原发性骨髓纤维化ASXLl基因突变的临床意义

原发性骨髓纤维化ASXLl基因突变的临床意义
摘要】目的：分析原发性骨髓纤维化(PMF)患者ASXLl基因突变情况，比较与
JAK2V617F、CALR、MPL515W突变患者及突变阴性临床参数的差异。

方法：检测41例PMF患者ASXLlexon12、CALRexon9、MPLexon10和JAK2V617F基因突变。

结果：41例患者总基因突变检出率为87.8％(36／41)，ASXL1、CALR、JAK2V617F
及MPL基因突变发生率分别为17.1％(7／41)、19.5％(8／41)、56.1％(23／41)及2.4％(1／41)；7.3％(3／41)的患者为双基因突变，包括ASXLl／CALR(n=2)、ASXLl
／JAK2V617F(n=1)。

与单基因CALR、JAK2V617F、MPL突变相比，ASXLl突变组的
患者有较低的血红蛋白(P<0.05)，但在中位年龄和外周白细胞计数方面无显著差异(P>0.05)；ASXLl突变组与突变阴性组相比具有较低的血小板数及血红蛋白水平，
差异有统计学意义(P<0.05)。

结论：ASXLl基因突变在PMF患者中有较高的检出率，与其他单基因及突变阴性组相比，具有较低的血红蛋白水平。

【关键词】ASXLl；原发性骨髓纤维化；骨髓增殖性肿瘤
【中图分类号】R733.3 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2020）04-0046-03
Detection clinical significance of ASXL1 Mutation existance in patients with primary myelofibrosis neoplasm and
Wang Yanli,Wang Zheng,Yan Shibin, Xia Jingqing .
The Center Hospital of Linyi,Linyi,Shandong 276000,China
【Abstract】 Objective To explore the existence of ASXLl gene mutations in patients with primary myelofibrosis(PMF),and to compare the differences of clinical characteristics between
PMF patients carrying ASXLl mutations, and patients carrying other solitary gene mutation,
and patients without any mutations. Methods The mutations of ASXL1 gene at exon 12, CALR
gene at exon 9and MPL gene at exon 10 and JAK2V617F mutations in 41 essential PMF patients were detected Results 87.8%of patients harbored at least one mutation.The incidences
of ASXL1and CALR mutations were17.1%and 19.5%;respectively.The frequencies of JAK2V617Vand MPL mutations were 56.1%and 2.4%,respectively.7.3%of patients had double mutations,including ASXLl and CALR(n=2).ASXLl and JAK2V617F(n=1).Significant difference was found on hemoglobin levels between ASXL1 mutations and other single mutation(P<0.05).however,the difference on leukocyte counts and median age was not pared with negative patients.the presence of ASXL1 mutations was found to be significantly correlative with lower hemoglobin level and platelet counts,and the difference was statistically significant (P< 0.05).Conclusion.The frequency of concurrent ASXLl mutations is higher in PMF patients.The existence of ASXL1 gene mutations significantly associated with lower hemoglobin level.
【Key words】ASXLl; Primary myelofibrosis;Myeloproliferative neoplasm
骨髓增殖性肿瘤（myeloproliferative neoplasms, MPN）是一组起源于骨髓多能造血干细
胞克隆恶性血液系统疾病。

原发性骨髓纤维化（PMF）是MPN的一个亚型，是MPN中最具
侵袭性的一种克隆性疾病，其临床特征是进行性贫血、脾大、髓外造血，伴全身症状，易进
展为急性白血病。

自2005年MPN患者高频获得JAK2V617F基因突变［1-3］，从此人们对MPN的发病机制有了新的认识。

2013年，在JAK2V617F及 MPLW515阴性的ET及PMF患者
中发现CALRexon9突变的检出率高达50%以上[4-5]。

JAK2、MPL、CALR基因的发现使得约80%的MPN患者的发病机制有了新的生物学标志及预后指标，但不能解释不同MPN的显著差异。

研究显示，几乎所有髓系肿瘤中都有ASXLl突变检出，并与其他基因事件共同作用参与了肿
瘤的发生发展，但ASXL1在PMF中的突变情况及临床意义尚不明确[6-7]。

