IL-17A对人子宫内膜癌Ishikawa细胞迁移能力的影响
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[D]．北京：中国科学院大学（工程管理与信息技术 学院），2014. [2] 宫海鹏．无砟轨道施工精测技术及其运用[D]．成 都：西南交通大学，2009. [3] 张宏剑．高速铁路无砟轨道施工技术分析[J]．工程 建设与设计，2017，（6）.
（责任编辑：陈玉荣）
MMP-9的表达，为探讨IL-17A在子宫内膜癌转移 中的作用及其机制提供实验依据。
1.3.1 细胞培养 Ishikawa细胞细胞培养于60mm细胞培养皿中， 含10%胎牛血清、1% PS的RPIM-1640培养基，放 置于37°、5% CO2的培养箱中传代培养，每2～3天 传代一次。用0.25%胰蛋白酶消化传代，细胞呈单 层贴壁生长。 1.3.2 实验细胞分组与给药 将细胞分为对照组、IL-17A处理组。按1×105/ 孔将细胞接种于6孔板，培养24小时，待细胞达到 90%以上融合，无血清培养20小时，然后用20ng/ml IL-17A处理细胞。 1.3.3 细胞划痕实验检测Ishikawa细胞迁移能 力的变化 IL-17A处理细胞2h进行细胞划痕实验：用 10μl枪头比着直尺，垂直于培养板划痕，用PBS洗 涤细胞，以去除划下的细胞。洗涤3次之后加入无 血清RPIM-1640培养基，置于37℃、5%CO2的细胞 培养箱中培养，分别于0h、6h、12h、24h，显微镜 下观察拍照。使用Image J软件打开图片后，随机划 取6～8条水平线，计算细胞间距离的均值。每个时 间长度细胞整体迁移的距离=每个时间点的距离长
子宫内膜癌是女性生殖系统常发生的恶性肿瘤 之一，好发于围绝经期和绝经后女性。在我国，随 着社会发展和经济条件的改善，子宫内膜癌的发病 率亦逐年升高。白细胞介素17（IL-17或IL-17A） 是由TH17细胞分泌的前炎症因子，具有促炎及抗 炎双重作用。近年研究显示，IL-17作色，比如肠 癌、皮肤癌、乳腺癌、前列腺癌、肺癌和胰腺癌 等。子宫内膜癌的病因迄今尚不明确。本实验选择 高分化的人子宫内膜样腺癌Ishikawa细胞，给予外 源性IL-17A处理，通过细胞划痕实验检验IL-17A 对Ishikawa细胞迁移的影响，并检测迁移相关蛋白
和单元式结构道床板受到的弯矩相同。
4 结语 综上所述，在高速铁路工程施工过程中，无砟
轨道有着非常高的应用价值，同时也存在一些技术 难题，对施工要求比较高。所以，在进行施工时， 施工人员要做好精细化施工，重点做好关键环节的 监督和检查工作，避免出现疏漏，确保施工质量达 到要求。
参考文献 [1] 吴大勇．高速铁路无砟轨道施工的质量控制方法研究
摘要：目的：探讨IL-17A对人子宫内膜癌Ishikawa细胞迁移能力的影响，通过检测迁移侵袭相关蛋白 MMP-9的表达，初步探讨其作用机制。方法：体外培养Ishikawa细胞，将细胞分为对照组及IL-17A处理 组，细胞划痕实验检测2组细胞的迁移能力，采用Western blotting检测迁移相关蛋白MMP-7、MMP-9蛋白 表达。结果：IL-17在人子宫内膜癌Ishikawa细胞中有表达，给药组细胞的迁移能力比空白组明显增强。 结论：人子宫内膜癌Ishikawa细胞中有IL-17表达，外源性IL-17可促进细胞的迁移。 关键词：子宫内膜癌；IL-17A；MMP-7；MMP-9；细胞划痕实验 文献标识码：A 中图分类号：R711 文章编号：2096-4137（2018）06-014-03 DOI：10.13535/ki.10-1507/n.2018.06.05
1 材料与方法 1.1 细胞株
Ishikawa细胞株，为高分化子宫内膜样腺癌， ER、PR均为阳性，PTEN活性缺失，本实验室 保存。 1.2 主要试剂与仪器
RPMI-1640培养基、胎牛血清（美国，GIBCO 公司），胰蛋白酶（美国，SIGMA公司），青链 霉素双抗PS（美国，Hyclone公司）人重组IL-17A （美国，R&D公司），兔抗人MMP-7单克隆抗 体、兔抗人MMP-9单克隆抗体（美国，Epitomics 公司）。细胞培养箱（Thermo），Real-time PCR 仪、Bio-rad MINI转移电泳仪、化学发光成像系统 （美国，Bio-rad公司）。 1.3 实验方法
2018年第6期 （总第18期）
中国高新科技 China High-tech
