成釉细胞瘤基质金属蛋白酶-2表达的初步研究

成釉细胞瘤基质金属蛋白酶-2表达的初步研究
陆长玺\郭传瑱2
(1.上海交通大学医学院附属第九人民医院口腔医学院口腔综合科，国家口腔疾病临床医学研究中心，上海市口腔 医学重点实验室，上海市口腔医学研究所，上海200011 ;2.北京大学口腔医学院口腔颌面外科，北京100081$
[摘要]目的：分析基质金属蛋白酶-2(m a trix m e ta llo p ro te in a se-2，M M P-2)在成釉细胞瘤中的表达，比较其在成釉细胞 瘤各病理类型间的差异及与侵袭性的关系。

方法：收集2005—2009年于北京大学口腔医院手术所得成釉细胞瘤石 蜡标本26块，对标本进行免疫组织化学（免疫组化）染色。

M M P-2为一抗，在高倍镜下观察，因细胞较少，深褐色区 域>50%性，26%~50%为中等阳性，5%~25%少量斑点性，<5:为阴性。

！2检验。

结果：M M P-2表达性率为88.5%，性率为65.4%,阴性率为3.8%。

在外周柱状细胞、基质细胞细胞内
均可见M M P-2的表达。

结论:M M P-2与成釉细胞瘤的侵袭性相关，各病理类型间M M P-2表达无显著差异。

[关键词]成釉细胞瘤；侵袭深度；基质金属蛋白酶-2
[中图分类号]?782[文献标志码]A D O I：10.3969/j.issn.1005-4979.2021.01.005
Preliminary Study of MMP-2 Expression in Ameloblastoma
LU Changxi1，GUO Chuanbin2
(1. Department o f General Dentistry，Ninth People! s Hospital，College o f Stomatology，Shanghai Jiao
Tong University School o f Medicine，National Clinical Research Center for Oral Diseases，
Shanghai K ey Laboratory o f Stomatology & Shanghai Research Institute o f Stomatology，Shanghai 200011; 2. Department o f Oral and Maxillofacial Surgery，School and
Hospital o f Stomatology，Peking University，Beijing 100081，China)
[Abstract] Objective：To investigate m a trix m e talloprotein ase-2(M M P-2) expression o f am eloblastom a w ith in d iffe re n t pa th o lo g ica l types and discuss its re la tio n to invasive behaviors. Methods：A total o f 26 am eloblastom a specim ens ac­q u ire d fro m P eking U n iv e rs ity H o sp ita l o f Stom atology were analyzed im m u n o h isto ch e m ica lly w ith a sp e cific m a rke r o f M M P-2and graded in w h ic h d a rk brow n areas >50[were stro ngly po sitive, 26%-50%were m oderately p o sitive, 5%-25% o r o n ly a few spots were w e a kly p o sitive, and <5%were negative. Data processing adopted x2test. Results：The total p o si­tive rate o f M M P-2 expression was 88.5%, the strongly po sitive rate was 65.4%, and the negative rate was 3.8%. M M P-2 expression can be seen in tu m o r p e rip h e ra l co lu m n a r ce lls, strom al ce lls and oth e r cells. Conclusion：M M P-2is re la te d to the lo c a l invasiveness o f am eloblastom a, and there is no s ig n ific a n t d iffe re n ce in the expression o f M M P-2 am ong various pa th o lo g ica l types.
[Keywords] am eloblastom a; d e pth o f in va sio n; m a trix m etalloprotein ase-2
在 侵袭的过程中，除抑制肿瘤细胞增生外，细胞外基质 侵袭也十分重。

细胞外基质 蛋白 。

基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinase，MMP$是
收稿日期：2020-04-21 修回日期：2020-12-16
作者简介：陆长玺（1983—），男，江苏江阴人，主治医师，博士.E- mail: *****************
通信作者：郭传璜，教授.E-mail: *****************4类蛋白水解酶(丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶、蛋白 基质金属蛋白酶）中较重要的一类。

MMP是一组锌离子依赖性内肽酶，经典型 MMP性 分 细胞外，在
剂作用下 性；型MMP，分型MMP接 性 分泌到细胞外，而另一种膜型 MMP结合在胞膜上。

研究表明，在多种类
型的肿瘤系中，MMP的表达水平和活性水平与其侵 袭性和转移成正相关[1-5&。

MMP-2也称为！型胶原酶，其可以降解！型胶 I，！型胶原同时也是构成基底膜的主要胶原成 分。

研究普遍认为，MMP-2水平可能是肿瘤恶性程 度的标志之一。

本研究对MMP-2在成釉细胞瘤体 及骨组织中的表达进行检测，探讨其在成釉细胞瘤 侵袭及骨破坏过程中的作用。

1资料和方法
1.1组织标本准备
标本 26块，为2005—2009年北京大学口腔 ，其中确诊为成釉细胞瘤的标本
为25块，恶性成釉细胞瘤为1。

成釉细胞瘤病理类型包括单囊型（11例）、一般型（13例）及 型(1例）。

其中，一型又可分为4 型：型、丛 型、瘤型、细胞型。

本均用101乙二
四乙酸（ethylene diamine tetraacetic acid,EDTA%充 分 进行连续切片，切片厚度为5 "m，进行 组 。

1.2 组
包括 组化通用型试剂盒，兔抗人MMP!2 体 ,(di! aminobenzidine,DAB)。

以上试剂均购自北足中衫金。

过程：，60丈烤片2d后，常规脱蜡至水，原 15 min，31过
水 10 min，以性过
氢酶活性；憐酸盐缓冲液（phosphate buffered saline, PBS) 3 ， 3 min，正常山羊血清工作
液(A液)置室温孵育15 min，倾去，滴加MMP-2多克 体(一 ），37"3h*PBS 3 次，
3 min，素 IgG(B液）置室温孵
育15 min，PBS冲洗3次，每次3 min，辣根过氧酶标记链霉卵白素工作液（C)置室温 : 15 min*PBS冲洗3次，每次3 min，DAB显色剂显
，自来水分，，水，透明，封片剂封。

1.3结果判断
因细胞较少，本研究采取如下方法判断:MMP-2 阳性 定位于细胞质，在高倍镜观察，深褐色 区域>501为强阳性，261~501为中等阳性，51~ 251或仅少量斑点为弱阳性，<51为阴性。

此外，因细胞数过少或其他原因无法确定的标本判定为 “不确定”。

分别将已知的阳性和PBS代替一 (MMP-2)设为阳性和阴性对照。

1.4结果分析
分析软组织中MMP-2的表达，包括肿瘤组织 及基质组织。

分析骨组织中MMP-2的表达，探讨其 与骨侵袭性的关系。

分析各型成釉细胞瘤中MMP-2 的表达是否差异，以及此差异是否与侵袭性相关。

1.5统计学分析
统计MMP-2表达的总阳性率，比较各病理类 型的阳性率，使用SPSS 16.0软件进行;!2检验及方差分析。

2结果
2.1 MMP-2 结果
在成釉细胞瘤中，绝大部分MMP-2强阳性表 达存在于外周柱细胞的胞质中，少量细胞膜呈 MMP-2阳性表达，中心星网状细胞少见或未见表 达。

基质中类成细胞的组织也存在MMP-2的阳性表达。

如 1，在单 型成釉细胞瘤的 细胞内，MMP-2呈强阳性表达，MMP-2在囊壁基底层呈 阳性表达,纤维结组织中也有MMP-2的阳性表达*肿瘤组织少部分外层柱状细胞质可MMP-2表达（），少量中心星网分细胞可见MMP-2表达（）。

以，单囊型MMP-2的表达主要 在基质中。

A.囊壁;
B.肿瘤细胞。

图1单囊型成釉细胞瘤免疫组化染色图（X200"
Figure 1 Immunohistochemistry staining o f unicystic ameloblas­toma (x200)
如 2 ，型成釉细胞瘤 组
可肿瘤上皮岛外周柱状细胞质MMP-2阳性表达，基质中出现MMP-2 阳性表达；神经组织外周也 MMP-2阳性表达（）。

弱阳性率为9.1%,无阴性及不确定的病例；角化型 及恶性成釉细胞瘤均呈MMP -2强阳性表达。

不同 病理型成釉细胞瘤中MMP -2的表达
见表1。

将一般型及单囊型成釉细胞瘤MMP -2阳性率
，结显示两者MMP -2的表达无
显差异(！>0.05)。

A .肿瘤细胞;
B .神经组织。

图2
丛状型成釉细胞瘤免疫组化染色图<x4001
Figure 2
Immunohistochemistry staining o f plexiform ameloblas­toma (x400)
如图3所示，角化型成釉细胞瘤免疫组化染色 结果显示，肿瘤细胞中心为角化物，MMP -2呈强阳 性表达，外周柱状细胞质呈MMP -2强阳性表达。

图4
恶性成釉细胞瘤免疫组化染色图！x 400"
Figure 4
Immunohistochemistry staining of malignant ameloblas­toma (x 400)
3讨论
图3角化型成釉细胞瘤免疫组化染色图，肿瘤及角化物！x 400"
Figure 3
Immunohistochemistry staining of keratotic ameloblas­toma, tumor and keratin (x 400)
恶性成釉细胞瘤免疫组化染色结果显示，肿瘤 细胞排列无规律，可见核分裂象，整个肿瘤组织中 的细胞质中均有MMP -2阳性表达（图4)。

