GST琼脂糖凝胶FF

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北京卓冠科技有限公司 北京市西城区德外大街 2 号 512 室
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FAX：62360884
品目录
货号
产品名称
CS-A03-00 GST 琼脂糖凝胶 FF
CS-A03-01 CS-A03-02 CS-A03-03 CS-A03-04
GST 琼脂糖凝胶 FF GST 琼脂糖凝胶 FF GST 琼脂糖凝胶 FF GST 琼脂糖凝胶 FF
联系人：韦新桂
E-mail: weixingui@
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１、除去因离子交换作用吸附的蛋白，用 2-3 倍柱床体积 2M 的 NaCl 溶液淋洗柱子， 再反向淋洗。 ２、除去蛋白沉淀、疏水性蛋白，用 1M 的 NaOH 以 100cm/h 的速度淋洗柱子 1-2h， 再 反向淋洗。 ３、所有操作中，都要用至少 3 倍柱床体积的初始缓冲液洗柱子。 ４、除去强的疏水性蛋白和脂质等，用 4 倍柱床体积的 70%的乙醇或者 30%的异丙醇洗 柱子，再反向淋洗。 八、保存 在 20%乙醇，4℃下长期保存。
包装 1ml (预装 柱) 25ml
100ml
500ml
大包装
载量 mg/ml
≤10mg/ml
≤10mg/ml ≤10mg/ml ≤10mg/ml ≤10mg/ml
特性 及应用
平均粒 径(μm)
GST 及 GST 融 合蛋白
90
GST 及 GST 融 合蛋白
90
GST 及 GST 融 合蛋白
90
GST 及 GST 融 合蛋白
使用温度
常温
保存温度
+4~8℃
保存液体
20%乙醇
化学稳定性
70%乙醇，6 M 盐酸胍
三、 适用范围 分离谷胱甘肽 S-转移酶（GST）融合蛋白、其它的谷胱甘肽转移酶以及与谷胱甘肽有亲
和作用的蛋白。
四、 应用实例 实验名称：GST 琼脂糖凝胶分离 GST 融合蛋白
实验步骤：
1、 GST 琼脂糖凝胶 FF 装柱，0.7×2.5cm，柱床体积为 1ml；
GST 琼脂糖凝胶 FF
一、 简介 GST 琼脂糖凝胶是专门设计用于纯化谷胱甘肽 S-转移酶（GST）融合蛋白、其它的谷胱甘 肽转移酶以及与谷胱甘肽有亲和作用的蛋白的亲和色谱填料，一步分离就可得到很纯的目标 蛋白，纯化条件温和，可以保证蛋白的活性。
本产品是本公司自主设计合成的 GST 琼脂糖凝胶，很好的物理和化学稳定性，使用寿
命长，使用方便。良好的批次重复性，易于放大，所以无论是研发还是生产都是理想的选择。
二、 亲和填料特性：
特点
基团密度高，载量大
基质
6%的交联琼脂糖凝胶
吸附载量
5-10mgGST 融合蛋白/ml
亲和填料的颗粒大小 45-165μm
最大流速
300cm/h
pH 范围
3-10，在位清洗时 pH 范围可到 2-11
60
volume(ml)
图 1 GST 琼脂糖凝胶 FF 分离 GST 融合蛋白
图 2 纯化后 SDS- PAGE
五、 应用的注意事项：
1、GST 融合蛋白与还原型谷胱甘肽的结合比较缓慢，为了获得最大的结合量，很重要
的一点就是保证足够作用时间，而流速是影响 GST 融合蛋白与色谱填料结合的关键因
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6、 用纯水洗 5 个柱床体积，再用 20%的乙醇洗 5 个柱床体积，流速为 1ml/min，柱子
置于+4~8℃环境中保存
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缓冲液组成： 缓冲液 1：20 mM磷酸盐缓冲液，pH7.4，即pH7.4 的PBS溶液。配制：0.2 M NaH2PO4 19ml，
本产品有严格的生产质量控制标准，我们力求为您提供最满意的产品、技术支持和服务。
除了为您提供各种包装规格的 GST 琼脂糖凝胶 FF 亲和填料外，我们还提供其它产品 和服务，包括：
1、为您提供各种包装规格的填料和柱子 2、针对各种生物大分子的分离纯化生产制备工艺，为您解决分离纯化过程中的难题 3、为您订制特殊要求的亲和色谱填料 4、本公司正开发系列硅胶产品和球型羟基磷灰石填料，相信会给您更多的选择。
2、 用缓冲液 1 平衡 5 个床体积，流速为 1ml/min；
3、 将 10ml 发酵液用缓冲液 1 稀释到 20ml，0.45μm 滤膜过滤，上样。流速为 1ml/min；
4、 用缓冲液 1 再洗 10 个床体积，流速为 1ml/min；
5、 用缓冲液 2 洗脱，流速为 1ml/min，收集洗脱峰
90
GST 及 GST 融 合蛋白
90
耐压 (MPa)
0.3
0.3 0.3 0.3 0.3
最大流速 (cm/h)
300
300 300 300 300
北京卓冠科技有限公司 色谱填料事业部
市 场 部：010-62364123 技术支持：010-67804548 13911415318 公司传真： 010-62360884 公司网站：
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素之一，所以必须在上样时维持较低的流速。 2、对不同的 GST 融合蛋白，洗脱体积和洗脱时间会有所不同，可能会需要更高浓度的 还原型谷胱甘肽。如果需要的话，需要对流穿液、洗脱液进行 SDS-PAGE 以及 Western 杂交分析。 3、GST 融合蛋白的浓度也可以通过标准色谱法来确定。如果用 Lowry 或者 BCA 分析， 样品需要先利用 HiTrap 脱盐柱进行缓冲液交换处理或者是透析处理。以除去其中的还原 型谷胱甘肽，因为还原型谷胱甘肽的存在会干扰测定。 5、GST 琼脂糖凝胶能否重复利用要根据样品来定，而且只能用来处理同一种样品，以 防止交叉污染。
0.2 M Na2HPO4 81ml加水至 1000ml。 缓冲液 2：50mM Tris-盐酸缓冲液，pH8.0，配制：0.1M Tris 50ml，0.1 M 盐酸 29.2ml，
3070mg 还原型谷胱甘肽，加水至 1000ml。
A280(mAu)
200
150
100
50
0
0
10
20
30
40
50
六、 GST 融合蛋白的裂解
GST 融合蛋白用凝血酶、肠激酶和 Xa 因子裂解，再用离子交换色谱把 GST 和目标蛋白 分离。一般凝血酶用量为 10U/mg，裂解条件是 22-25℃，2-16 小时。此外还可以亲和色 谱把 GST 和凝血酶去除，而得到纯的目标蛋白。 七、 再生、清洗、保存 1）在位清洗