NO.6 2018 ( Cumulativety NO.18 )
IL-17A对人子宫内膜癌Ishikawa细胞 迁移能力的影响
魏 敏1 姜 泽1 马思琪1 曲银娥2 魏静波2
（1.华北理工大学临床医学院；2.华北理工大学基础医学院，河北 唐山 063000）
（1） 式中，M为温度梯度产生的弯矩；σ 为最大翘 曲应力； E 为混凝土的弹性模量； ∆T 为上表面和下 表面的温度变化（℃）；h为道床板厚度； b 为计算 宽度； µ 为泊松比。 经分析发现，道床板受到的负弯矩为28.01kN·m/ m，正弯矩为14.32kN·m/m，纵向连续式结构道床板
·14·
度-0h距离，求出均数和标准差，时间为横轴，迁 移距离为纵轴（mm）作图，并比较初始0h与实验 结束时试验组与对照组的照片。
1.3.4 Western-blotting检测MMP-7、MMP-9 蛋白表达
分别于IL-17A处理细胞0h和24h，收集对照 组和处理组细胞，每孔加入150μl细胞裂解液， 充分裂解后提取总蛋白，nanodrop2000超微量紫 外分光光度计测定蛋白浓度，与样品处理液混合 后煮沸10min，加样，每样品孔30ug，10% SDSPAGE凝胶电泳，浓缩胶80V恒压电泳30min，分 离胶140～180V，溴酚兰达凝胶底部停止电泳； 半干转，恒压，20V、30min，将胶上的蛋白转移 至PVDF膜上。5%脱脂奶粉封闭2h；MMP-7、 MMP-9兔抗人单克隆抗体（1: 1000），4℃孵 育过夜；TBST对膜进行清洗（15min，10min， 10min），以洗掉非特异结合的一抗；HRP标记羊 抗兔二抗（1:4000）室温孵育1h；TBST对膜进行 清洗（5min×3）；采用ECL发光法显影，化学发 光底物A液与B液1:1混合，室温避光反应5min， Biorad化学发光成像系统扫描图像，目的蛋白/ GAPDH条带的灰度比值进行半定量分析。
与其他区域的轨道进行很好的过渡。 3.5 严格把控混凝土的浇筑过程
混凝土的浇筑包括以下步骤：（1）施工前的 准备。对轨枕的表面进行清理，确保轨枕内无积 水、无杂物。（2）对已调整好的轨排进行最终检 测。（3）混凝土搅拌。在本次施工过程中需要4 个振捣器进行搅拌，采取人工和机器相结合的方法 进行施工，确保振捣器不会接触到轨枕和排架。为 了保证混凝土施工质量，施工完成后，需采用式 （1）计算温度应力引起的弯矩和应力：
（责任编辑：陈玉荣）
MMP-9的表达，为探讨IL-17A在子宫内膜癌转移 中的作用及其机制提供实验依据。
1.3.1 细胞培养 Ishikawa细胞细胞培养于60mm细胞培养皿中， 含10%胎牛血清、1% PS的RPIM-1640培养基，放 置于37°、5% CO2的培养箱中传代培养，每2～3天 传代一次。用0.25%胰蛋白酶消化传代，细胞呈单 层贴壁生长。 1.3.2 实验细胞分组与给药 将细胞分为对照组、IL-17A处理组。按1×105/ 孔将细胞接种于6孔板，培养24小时，待细胞达到 90%以上融合，无血清培养20小时，然后用20ng/ml IL-17A处理细胞。 1.3.3 细胞划痕实验检测Ishikawa细胞迁移能 力的变化 IL-17A处理细胞2h进行细胞划痕实验：用 10μl枪头比着直尺，垂直于培养板划痕，用PBS洗 涤细胞，以去除划下的细胞。洗涤3次之后加入无 血清RPIM-1640培养基，置于37℃、5%CO2的细胞 培养箱中培养，分别于0h、6h、12h、24h，显微镜 下观察拍照。使用Image J软件打开图片后，随机划 取6～8条水平线，计算细胞间距离的均值。每个时 间长度细胞整体迁移的距离=每个时间点的距离长
子宫内膜癌是女性生殖系统常发生的恶性肿瘤 之一，好发于围绝经期和绝经后女性。在我国，随 着社会发展和经济条件的改善，子宫内膜癌的发病 率亦逐年升高。白细胞介素17（IL-17或IL-17A） 是由TH17细胞分泌的前炎症因子，具有促炎及抗 炎双重作用。近年研究显示，IL-17作色，比如肠 癌、皮肤癌、乳腺癌、前列腺癌、肺癌和胰腺癌 等。子宫内膜癌的病因迄今尚不明确。本实验选择 高分化的人子宫内膜样腺癌Ishikawa细胞，给予外 源性IL-17A处理，通过细胞划痕实验检验IL-17A 对Ishikawa细胞迁移的影响，并检测迁移相关蛋白
和单元式结构道床板受到的弯矩相同。
4 结语 综上所述，在高速铁路工程施工过程中，无砟
