分光光度法测定维锌糖浆中葡萄糖酸锌的含量

２００６年第１９卷第４期
柳州医学
维锌糖浆是我院常用的补锌制剂，临床上用于锌缺乏症和青年痤疮等的治疗，效果良好。

该制剂成分复杂，除主药葡萄糖酸锌外，其他成分多达１０余种，包含枸橼酸、维生素Ｂ１、维生素Ｂ２、维生素Ｂ６、
烟酰胺、泛酸钙、苯甲酸、尼泊金乙酯、蔗糖、香精、乙醇等微量成分。

主药葡萄糖酸锌的含量测定按中国药典２００５版用络合滴定法［
１］
，但本
制剂受其他成分干扰，用此法测定本制剂中葡萄糖酸锌含量有如下问题：终点不明，测定结果重现性差，回收率高，有时高达１６０％。

本实验根据锌试剂遇锌生成蓝色化合物的特性
［２］
，取锌试液与葡萄糖
酸锌产生颜色反应，不经分离，直接用分光光度法在６１８ｎｍ测定主药葡萄糖酸锌含量，能有效排除其它辅料等因素的干扰，方法简便快速，专属性强，测定结果准确可靠，令人满意，报道如下。

１仪器与试药
１．１
仪器：ＵＶ－２５０１ＰＣ紫外－可见分光光度计（日
本岛津），ＢＰ－２１１Ｄ电子分析天平（德国赛多利斯）。

１．２试药：葡萄糖酸锌对照品（中国生物制品检定
所，批号１０３３２－００１）；锌试剂（上海三爱思试剂有限公司，分析纯，批号２００２１２１８），维糖锌浆（柳州市人民医院制剂室），其他所用试剂均为分析纯。

２实验方法与结果２．１
最大吸收波长选择
取葡萄糖酸锌对照品２５ｍｇ，置１００ｍｌ量瓶中加
水溶解并稀释至该度，摇匀，得对照液（２５０μｇ／
ｍｌ）。

取对照液２ｍｌ置５０ｍｌ容量瓶中，加硼酸－氯化钾缓冲液（ｐＨ９．０）１０ｍｌ，新配制的锌试液（取锌试剂
０．１３ｇ，加１ｍｏｌ／Ｌ氢氧化钠溶液２ｍｌ溶解后，加水使成１００ｍｌ）１．０ｍｌ，加水至刻度，摇匀，按分光光度法
［３］
于５００～７５０ｎｍ处扫描，结果在６１８ｎｍ有最大吸
收。

另按维锌糖浆的处方剂量，分别称取各辅料成分配制成单一成分溶液，同法操作分别扫描，结果其他成分在此范围内均无吸收，对测定无干扰，见图１，故选择６１８ｎｍ为葡萄糖酸锌测定波长。

２．２
锌试液的加入量对吸收度（Ａ）值测定的影响锌试液本身为深红色溶液，其与锌生成蓝色
化合物，若过量的锌试液存在与此蓝色溶液混合为紫色，因此特考察锌试液本底及其加入量对Ａ值测定的影响。

取锌试液１ｍｌ不加葡萄糖酸锌其余按２．１项同倍稀释做光谱扫描，结果在此波长段内锌试液无吸收峰。

分别吸取２．１项下葡萄糖酸锌对照液２ｍｌ，置
５０ｍｌ量瓶中（平行５份），各加硼酸－氯化钾缓冲液
（ｐＨ９．０）１０ｍｌ，然后依次加新配制的锌试液０．１ｍｌ～
０．７ｍｌ，加水至刻度，摇匀，制成含不同量锌试液，葡
分光光度法测定维锌糖浆中葡萄糖酸锌的含量
韦曦１，周永丽２，张丽２
（１广西医科大学第五附属医院，柳州
５４５００１２桂林医学院药学院实习生，广西桂林
５４１００４）
【摘
要】
目的
采用分光光度法测定维锌糖浆中葡萄糖酸锌含量。

