肠杆菌的鉴定t

实验结果
生化反应鉴定——葡萄糖蛋白胨水（M—甲基红）
依次为：可疑大肠杆菌（+）、可疑沙门菌（+）、可疑志贺菌（-）
实验结果
生化反应鉴定——葡萄糖蛋白胨水（Vp）
从左至右依次为： 可疑大肠杆菌（-）、可疑沙 门菌（-）、可疑志贺菌（-）
实验结果
生化反应鉴定——西蒙枸橼酸盐琼脂斜面（C）
可疑大肠杆菌（-）、可疑沙门菌（-）、可疑志贺菌（-）
B3
B4 B5
+ +
（⊕产酸产气，+产酸不产气，-不产酸也不产气）
实验结论
根据B3和B4、B6的EMB菌落特点可初步判断这三个菌落为致病菌落。 经过双糖铁纯化培养后，B3和B6为H2S阳性，可初步诊断B3和B6为沙门菌属。
B4的双糖铁纯化后为K/A及H2S阴性，可初步诊断为志贺菌属。
分别对B3和B4进行血清学鉴定，结果与初步诊断的预测一致，即B3在沙门菌 属血清中发生凝集反应，B4在志贺菌属血清中发生凝集反应，由此可以肯定B3 为沙门菌属。 根据实验结果记录，B5号菌的EMB菌落特点和双糖铁生长现象符合大肠杆菌 的特征，初步确定为可疑的大肠杆菌。 经过生化反应鉴定，B5的IMViC反应为++--，五种糖发酵结果均为阳性，可以 断定B5确实为大肠杆菌。
有白色凝集
无凝集现象
实验结果
动力测试（普通肉汤半固体培养）
大肠杆菌和可疑沙 门菌均有运动趋势， 琼脂显浑浊。 可疑志贺菌则紧沿 穿刺路线生长。
大 肠 杆 菌
可 疑 沙 门 菌
可 疑 志 贺 菌
实验结果
生化反应鉴定——蛋白胨水（I—吲哚）
从左至右依次为：可疑大肠杆菌（+）、可疑沙门（+）、可疑志贺（-）
肠杆菌科细菌的鉴定
主讲人：
小组成员：
目录
实验目的及背景 实验方法
实验结果 实验结论
实验目的及意义
实验背景 实验目的
肠杆科细菌是一大群生 物学性状非常相似的革兰氏 阴性杆菌，它们的酶十分活 跃，能分解多种糖和醇类。 因此肠杆菌科细菌鉴定主要 依靠生化反应和血清学反应。 而本实验中已得知所给 的混合菌种中含有大肠杆菌、 志贺菌和沙门菌三种。可依 靠生化反应鉴定大肠杆菌， 血清学鉴定区分志贺菌和沙 门菌。
结论：肠杆菌样品中含有大肠杆菌、沙门菌属和志贺菌属。
实验结果
肠杆菌科细菌初步鉴定结果略
双糖铁生长现象 K/A,H2S
-/+
K/A,H2S-
B5
B6
略
略
A/A,H2SK/A,H2S
-/+
实验结果
表 肠杆菌科部分细菌重要生物学特征 细 菌 编 号 糖发酵试验 葡 萄 糖 ⊕ ⊕ ⊕ 乳 糖 ⊕ ⊕ 麦 芽 糖 ⊕ ⊕ 甘 露 醇 ⊕ ⊕ ⊕ 蔗 糖 + + + + 吲哚 甲基 红 VP 枸 橼 酸 盐 利 用 动 力 志贺 菌属 多价 判断 血清 + 沙门 菌属 多价 判断 血清 + -
实验结果
EMB培养基肠杆菌分离培养
可疑的志贺菌和沙门菌 (光滑无色透明）
可疑大肠杆菌 （紫黑色且在亮光下可有绿色金属光泽）
实验结果
双糖铁琼脂斜面培养
疑沙 疑志 门菌1 贺菌
疑大 肠菌
疑沙 门菌2
实验结果
对疑志贺菌（B4）的血清鉴定结果
有白色凝集
