【推荐下载】高速逆流色谱法制备岩黄连中的脂溶性生物碱
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HSCCC不使用固相载体作固定相，克服了固相载体带来的样品吸附、损失、污染和峰
形拖尾等缺点[3]，可在短时间内实现高效分离和制备。据报道，HSCCC制备分离生
物碱的经典溶剂系统为氯仿?甲醇体系;考虑到该溶剂对仪器的损耗，本研究根据溶剂平
衡时间、化合物分配Байду номын сангаас数等参数对多组溶剂系统进行筛选，建立了快速制备分离岩黄
Cheilanthifoline(12.3mg，纯度：76.1%)、Thalictrifoline(3.6mg，纯度：83.1%)、
Tetrahydropalmatine(13.7mg，纯度：85.5%)、Canadine(8.7mg，纯度：78.5%)。结论采
用高速逆流色谱法制备分离岩黄连中的脂溶性生物碱，快速、简便、产物得率和纯度
[键入文字]
高速逆流色谱法制备岩黄连中的脂溶性生物碱
【编者按】医药论文是科技论文的一种是用来进行医药科学研究和描述研究成果的
论说性文章。论文网为您提供医药论文范文参考，以及论文写作指导和格式排版要
求，解决您在论文写作中的难题。
高速逆流色谱法制备岩黄连中的脂溶性生物碱【摘要】目的采用高速逆流色谱法对
岩黄连中的脂溶性生物碱进行制备分离。方法经过筛选确定溶剂系统为正己烷?醋酸乙
度：76.1%);b:Thalictrifoline，ESI-MS:m/z354[M+H]+(3.6mg，纯度：83.1%);c:
Tetrahydropalmatine，ESI-MS:m/z356[M+H]+(13.7mg，纯度：85.5%);d:Canadine，
测器。ThermoLCQDECAXP高效液相色谱-质谱联用仪(ESI-MS);JY98-Ш超声波细
胞粉碎机(宁波新芝生物科技有限公司)。
2方法
2.1供试品的制备取适量岩黄连药材粉碎过60目筛，用6倍量95%乙醇超声提取
3次，过滤，合并滤液浓缩后混悬于水中，用醋酸乙酯萃取3次，合并萃取液，回收溶
剂，干燥后得提取物备用。
酯?甲醇?水(3∶7∶5∶5;1.5∶5∶1.5∶5)、正己烷?醋酸乙酯?甲醇?0.2mol/L盐酸(1∶
3.5∶2.5∶4.5)，上相作固定相，下相作流动相，转速860r/min，流速1.2ml/min。结
果经连续3次高速逆流色谱分离，可直接从岩黄连的醋酸乙酯粗提物(300mg)中得到4
个纯度较高的脂溶性生物碱，经过与对照品比较保留时间及质谱鉴别，确定产物为
液溶解，作为HSCCC的样品，备用。首先将固定相(上相)泵入高速逆流色谱仪，待线
圈内充满固定相后，调转速至860r/min。然后将流动相泵入色谱仪，待流动相从管柱
出口流出，基线稳定，即达到平衡时，将5ml样品(300mg/5ml)溶液注入高速逆流色
谱仪。流速为1.2ml/min，转速为860r/min。紫外检测器，检测波长为270nm。流份
率，最终确定醋酸乙酯萃取物的HSCCC溶剂系统，如表1所示。
按照表1中的溶剂体系，先后对醋酸乙酯萃取物(见图1)进行3次HSCCC制备分
离，分离得到的流份进行HPLC分析，将化学组成相同的流份合并后，浓、缩干燥，
收集其中纯度较高的4段组分(见图1：a～d)。经过质谱鉴别及与对照品比较保留时
间，确定4组生物碱分别为：a:Cheilanthifoline，ESI-MS:m/z326[M+H]+(12.3mg，纯
较高。
【关键词】高速逆流色谱;岩黄连;生物碱
1
[键入文字]
岩黄连系罂粟科紫堇属多年生草本植物石生黄堇CorydalissaxicolaBunting的全草。
作为黔桂高寒山区的特效草药，长期以来岩黄连一直被广泛应用于治疗热毒痈疮、急
性腹痛、急性黄疸型肝炎等症。经过系统分离方法，我们已经确定岩黄连的主要成分
为生物碱[1]。鉴于其中的化合物结构相似，制备纯化过程耗时长、溶剂消耗大，化合
物得率低，本研究采用高速逆流色谱法探索岩黄连中生物碱的快速制备方法。
高速逆流色谱法(high-speedcountercourrentchromatography,HSCCC)是在20世纪80