方法
利用葡萄糖酸锌与锌试
剂生成蓝色化合物后，用分光光度法测定其含量，检测波长为６１８ｎｍ。

结果葡萄糖酸锌在４～１２ｇ．ｍｌ－１范围内线性关系良好（γ＝０．９９９８），平均回收率为１００．６８％（ＲＳＤ＝０．６６％）。

结论本法简便、准确，专属性强，
可作为该制剂的质量控制。

【关键词】
分光光度法；葡萄糖酸锌；
含量测定
图１维锌糖浆中各成分的吸收光谱
１葡萄糖酸锌
２－９其他成分
０．４０００．３０００．２００
０．１０００．０５００．０００
ＡＢＣ
４５００５０００６０００７０００７５００
Ｗａｖｅｌｅｏｈ（ｎｉｍ）
・２２４
・
２００６年第１９卷第４期
柳州医学
样品批号
络合量法分光光度法葡萄糖酸锌占标示量
（％）
葡萄糖酸锌占标示量
（％）
精密配制１０５．９９９．４０４１１０１
１０４．３９９．９１０４．３
９９．６０５０４２０１６７．７９８．４１６７．７
９８．１０５０８０４１４９．０９３．１１２８．４
９３．１０５０９０７１３１．７１０２．２１２８．２
１０２．５
表４分光光度法与络合滴定法测定结果
萄糖酸锌为１０μｇ．ｍｌ－１溶液，分别于６１８ｎｍ测吸收度，结果见表１。

结果，锌试液加入量在０．６ｍｌ以上时，已足够与此浓度的葡萄糖酸锌反应完毕，并开始过量，颜色变紫，而锌试液稍过量对主药葡萄糖酸锌吸收度值无影响，为保证反应迅速完全，本试验确定锌试液加入量为１ｍｌ。

２．３时间对测定Ａ值的影响
在实验中观察到葡萄糖酸锌与锌试液反应后
的纯蓝色溶液在放置２４ｈ后，肉眼看到有颜色变浅的趋势，故用ＵＶ－２５０１ＰＣ特有的时间过程扫描功能，测定不同时间蓝色溶液的吸收曲线变化，并以０时Ａ值为１００％计，计算放置后不同时间Ａ值变化百分率，见表２。

结果可见，放置后颜色渐褪，６０ｍｉｎ时吸收度值下降至９５％，加入锌试液后需５ｍｉｎ内迅速测定Ａ值完毕，以保证测定结果的准确性。

２．４标准曲线的绘制
取经８０℃减压干燥至恒重的葡萄糖酸锌对照
品约２５ｍｇ，精密称定，置１００ｍｌ量瓶中，摇匀，得对照液，分别精密量取对照液０．７５，１．０，１．２５，１．５，
１．７５，２．０ｍｌ，置５０ｍｌ量瓶中，加硼酸氯化钾缓冲
液１０ｍＬ，新配制锌试液１ｍＬ，用水稀释至刻度，摇匀，在５ｍｉｎ内，以水为空白，于６１８ｎｍ处分别测定吸收度?以吸收度Ａ为横坐标，浓度Ｃ（μｇ／ｍｌ）为纵坐标，绘制标准曲线，在４．０１７～１０．７１２μｇ／ｍｌ的浓度范
围内，得线性回归方程：Ｙ＝１９．５７８２Ｘ－０．４７６５７，γ＝
０．９９９８５。

２．５
精密度与方法重现性实验
取同一份对照液重复测定，ＲＳＤ值为０．６６％（ｎ＝
７），于同一日内每隔４ｈ测定，日内ＲＳＤ值为０．７８％（ｎ＝６），于不同日期测定，日间ＲＳＤ值为０．８９％（ｎ＝６）２．６
回收率实验采用加样回收法，
按处方剂量，
精密称取经
８０℃减压干燥至恒重的葡萄糖酸锌，和其他成分，准
确配制成维锌糖浆。

分别取样稀释成高、中、低不同
浓度溶液，按２．４项标准曲线的绘制方法测定Ａ，代入回归方程计算含量和回收率，见表３。

２．７分光光度法与络合量比较
取２．６项精密配制和制剂室生产的不同批号维锌糖浆分别用分光光度法和络合量法分别测定葡萄糖酸锌含量，结果见表４。

表中每批样品在成品库不同位置随机取样测表１
锌试液的加入量对Ａ值测定的影响
锌试液加入量／ｍｌ性状Ａ０．１纯蓝色＋０．１１９０．３纯蓝色＋＋０．３３９０．５纯蓝色＋＋＋０．４８７０．６紫蓝色＋＋＋＋０．４９９０．７
深蓝紫色＋＋＋＋＋
０．４９８
表２放置时间对测定Ａ值的影响
时间（ｍｉｎ）
吸收度（Ａ）
吸收度值变化（％）
００．４８１４１００．０５０．４８０１９９．７１００．４７６２９８．８２００．４７０９９７．８６０
０．４５７２
９５．０
表３
回收率实验结果
实验编号加入量（μｇ）测得量
（μｇ）回收率
（％）
平均回收率
（％）
ＲＳＤ
（％）
１６．６３９８６．６３０３９９．８６２７．３０３８７．３３５１１００．４０３７．９６７８７．９８１２１００．１７４８．６３１８８．５４８９９９．０５９９．４４
０．６８
５９．２９５８９．１９５１９８．９２６９．９５７６
９．８６０７
９９．００７
１０．６２３７１０．４８７２
９８．７１
・２２５
・
２００６年第１９卷第４期
柳州医学
恶性肿瘤的发生是由于癌基因被激活、抑癌基因失活所导致的癌细胞异常增殖的结果。

