反相高效液相色谱法测定复方丹参片中丹参素的含量

反相高效液相色谱法测定复方丹参片中丹参素的含量
【摘要】目的建立高效液相色谱法测定复方丹参片中丹参素含量的方法。

方法HPLC法，Hypersil填料C18柱，流动相为甲醇0.05%磷酸溶液(5∶95)，流速为1.0 ml/min，检测波长为280nm。

结果丹参素0.088～2 μg范围内线性关系良好(r=0.9995)，平均回收率为99.2%，RSD为1.7%。

结论该方法简便、灵敏、准确，可作为复方丹参片的质量控制标准。

【Abstract】Objective To establish an HPLC method for the determination of DanShensu sodium. Methods HPLC and a Hypersil C18Column was used. The
mobile phase was methanol 0.05% acetic acid(5:95). The detective wavelength was at 280 nm, the flow rate was 1.0 ml/min. Results The linear range of danshensu sodiun was 0.088~2 μg，(r=0.9995).The average recovery was 99.2%，RSD 1.7%. Conclusion The method is simple and rapid which can be used for the quality control of Danshenpian mixture.
【Key words】HPLC；Danshenpian mixture；Danshensu sodium
复方丹参片临床上常用的一种复方制剂，由丹参、葛根等中药经过提取精制而成，具有活血化瘀、通脉养心、活血消肿、养血安神等功效，临床用于治疗冠心病、心绞痛、胸中憋闷等疾病［1］。

丹参素钠为其中主要水溶性成分，丹参素钠的含量测定方法主要有紫外分光光度法［2］、薄层扫描法［3］及HPLC法［4］等。

笔者采用反相高效液相色谱法测定本品中的丹参素钠的含量。

1 仪器与试药
1.1 仪器Waters高效液相色谱仪，UV 2550紫外分光光度计，AG204电子天平，Empower Ⅱ色谱工作站。

1.2 试药复方丹参片的阴性对照品为医院自制；丹参素钠对照品供含量测定用，购自中国药品生物制品检定所（批号:110805 200508)；甲醇为色谱纯；水为重蒸水；其他试剂为分析纯。

2 方法与结果
2.1 色谱条件美国热电色谱柱(Hypersil填料，4.6 mm×250 mm，5 μm)，柱温40℃；进样量10 μl，流动相为甲醇0.05% 磷酸溶液(5:95)，流速1.0 ml/min，检测波长280 nm；理论板数按丹参素钠计算应不低于3000。

图1。

A.丹参素钠对照品
B.复方丹参片供试品
C.丹参素阴性对照品
图1
复方丹参片中丹参素钠含量测定HPLC色谱图
2.2 对照品溶液的制备精密称取丹参素钠对照品1.76 mg，置10 ml量瓶中；加甲醇使溶解，并稀释至刻度，摇匀；精密吸取1 ml，置10 ml量瓶中；加甲醇稀释至刻度，摇匀，制成每毫升含17.60 μg的溶液即得。

2.3 供试品溶液的制备取本品20片，除去薄膜衣，精密称定，研细(过三号筛)，精密称取适量(约相当于15片的重量)，置锥形瓶中，精密加入30%乙醇50 ml，称定重量，加热回流30 min，放冷，再称定重量，用30%乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液1 ml，置10 ml量瓶中，加30%乙醇至刻度，即得。

2.4 阴性对照品溶液的制备取丹参素的阴性样品，按“2.3”项下方法制成阴性对照品溶液。

2.5 系统适应性试验分别精密吸取“2.2”、“2.3”、“2.4”项下溶液各10 μL,按“2.1”项下色谱条件进样测定，结果见图1。

2.6 线性关系考察精密吸取“2.2”项下丹参素钠对照品溶液5,10,20, 30, 40 uL, 分别注入液相色谱仪；按上述条件分别测定丹参素钠的吸收峰峰面积，以进样量为横坐标(X )，以峰面积积分值为纵坐标(Y )，进行回归处理。

结果丹参素钠在0.088~0.704 ug范围内，进样量与峰面积积分值之间线性关系良好，回归方程为Y=2.069973×106X + 1.888410×104，r=0.9995。

2.7 精密度试验精密吸取“2.2”项下对照品贮备液，按“2.1”项下色谱条件重复进样6次，20 μl/次，结果RSD=0.45%，表明本方法具有较高精密度。

2.8 稳定性试验取同一批供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件每隔1 h取10 μL进样1次，共10次，结果RSD=0.65%，表明样品在10 h内稳定性良好。

2.9 重复性试验取同一批复方丹参片样品5份，按“2.3”项下方法制备供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件进样测定，结果该批样品丹参素的平均含量为
1.20%(RSD=0.69%)，表明本方法重复性较好。

2.10 回收率试验取已知含量的样品研细，称约1 g，精密称定，精密加入丹参素钠对照品的甲醇溶液(0.01712 g/L)25 ml, 以下按“2.3”项下供试品溶液制备方法操作，制成加样供试品溶液。

吸取加样供试液10 μl，注入液相色谱仪，按上述方法测定加样供试液中丹参素钠含量，计算回收率。

结果丹参素钠平均回收率为99.2%，RSD为1.7%。

2.11 样品含量测定取3批样品，按上述“2.3”方法操作，各制备3份供试品溶液，依法测定，结果见表1。

表1
样品中丹参素钠含量测定结果(mg/g)
批号123XRSD%
0610260.4020.4080.4040.4050.75
0611080.4000.3890.3880.3921.70
0611200.3770.3850.3660.3762.53
3 讨论
高效液相色谱法是近代分析化学领域得到迅速发展的一种分析方法，具有分析速度快，分辨率高，样品用量少、可分离制备单一组分等诸多优点，尤其在对具有多种复杂成分的中药及成方制剂进行成分分析及质量控制方面得到广泛应用［3,4］。

在本实验中，笔者曾试用甲醇0.05%磷酸溶液(4:96)、甲醇0.1%磷酸溶液(5:95)、甲醇0.05%冰醋酸(12:88)等流动相条件，经反复比较，以文中所选流动相甲醇0.05%磷酸溶液(5:95)重复性最佳，出峰时间较快，峰形尖锐、对称，且丹参素钠和杂质峰分离较好。

文献［5］报道，丹参素的解离与溶液的pH值有关，在制备供试品溶液时加少量的酸，能更好地将丹参素提取出来。

在本实验中笔者分别试用了甲醇、甲醇醋酸溶液(99:1)和50%甲醇溶液，超声处理制备供试品，进样测定，结果供试品溶液中丹参素钠含量基本一致。

因此，为简化实验，选用甲醇为溶媒超声提取供试品溶液。

本方法操作简便，测定结果准确，重复性好、灵敏度高，可作为本制剂的质量控制方法。

参考文献
［1］周群,李炜东.高效液相色谱法测定复方丹参片中葛根素的含量.现代中医药, 2009,29(2):73 75.
［2］许腊英,毛维纶,黎莉.酒制丹参水溶性总酚的含量测定.湖北中医学院学报,2004,6(1):48.
［3］卢平,万民,陈洪燕.四产地丹参主要成分的含量测定与分析.中国药业,2005,14(10):330.
［4］雷艳青.高效液相色谱法测定丹参药材中丹参素含量研究.中医药导
报,2005,11(4):59.
［5］邹亮,罗亚玲,赵钢,等.RP HPLC法测定复方丹参胶囊中丹参素的含量.成都大学学报(自然科学版),2006,25(3):207.。