长链非编码RNA FAM83A-AS1在肺腺癌组织中的表达水平及与临床病理参数和预后的关系

论著
(临束研究）
长链非编码RNA FAM83A-AS1在肺腺癌组织中的
表达水平及与临床病理参数和预后的关系
王高明，刘广军，袭向南，蔡伟，陈伟钢，陈强，杨传平，申翼
[摘要]目的检测长链非编码RNA(lncRNA)序列相似家族83成员A -反义核糖核酸1(FAM83A-AS1)在肺腺癌（LU-AD)中的表达水平，探讨IncRNA FAM83A-AS1和LUAD患者临床病理学特征及预后的关系。

方法分析2015年1月至12 月间80例行外科手术治疗的LUAD患者相关临床资料。

采用Real-time PCR方法检测80例LUAD组织，并与癌旁正常肺组 织中IncRNA FAM83A-AS1的表达水平进行对照分析。

采用卡方检验LUAD患者IncRNA FAM83A-AS1水平与临床病理特征 的关系;Kaplan-Meiei•法分析总生存期（OS);C ox回归模型分析影响LUAD预后的危险因素。

结果与肺正常组织相比，LUAD组织中IncRNA FAM83A-AS1表达明显上调（P< 0.05) D IncRNA FAM83A-AS1水平升高与肿瘤大小、淋巴结转移和临床 TNM分期有关（P<0.05)。

IncRNA FAM83A-AS1高表达的LUAD患者总生存期短（P < 0.05)。

COX生存分析显示，IncRNA FAM83A-AS1基因表达为肺癌预后的危险因素，高表达提示LUAD患者临床预后不良。

结论IncRNA FAM83A-AS1在LU-AD组织中表达显著升高，且与患者肿瘤大小、淋巴结转移、TNM分期和预后密切相关。

[关键词]肺腺癌;长链非编码RNA FAM83A-AS1;临床病理特征;预后
[中图分类号]R734.2 [文献标志码]A[文章编号]1008-8199(2021)01-0058-04
[D O I]10.16571/ki. 1008-8199.2021.01.011
The expression level of long non-coding RNA FAM83A-AS1 in lung adenocarcinoma and its relationship with clinicopathological parameters and prognosis
WANG Gao-ming1, LIU Guang-jun1, GONG Xiang-nan1, CAI Wei1, CHEN Wei-gang1, CHEN Qiang1, YANG Chuan-ping1 ,SHEN Yi2
(\.D epartm ent o f Thoracic S u rg e ry,X u zh o u C entral H o sp ita l,X u zh o u 221009, J ia n g s u,C hina；2.D epartm ent o f C ardiothoracic S u rg e ry,J in lin g H o sp ita l,M edical School o f N a n jin g U niversity/ General H ospital o f E astern Theater C o m m a n d,PLA,N a n jin g210002, J ia n g s u,C h in a)
[Abstract ] Objective This paper aims to detect the expression level of long non-coding R N A FAM83A-AS1 in lung adeno­carcinoma ,and t o explore i t s relationship with clinicopathological parameters and prognosis. Methods The clinical data of 80 L U A D patients undergoing surgical treatment between January and December 2015 were analyzed. Realtime P C R was used to detect the ex­pression levels of IncRNA F A M83A-AS1 in 80 L U A D tissues and compare them with those in normal lung tissues adjacent t o the canc­e r. Chi-square te s t was used t o verify the relationship between IncRNA FAM83A-AS1 level and clinicopathological features in L U A D patients. Overall survival (OS) was analyzed by Kaplan-Meier method； Cox regression model was applied to analyze the risk factors af­fecting the prognosis of LUAD. Results W e found that IncRNA FAM83A-AS1 was distinctly upregulated in L U A D tissues compared with the normal tissues (P<0.05). Higher level of IncRNA FAM83A-AS1 was associated with tumor size, lymph nodes metastasis and
基金项目：徐州市科技项目（KC18037);徐州市临床技术骨 干研修计划项目（2〇l9G G〇2l)
作者单位:221009徐州，徐州市中心医院胸外科[王高明
(医学博士）、刘广军、龚向南、蔡伟、陈伟钢、
陈强、杨传平];210002南京，南京医科大学
金陵医院（东部战区总医院）心胸外科
(申翼）
通信作者：申翼，E-mail :yishen2019@ T N M stage (P< 0. 05 ).Clinical investigation revealed that L U A D patients with high IncRNA FAM83A-AS1 level showed a significantly shorter O S(P<0.05). C O X regression survival analysis showed that IncRNA Fam83A-ASl gene expression was a risk factor for the prog­nosis of lung cancer, and i t s high expression indicated poor clinical prognosis in L U A D patients. Conclusion The present study sug­gested that the expression of IncRNA F AM83A-AS1 in L U A D signifi­cantly increased, which i s closely related t o tumor size, lymph node metastasis, T N M stage and prognosis.
[Key words ]lung adenocarcinoma； IncRNA FAM83A-AS1 ；
clinicopathologic feature ； prognosis
正常绀织肿瘤组织图 1 qRT- PCR 检测 IncRNA FAM83A-AS1 在 LUAD 与 肺正常组织中表达的情况
Figure 1 Expressions oflncRNA FAM83A-AS1 in LUAD tissues and the non-tumor specimens by per­forming Real-time PCR
2.2 LUAD 中 IncRNA FAM 83A -AS 1 表达水平与患者临床病理特征的关系
L U A D 标本中IncRNA
FAM83A-AS1基因表达的中位数为4.46。