年代由美国YoichiroIto教授首先研究和发展起来的一种现代色谱分离制备技术[2]。
2
[键入文字]
1.2仪器QuilPrepTMChassisMKV500/SeriesIIHPLCPump高速逆流色谱仪(英国
/AECS美国SSI)，配有四组不锈钢线圈(110ml42mm)和5ml定量环;WatersFraction
CollectorIII自动流分收集器;Waters600E型高效液相色谱仪,Waters996二极管阵列检
到完全分层的时间，该参数与固定相的保留率密切相关。K=目标化合物在上相溶液中
的峰面积值A1目标化合物在下相深液中的峰面积值A2表1不同溶剂系统的平衡时间
及主要化合物在溶剂中的K值溶剂系统组成比例
3
[键入文字]
2.3HSCCC制备分离将溶剂系统置分液漏斗中，混匀，静置过夜，分成固定相(上层)
和流动相(下层)。使用前超声30min。称取醋酸乙酯萃取物300mg，用5ml的下相溶
2.2HSCCC溶剂系统选择每次称取醋酸乙酯萃取物约4mg置于试管中，分别取上
相、下相溶液各2ml溶解样品，充分振荡溶解。待两相平衡后，分别取上相、下相溶
液，挥干，再用甲醇溶解，进行HPLC分析。计算不同溶剂系统中，目标化合物的分
配系数K值和两相溶剂系统的平衡时间：即当上相与下相溶剂混合时，两相系统达
连中脂溶性生物碱的HSCCC方法。
1材料与仪器
1.1试剂及药品色谱纯试剂：乙腈(TediaCompany，Fairfield，USA)分析纯试剂：正
己烷，醋酸乙酯，甲醇，盐酸(天津市红岩化学试剂厂)。对照品：Cheilanthifoline，
Thalictrifoline，Tetrahydropalmatine，Canadine为实验室自制(HPLC检测纯度95%)。
由自动接收器收集。进样110min后，停止主机转动，用氮气将固定相推出，测得保
留率均大于80%。
3结果
本实验中，曾先后对溶剂系统：正己烷?甲醇?水、正己烷?醋酸乙酯?甲醇?水、正己
烷?醋酸乙酯?甲醇?盐酸、石油醚?醋酸乙酯?水、石油醚?醋酸乙酯?甲醇?水等进行了筛
选。以两相溶液的平衡时间以及目标化合物的分配系数为参数，并结合固定相的保留
形拖尾等缺点[3]，可在短时间内实现高效分离和制备。据报道，HSCCC制备分离生
物碱的经典溶剂系统为氯仿?甲醇体系;考虑到该溶剂对仪器的损耗，本研究根据溶剂平
衡时间、化合物分配Байду номын сангаас数等参数对多组溶剂系统进行筛选，建立了快速制备分离岩黄
Cheilanthifoline(12.3mg，纯度：76.1%)、Thalictrifoline(3.6mg，纯度：83.1%)、
Tetrahydropalmatine(13.7mg，纯度：85.5%)、Canadine(8.7mg，纯度：78.5%)。结论采
用高速逆流色谱法制备分离岩黄连中的脂溶性生物碱，快速、简便、产物得率和纯度
[键入文字]
高速逆流色谱法制备岩黄连中的脂溶性生物碱
【编者按】医药论文是科技论文的一种是用来进行医药科学研究和描述研究成果的
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求，解决您在论文写作中的难题。
高速逆流色谱法制备岩黄连中的脂溶性生物碱【摘要】目的采用高速逆流色谱法对
岩黄连中的脂溶性生物碱进行制备分离。方法经过筛选确定溶剂系统为正己烷?醋酸乙
度：76.1%);b:Thalictrifoline，ESI-MS:m/z354[M+H]+(3.6mg，纯度：83.1%);c:
Tetrahydropalmatine，ESI-MS:m/z356[M+H]+(13.7mg，纯度：85.5%);d:Canadine，
测器。ThermoLCQDECAXP高效液相色谱-质谱联用仪(ESI-MS);JY98-Ш超声波细
胞粉碎机(宁波新芝生物科技有限公司)。
2方法
2.1供试品的制备取适量岩黄连药材粉碎过60目筛，用6倍量95%乙醇超声提取
3次，过滤，合并滤液浓缩后混悬于水中，用醋酸乙酯萃取3次，合并萃取液，回收溶
剂，干燥后得提取物备用。
