实验报告-从牛奶中分离酪蛋白
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实验报告
一、实验名称：从牛奶中分离酪蛋白
二、实验目的：
1.学习从胶体中提取某一类物质的方法。
2.学习蛋白质的各种颜色反应及其原理。
三、实验原理：
1.蛋白质是两性化合物，溶液的酸碱性直接影响蛋白质分子所带的电荷。
当调节牛奶
的p H值达到酪蛋白的等电点（p l）4.8左右时，蛋白质所带正、负电荷相等，呈电
中性，此时酪蛋白的溶解度最小，会以沉淀形式从牛奶中析出。
2.缩二脲反应原理：具有两个或两个以上肽键的化合物在碱性条件下与Cu2+反应,生
成红紫色的络合物。
所有的蛋白质均有此显色反应。
3.蛋白黄色反应原理：硝酸将蛋白质分子中的苯环硝化，在加热状态下产生了黄色
硝基苯衍生物，再加碱颜色加深呈橙黄色。
这是含有芳香族氨基酸特别是含有酪
氨酸和色氨酸的蛋白质所特有的颜色反应。
4.茚三酮反应原理：蛋白质与茚三酮共热，产生蓝紫色的还原茚三酮、茚三酮和氨
的缩合物。
此反应为一切氨基酸及α-氨基酸所共有。
四、实验步骤及现象：
1.取50mL脱脂牛奶于150mL烧杯中，用热水浴加热至40℃，维持此温度，边搅拌边
加稀醋酸（1：9）溶液约2mL——有白色沉淀析出。
2.继续搅拌并使悬浊液冷却至室温，然后将混合物转入离心杯中，于3000r/min离心
15min。
3.离心完毕后，上清液倒入乳糖回收瓶中，沉淀用95%的乙醇（20ml）搅匀，然后用
布氏漏斗减压过滤，用乙醇-乙醚（1：1）混合液洗涤沉淀2次，每次约10ml，最
后用5ml乙醚洗涤沉淀一次，减压过滤至干——得到干燥的白色固体。
4.将干粉铺于表面皿上，称量并计算牛奶中酪蛋白含量。
5.称取0.5g酪蛋白，溶解于0.4M氢氧化钠溶液的生理盐水（5mL）中，然后滴加3-4
滴1%硫酸铜溶液，振荡试管——溶液变成紫色。
五、实验数据：
空表面皿的质量m0=28.15g
表面皿与酪蛋白的总质量m1=31.78g
牛奶中酪蛋白的质量m=m1-m0=3.63g
六、讨论与感想：
1.牛奶是一种胶体，在正常情况下是均一稳定的，要想分离出其中的某一成分，就应
该想办法使这种成分变成沉淀析出。
通过本次实验，我知道了可以通过调节胶体
的酸碱性，来改变蛋白质分子所带电荷，使其达到等电点。
此时蛋白质分子间的
电荷作用力最小，分子间没有了间隙，浮力减小，蛋白质就会沉淀。
而实验中50
ml牛奶和2m l稀醋酸（1：9）所配成的混合液的pH恰好在4.8左右，正好是蛋白
质的等电点，从而可以使最多的酪蛋白沉淀析出。
2.加入的醋酸不能过量，过量酸会促使牛奶中的乳糖水解为半乳糖和葡萄糖，难以
将酪蛋白分离。
3.析出的酪蛋白沉淀是絮状物，直接过滤会堵塞漏斗孔，所以要先对悬浊液进行离
心操作，使得絮状物富集，便于过滤。
4.用乙醇-乙醚混合液洗涤沉淀的原因是因为酪蛋白不溶于乙醇和乙醚，而脂质溶于
其中，可以用来洗涤除去酪蛋白粗制品中的脂质。
5.理论上最终得到的酪蛋白应该是纯白色的，但是实际得到的酪蛋白表面会有一些
黄色物质，这些黄色物质是没有洗净的残留脂质。
其原因可能是在用乙醇-乙醚混合液洗涤沉淀的时候，没有充分搅拌，使得洗涤不彻底。
6.通过查找资料得知，蛋白质的颜色反应是不同物质与蛋白质中的特定结构（例如肽
键、苯环、氨基酸等）的反应，因为反应能产生特定的颜色，所以可以用来鉴定蛋白质。
但是也要注意，颜色反应不是蛋白质的专一反应，一些非蛋白物质也可产生相同颜色反应，因此不能仅根据颜色反应的结果决定被测物是否是蛋白质。
颜色反应是一些常用的蛋白质定性和定量测定的依据。
7.离心仪是本次实验中第一次接触到的器械，它的使用也有注意事项：处于相对位
置的两个离心杯要保证质量相同，因为高速转动需要很大的向心力，如果相对位置的两个离心杯质量不同，会使得转轴受力不均匀，可能导致转轴弯曲。
所以，在放入离心机之前，要用天平比较两个离心杯和其中液体的质量，并进行适当调整。