ｏｃｃｕｒｒｅｎｃｅ
ａｎｄ ｐｒｏ霉皿ｏｓｉｓ ｏｆ ｃｏｌｏｎ ｎｏｒｍａｌ
ｃａｎｃｅｒ
Ｌ脚ａｎｄ
ＣＤ４４
ｒｅｐｒｅｓｅｎｔ
Hale Waihona Puke ａｄｉｓｔｉｎｃｔ ｆｅａｔｕｒＰ ｔｏ ｄｉｆｆｅｒｅｎ廿ａｔｅ
ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ
ｒＩｈｉｓ
ｆｒｏｍ ｎｏｒｍａｌ ｉｎｔｅｓｔｉ：ｎａｌ ｍｕｃｏｓａ．Ｌｇｒ５ ｉｓ ｍｏｒｅ ｄｏｓｅｌｙ ｃｏｒｒｄａｔｅｄ ｗｉｍ ｔｕｍｏｒ ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｐｏｌｖｐｓ ｔｈａｎ ＣＤ４４．
肠粘膜组织的显著特点；与ｃＤ４４相比，Ｌ盯５表达与息肉癌变具有较强相关性，联合检测Ｌｇｒ５与ｃＤ４４在肠道早期病变诊断、尤 其是肠息肉癌变预测中具有重要意义。 关键词：肿瘤干细胞；Ｌｇｒ５；ＣＤ４４；结肠息肉；结肠癌
Ｌｇｒ５ ａｎｄ ＣＤ４４ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓ ｉｎ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｔＶｐｅｓ ｏｆ ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ ｐｏｌＶｐｓ ａｎｄ ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ ｃＨＡ¨、『纫２酽，ｚＨＡＮＧ ｗｉ，ｚｃｈＰ竹妒Ｖ悄ＮＧ坳靠卅ｉ”３，ｚＨＯＵ ｚ｝ｚ口ｏｆ口Ｄ３，ｚＨＡＮＧ坳竹一ｕＵ
・９７２・
ｄｏｉ
１０．３９６９力．ｉｓｓｎ．１６７３．４２５４．２０１３．０７．０７
Ｊ ｓｏｕｔｈ Ｍｅｄ
ｕｎｉｖ，ｚ０１３，３３｛７）：９７２・９７６
｜缶床研究
Ｌｇｒ５和ＣＤ４４在肠息肉和结直肠癌中的表达及意义
柴宁莉ｔ，张文成：，王艳敏３，周昭涛３，张艳娥３，刘红艳３，万军１，覃金华２，王术勇２，王韫芳２，裴雪涛２，吴本俨１， 令狐恩强４ 解放军总医院・南楼消化内科，，健康医学中心胃肠镜室，４消化科，北京１００８５３；２解放军军事医学科学院野战输 血研究所干细胞与再生医学实验室，北京１００８５３
ｎ日ｎｓ触ｓｉＤ”Ｍ已ｄｉｃｉｎｅ，Ｂｅｉｆｉｎ２ Ｊ，ｚｓｆ丹“ｆ已。厂ｊ『ｋ玎ｓｍｓ如ｎ Ｍ已ｄｉｃｉ玎已，Ｂｅｉ缸，ｚ２
１００８５３，Ｃｈｆ托口
Ａｂｓｔｒａｃｔ：０ｂｊｅｃｔｉｖｅ
Ｔｂ
ｓｔＬｌｄｙ
ｔｈｅ
ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ
ｏｆ
ｔｕｍｏｒｉｇｅｎｅｓｉｓ－ｒｅｌａｔｅｄ ｓｔｅｍ
ｃｅＵ
ｍａｒｋｅｒｓ
Ｋｅｖ ｗｏｒｄｓ：ｃａｎｃｅｒ
ｃｌ“ｃａｌ ｄｉａｇｎｏｓｉｓ
ｏｆ Ｐａｔｉｅｎｔｓ
ｓｔｅｍ ｃｅｎｓ；Ｌｚｒ５；ＣＤ４４；ｃ０１０ｎ ｐｏｌｙｐｓ；ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ
ｃａｎｃｅｒ
大肠癌是常见的恶陛肿瘤。近年来，随着我国饮食
西化，直肠结肠癌已成为我国的癌症第３死因，且发病 人群逐渐趋向年轻化“。２３，对其的早期诊断及治疗对预后
摘要：目的探讨不同病理分型肠息肉与肿瘤发生相关的干细胞标志Ｌ伊５和ｃＤ４４的表达及其对息肉癌变的ｌ临床预测意义。方 法经结肠镜活检获取结肠直肠息肉、腺瘤和癌组织１４５例，进行病理检测分型；应用免疫组化方法检测不同病理类型标本中肿
瘤干细胞标志Ｌｇｒ５和ｃＤ蚪的表达，分析比较其与结、直癌的发生和预后的关系。结果ｃＤ４４在结肠癌组织中的表达率为 ９５．６５％，显著高于正常粘膜５％、炎性增生陛息肉２２．５８％、管状腺瘤眭息肉５５．２６％及绒毛状息肉７５．７６％（ｐ＜Ｏ．０５）。Ｌ盯５在大肠
究将管状腺瘤息肉及绒毛状腺瘤息肉视为癌前病变，证 实大肠息肉与肠癌的发生具有密切关系ｂ１。随着人们 饮食结构中脂肪成分的增加以及生活习惯的改变，加之 肠镜检查的普及，近年肠息肉的镜检发现率在逐年增 高。随访研究结果显示，结肠息肉的整体恶变率为１０％
ｏｆＣｈｉｎａ（８１０７２９１３）
作者简介：柴宁莉，博士，副主任医师，Ｅ—ｍａｉｌ：ｃｓｘｌｉｌｙ＠１６３．ｃｏｍ 通信作者：令狐恩强，Ｅ—ｍａｉｌ：ｌｉｎ曲ｕｅｎｑｉａｌｌｇ＠ｖｉｐｓｉｎａ．ｃｏｍ