紫外分光光度法测定植物黄酮含量的方法 (2)

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光 度 法 具 有 重 复 性 好 、准 确 、简 便 、易 掌 握 、不 需 要 复 杂 的仪器设备， 加之所需试剂便宜易得， 因此该方法应用
以 淫 羊 藿 苷 对 照 品 ， 用 ＡｌＣｌ３－ 甲 醇 体 系 ， 于 ４１３ ｎｍ 测 定淫羊藿中总黄酮含量， 该方法明显优于直接法在
于测定植物中黄酮含量最为广泛［５］。近年来， 紫外分光 ２７０ ｎｍ 处［１０］测定的结果。
［２２］ Ｇｒｉｇｅｌｍｏ－ Ｍｉｇｕｅｌ Ｎ， Ｇｏｒｉｎｓｔｅｉｎ Ｓ， Ｍａｒｔｉｎ － Ｂｅｌｌｏｓｏ Ｏ．Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａ－
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题。而且， 实验表明采用差示分光光度法测定， 当叶绿 素含量较低时， 甚至可省略除叶绿素这一步骤， 因而使 测定方法更加简便。
ＲＳＤ 为 ０．６２ ％。该方法对单一成分的样品测定简便、
如 覃 洁 萍 ［１３］等 用 差 示 分 光 光 度 法 测 定 广 西 瑶 族
快速、准确； 但对植物提取液来说， 杂质的干扰大， 往往 出现正误差， 因此测定前对样品的预处理要求较严格，
１ 直接测定法
条件下， 测定了中草药中的总黄酮含量， 芦丁含量在
大多数黄酮类化合物分子中存在桂皮酰基和苯甲 １．５ μｇ／ｍＬ～２００ μｇ／ｍＬ 测定范围内， 呈现良好的线性关
酰基组成的交叉共轭体系， 其 ＭｅＯＨ 谱 ２００ ｎｍ～４００ ｎｍ 系 γ＝ ０． ９９９ ２； 且多糖、皂甙对实验均无干扰。
在黄酮的紫外吸收峰中， 峰带Ⅱ的吸收峰较强， 是
ＡｌＣｌ３ 络合后， 在特征吸收波长处吸光度值发生显著变 化， 所测得的络合前后的吸光度差值与样品中黄酮类
定量分析的重要依据。运用 ｌａｍｂｅｒｔ－ Ｂｅｅｒ 定律的数学 运算， 紫外分光光度法可测定出样品中黄酮类化合物
成分在一定浓度范围内呈线性关系， 而样品中共存的 其它组分（ 如叶绿素） 由于在此波长下不发生吸收性质
１６４ ２００７．Ｖｏｌ．２８．ＮＯ．０９
食品研究与开发
综述
紫外分光光度法测定植物黄酮含量的方法
严赞开 （ 韩山师范学院化学系， 广东 潮州 ５２１０４１）
摘 要 ： 综述了紫外分光光度法测定植物中黄酮含量的方法。重点介绍了单波长法、差示法、双波长法、三波长法、导 数法等紫外分光光度法测定黄酮类化合物含量的原理及分析特性。 关键词： 紫外分光光度法； 测定； 黄酮
一系列化合物及其衍生物［１］。这类物质 广泛分布于蔬 ＯＨ ＞ 二 氢 黄 酮 醇 ３－ ＯＨ。 其 中 从 邻 二 酚 ＯＨ 以 后 与
菜、水果和药用植物中， 其天然物以游离态或甙的形式 Ａｌ３＋形成的络合物不稳定， 加入少量酸水（ 如 ＨＣｌ） 可分
存在于植物体的各个部分， 一般呈黄色。近年来， 不断 解， 使相应光谱紫移， 而前三种络合物稳定， 不能被分
作者简介： 严赞开（ １９６３－ ） ， 男（ 汉） ， 本科， 教授， 研究方向： 有机化学及天然产物化学。
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藤茶中黄酮类成分的含量， 以双氢杨梅素为指标， 测 定波长为 ３１８ ｎｍ±１ ｎｍ， 对照品浓度在 ４．５７６ μｇ／ｍＬ～
ＤＥＴＥＲＭＩＮＡＴＩＯＮ ＯＦ ＦＬＡＶＯＮＯＩＤ ＣＯＭＰＯＵＮＤＳ ＩＮ ＰＬＡＮＴＳ ＢＹ ＴＨＥ ＭＥＴＨＯＤ ＯＦ ＵＬＴＲＡＶＩＯＬＥＴ ＳＰＥＣＴＲＯＰＹＯＴＯＭＥＴＲＹ ＹＡＮ Ｚａｎ－ ｋａｉ
（ Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ， Ｈａｎｓｈａｎ Ｔｅａｃｈｅｒ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ， Ｃｈａｏｚｈｏｕ ５２１０４１， Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ， Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒ ａｃｔ： Ａｎ ｏｖｅｒｖｉｅｗ ａｂｏｕｔ ｔｈｅ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ｏｆ ｆａｌｖｏｎｏｉｄｓ ｉｎ ｐｌａｎｔｓ ｂｙ ｔｈｅ ｍｅｔｈｏｄ ｏｆ ｕｌｔｒａｖｉｏｌｅｔ ｓｐｅｃｔｒｏｐｙｏｔｏｍｅｔｒｉｙ． Ｔｈｅ ｂａｓｉｃｓ ａｎｄ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ ｗｅｒｅ ｅｍｐｈａｔｉｃａｌｌｙ ｉｎｔｒｏｄｕｃｅｄ ｆｏｒ ｔｈｅ ａｎａｌｙｓｉｓ ｍｅｔｈｏｄｓ ｔｈａｔ ｗｅｒｅ ｓｉｇｎａｌ－ ｗａｖｅｌｅｎｇｔｈ ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｒｙ， ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｒｙ， ｄｕａｌ－ ｗａｖｅｌｅｎｇｔｈ ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｒｙ， ｔｈｒｅｅ－ ｗａｖｅｌｅｎｇｔｈ ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｒｙ， ａｎｄ ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅ ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｒｙ． Ｋｅｙ ｗｏｒ ｄｓ： ｕｌｔｒａｖｉｏｌｅｔ ｓｐｅｃｔｒｏｐｙｏｔｏｍｅｔｒｉｃ ｍｅｔｈｏｄ； ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ； ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ
的区域内存在两个主要的紫外吸收带： 峰带Ⅰ（ ３００ ｎｍ～
４００ ｎｍ） 和峰带Ⅱ（２２０ ｎｍ～２８０ ｎｍ）［６］。
３ 差示测定法
从植物中提取的黄酮样品中， 一般含有较多的叶
绿素， 用石油醚除去其叶绿素后， 加入 ＡｌＣｌ３ 溶液， 直接 在黄酮与 ＡｌＣｌ３ 络合物的最大吸收波长下 测定样品中 黄酮类成分的含量。这种方法在实验中发现石油醚虽
20等用三波长光谱法测定沙棘果汁中黄酮的含量有效地消除了随浓度不同产生的本底漂移及吸收峰不对称给定量分析造成的影响并校正了基于干扰组分的吸收光谱具有线性吸收产生的基线倾斜黄酮的浓度在0gml800gml范围内分别在波长为368nm处测吸光度时则a与浓度c之间呈良好的线性关系r09991回收率为9701010变异系数小于0058n21等还利用三波长分光光度法测定红茶及其饮料中黄酮的含量方法的准确度与精密度均令人满意而且操作简便易行
可除去大部分叶绿素， 但仍存在背景吸收， 直接测定往
苯甲酰基 Ｂｅｎｚｏｙｌ （ Ⅱ， ２２０ ｎｍ￣２８０ ｎｍ）
黄酮 Ｆｌａｖｏｎｅ
肉桂酰基 Ｃｉｎｎａｍｏｙｌ （Ⅰ， ３００ ｎｍ～４００ ｎｍ）
往会使测得值偏高。为了减少叶绿素及其它杂质的背 景吸收， 可采用差示分光光度法［１２］。
差示分光光度法是利用样品溶液中黄酮类成分与
收稿日期： ２００７－ ０１－ １２
综述
食品研究与开发
２００７．Ｖｏｌ．２８．ＮＯ．０９ １６５
黄酮类是指具有 α或 β－ 苯基苯稠吡喃酮的一大 生成的各种 Ａｌ３＋络合物的稳定性不同， 稳定性规律为：
类物质， 包括黄酮、异黄酮、黄酮醇、双黄酮和黄烷酮等 黄酮醇 ３－ ＯＨ ＞ 黄酮 ５－ ＯＨ ＞ 二氢黄酮 ５－ ＯＨ ＞ 邻二酚
光度法中除了单波长光谱外， 多波长光谱、导数光谱等
通常采用更多的是在碱性条件下测定， 测定时以
法应用日益广泛， 本文对这几种方法进行简要介绍。
芦 丁 为 标 准 样 品 ， 与 铝 离 子 络 合 后，在 ５１０ ｎｍ 波 长 处
测定其吸光值。如 于 村［１１］等 以 芦 丁 为 对 照 品 ， 在 碱 性
［１３］ 袁尔东， 郑建仙．不同品种膳食纤维降血脂功能的比较［Ｊ］．中国粮
［２５］ 杜亚 军．燕 麦 膳 食 纤 维 肉 脯 的 研 制［Ｊ］．肉 类 工 业 ， ２００３， ２７１（ １１） ：
油学报， ２００２， １７（３）： ３８－ ４１
１５－ １７
［１４］ Ｍａ Ｑ， Ｈｏｐｅｒ Ｍ， Ｈａｌｌｉｄａｙ Ｉ，ｅｔ ａｌ．Ｄｉｅｔ ａｎｄ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ
的含量。这种方法是依据黄酮自身结构的特点， 不使用 改 变， 因 而 对 测 定 无 影 响， 可 较 好 解 决 背 景 吸 收 的 问
显色剂， 直接在其特征吸收峰处对供试样进行测定。如 魏捷［７］采用直接测定法， 在 ２９２ ｎｍ 处， 有效地测定了蛇 葡 萄 中 二 氢 杨 梅 素 的 含 量 ， 其 中 回 收 率 为 ９９．１７ ％，
发现这类物质具有多方面的功能， 诸如医药功能、防腐 解， 故加入 ＨＣｌ 后仍表现为相应峰带红移， 可用于定量
保 鲜 功 能 、抗 氧 化 功 能 等［２］。
法测定黄酮含量［８］。
目前植物中黄酮含量的测定主要有紫外分光光度
在酸性条件下， 测定时可以芦丁为标准样品， 与铝
法 、ＨＰＬＣ 法［３］、毛 细 管 电 泳 法［４］等 方 法 ， 由 于 紫 外 分 光 离子络合后， 在 ４１３ ｎｍ 处测定黄酮含量。如赵大洲［９］等
［１２］ ＡＡＣＣ．Ｔｈｅ Ｄｅｆｉｎｉｔｉｏｎ ｏｆ Ｄｉｅｔａｒｙ Ｆｉｂｅｒ［Ｊ］．ＣＥＲＥＡＬ ＦＯＯＤＳ ＷＯＲＬＤ，
２００３， ２０（４）： ２５６－ ２６０
２００１， ４６（３）： １１２－ １２６
［２４］ 杨云香．高纤维肉脯的研制［Ｊ］．山西食品工业， ２００４（ １） ： ２３－ ２５．