将80例LU- A D 患者分为低表达组（<4.46, n = 40)和IncRNA
物1 |xL，模板2 pL,加双蒸水至25 p L 。

首先95丈 下进行1〇 min;然后40个循环在92 t 下进行15 s ; 最后60尤下进行lmin。

引物序列如下：IncRNA FAM83A-AS1, 5' -CCCCAGAGCACTTCCTTAGC-3' (正向）和 5' -CAGGGCCGTCTGTGTTTACT-3'(反 向）；p-actin, 5’-CATGTACGTTGCTATCCAGGC-3' (正向）和 5' -C T C C T T A A T G T C A C G C A C G A T K 反 向）。

l n c R N A F A M 83A -A S l 基因的定量分析采用相 对定量法，利用监测得到的C t 值和计算得到的扩增 效率，以p-actin为参照，计算待测基因m R N A 相对 表达量。

1.3统计学分析应用SPSS 21.0软件进行统计分 析。

计量数据采用均数±标准差表示。

L U A D 和正常肺组织中IncRNA FAM83A-AS1表达的比较 采用独立样本【检验;IncRNA FAM83A-AS1表达与 L U A D 临床病理特征比较采用;^检验;总体生存曲 线采用Kaplan-Meier法计算；C o x 回归模型分析LU- A D 预后的相关危险因素。

以P 矣0.05为有统计学 意义。

2
结 果
2.1 IncRNA FAM 83A -AS 1 在 LUAD 、正常肺组织中的表达 80例L U A D 标本中IncRNA FAM83A-AS1
基因表达上调，明显高于正常肺组织中的表达水平,
差异有统计学意义（P<〇.〇5)，见图1。

提示IncRNA FAM83A-AS1在L U A D 发生中起着重要作用。

〇引 言
肺癌具有较高的发病率和病死率，己成为世界 范围内严重危害人类健康的恶性肿瘤[1]。

肺癌根 据不同的病理特征可分为非小细胞肺癌和小细胞肺
癌，而非小细胞肺癌所占比例约为85%，其中肺腺 癌（lung a d e n o ca rc in o m a , L U A D )所占比例己超过一■ 半，成为我国发病率最高的肺癌类型[1]。

虽然早期 筛查、临床诊断和治疗水平不断提升，但L U A D 发病 率仍然居高不下,患者长期存活率较低[2]。

长链非 编码 R N A (long non -co d in g R N A , In c R N A )是一•类长 度大于200个核苷酸的非编码R N A ,在细胞周期调 控、细胞分化调控及表观遗传调控等众多生命活动 中起着重要作用[3]。

研究表明，83序列相似成员A -反义核糖核酸1 (F A M 83A -A S 1)作为IncR N A —员， 在多种恶性肿瘤的发生、发展及侵袭转移进程中发 挥重要作用[4_5]。

但 IncR N A FA M 83A -A S1 在 LUAD 中的功能作用和临床意义尚不清楚。

本研究采用实 时 q R e al-tim e P C R 法检测 IncR N A FA M 83A -A S1 在
L U A D 组织及正常肺组织中的基因表达水平，进一
步探究IncR N A F A M 83A -A S 1的异常表达情况及其 临床意义。

