奥沙利铂杂质C及其它杂质测定的方法学研究

奥沙利铂杂质C及其它杂质测定的方法学研究
【摘要】目的对奥沙利铂制剂中杂质C及其它杂质的测定方法进行方法学验证。

方法用十八烷基键合硅胶为填充剂；以0.001mol/L磷酸溶液（用20%氢氧化钠溶液或稀磷酸调节pH值至3.0±0.05）-乙腈（99：1）为流动相；流速为1.2ml/min；检测波长为210nm；柱温40℃。

结果杂质C在0.0202～4.0360?g/ml 范围内有较好的线性，相关系数r =0.9999；平均回收率100.31%，RSD=0.69%；定量限为0.40ng。

结论该方法可用于奥沙利铂制剂中杂质C及其它杂质的测定。

【关键词】高效液相色谱法；奥沙利铂；杂质C及其它杂质
奥沙利铂是第3代铂类化合物，目前已成为结直肠癌化疗的一线药物[1]。

奥沙利铂及其制剂存储过程中，可降解产生草酸（杂质A）、二水合奥沙利铂（杂质B）及二羟合奥沙利铂（杂质C）[2-3]，结构见图1。

本文参照进口药品注册标准JX20090239[4]杂质C检测方法，对国内外奥沙利铂制剂进行考察。

1、仪器与试药
1.1仪器
HITACHI系列高效液相色谱仪
1.2试药
国内样品：厂家A（批号：101118）；国外样品：Laboratoires Thissen，Beigium （批号：09104）；奥沙利铂对照品：中国药品生物制品检定所（批号：100584-200902）；二氯二氨环己烷铂对照品：中国药品生物制品检定所（批号：101103-201001）；二羟合奥沙利铂对照品：中国药品生物制品检定所（批号：101101-201001）。

2、方法与结果
2.1色谱条件与系统适用性试验
色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相：以0.001mol/L磷酸溶液（用20%氢氧化钠溶液或稀磷酸调节pH值至3.0±0.05）-乙腈（99：1）；进样量：20?l；柱温：40℃；检测波长：210nm。

精密称取奥沙利铂和二氯二氨环己烷铂对照品各适量，置同一量瓶中，加水适量超声使溶解，并稀释制成每1ml 中各约含0.1mg的溶液，取20?l注入液相色谱仪，记录色谱图，结果见图2。

系统适用性试验符合规定，二氯二氨环己烷铂峰与奥沙利铂峰之间的分离度为2.4。

2.2空白辅料干扰试验
取空白辅料适量，用水配制成每1ml中约含20mg的溶液，精密量取20μl 注入液相色谱仪，记录色谱图，空白辅料对本品的此项检查无干扰。

2.3定量限
称取二羟合奥沙利铂对照品适量，用水分别逐级稀释，精密量取20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，按10：1信噪比计算，二羟合奥沙利铂的定量限为0.40ng。

2.4进样精密度
精密称取奥沙利铂和二羟合奥沙利铂对照品适量，置同一量瓶中，用水溶解幷稀释制成每1ml中各约含2μg的溶液，取该溶液连续进样6次，记录峰面积，计算进样精密度，RSD=0.21%。

2.5溶液放置稳定性
取本品4瓶，用水将内容物溶解并全量转移至一适宜的量瓶中，用水稀释制成每1ml中约含奥沙利铂2mg的溶液，置室温下放置，分别于0h、0.5h、1h、2h、3h、4h、6h、8h进样，测定二羟合奥沙利铂及其它杂质峰面积，计算杂质变化的情况，结果见表1。

由表1可见，在水溶液状态下其它杂质的含量会随着时间的推移而增长，应配制后立即进样。

2.6线性关系
精密称取二羟合奥沙利铂对照品适量，置同一量瓶中，加水溶解并稀释制成每1ml中约含二羟合奥沙利铂0.1mg的溶液，作为储备液。

分别精密量取储备液适量，并加水适当稀释制成不同浓度的线性溶液。

照二羟合奥沙利铂及其它杂质检查项下的方法操作，以浓度（c）为横坐标，峰面积（A）为纵坐标，绘制标准曲线，并计算回归方程，结果见表2和图3。

由表2和图3可见，二羟合奥沙利铂浓度在0.0202～4.0360?g/ml范围内，有较好的线性，相关系数r = 0.9999。

2.7回收率试验
精密称取本品适量，置容量瓶中，分别以标示量的0.001%、0.05%、0.075%的量加入二羟合奥沙利铂对照品，加水溶解并稀释至刻度，摇匀。

各配制3份，测定二羟合奥沙利铂的含量，结果见表3。

2.8破坏性试验
取本品及空白辅料适量，对其进行酸、碱、氧化、光照、高温破坏试验，以考察方法的专属性。

按外标法以峰面积计算主峰含量，杂质按面积归一化法计算含量，并计算物料平衡情况。

结果见表4。

由表4可见，酸破坏主要在相对保留时间为0.43、0.45、0.88处有降解产物产生，主要降解产物之一为二羟合奥沙利铂；碱破坏主要在相对保留时间为0.43、0.88处有降解产物产生；氧化破坏主要在相对保留时间为0.43处有降解产物产生，降解产物为二羟合奥沙利铂；热破坏和光破坏基本未被破坏。

在上述分析条件下，降解产物与主峰分离良好，各破坏条件下辅料对制剂有关物质检查均不产生干扰。

2.9重复性试验
取本品4瓶，分别用水将内容物溶解并转移至适宜的容量瓶中，并稀释制成每1ml中约含奥沙利铂2mg的溶液，摇匀，同法配制6份，照二羟合奥沙利铂及其它杂质检查项下的方法，测定每份样品二羟合奥沙利铂及其它杂质的含量，计算精密度，结果见表5。

2.10中间精密度试验
取本品，在不同的时间，由不同的实验者，在不同的仪器上，照二羟合奥沙利铂及其他杂质检查项下的方法操作，得中间精密度，测定结果见表6。

2.11耐用性试验
取本品，分别改变缓冲液的pH值（3.0±0.2）、流速（1.2±0.2ml/min）、柱温（40±5℃）、流动相配比，考察系统适用性及二羟合奥沙利铂含量的变化程度，测定结果见表7。

由表7可见，此色谱系统的耐用性良好。

2.12样品测定
取本品4瓶，用水将内容物溶解并全量转移至一适宜的量瓶中，用水稀释制成每1ml中约含奥沙利铂2mg的溶液，摇匀，作为供试品溶液；另精密称取奥沙利铂和二羟合奥沙利铂对照品适量，置同一量瓶中，用水溶解并稀释制成每1ml中各约含2μg的溶液，作为对照品溶液。

精密称取乳糖一水物适量，用水溶解并制成每1ml中约含20mg的溶液，作为空白溶液。

精密量取对照品溶液20μL，注入液相色谱仪调整检测灵敏度，使对照品溶液中两个主峰的峰高约为记录仪满量程的20%。

再精密量取空白溶液、对照品溶液和供试品溶液（临用新配）各20μL注入液相色谱仪，记录色谱图至奥沙利铂峰保留时间的两倍。

供试品溶液的色谱图中，二羟合奥沙利铂的含量按外标法以峰面积计算；扣除空白溶液中的色谱峰不计，其他杂质峰的含量按奥沙利铂对照品的峰面积计算。

测定结果见表8。

由表8可见，本品有关物质检查，含二羟合奥沙利铂量均小于0.05%。

同时检测市售样品，结果显示国内外样品的此项检测结果基本一致。

3、结论
此检测方法简便、准确，能够对各杂质进行研究以确保奥沙利铂及其制剂存储过程中的质量安全。