适用于蛋白质分离的HPLC型SEC色谱柱

用于HPLC 分离的
XBridge Protein BEH SEC ■■■
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用于SEC HPLC 分离10-1,500 kDa 范围内的蛋白质，具有更高的通量卓越的SEC 色谱柱寿命
与硅胶基质SEC 色谱柱相比，显著减少不希望发生的蛋白与色谱柱之间的相互作用
全面的测试可保证无可比拟的柱间一致性，并提高了已验证方法的可靠性互补ACQUITY UPLC ® SEC 色谱柱系列，可根据不同的应用需求实现方法的无缝转换
[ 产品解决方案 ]
沃特世XBridge ® Protein BEH SEC 200Å和450Å, 3.5 µm 补现有的用于蛋白分离的小粒径UPLC HPLC SEC 色谱柱基于相同的沃特世亚乙基桥杂化颗粒(合技术，与传统100%硅胶基质SEC 产品相比性能更佳。

因此，色谱工作者现在能够根据实验室仪器、所需蛋白组分分离度和样品通量的要求，轻松地开发和/或转换SEC 方法。

适用于蛋白质分离的HPLC 型SEC 色谱柱
图1. XBridge Protein BEH SEC 200Å(绿色)和450Å(蓝色)，3.5 µm 粒径SEC 色谱柱上所得的各种蛋白质、多肽和尿嘧啶的校准曲线。

图2. XBridge Protein BEH SEC 450Å(上图)和200Å(下图)，3.5 µm 粒径SEC
色谱柱上各种蛋白质、多肽和尿嘧啶的曲线分离结果的比较。

图3. 沃特世BEH200 SEC 蛋白质标准品混合物(部件号：186006518)在(A )其它品牌的250Å, 5 µm SEC 硅胶基质色谱柱，流速为1.0 mL/min 和(B )XBridge Protein BEH SEC 200Å, 3.5 µm 色谱柱，流速为2.0 mL/min ，100 mM 磷酸钠缓冲液，流动相pH 6.8条件下分离结果的比较。

两根色谱柱规格均为7.8 mm x 300 mm ，且载样量相同。

已对主色谱图的时间轴进行了归一化处理。

色谱图A 和B 的谱峰识别结果为：1)甲状腺球蛋白(669 kDa ), 2) IgG(150 kDa ), 3)BSA (67 kDa ), 4)肌红蛋白(14 kDa )以及尿嘧啶(112 Da )。

XBridge Protein BEH SEC 200Å和450Å, 3.5 µm 色谱柱上的蛋白质和多肽标准品的分离
采用XBridge Protein BEH SEC 3.5 µm 色谱柱可获得更高的样品通量
XBridge Protein BEH SEC 200Å和450Å, 3.5 µm 色谱柱上的蛋白质和多肽校准曲线
蛋白类生物治疗药物的发现、研发和质量评估时常用到可靠、高分离度的SEC 方法。

沃特世XBridge Protein BEH SEC 200Å和450Å, 3.5 µm 色谱柱可分离大小在10 – 1,500 kDa 范围内的蛋白质。

与使用大于5 ìm 颗粒的传统硅胶基质SEC 色谱柱相比，XBridge Protein BEH SEC 3.5 µm 二醇基键合色谱柱能承受较高的流速和压力条件，可提高HPLC 系统的样品通量。

注：与200Å, 3.5 µm BEH 色谱柱的结果相比，较大孔径的250Å, 5 µm 硅胶基质颗粒对甲状腺球蛋白二聚体峰(1.3 MDa )具有较高的分离度，其它分子量标准谱图相当。

沃特世推荐使用XBridge Protein BEH SEC 450Å, 3.5 µm 柱分析如甲状腺球蛋白及其二聚体，这种分子量超出XBridge Protein BEH SEC 200Å, 3.5 µm 色谱柱推荐分子量分析范围的蛋白。

采用BEH 颗粒技术可大大延长SEC 色谱柱寿命，减少不希望发生的相互作用
图4. 在沃特世XBridge Protein BEH SEC 450Å, 3.5 µm, 7.8 x 300 mm 色谱柱上采用沃特世BEH450 SEC 蛋白质标准品(部件号186006842)和Intact mAb Mass 检测标准品(部件号186006552，稀释至1 mg/ mL )对色谱柱寿命进行研究。

在mAb 标准品(C 和D )的色谱图中，IgG 单体和二聚体的分子量分别约为150 kDa 和300 kDa 。

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11.012.013.014.015.016.017.018.019.020.0 min
A U
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0.020.040.06
0.0810.0
15.020.025.030.035.040.045.050.0 min
竞争者的二醇基涂层硅胶基质SEC 4 µm ，4.6 × 300 mm 色谱柱
溶质：1) 100 mM 缓冲液 2) 25 mM 缓冲液 3) 10 mM 缓冲液中的溶菌酶
XBridge Protein BEH SEC 200Å 3.5 µm, 7.8 x 300 mm 色谱柱
检测条件：ACQUITY TUV (280 nm)
流速：0.86 mL/min, 10、25和100 mM NaPO 4缓冲液pH ：6.8
图5. 多数硅胶基质二醇基键合颗粒的SEC 色谱柱，由于颗粒表面负电荷与碱性蛋白质之间的二次离子相互作用，会产生保留时间延长和过度峰拖尾现象。