无凝集现象
实验结果
对疑沙门菌（B3）的血清鉴定结果
试管均呈原来的蓝色， 并且小试管均有无小气泡， 所以三种可疑菌的蔗糖发酵为阴性。
实验结果
萄发酵管——麦芽糖 三支葡萄糖发酵管依次分别接种培 养了可疑大肠杆菌、可疑沙门杆菌、可 疑志贺杆菌。
从左至右： 大肠杆菌、沙门菌均产气产酸，志贺菌 为阴性
实验结果
萄发酵管——甘露醇 三支葡萄糖发酵管依次分别接种培 养了可疑大肠杆菌、可疑沙门杆菌、可 疑志贺杆菌。
试管均从原来蓝色变为黄色， 并且小试管均有小气泡， 所以三种可疑菌均有产气产酸。 其中沙门菌颜色较浅，产酸较少。
实验结果
萄发酵管——乳糖 三支葡萄糖发酵管依次分别接种培 养了可疑大肠杆菌、可疑沙门杆菌、可 疑志贺杆菌。
只有可疑志贺菌试管变为黄色， 并且只有可疑志贺菌试管的小试管无 小气泡， 所以可疑大肠杆菌、沙门菌均产气产 酸菌，志贺菌的乳糖发酵为阴性。
实验结果
萄发酵管——葡萄糖 三支葡萄糖发酵管依次分别接种培 养了可疑大肠杆菌、可疑志贺杆菌、沙 门杆菌。
试管均从原来蓝色变为黄色，
并且小试管均有小气泡，
所以三种可疑菌均有产气产酸。
实验结果
萄发酵管——蔗糖 三支葡萄糖发酵管依次分别接种培 养了可疑大肠杆菌、可疑志贺杆菌、可 疑沙门杆菌。
通过对三种肠杆菌科细 菌的鉴定实验，全面的 熟悉细菌常规鉴定程序 和方法，初步掌握细菌 鉴定实验操作技能，学 会正确观察记录实验结 果以及分析归纳实验资 料，得出正确的鉴定结 论并撰写合格的细菌鉴 定实验报告。
实验方法
肠杆菌混合液（老师提供）
实 验 材 料
伊红亚甲蓝琼脂平板培养基
双糖含铁培养基
单糖发酵管 硫酸亚铁半固体培养基 普通肉汤培养基 西蒙枸櫞酸盐培养基
实验方法
配置 培养基
分离菌 株
纯化培 养
血清学 鉴定
生化反 应鉴别
紫黑色的单个菌落，可初步定为可疑大肠埃希菌 取洁净载玻片，以灭菌接种环取 1~2环志贺菌属多价诊断血 菌落，编号；光滑无色透明的单个菌落可初步定为 每株可疑菌落接种以下培养基：糖发酵管（葡，乳， 平板分离法分离菌株： 清放在玻片上，然后烧环。 不发酵乳糖的，可疑志贺菌属或沙门菌属菌落，编 麦，甘，蔗）各 1支，蛋白胨水一支，葡萄糖蛋白胨 取肠杆菌混合溶液涂布于1 EMB 平板培养基 号。 待环冷却后用环在菌种斜面菌苔上蘸取少量细菌与血清混 水2支，西蒙枸櫞酸盐琼脂斜面 支，硫酸亚铁琼脂半 合，先在血清边缘处将细菌研磨开，然后再混匀。 取双糖铁高层琼脂斜面培养基，无菌操作接种已 上，37℃恒温箱倒置培养 24h 后。 固体培养基 1 支，普通肉汤琼脂半固体培养基 1支。 轻轻摇动载玻片，一边摇动，一边将载玻片稍微倾斜对光 编号的可疑菌落，送37℃恒温箱培养 24-48 小时。 挑选菌落形态、颜色不一致的菌落保存 接种完毕后，试管置于试管架上，送37℃恒温箱培 观察凝集现象。 待用。 观察可疑细菌在双糖铁琼脂斜面的生长现象并记 养24-48小时候观察记录于表格中。 录。（用酸碱指示剂检测双糖铁琼脂斜面和琼脂高 层的颜色变化）