2.2统计学结果
本研究中，MMP -2表达的总阳性率为88.5)， 强阳性率为65.4)，中等阳性率为15.4)，弱阳性率 为7.7)，阴性率为3.8)，不确定的为7.7)。

其中， 一般型成釉细胞瘤MMP -2表达的总阳性率为 76.9)，强阳性率为61.5)，中等阳性率为7.7)，弱 阳性率为7.7%，阴性率为7.7%，不确定的为 15.4%;单囊型成釉细胞瘤MMP -2表达的总阳性率 为100)，强阳性率为63.6)，中等阳性率为27.3)，
恶性肿瘤的发展过程中，癌细胞必须突破基底
癌向周围组织
， 展成为
润癌。

肿瘤细胞 的 ，主
要成有！型
'
（laminin , Lm )
(fibronectin , Fn )等，其中！型 可能是
'
定的成。

MMP
可以降解所有细
胞外基质（extracellular matrix , ECM )和基底膜 (basement membrane , BM )成分，在肿瘤细胞突破基
过程中
[6]。

MMP 肿瘤细胞
过程中的多重作用主要为 成。

如MMP -2可水解！型
胶原， 的整性；
细胞
，打
有的结，形成新的细胞 细胞基质的 ，有
细胞的游走;MMP 作用于ECM
成
新的活性因子，
一系列
F 7
G 。

成釉细胞瘤
性肿瘤，但包膜不完整，
具有局部侵袭性。

有学者从细胞
的角
•
表1
不同病理类型成釉细胞瘤中M M P -2的表达情况！例"
Table 1
Expression o f M M P -2 in different pathological types o f ameloblastoma (case)
病 型阴性
弱阳性
中等阳性
强阳性
不确定
总
一般型1118213单囊型0137011角化型
000101恶性
1
1
析了成釉细胞瘤的生物学行为，通过对成釉细胞瘤 和角化囊肿细胞的体外培养观察发现，两者的细胞 生长特点不同，前者细胞增殖活跃，具有主动性生 长的特点，细胞向周围游走的能力强"而后者细胞 的膨胀性生长能力强，能使病变范围变大，并具有 术后易复发的特点。

Piattelli等的研究表明，成釉细 胞瘤的增殖细胞核抗原$proliferating cell nuclear antigen，PCNA)细胞主要集中在肿瘤上皮岛的外周 细胞上，提示外周细胞的增殖活跃，在成釉细胞瘤 的发生和发展过中要 &
和 解酶等在成釉细胞瘤局部侵袭中作用的研究尚。

本研究 化的对MMP-2在成釉细胞瘤中的表达和 行 研究，发现在26 成釉细胞瘤中，对 细胞，有84 MMP-2强阳性染色"对于肿瘤细胞，大部 MMP-2阳性表 外周 细胞，中.网状细胞少见或未见表达。

本研究中，MMP-2表的总阳性率为88.5%，强阳性率为65.4%，阴性率为3.8%。

Kumamoto等 的研究显示，MMP-2表达的总阳性率为93.2%，强 阳性率为45.5%，阴性率为6.8%。

Fregnani等[1°猶研 究 ，肿 瘤 细 胞 中MMP-2 表 的性 为 47.3%，细胞中为38.2%，总阳性率为85.5%。

陶谦等[61的研究 ，MMP-2表的性率为92%，强性为84%，性率为8%。

等'11E的研究，中等 强的 性 为 79%。

上 ，研究的 性 ，而强阳性 大，能 和 有关。

角化 成 釉 细 胞 瘤 的外 周细 胞 胞 中，MMP-2呈强阳性表达，其角化物中的MMP-2乜
现强阳性表达，了角化成釉细胞瘤的侵袭性可能大大强 囊 成釉细胞瘤。

1性成釉细胞瘤中，肿瘤 现“成釉器”样表现，MMP-2的性表局限在外周细 胞，在中 部 有强 性表 。

本研究 ，成釉细胞瘤的外周细胞或基质细胞中产生的MMP-2 成 ！原解，的完整性，能成釉细胞瘤
局部侵袭生长的 &同病 的MMP-2表达并无显著差异（！>0.05)。

Fregnani等[10]
病 的成釉细胞瘤，MMP-2的表达无显著差异（！>0.05)。

Kumamoto等[9]
和 成釉 细胞瘤 中MMP-2 的表达，未见明 （！>0.05)。

等[6]的研究 ，MMP-2 的表 为 囊 ，成
釉细胞瘤角化囊肿囊肿的&临床上，成釉细胞瘤的复发 囊型高，主要原因能并不在于MMP-2的侵袭
的深度，而由囊成釉细胞瘤性瘤体，
边界光滑，容易刮治，而一般型成釉细胞瘤为多囊，囊实性混合肿块，对骨壁的不规则侵袭造成瘤
体易被刮净，而需采 定边界范围的切除法。

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