HCVRNA核酸扩增及产物分析标准操作程序

HCV-RNA核酸扩增及产物分析标准操作程序
一、目的：
规范实验室操作，正确使用ABI-5700荧光定量PCR仪进行HCV-RNA扩增分析，以保证实验结果的准确性。

二、适用范围：
丙型肝炎病毒(HCV)核酸扩增(PCR)荧光检测试剂盒、ABI-5700荧光定量PCR仪。

三、职责：
由临床基因扩增检验实验室专业技术人员制定程序文件，实验室负责人审核，科室主任批准实施。

四、程序：
1、PCR扩增
1）打开稳压器电源，再打开计算机电源。

2）打开扩增仪电源，按仪器操作规程进入扩增循环条件设定。

3）将循环条件设定为
4）检查反应管是否盖紧，以免荧光物质泄漏污染仪器。

5）将待反应的PCR反应管放入扩增仪中，并根据实际情况和仪器操作规程在程序中设定好反应孔位置。

6）关闭扩增仪盖，按仪器操作规程开始循环。

7）扩增结束后先保存结果，再关闭扩增仪电源，取出PCR 反应管，密封放入垃圾桶。

2、产物分析
1）基线的确定：取3～8个循环的荧光信号。

2）阈值的设定：原则以基线刚好超过正常阴性对照扩增曲线的最高点。

3）对照标准：阳性对照参控品的Ct值应小于28，标准曲线的拟和度应大于等于0.990，否则视为定量结果无效；
阴性、空白对照的扩增曲线应平坦，Ct值等于30或0，否则结果无效。

4）结果判断：检测样本中核酸阳性时，按实际结果报告；
对可疑结果应复查，需要时与临床联系。

5）填写检验记录，关闭计算机。

此标准操作变更程序：如果本操作程序使用者在实际工作中发现其存在问题，则应向科室负责人提出，科室负责人则召集所有与本程序有关的人员讨论，以决定是否需要变更本程序。