本文分析了41例PMF患者中ASXL1基因突变情况，并与JAK2V617F、CALR及MPL等单基因突变进行比较分析，初步探讨其临床意义。

1.资料和方法
1.1 病历资料
选取2014年1月－2019年6月我院血液科诊断的骨髓纤维化患者41例。

男23例，女
18例；年龄52～75岁，中位年龄65岁。

均符合2008年WHO诊断标准[8]。

41例均有不同
程度脾大，其中13例为巨脾。

1.2 JAK2、CALR、MPL和ASXL1基因突变检测
用血液基因组DNA提取试剂盒（QIAamp DNA Mini Kit，生产商：QIAGEN）提取骨髓样本中基因组DNA。

CALRexon9突变检测采用PCR法。

其上游引物序列为：FAM-CTGGTCCTGGTCCTGATGT；下游引物序列为：TCTCACAGAGACATTATTTGGC。

PCR扩增后产物经纯化后，使用3500XL测序仪进行高分辨率毛细管凝胶电泳，实验数据采用片段分析软件GENEMAPPERID V4.1进行分析。

MPLexon10突变检测采用Sanger测序法。

其上游引物序列为：TGACCTTGCGGGCCGAC；下游引物序列为：GATCTGGGGTCACAGAGCGA。

PCR扩增后产物经纯化、测序反应后使用3730XL测序仪进行高分辨率毛细管凝胶电泳，实验数据采用DNA序列
分析软件Sequencher V4.5进行突变分析。

JAK2基因V617F突变采用等位基因特异性聚合酶
链反应(AS-PCR)+荧光探针法进行定量检测，试剂盒由上海源奇生物医药科技有限公司提供。

ASXL1基因突变检测采用二代测序法。

ASXL1exon12经探针捕获和建库后，使用Illumina公司
的Nextseq500测序仪进行双端测序，测序长度为2×150bp。

测序数据经生物信息学分析后，
最后人工筛选和确认变异位点。

1.3 统计学处理
数据采用SPSS21.0统计软件进行统计学分析，计数资料采用率（%）表示，进行χ2检验，计量资料采用（x-±s）表示，进行t检验，P＜0.05为差异具有统计学意义。

2.结果
2.1 ASXL1、CALR、JAK2V617F、MPL基因突变分析
ASXLl结果：41例患者中，共有7例检出ASXLl突变，突变率为17.1%(7/41)，ASXL1突
变主要类型为：Gly646Trpfs(n=4)、Pro808Leufs(n=1)、Thr823X(n=1)、Glu768X(n=1)。

ASXLl突
变患者的平均年龄为56岁(52～60岁)，见表1。

3.讨论
表观遗传调节是细胞维持其基因表达模式的重要机制，其中维持基因表达稳态的两类重
要表观遗传调节蛋白为polycomb家族(polycomb group，PcG)和Trithorax家族(Trithorax group，TrxG)。

PcG蛋白的主要功能是保持发育过程中同源异形基因的沉默，而TrxG蛋白则负责维持
基因的活化状态。

人类ASXLl基因定位于染色体20ql l，编码由1541个氨基酸组成的核蛋白，是trxG(trithorax-group)和PRC(Polycomb-group repressor complex)的增强子，具有抑制／激活
双重特性，在包括血液细胞等多种组织中广泛表达。

ASXLl编码的蛋白质表达于所有造血细胞，具有对转录的双向激活与抑制作用。

Fisher等[9]人建立了ASXL1敲除的小鼠模型。

敲除后的
小鼠淋系和髓系分化中都发生异常，表明ASXL1对于维持正常的造血功能是必须的。

作为表观遗传调节子基因，ASXLI在MPN可与JAK2V617F、TET2、RUNXl、CEBPA等基因
突变共存。

高通量DNA测序发现，90%以上的MPN 患者至少携带1个突变基因，具有多个
基因突变共存者其转化白血病的风险增加[10]。

国内研究显示，ASXLl突变在MPN发生率达36%。

ASXLl突变的频率在PMF为12%～13%，Pv/ET-MF为23%[11]，这一结果表明，PMF是
具有多基因改变的疾病，多基因检测可以为PMF生物标志的筛选及预后分层提供更多依据[12]。

单变量分析中发现了ASXL1突变对PMF生存的不利影响[13]。

有研究报道，
ASXLl+CALR+PMF患者OS下降，但ASXLl+CALR-患者的预后最差[14]。

CALR+ASXL1-中位生存期
最长(平均10.4年)，CALR-ASXL1+患者最短(平均2.3年)。

CALR+ASXLl+和CALR-ASXL1-患者具有
相似的生存率，并被归为中等风险类别 (平均5.8年)[13]。

本组研究对41例PMF患者进行了多基因检测。

结果发现，93.5%的患者存在单基因突变，ASXLl基因总的突变发生率为17.1%，均为移码突变、点突变或无义突变，大部分ASXLl突变
与其它基因突变共存，7.3%的患者存在双基因突变，其中双基因突变患者中均携带ASXLl突变，且这一结果与既往研究基本一致[15]。

在3例基因双突变患者中，2例为ASXLl/CALR突
变共存，未检测到CALR/JAK2V617F突变共存。

目前，关于ASXLl突变在PMF中的研究鲜见
报道。

与单CALR基因突变患者相比，本研究中ASXLl突变患者的血红蛋白、血小板计数水平
明显降低，这提示ASXLl突变患者的红系、巨核系受抑更为明显，但尚需进一步扩大样本并
长期随访尚能明确。

综上，ASXL1基因突变是继MPN患者中JAK2、CALR、MPL基因突变之
后的又一重要生物学标志。

PMF的发生可能由于一个或多个基因的共同作用结果,如JAK/STAT 通路相关基因、表观遗传调控相关基因及剪接因子相关基因等[16]。

针对PMF发病过程中起
决定作用的基因，研制更多的靶向药物，是根本改变PMF预后的关键。

未来随着基因测序技术的提高发现更多的协同致病基因并进行深入的功能研究，可能会
为诠释PMF复杂的致病机制提供更多有力的理论依据，将对我们认识PMF的发病机制，预
后和治疗发挥重要的作用。

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