最新小鼠类风湿关节炎动物模型的建立1-药学医学精品资料

各组小鼠实验前测量后肢体积，二次免疫后，每隔三天再次 测量后肢体积，比较注射前及注射后第12天的后肢体积。测 量结果显示体积大小与关节红肿程度成正比。
病理改变

病理观察结果显示，小鼠肢体关节主要有滑膜增生，炎细胞 浸润，血管变性，软骨层破坏等病理改变。出现上诉1-2种 病理改变者为轻度病理改变，3种以上者为中度，4种以上者 为重度。
2分
3分 4分
活动稍有影响，足爪，脚垫或膝关节有红肿。
活动受影响，足爪脚趾及关节轻度变形红肿。 活动受阻，脚趾及关节红肿严重，强直或畸形。
1分
2分
3分
4分
测定

实验前后小鼠后肢关节体积测定：
采用小鼠爪足体积测量计
测量每只小鼠后腿膝关节约5mm以下体积，反 复三次，记录取平均值，体积大小与关节红肿 程度成正比。每三天检测一次。
寻找一种与人类种属接近，容 易建立并能较全面的反映RA特点的 动物模型将是今后RA动物模型的研 究方向。
Ⅱ型胶原诱导的关节炎（CIA）模型
Ⅱ型胶原（CⅡ）大多存在于关节软骨中，同 时也存在于视网膜和玻璃体中，是一种与免 疫系统隔绝的蛋白质，但在病理条件下可作 为一种自身抗体呈现出来。 50%RA患者血清中存在抗CⅡ的自身抗体，这 表明CⅡ可诱导产生关节炎性质的自身免疫反 应。 1977年，Trentham等首次建立CIA模型，国外 大量重复试验并在临床表现，病理组织学， 免疫学方面进行了广泛深入的研究。

注射用水组 佐剂组
实验分组
实验组
佐剂对照组 22只
注射用水对照组
22只
90只
观察记录

一般在第二次免疫后7-12天实验组小鼠80%以上出现关节 炎症状。根据小鼠关节部位红肿及活动程度进行临床症状 分级。在实验前和实验后的第3,5,7,12天分别观察记录。 1分 活动正常，仅皮肤发红，无明显肿胀。

完全佐剂
（complete Freund adjuvant, CFA）
液体石蜡与无水羊毛脂按2:1或者6:4
比例混合的混合液1ml，高压灭菌加 入80℃灭活1h的减毒卡介苗或干燥结 核死菌10mg制成。 不加入卡介苗则为不完全佐剂
（incomplete Freund adjuvant, IFA）。
目的

建立一个稳定的可靠的类风湿关节炎动 物模型，为RA的发病机制研究和药物筛 选提供必要的手段。
原理


用牛Ⅱ型胶原加佐剂免疫动物。 佐剂型关节炎（AA）模型 Ⅱ型胶原诱导的关节炎（CIA）模型 弗氏佐剂 完全佐剂（CFA） 不完全佐剂（IFA）
佐剂型关节炎模型

佐剂型关节炎（Adjuvant Arthritis, AA）的发病机 制主要是分子模拟理论： 结核杆菌的一个蛋白分子与关节滑膜上的一个 糖蛋白分子结构相似，可以被同一株克隆T细胞所 识别，从而诱发产生关节的免疫反应。 AA模型由细菌学家Freund于20世纪50年代创立，是 研究免疫性关节炎动物的基本方法。
3）将牛Ⅱ型胶原乙酸溶液与完全佐剂等量 混合并乳化。 4）每只实验小鼠背部取4-6点进行皮下注 射，总共200l。 5）三周后用不完全佐剂，与牛Ⅱ型胶原乙 酸溶液等量混合并乳化，每只小鼠尾根 部取3-5点皮下注射，总共100l。
设置对照组
佐剂组：只给小鼠注射佐剂，不加胶原。 注射用水组：给小鼠注射用水，不加胶原和 佐剂。
小鼠类风湿关节炎动 物模型的建立
学生：张梦云 专业：风湿免疫
类风湿关节炎

类风湿关节炎(Rheumatoid Arthritis, RA)是一种 以慢性破坏性关节病变为特征的全身性自身免 疫性疾病。主要表现为双手、腕和足关节的对 称性多关节炎，也可累及膝、髋等大关节。同 时可伴有发热、贫血、皮下结节及淋巴结肿大 等关节外表现，血清中可出现多种自身抗体。
讨论
RA动物模型只是在一定条件下侧重于某
些因素而建立起来的，故其并不能完全 反应RA的所有特点。
其次，RA患者所表现的关节肿痛晨僵发
热等不适都可以通过患者的主诉反映出 来，但在RA动物模型中这些指标却不能 被体现出来。
理想的RA动物模型的条件
1、在病原学和发病机制方面与人类相似； 2、临床表现与组织病理改变与人类相似； 3、模型容易获得，施加相同实验条件获得的 结果相同； 4、模型建立后，效果稳定并可以长期维持。
病理检查
取实验组和对照组小鼠肢体，去外皮，4%甲 醛固定48小时以上，5%硝酸脱钙2小时，二甲 苯浸润，石蜡包埋。制成6mm切片，HE染色。 常规光学显微镜观察，制定评分标准，进行 病理学诊断。

记录

用双盲法在给药前和给药后第3、5、7、12天记录各组小鼠 的活动及关节红肿情况，并打分。
后肢体积测量
对象与材料
动物：8周龄雄性小鼠，体重18-20g。 试剂：1)牛Ⅱ型胶原。
2)完全佐剂和不完全佐剂。 3)注射用水。
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方法

胶原诱导小鼠关节炎模型建立 1）将牛Ⅱ型胶原溶于0.1M冰乙酸溶液中， 浓度2mg/ml，4℃过夜。 2）弗氏完全佐剂补加已灭活的结核杆菌， 使其浓度达5mg/ml。