NUP98重排在APL中MECOM和11p15基因表达标

医疗医务标准化NUP98重排在APL中MECOM和
11p15基因表达标准化作用
■ 侯艳秋1 韩济南1* 刘昌勋1 甘露双2
（1.呼伦贝尔市人民医院；2.长沙市妇幼保健院）
摘 要：目的：分析NUP98重排在APL中与MECOM和11p15基因表达的相关性。

方法：回顾性分析52例11p15基因重排APL患者，通过细胞形态学检查、流式细胞分型、染色体核型分析、FISH检测、qRT-PCR等技术检测和分析。

结果：52例患者中细胞免疫表型表达T系、髓系、B系，相应的比例分别为43.90%、24.39%、28.04%。

52例11p15APLAPL患者出现38例NUP58重排阳性，阳性率为68.2%。

结论：NUP98基因重排和MECOM、11p15均为正向表达关系，后续可通过基因重排对APL患者进行标准化诊治。

关键词：11p15基因，APL，MECOM，NUP98重排，标准化作用
DOI编码：10.3969/j.issn.1002-5944.2022.22.064
The Role of NUP98 Rearrangement in the Standardization of MECOM
and 11p15 Gene Expression in APL
HOU Yan-qiu1 HAN Ji-nan1* LIU Chang-xun1 GAN Lu-shuang2（1.Hulunbuir People's Hospital; 2. Changsha Maternal and Child Health Care Hospital）Abstract: Objective: To analyze the correlation between NUP98 rearrangement and MECOM and 11p15 gene expression in APL. Methods: Eighty two APL patients with 11p15 gene rearrangement were analyzed retrospectively by cell morphology, fl ow cytometry, chromosome karyotype analysis, fi sh and QRT PCR. Results: In 52 patients, T-line, myeloid line and B-line were expressed in cellular immunophenotypes, and the corresponding proportions were 43.90%, 24.39% and 28.04% respectively. 38 of 52 patients with 11p15APLAPL were positive for NUP58 rearrangement, and the positive rate was 68.2%. Conclusion: There is a positive relationship between NUP98 gene rearrangement and MECOM and 11p15. Later, APL patients can be diagnosed and treated by gene rearrangement.
Keywords: 11p15 gene, APL, MECOM, NUP98 rearrangement, standardization role
白血病是造血细胞的恶性克隆性疾病，临床表现具有异质性，大多数患者可检出克隆性的染色体异常。

11p15重排是白血病中常见的染色体异常，其具有多种多样的形式，在初发和治疗急性髓细胞白血病、急性淋巴细胞白血病等疾病中均可发生[1]。

核孔蛋白98kDa（nucleoporin 98kDa，NUP98）是核
基金项目：本文受科学技术研究项目“MECOM基因过表达在NUP98重排白血病发病机制中的作用”（项目编号：NMDYB17188）资助。

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孔蛋白的重要组成部分，负责RNA和蛋白的核浆运输[2，3]。

急性早幼粒细胞白血病（Acute promyelocytic leukemia，APL）作为急性髓细胞白血病的特殊类型，法国（F）、美国（A）、英国（B）三国血液学专家组将其作为急性髓细胞白血病M3型。

研究以伴11p15基因重排白血病患者为研究对象，通过荧光原位杂交技术（fluorescence in situ hybridization，FISH）检测确定NUP98基因重排患者，深入分析APL患者中NUP98重排与MECOM和11p15基因的标准关系，以期实现白血病患者的个体化治疗。

1 一般资料和研究方法
1.1 一般资料
回顾性分析52例11p15基因重排APL患者，纳入标准：①符合细胞形态学、细胞遗传学分型的诊断标准；②确诊为11p15基因重排APL患者；③无严重肝、肾等代谢疾病；④3个月内无药物治疗；④病程超过3年。

排除标准：①拒绝自愿签署知情同意书；
②合并恶性肿瘤或其他血液疾病；③药物过敏史；
④妊娠或哺乳期女性。

另选体检正常的健康人群作为对照组，以便于标准化分析。

1.2 研究方法
1.2.1 细胞形态学检查
获取患者骨髓和外周血样本，经涂片和瑞-姬染色后，确定各个阶段血细胞的形态和比例，接着根据急性白血病的分型诊断标准通过糖原染色等实验确定白血病类型。

1.2.2 流式细胞分型
抽取乙二胺四乙酸抗凝骨髓2mL，利用荧光物质进行单克隆抗体标记，数据标准检测和分析采用 BD公司FACSCalibur 型流式细胞仪和CellQuest Pro 分析软件。