Ｐ１６基因
是一种新型抑癌基因
［
１］
，它能够最直接的抑制肿瘤
发生，且与许多肿瘤的发生发展密切相关，是细胞增殖周期的调节和抑制者。

其抑癌机制与细胞周期
的调控密切相关
［
２］。

喉癌是一种发生在喉黏膜上皮
的恶性肿瘤，好发于５０～６０岁男性。

在喉癌当中以鳞状细胞癌最多，约占９０％，腺癌约占２％，其余为肉瘤，肉瘤中以恶性淋巴瘤较为常见。

有关Ｐ１６基
因表达与喉癌的关系研究较少，本研究选取１４例喉癌手术标本及３例正常喉黏膜标本，应用ＲＴ－ＰＣＲ方法，
检测喉癌中Ｐ１６ｍＲＮＡ的表达水平，
探讨
Ｐ１６对喉癌生物学行为的影响。

１材料与方法１．１
标本
收集滨海县人民医院耳鼻喉科２００３年６月至
２００５年１２月喉癌手术切除的标本１４例，其中男性
１０例，女性４例，年龄１６～７０岁，平均５５岁。

按组织Ｐ１６基因在喉癌中的表达
范井荣
（江苏省滨海县人民医院耳鼻喉科
２２４５００）
【摘
要】
目的
探讨Ｐ１６基因的表达与喉癌的关系。

方法
采用ＲＴ－ＰＣＲ方法检测喉癌中Ｐ１６
ｍＲＮＡ表达情况。

结果
不同病理级别喉癌组织中Ｐ１６ｍＲＮＡ表达均有不同程度下降，ＩＩ～ＩＩＩ级患者下降比
较明显。

结论
Ｐ１６基因在喉癌中的表达明显低于正常喉黏膜组织，可能与喉癌的发生发展密切相关。

【关键词】Ｐ１６；ＲＴ－ＰＣＲ；喉癌
定２次，结果络合量法的含量测定结果偏高，重现性差，而本法的重现好，结果准确。

２．８络合量法滴定误差原因分析２．８．１
其他成分的影响
本制剂中蔗糖和泛酸钙
都含有一定量的Ｃａ＋＋，经按中国药典２００５版对蔗糖进行钙盐分析，其含钙盐量达０．０５％，本制剂含蔗糖量为３０％，这些可能都会使含量测定结果偏高。

２．８．２加热时橡皮塞对含量测定的影响
本制剂用管制口服液瓶分装，在生产时为避免
各种因素带来的微生物微量污染，在灌封后常用流通蒸汽灭菌５～１０ｍｉｎ，经验证明这能确保制剂每批达到无菌。

本实验考察加热时管制口服液瓶盖的橡胶衬垫对含量测定的影响，取２．６项回收实验配制的维锌糖浆１０ｍｌ，分置具塞试管中，每管加入橡胶塞垫１片，分别置水浴中加热不同时间，用络合量法和分光光度法分别测定含量，比较结果见表５。

由表５见，络合量法滴定时，加热消毒使橡胶塞对测定结果有很大影响，２０ｍｉｎ内加热时间延长，含量测定结果愈高，因消毒锅里各部位受热程度不同，所以不同位置抽样测定结果偏差很大。

而分光光度法受此干扰很小。

３讨论
实验分析结果，由于受处方其它成分和加热等
因素的影响，不能用络合量法测定维锌糖浆中葡萄糖酸锌含量。

而利用锌试剂与锌生成蓝色化合物的特性，采用分光光度法测定其的含量，专属性强，能排除其他成分等因素的干扰，方法准确快捷，符合医院快速检验的要求。

参考文献
［１］中国药典．２００５版二部［Ｓ］．２００５．６９６
［２］中国医药公司上海化学试剂采购供应站编．试剂
手册［Ｍ］．上海科学技术出版社，１９８５．１３０９
［３］中国药典．２００５版．二部［Ｓ］．２００５：附录ⅣＡ
表５
加热时橡皮塞对含量测定的影响
加热时间（ｍｉｎ）
葡萄糖酸锌含量（％）
络合滴定法
分光光度法
０１０５．９９９．４１０１１４．８９９．４２０
１１８．１
１００．４
・２２６
・。