通常情况下，上述问题需要使用高浓度盐的SEC 洗脱液，以较少这类离子相互作用。

XBridge Protein BEH SEC 200Å和450Å色谱柱独特的BEH-二醇基颗粒表面可显著减少该次级作用，从而降低对流动相盐浓度的依赖性。

SEC 洗脱离子强度对在100%硅胶与BEH SEC 颗粒上分析碱性蛋白质溶菌酶的影响
沃特世XBridge Protein BEH SEC 200 Å, 3.5 µm 色谱柱进样600余针后的性能测试
BEH Technology™专为多种生物分子的色谱分析而开发，具有传统100%硅胶基质颗粒(Anal Chem. 75 6781–6788 2003)所不具备的稳定性和性能优势。

BEH 颗粒与创新的二醇基键合技术相结合，造就了前所未有的色谱柱稳定性、性能和寿命。

此外，与传统硅胶基质SEC 色谱柱相比，沃特世Bridge Protein BEH SEC 色谱柱采用二醇基键合BEH 颗粒，残余带电硅醇基更少，从而减少了蛋白质和SEC 颗粒之间的离子交换次级作用。

检测条件：ACQUITY TUV (280 nm)
流速：0.3 mL/min, 10、25和100 mM NaPO 4缓冲液pH ：6.8
严格的生产质控可增加SEC 数据的可靠性
XBridge Protein BEH SEC 色谱柱的批间和柱间重现性
图6. 沃特世BEH200和BEH450 SEC 蛋白质标准品混合物在XBridge Protein BEH SEC 200Å和450Å, 3.5 µm , 7.8 mm x 300 mm 色谱柱上的分离结果显示了出色的制造与填料一致性。

两根色谱柱由3个不同生产批次的BEH-
二醇基键合颗粒填充而成，可评估和确认行业领先的柱间和批间重现性。

蛋白质标准品
所有沃特世HPLC 和UPLC BEH SEC 颗粒均在先进的、ISO 认证的生产基地中合成，整个合成过程中经过了全面的QC 检测。

此外，生产的每批XBridge Protein BEH SEC 200Å和450Å, 3.5 ìm 材料均经过相关蛋白质检测，确保了无可比拟的批间一致性，以获得对已验证方法的高度信心。

每支XBridge Protein BEH SEC 200Å和一瓶BEH SEC 蛋白质标准品配方，以确保SEC 工作者现在可以用它们对新型SEC 验证方法中可能出现的问题。

综述：
用于分析蛋白类
生物治疗药物及其
聚集体的体积排阻
色谱技术
这篇23页的Journal of Liquid Chromatography杂志文章完美展示了采用SEC分析蛋白质的历史回顾与近期发展。

文章探讨了
多种仪器注意事项和方法开发
策略，使读者能够成功应用这
种重要的生物分析技术。

文献编号：
720004595EN
体积排阻色谱
初学者指南
这本62页的书籍详
细介绍了基于体积
大小分离进行聚合
物表征的原理和操作。

本书简洁明了地为读者介绍了传统凝胶渗透色谱(GPC)，书中含有清晰的彩色示意图，有助于读者清晰了解SEC的基本概念(包括仪器和检测注意事项)。

文献编号：
715004398
Waters, The Science of What’s Possible, XBridge, Alliance, UPLC 和ACQUITY UPLC是沃特世公司的注册商标。

BEH Technology是沃特世公司的商标。

©2014 沃特世公司 印刷于中国 2014 年 10 月 720005205ZH AW-PDF
订购信息
XBridge Protein BEH SEC, 200Å 色谱柱，附带 BEH200 SEC 蛋白质标准品色谱柱 3.5 µm 7.8 x 150 mm 176003595 XBridge Protein BEH SEC, 200Å 色谱柱，附带 BEH200 SEC蛋白质标准品色谱柱 3.5 µm 7.8 x 300 mm 176003596 XBridge Protein BEH SEC, 450Å 色谱柱，附带 BEH450 SEC 蛋白质标准品保护柱 3.5 µm 7.8 x 30 mm 176003597 XBridge Protein BEH SEC, 450Å 色谱柱，附带 BEH450 SEC 蛋白质标准色谱柱 3.5 µm 7.8 x 150 mm 176003598 XBridge Protein BEH SEC, 450Å 色谱柱，附带 BEH450 SEC 蛋白质标准品色谱柱 3.5 µm 7.8 x 300 mm 176003599 XBridge Protein BEH SEC 色谱柱的直型连接管路和接头———WAT006519 XBridge Protein BEH SEC 色谱柱的U-型连接管路和接头———WAT084080 BEH 200Å 蛋白质标准品混合物———186006518 BEH 450Å SEC 蛋白质标准品混合物———186006842
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体积排阻色谱初学者指南715004398
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聚集体的体积排阻色谱技术。