1
资料与方法
1.1 _般资料回顾性分析2015年
1
月至12月
间徐州市中心医院进行外科手术治疗的80例
LU-
A D
患者临床资料。

纳人标准:①组织病理学证实
为L U A D ;②除L U A D 外无其他恶性肿瘤；③肿瘤完 全切除，切缘阴性,无远处转移;④术前未接受放疗 或化疗等。

参与研究患者均签署知情同意书，经徐
州中心医院医学伦理委员会批准（X Z X Y -U - 20200306-003)。

标本为原发性L U A D 组织及癌旁 组织，距肿瘤边缘至少5 c m ,经病理学检测无病变。

收集后迅速在-80
T
冰箱冻存待检。

收集患者年
龄、性别、肿瘤大小、肿瘤分化程度、淋巴结转移情况 及T N M 分期等临床病理资料。

肿瘤临床分期按照
A J C C /U IC C 第8
版
T N M
标准，具体临床资料见
表1。

1.2 IncRNA FAM 83A -AS 1基因表达水平检测取-80 t 保存标本约50 m g 匀浆机匀浆后，按照说 明书步骤TRIzol方法分别从肿瘤组织和正常组织 中提取总R N A 。

用Fermentas c D N A 第一链合成试 剂盒反转录合成cD N A 。

采用SYBRGreen荧光染料 法行实时定量P C R 反应。

反应体系25 p L ，包括2X Real-time P C R Master Mix(SYBR Green) 10 j j l L ，引
I ---_---_---1
—8
6
4
2
5
i
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p u
l
正常组织肿痈绀织图2 IncRNA FAM83A-AS1低表达组与高表达组LUAD
患者的生存曲线
Figure 2 Kaplan-Meier curves of overall survival for LU­
AD patients with high/low IncRNA FAM83A- AS1 expression
临床病理特征
IncRNA FAM83A-AS1 表达
低（rt = 40)高（ra = 40)
P 值年龄（岁）
<60
43
18250.1165
^60
3722
15性别男2811
170.1596
女
522923肿瘤分化程度高3218
140.3613
中+低482226肿瘤大小（cm)
<34125160.0441
彡3
391524淋巴结转移阴性4427170.0246
阳性361323TNM 分期
i /n 5231210.0191
m /i v
28
9
19
2.3 LUAD 中 IncRNA FAM 83A -AS 1 的表达水平与患者预后的关系 Kaplan-Meier分析结果显示,In­cRNA FAM83A-AS1 水平较高的患者总生存期较短 (P<0.05)，见图2。

C o x 回归分析结果显示，IncRNA FAM83A-AS1基因表达水平为肺癌预后的危险因素, 高表达提示L U A D 患者临床预后不佳，见表2。

FAM83A-AS1
高表达组（> 4.46，r a 二 40))。

IncRNA
F A M 83A -A S1的表达与肿瘤大小、淋巴结转移情况和临
床T N M 分期有关(P<0.05),但与年龄、性别及肿瘤分 化程度等因素无关（P>0.05)，见表1。

提示IncRN A
F A M 83A -A S1在L U A D 的临床进展起着重要作用。

表1 IncRNA FAM83A-AS1在LU A D 患者组织中表达与
临床病理特征的关系（n)
Table 1
Correlation betweenlncRNA FAM83A-AS1 ex­pression and clinicopathological features in LU­AD patients (n )
表2 LUAD 患者总体生存率的单因素和多因素分析
Table 2 Univariate and multivariate analyses of factors as­
sociated with overall survival in LUAD patients
临雜理特征单因素
多因素
H R 95%C I P 值H R 95%C I P 值年龄0.8460.498-1.4370.5361.3760.724 - 2.6140.330性别0.6750.394-1.1570.1530.4600.162-1.3110.146肿瘤分化程度0.7890.464-1.3420.3820.6310.251 ~ 1.5820.326肿瘤大小0.8920.528-1.5080.6710.6080.298〜1.2370.170淋巴结转移
1.8391.083 - 3.1230.024
2.6631.270-5.5850.010T N M 分期
2.480 1.455-4.2270.0012.4201.372-4.2690.002In c R N A F A M 83A -A S 1 表达
2.2061.290-
3.773
0.004
2.0641.117-
3.816
0.021
3讨 论
肺癌是世界范围内癌症相关死亡的常见原因, 每年180万人被诊断为肺癌，且每年可导致约160 万人死亡。

