ELISA实验报告（酶联免疫吸附测定）结果

ELISA实验报告（酶联免疫吸附测定）结果
ELISA实验报告
-森贝伽⽣物实验技术中⼼前⾔
酶联免疫吸附剂测定（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）的基本原理是：①使抗原或抗体结合到某种固相载体表⾯，并保持其免疫活性。

②使抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体，这种酶标抗原或抗体既保留其免疫活性，⼜保留酶的活性。

在测定时，把受检标本（测定其中的抗体或抗原）和酶标抗原或抗体按不同的步骤与固相载体表⾯的抗原或抗体起反应。

⽤洗涤的⽅法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与其他物质分开，最后结合在固相载体上的酶量与标本中受检物质的量成⼀定的⽐例。

加⼊酶反应的底物后，底物被酶催化变为有⾊产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据颜⾊反应的深浅刊物定性或定量分析。

ELISA可⽤于测定抗原，也可⽤于测定抗体。

该法适于测定细胞培养上清、⾎清、⾎浆及组织液中的样本，⼲扰⼩可以测到每毫升纳克⽔平的细胞因⼦（或受体）的⽔平。

材料与⽅法
1材料
1.1主要试剂
ELISA检测试剂盒(From：森贝伽⽣物/SenBeiJia)
1.2主要仪器及耗材
酶标仪：芬兰（Labsystems Multiskan MS）公司产品
洗板机：芬兰（Thermo Labsystems）公司产品
离⼼机：微量⾼速离⼼机（国产）
移液器：吉尔森P型移液器(Pipetman)产品
培养箱：隔⽔式恒温培养箱（国产）产品
其他所需耗材均为国产。

2⽅法
2.1实验过程
（1）标准品的稀释与加样：标准品按照说明书稀释好五个梯度，各个梯度每孔加样量都为50µL；
（2）加样：分别设空⽩孔、待测样品孔。

在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40µL，然后再加待测样品10µL。

加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀；
（3）温育：⽤封板膜封板后置37℃温育30min；
（4）配液洗涤：将30（48T的20倍）倍浓缩洗涤液⽤蒸馏⽔30（48T的20倍）倍稀释后备⽤；⼩⼼揭掉封板膜，弃去液体，甩⼲，每孔加满洗涤液，静置30sec 后弃去，如此重复5次，拍⼲；
（5）加酶：每孔加⼊酶标试剂50µL，空⽩孔除外；
（6）温育：⽤封板膜封板后置37℃温育30min；
（7）洗涤：⼩⼼揭掉封板膜，弃去液体，甩⼲，每孔加满洗涤液，静置30sec 后弃去，如此重复5次，拍⼲；
（8）显⾊：每孔先加⼊显⾊剂A50µL，再加⼊显⾊剂B50µL，轻轻震荡混匀，37℃避光显⾊15min；
（9）终⽌：每孔加终⽌液50µL，终⽌反应；
（10）测定：以空⽩空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。

测定应在加终⽌液后15min以内进⾏。

2.2计算
以标准物的浓度为纵坐标，OD值为横坐标，计算出标准曲线的多项式⼆次回归⽅程，将样品的OD值代⼊⽅程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。

实验结果举例（相关技术问题可咨询我们）
编号OD值浓度（ng/L）
空⽩0.0320
标1 1.986240标2 1.341160标30.72380
标40.41140
标50.19620 1—10.447238.501 1—20.598328.599 1—30.517280.141 1—40.506273.583 1—50.368191.771 1—60.349180.575 1—70.361187.644 1—80.411217.172 1—90.393206.529 1—
100.537292.078 2—10.515278.948 2—20.549299.249 2—30.549299.249 2—40.642355.045 2—60.561306.427 2—70.526285.510 2—80.489263.458 3—10.458245.029 3—20.536291.481 3—30.496267.625 3—40.504272.391 3—50.547298.054 3—60.519281.333 3—80.750420.328 4—10.518280.737 4—20.506273.583 4—30.534290.286 4—40.469251.564 4—50.479257.509 4—
60.567310.018 4—80.333171.158 5—10.469251.564 5—20.525284.913 5—30.498268.817 5—40.438233.163
5—50.581318.404
5—60.498268.817
5—70.437232.570
5—80.567310.018
5—90.455243.248
6—10.579317.205
6—20.523283.720
6—30.633349.629
6—50.569311.216
6—60.425225.459
6—70.498268.817
6—80.534290.286
7—10.381199.442
7—20.298150.600
7—30.437232.570
7—40.467250.375
7—50.455243.248
7—60.346178.808
7—70.524284.317
7—80.362188.234⼤⿏6酮前列腺素F1a:。