轨道有着非常高的应用价值，同时也存在一些技术 难题，对施工要求比较高。所以，在进行施工时， 施工人员要做好精细化施工，重点做好关键环节的 监督和检查工作，避免出现疏漏，确保施工质量达 到要求。
参考文献 [1] 吴大勇．高速铁路无砟轨道施工的质量控制方法研究
摘要：目的：探讨IL-17A对人子宫内膜癌Ishikawa细胞迁移能力的影响，通过检测迁移侵袭相关蛋白 MMP-9的表达，初步探讨其作用机制。方法：体外培养Ishikawa细胞，将细胞分为对照组及IL-17A处理 组，细胞划痕实验检测2组细胞的迁移能力，采用Western blotting检测迁移相关蛋白MMP-7、MMP-9蛋白 表达。结果：IL-17在人子宫内膜癌Ishikawa细胞中有表达，给药组细胞的迁移能力比空白组明显增强。 结论：人子宫内膜癌Ishikawa细胞中有IL-17表达，外源性IL-17可促进细胞的迁移。 关键词：子宫内膜癌；IL-17A；MMP-7；MMP-9；细胞划痕实验 文献标识码：A 中图分类号：R711 文章编号：2096-4137（2018）06-014-03 DOI：10.13535/ki.10-1507/n.2018.06.05
1 材料与方法 1.1 细胞株
Ishikawa细胞株，为高分化子宫内膜样腺癌， ER、PR均为阳性，PTEN活性缺失，本实验室 保存。 1.2 主要试剂与仪器
RPMI-1640培养基、胎牛血清（美国，GIBCO 公司），胰蛋白酶（美国，SIGMA公司），青链 霉素双抗PS（美国，Hyclone公司）人重组IL-17A （美国，R&D公司），兔抗人MMP-7单克隆抗 体、兔抗人MMP-9单克隆抗体（美国，Epitomics 公司）。细胞培养箱（Thermo），Real-time PCR 仪、Bio-rad MINI转移电泳仪、化学发光成像系统 （美国，Bio-rad公司）。 1.3 实验方法
2018年第6期 （总第18期）
中国高新科技 China High-tech
NO.6 2018 ( Cumulativety NO.18 )
IL-17A对人子宫内膜癌Ishikawa细胞 迁移能力的影响
魏 敏1 姜 泽1 马思琪1 曲银娥2 魏静波2
（1.华北理工大学临床医学院；2.华北理工大学基础医学院，河北 唐山 063000）
（1） 式中，M为温度梯度产生的弯矩；σ 为最大翘 曲应力； E 为混凝土的弹性模量； ∆T 为上表面和下 表面的温度变化（℃）；h为道床板厚度； b 为计算 宽度； µ 为泊松比。 经分析发现，道床板受到的负弯矩为28.01kN·m/ m，正弯矩为14.32kN·m/m，纵向连续式结构道床板
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度-0h距离，求出均数和标准差，时间为横轴，迁 移距离为纵轴（mm）作图，并比较初始0h与实验 结束时试验组与对照组的照片。
1.3.4 Western-blotting检测MMP-7、MMP-9 蛋白表达
分别于IL-17A处理细胞0h和24h，收集对照 组和处理组细胞，每孔加入150μl细胞裂解液， 充分裂解后提取总蛋白，nanodrop2000超微量紫 外分光光度计测定蛋白浓度，与样品处理液混合 后煮沸10min，加样，每样品孔30ug，10% SDSPAGE凝胶电泳，浓缩胶80V恒压电泳30min，分 离胶140～180V，溴酚兰达凝胶底部停止电泳； 半干转，恒压，20V、30min，将胶上的蛋白转移 至PVDF膜上。5%脱脂奶粉封闭2h；MMP-7、 MMP-9兔抗人单克隆抗体（1: 1000），4℃孵 育过夜；TBST对膜进行清洗（15min，10min， 10min），以洗掉非特异结合的一抗；HRP标记羊 抗兔二抗（1:4000）室温孵育1h；TBST对膜进行 清洗（5min×3）；采用ECL发光法显影，化学发 光底物A液与B液1:1混合，室温避光反应5min， Biorad化学发光成像系统扫描图像，目的蛋白/ GAPDH条带的灰度比值进行半定量分析。
与其他区域的轨道进行很好的过渡。 3.5 严格把控混凝土的浇筑过程
混凝土的浇筑包括以下步骤：（1）施工前的 准备。对轨枕的表面进行清理，确保轨枕内无积 水、无杂物。（2）对已调整好的轨排进行最终检 测。（3）混凝土搅拌。在本次施工过程中需要4 个振捣器进行搅拌，采取人工和机器相结合的方法 进行施工，确保振捣器不会接触到轨枕和排架。为 了保证混凝土施工质量，施工完成后，需采用式 （1）计算温度应力引起的弯矩和应力：