肺腺癌作为肺癌的主要病理类型，占肺 癌病例的40%以上，且发病率及病死率呈逐年上升 的趋势[6]。

虽然在外科手术、放化疗、靶向以及肿 瘤免疫等方面治疗水平显著提高，但L U A D 的早期 临床症状隐匿、肿瘤进展迅速、缺乏高效的筛查手 段，且容易复发和转移等特点，肺腺癌的整体治愈率 和生存率仍然很低，其5年生存率仍不足20%。

这 可能与早期诊断标志物的缺乏有关[1]。

因此, L U A D 的早期诊断和预后预测对于临床治疗非常 必要。

IncRNA是一类转录本长度大于200nt,不编码 蛋白的R N A 分子。

L n c R N A 大多位于细胞核或细 胞质中，多由R N A 聚合酶H 转录，L n c R N A 虽不能 够编码蛋白，但却因其具有独特的空间结构和对 D N A 、蛋白质的双向亲和力，在基因表达的过程中发 挥着重要的作用[7_9]。

L n c R N A 对人类基因表达的 调控有多种方式，其中70%的基因表达都受到In­cRNA 的调控，其调控方式的丰富性和多样性也决 定了 I n c R N A 在个体发育及疾病进展中的重要 性[1°—12]。

L n c R N A 可以从表观遗传学水平、转录水 平以及转录后水平对基因表达水平进行调控，调控 方式包括信号传导、蛋白诱饵、分子向导及支架等, 从而广泛参与细胞的增殖、凋亡、运动等生命活 动[1>15]。

近年来随着IncRNA在肿瘤领域的研究越 来越深入，相关IncRNA参与基因表达的调控，促进 或抑制肿瘤的发生[16_18]、发展。

因此，IncRNA有希 望成为新型的肿瘤标志物或肿瘤防治的重要靶点。

IncR N A FA M 83A -A S1 是 IncR N A 的一员，位于
8
号染色体长臂[9_1°]。

H e 和Y u [4]研究发现IncR N A
FA M 83A - a s l
通过与 N O P 58 结合，增强 FA M 83A
_
---1---1
---_-8 6 4 2
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(z .V N c l
m R N A的稳定性，进而促进肝癌的进展。

Shi等[5]报 道 IncRNA FAM83A- asl 上调 F A M38A 蛋白表达，诱导E R K磷酸化，从而促进肺癌细胞增殖和侵袭^ 同时通过细胞水平验证敲低IncRNA FAM83A-AS1 基因能够明显抑制肝癌、肺癌等细胞的增长并诱导 细胞周期阻滞。

以上研究表明IncRNA FAM83A- A S1在肿瘤领域的研究有重要价值，而其在L U A D 的作用及机制较少报道。

Xiao等[9]研究发现l n-cRNAFAM83A-ASl 通过调节miR-150-5p/MMP14 通路增强L U A D细胞增殖、迁移、侵袭、上皮间质转 化，在体内能够促进肿瘤生长。

得出结论认为FAM83A-ASl/miR-150-5p/MMP14 轴调控 L U A D 进 展。

Xiao等[9]从癌症基因组图谱（The Cancer Ge­nome Atlas, TCGA) 数据库中检索 I85 例转移性 LU- A D和217例非转移性L A U D样本的m R N A和In­cRNA 表达谱 ，发现 FAM83A- asl 的表达与转移性 L U A D患者的总生存时间显著相关。

虽然IncR N A F A M83A-A S1在L U A D中的生物 学功能及其机制尚在研究探索中。

但在临床研究 中，我们发现ln c R N A F A M83A-A S l在L U A D组织中 表达上调，且与肿瘤大小、淋巴结转移和T N M分期 密切相关，证实IncR N A F A M83A-A S1在L U A D的发 生、发展中起积极的调节作用。

此外，l n-CR N A F A M83A-A S1高表达与不良预后呈正相关，突 出了 IncR N A F A M83A-A S1在L U A D预后方面的重 要临床应用。

这些结果都提示了 IncR N A F A M83A-A S1可能 在L U A D的发生和发展过程中起到肿瘤启动子的作 用，是L U A D恶性程度的不良预示指标，并且是独立 的不良预后因素，并有可能成为该肿瘤新的预后生 物标志物。

鉴于IncR N A F A M83A-A S1在L U A D中的重要作用和高度研究价值，尚需大样本、多中心的 临床实验进一步证实我们的结论，而且IncR N A F A M83A-A S1在L U A D中作用的功能测定尚未进 行，需进一步的基础研究来阐述相关机制。

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(收稿日期：2020-04-17;修回日期:2020-07-15}
(责任编辑：闻浩；英文编辑:李麒）。