酯?甲醇?水(3∶7∶5∶5;1.5∶5∶1.5∶5)、正己烷?醋酸乙酯?甲醇?0.2mol/L盐酸(1∶
3.5∶2.5∶4.5)，上相作固定相，下相作流动相，转速860r/min，流速1.2ml/min。结
果经连续3次高速逆流色谱分离，可直接从岩黄连的醋酸乙酯粗提物(300mg)中得到4
个纯度较高的脂溶性生物碱，经过与对照品比较保留时间及质谱鉴别，确定产物为
液溶解，作为HSCCC的样品，备用。首先将固定相(上相)泵入高速逆流色谱仪，待线
圈内充满固定相后，调转速至860r/min。然后将流动相泵入色谱仪，待流动相从管柱
出口流出，基线稳定，即达到平衡时，将5ml样品(300mg/5ml)溶液注入高速逆流色
谱仪。流速为1.2ml/min，转速为860r/min。紫外检测器，检测波长为270nm。流份
率，最终确定醋酸乙酯萃取物的HSCCC溶剂系统，如表1所示。
按照表1中的溶剂体系，先后对醋酸乙酯萃取物(见图1)进行3次HSCCC制备分
离，分离得到的流份进行HPLC分析，将化学组成相同的流份合并后，浓、缩干燥，
收集其中纯度较高的4段组分(见图1：a～d)。经过质谱鉴别及与对照品比较保留时
间，确定4组生物碱分别为：a:Cheilanthifoline，ESI-MS:m/z326[M+H]+(12.3mg，纯
较高。
【关键词】高速逆流色谱;岩黄连;生物碱
1
[键入文字]
岩黄连系罂粟科紫堇属多年生草本植物石生黄堇CorydalissaxicolaBunting的全草。
作为黔桂高寒山区的特效草药，长期以来岩黄连一直被广泛应用于治疗热毒痈疮、急
性腹痛、急性黄疸型肝炎等症。经过系统分离方法，我们已经确定岩黄连的主要成分
为生物碱[1]。鉴于其中的化合物结构相似，制备纯化过程耗时长、溶剂消耗大，化合
物得率低，本研究采用高速逆流色谱法探索岩黄连中生物碱的快速制备方法。
高速逆流色谱法(high-speedcountercourrentchromatography,HSCCC)是在20世纪80
年代由美国YoichiroIto教授首先研究和发展起来的一种现代色谱分离制备技术[2]。
2
[键入文字]
1.2仪器QuilPrepTMChassisMKV500/SeriesIIHPLCPump高速逆流色谱仪(英国
/AECS美国SSI)，配有四组不锈钢线圈(110ml42mm)和5ml定量环;WatersFraction
CollectorIII自动流分收集器;Waters600E型高效液相色谱仪,Waters996二极管阵列检
到完全分层的时间，该参数与固定相的保留率密切相关。K=目标化合物在上相溶液中
的峰面积值A1目标化合物在下相深液中的峰面积值A2表1不同溶剂系统的平衡时间
及主要化合物在溶剂中的K值溶剂系统组成比例
3
[键入文字]
2.3HSCCC制备分离将溶剂系统置分液漏斗中，混匀，静置过夜，分成固定相(上层)
和流动相(下层)。使用前超声30min。称取醋酸乙酯萃取物300mg，用5ml的下相溶
2.2HSCCC溶剂系统选择每次称取醋酸乙酯萃取物约4mg置于试管中，分别取上
相、下相溶液各2ml溶解样品，充分振荡溶解。待两相平衡后，分别取上相、下相溶
液，挥干，再用甲醇溶解，进行HPLC分析。计算不同溶剂系统中，目标化合物的分
配系数K值和两相溶剂系统的平衡时间：即当上相与下相溶剂混合时，两相系统达
连中脂溶性生物碱的HSCCC方法。
1材料与仪器
1.1试剂及药品色谱纯试剂：乙腈(TediaCompany，Fairfield，USA)分析纯试剂：正
己烷，醋酸乙酯，甲醇，盐酸(天津市红岩化学试剂厂)。对照品：Cheilanthifoline，
Thalictrifoline，Tetrahydropalmatine，Canadine为实验室自制(HPLC检测纯度95%)。
由自动接收器收集。进样110min后，停止主机转动，用氮气将固定相推出，测得保
留率均大于80%。
3结果
本实验中，曾先后对溶剂系统：正己烷?甲醇?水、正己烷?醋酸乙酯?甲醇?水、正己
烷?醋酸乙酯?甲醇?盐酸、石油醚?醋酸乙酯?水、石油醚?醋酸乙酯?甲醇?水等进行了筛
选。以两相溶液的平衡时间以及目标化合物的分配系数为参数，并结合固定相的保留