1.2.3 染色体核型分析
采用热变性姬姆萨染色R显带技术完成核型分析，描述标准方式参考2018版本《人类细胞遗传学国际命名体制》。

1.2.4 FISH检测
取标准骨髓细胞悬液，更换甲醇/冰醋酸固定液，经滴片、风干，核酸杂交漂洗液和乙醇梯度脱水两个步骤各2min，加入双色探针并盖上载玻片用橡皮胶密封，73℃变性2min，室温下通过杂交仪杂交，第二日洗干晾干，通过4’,6二脒基-2-苯吲哚再次染色置于Olympus BX60 荧光显微镜下观察间期细胞。

1.2.5 定时定量PCR技术
研究使用定时定量聚合酶链式技术（real-time quantitative Polymerse Chain Reaction，qRT-PCR）验证候选基因的标准准确性。

1.3 统计学方法
研究采用SPSS 23.0统计软件进行整理和标准分
P<0.05表示差距具有明显的统计学差异。

2 结 果
2.1 一般资料
患者的临床特征如表1所示，涉及年龄、性别、 血小板、血红蛋白、白细胞、牙龈肿痛、胃肠炎等标准信息。

表1 患者的临床特征
指标数值指标数值
年龄/岁35.6±4.36牙龈肿痛7
男/女40/32胃肠炎6白细胞/(109/L)345.3±101.21瘀斑8血小板/L312.6±98.2发热9
血红蛋白(g/L)123.2±43.2贫血5
2.2 流式细胞分型结果
流式细胞分型标准结果：52例患者中细胞免疫表型表达T系、髓系、B系，相应的比例分别为43.90%、24.39%、28.04%。

2.3 FISH检测结果
52例11p15A PL A PL患者出现38例N U P58重排阳性，标准阳性率为68.2%。

其中，t（7;11）（p15;p15）核型异常的病例数为31例。

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3 讨 论
随着白血病细胞和分子遗传学的标准化进展，再现性染色体异常的生物学特征和致白血病机制相继被阐明，为白血病的个体化治疗提供了新的靶点，显著改善了部分特殊细胞遗传学类型患者的疗效[4]。

傅蔷等学者采用array-CGH 对4正常核型儿童急性髓细胞白血病检测，发现2例存在NUP98基因的缺失，进一步利用RT-PCR分析检出NUP98-NSD1融合基因，患者验证显示NUP98-NSD1融合基因在正常核型儿童急性髓细胞白血病发生率达16.7%，正常核型成人急性髓细胞白血病为2.3%。

其后多项研究证实NUP98-NSD1在正常核型儿童急性髓细胞白血病是高再现性的异常，但在成人急性髓细胞白血病中较为少见[5，6]。

目前，国际上对伴有11p15/NUP98基因重排白血病的标准化研究尽管取得了一定的进展，然而对于11p15/NUP98基因重排白血病的临床特点、生物学特征和发病机制尚缺乏系统深入的研究[7]。

研究对患者进行表达谱芯片检测，并与186例急性髓细胞白血病患者基因表达谱进行对比分析，首次发现NUP98重排白血病患者具有MECOM特异性高表达的标准化特征，MECOM在该类型白血病细胞中的作用及调控机制尚未见报道。

研究应用核型分析、FISH、qRT-PCR 技术从初诊11p15重排恶性血液病患者中筛选到38例NUP98重排阳性的患者，分布于多个年龄组，以急性髓细胞白血病居多，亦可见于急性淋巴细胞白血病、慢性髓细胞白血病急变期、骨髓增生异常综合征患者。

研究发现，11p15/NUP98组标准化OS率和LC率显著高于11p15组，这在部分学者的研究报道中均有提及。

NUP98和MECOM、11p15的相关性分别为0.523和0.534，显著性低于0.01。

NUP98基因重排和MECOM、11p15均为正向表达关系，临床可通过分析APL患者基因重排标准化情况，进而针对性地对患者进行诊治。

4 结 论
研究通过细胞形态学检查、流式细胞分型、染色体核型分析、FISH检测、qRT-PCR等技术检测和分析11p15基因重排APL患者的NUP98基因、MECOM蛋白表达情况，后续可通过MECOM、11p15、NUP98基因对APL患者进行诊治。

研究在NUP98-融合蛋白的致白血病机制等方面均具有意义，后续可通过基因重排对APL患者进行诊治。

参考文献
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作者简介
侯艳秋，硕士研究生，副主任医师，研究方向为急性白血病，恶性淋巴瘤。

韩济南，通讯作者，硕士研究生，副主任医师，研究方向为血管外科。

（责任编辑：刘宪银）
侯艳秋，韩济南，刘昌勋等：NUP98重排在APL中MECOM和11p15基因表达标准化作用
2022年第11期（下） / 总第619期295。