精制银翘解毒片中对乙酰氨基酚含量的测定

精制银翘解毒片中对乙酰氨基酚含量的测定作者：卢俊黄余国温彩莲
来源：《湖北农业科学》2012年第19期
摘要：建立了精制银翘解毒片中对乙酰氨基酚含量的HPLC检测方法。

采用Kromasil C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），以甲醇—水—冰乙酸（体积比为20∶80∶0.5）为流动相，流速为1 mL/min，检测波长为249 nm，进样量10 μL，外标法定量，结果显示，该法专属性好、简便、快速、准确、重现性好，适合于精制银翘解毒片的质量分析。

对乙酰氨基酚在
0.016 26～0.081 30 mg/mL的范围内峰面积与测定浓度呈良好的线性关系，R2=0.999 9
（n=5），平均回收率为96.2%，RSD为8.0%（n=9）。

关键词：HPLC；精制银翘解毒片；对乙酰氨基酚；测定
中图分类号：R969.1；TS255.36 文献标识码：A 文章编号：0439—8114（2012）19—4358—03
精制银翘解毒片收载于《卫生部药品标准》中药成方制剂第三册[1]，是由对乙酰氨基酚、桔梗、连翘、淡豆豉、甘草、淡竹叶、金银花、牛蒡子、荆芥穗、薄荷脑等组成的复方制剂，现行标准中对乙酰氨基酚的含量测定采用丙酮提取后蒸干，再用无水乙醇溶解，用紫外分光光度计测定，此方法由于操作繁琐、时间长、所用试剂挥发性较大，造成测定误差较大。

为了保证测定结果的准确性，根据现行药品质量标准和大量试验的基础上，对精制银翘解毒片中对乙酰氨基酚含量的测定方法进行了改进。

1 材料与方法
1.1 仪器
高效液相色谱仪（威玛龙LC9000）。

1.2 材料
对乙酰氨基酚（中国药品生物制品检定所，批号为100018—200408，供含量测定用）；精制银翘解毒片（广西大力神制药股份有限公司提供，批号为100601）；甲醇（色谱纯，天津四友）；水为重蒸馏水；冰乙酸（分析纯）。

1.3 试验方法
1.3.1 色谱条件色谱柱选用杭州环球色谱科技有限公司的C18（AP）色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相为甲醇—水—冰乙酸（体积比为20∶80∶0.5）；流速为1 mL/min；检
测波长为249 nm[2]；进样量为10 μL。

在该色谱条件下，对乙酰氨基酚峰形良好，前、后均无杂峰影响。

考虑到样品溶剂对色谱的干扰，根据《中国药典》附录中样品溶剂宜尽量采用流动相作溶剂的要求[1，3]，采用本方法的流动相作为溶剂，而且经试验证明该溶剂在该色谱条件下无干扰。

1.3.2 专属性试验（空白试验）按处方制成不含对乙酰氨基酚的样品，按上述方法进行测定，结果表明在对乙酰氨基酚出峰处无吸收峰出现。

2 结果与分析
2.1 线性关系与范围考察
称取对乙酰氨基酚对照品8.13 mg，置100 mL容量瓶中加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，得到浓度为0.081 3 mg/mL的对照品溶液。

精密量取5.0、10.0、12.5、20.0、25.0 mL上述溶液分别置于25 mL容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，分别进样10 μL，记录峰面积。

以对乙酰氨基酚的峰面积（y）对进样量（x）进行线性回归，得回归方程为：y=5×107x—15 956，R2=0.999 9（n=5）。

测定结果（表1）表明，在0.016 26～0.081 30 mg/mL的范围内峰面积与测定浓度呈良好的线性关系。

2.2 重复性试验结果
取同一批号样品（批号：100 601）6份，按含量测定项下方法制备供试品溶液，在上述色谱条件下，测定对乙酰氨基酚的含量，结果显示方法重复性良好，结果见表2。

2.3 精密度试验结果
取对照品溶液（浓度为0.040 65 mg/mL）10 μL，连续进样6次，测定对乙酰氨基酚的峰面积，结果显示方法精密度良好，结果见表3。

2.4 稳定性试验结果
取对照品溶液（0.040 65 mg/mL），于0、2、4、8、12 h分别进样，依法测定对乙酰氨基酚峰面积值，结果显示，溶液至少在12 h内是稳定的。

结果见表4。

2.5 加标回收试验结果
精密称取已知含量的同一批供试品（批号：100 601，含量为100.4%）3份，各精密加入一定量的对乙酰氨基酚对照品，研磨均匀后精密称取3份做平行试验，计算加样回收率。

测定结果（表5）较好。

3 小结与讨论
为了保证药品的质量，准确对对乙酰氨基酚的含量进行监控，本研究在参考有关报道和大量试验的基础上，对精制银翘解毒片中含量测定方法进行改进。

确定最佳条件为：采用Kromasil C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），以甲醇—水—冰乙酸（体积比为20∶80∶0.5）为流动相，流速为1 mL/min，检测波长为249 nm，进样量为10 μL，以外标法测定含量，对乙酰氨基酚在0.016 26～0.081 30 mg/mL的范围内峰面积与测定浓度呈良好的线性关系，
R2=0.999 9（n=5），平均回收率为96.2%，RSD为8.0%（n=9）。

试验结果显示该方法灵敏、专属性强、操作简便、结果准确，完全可应用于精制银翘解毒片中对乙酰氨基酚的质量分析。

流动相的选择上，有关文献报道不尽相同，如甲醇—水（体积比35∶65）、甲醇—水（体积比20∶80）等。

由于精制银翘解毒片与银翘片的处方组成基本一致，因此选择银翘片质量标准（国家药品标准WS3—B—4000—98—2003）中的流动相甲醇—水—冰乙酸（体积比为20∶80∶0.5）作为流动相，得到较好的结果。

对乙酰氨基酚的溶剂选择上，因对乙酰氨基酚易溶于热水、乙醇，分别采用乙醇、水、甲醇及流动相溶解，其中流动相和乙醇、甲醇的效果较好[4]。

用乙醇做溶剂时所得峰形较差，用甲醇作溶剂峰形有所改善，但各项条件均不能满足《中国药典》的要求；而用流动相作溶剂得到的色谱峰峰形好，各项条件均满足《中国药典》的要求，因此选流动相作为溶剂。

相关报道对乙酰氨基酚在200～400 nm处有最大吸收[5]，取对照品溶液进样在此波段进行扫描，结果发现在249 nm处有最大吸收，且此波长处其他辅料没有吸收[2]，同时参考维C 银翘片质量标准（《中国药典》2010年版一部，其处方组成除多了马来酸氯苯那敏和维生素C 外，其余与精制银翘解毒片一样），确定249 nm为检测波长且得到较好的检测结果[2，6]。

参考文献：
[1] WSB 2574—1997，中药成方制剂（第三册）[S].
[2] 谢笑英，黄文峰.中成药中对乙酰氨基酚含量测定的4种方法及比较[J].河北医学，2005（6）：563—565.
[3] 国家药典委员会.中华人民共和国药典（二部）[M].北京：化学工业出版社，2005.
[4] 唐骏，章晶. HPLC法测定精制银翘解毒片中对乙酰氨基酚的含量[J].湖北中药杂志，2008，30（3）：58—59.
[5] 赵希贤.高效液相色谱法测定精制银翘解毒片中对乙酰氨基酚的含量[J].首都医药，2005（22）：50—51.。